一種測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，包括內(nèi)標(biāo)溶液、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品溶液的制備，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析，以及測定結(jié)果的計算等步驟。本發(fā)明采用正十七碳烷為內(nèi)標(biāo)物進行定量，經(jīng)優(yōu)化后的檢測方法響應(yīng)極為靈敏，定量分析準(zhǔn)確，有效地減少了因樣品基質(zhì)復(fù)雜帶來的干擾，所采用的色譜和質(zhì)譜條件使得目標(biāo)物具有較好的信號響應(yīng)，并且具有較好的線性相關(guān)性，檢出限為0.015ng/支，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為6.35%，加標(biāo)回收率在87.78%～110.09%之間，說明本方法的靈敏度高、重復(fù)性好，回收率高，適合于煙氣復(fù)雜基質(zhì)中痕量目標(biāo)物黃樟素的定量分析。
【專利說明】一種測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于卷煙理化指標(biāo)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種測定卷煙主流煙氣中黃樟 素的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 黃樟素（Safrole)，為無色或淺黃色液體。有樟木氣味，易溶于乙醇，能與氯仿、乙 醚混溶，不溶于水和甘油。相對密度為1. 096,凝固點約1TC，沸點232?234°C，折光率 1. 5383,閃點97°C，半數(shù)致死量（大鼠，經(jīng)口）1950mg/kg。
[0003] 黃樟素是許多食用天然香精如黃樟精油、八角精油和樟腦油的主要成分，約占黃 樟精油的80%。黃樟素在用肉豆蘧、日本野姜、加州月桂樹等香料制成的香精中也有少量存 在。黃樟精油常被用作啤酒和其他酒的風(fēng)味添加成分，此外，腐爛的生姜中含有較多的黃樟 素。美國食品藥物管理局（FDA)的研究顯示，黃樟素是白鼠和老鼠的致肝癌物。在小鼠的 飼料中添加〇. 04?1 %的黃樟素，150d到2年可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生肝癌。黃樟素經(jīng)過代謝轉(zhuǎn)化 為活性致癌物的過程目前已經(jīng)比較清楚，黃樟素在小鼠體內(nèi)首先代謝為苯乙醇形式，接著 被激活轉(zhuǎn)化為乙酸鹽或硫酸鹽，成為最終的致癌物，后者的雙鍵因其親電性與遺傳物質(zhì)DNA 發(fā)生反應(yīng)，最終可導(dǎo)致癌的發(fā)生。鑒于上述結(jié)果，在美國不再允許黃樟素作為食物添加劑。
[0004] 卷煙作為一種快速消費品，在生產(chǎn)過程中要添加一些香精料液添加劑。由于煙 用添加劑中可能非預(yù)期引入黃樟素，因此，對于黃樟素的監(jiān)控管理就顯得尤為必要。專利 201010539732. X提供了一種煙用香精香料中香豆素和黃樟素含量的測定方法。它將煙用香 精香料中香豆素和黃樟素先分散于水溶液中后，使用有機試劑加以萃取，取樣過濾后使用 氣相色譜-質(zhì)譜法進行儀器分析并測定含量。專利201210332468. 1提供一種香精香料中 香豆素和黃樟素含量的測定方法。用加有甲基丁香酚內(nèi)標(biāo)的無水乙醇溶液稀釋樣品，樣品 過濾后使用氣相色譜/質(zhì)譜選擇離子法測定稀釋后樣品中香豆素和黃樟素的含量。
[0005] 對于黃樟素的分析檢測而言，現(xiàn)行的方法主要對植物、化妝品以及香精香料中的 黃樟素進行了研究，所采用的儀器分析方法主要有GC、GC/MS，以及HPLC。所采用的樣品前 處理技術(shù)，依據(jù)樣品基質(zhì)的不同，主要有溶劑萃取、固相萃取、蒸氣蒸餾、超臨界流體萃取、 固相微萃取等。但是，對于卷煙樣品而言，受限于煙氣中黃樟素釋放量水平低，以及煙氣復(fù) 雜基質(zhì)對目標(biāo)物的分析干擾嚴重等因素的影響，準(zhǔn)確測定黃樟素的釋放量是煙氣分析領(lǐng)域 一項極具挑戰(zhàn)的工作。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種測定卷煙主流 煙氣中黃樟素的方法，以期能準(zhǔn)確檢測卷煙主流煙氣中黃樟素的含量，測定結(jié)果準(zhǔn)確、基質(zhì) 干擾少。
[0007] 技術(shù)方案：為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0008] -種測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，包括以下步驟：
[0009] (1)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：以正十七碳烷為內(nèi)標(biāo)物，用乙醇作溶劑，制備內(nèi)標(biāo)溶液；
[0010] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：以黃樟素為標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇作溶劑，經(jīng)逐級稀釋制備成 標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，然后分別加入定量的內(nèi)標(biāo)溶液，制備成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；
[0011] (3)樣品溶液的制備：收集好卷煙煙氣中的目標(biāo)物，準(zhǔn)確加入定量的內(nèi)標(biāo)溶液以 及萃取溶劑，振蕩提??；轉(zhuǎn)移全部萃取液，經(jīng)固相萃取柱凈化，凈化液濃縮后，得樣品溶液；
[0012] (4)氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析：用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（GC-MS/MS)對標(biāo)準(zhǔn)工作 溶液和樣品溶液進行檢測分析；色譜分析條件為：采用DB-5MS(30mX0. 25mmX0. 25μπι)毛 細管色譜柱；載氣為氦氣，恒流速度為lmL/min ;進樣量為1 μ L ;進樣口溫度為250°C ;傳輸 線溫度為280°C;采用脈沖不分流進樣，脈沖壓力為25psi ;升溫程序為初始溫度為60°C，以 4°C /min的速率升高至160°C，再以10°C /min的速率升高至300°C。其質(zhì)譜分析條件為：電 離方式為EI源，正離子模式；離子源溫度：230°C ;四極桿溫度：均為150°C ;碰撞氣：氮氣， 流速1. 5mL/min，載氣（氦氣）流速為2. 25mL/min ;多反應(yīng)監(jiān)測（MRM)模式，詳細參數(shù)見表 1 ;
[0013] 表1目標(biāo)物的MRM參數(shù)表
[0014]

【權(quán)利要求】
1. 一種測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于，包括如下步驟： ⑴內(nèi)標(biāo)溶液的制備：以正十七碳烷為內(nèi)標(biāo)物，用乙醇作溶劑，制備內(nèi)標(biāo)溶液； (2) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：以黃樟素為標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇作溶劑，經(jīng)逐級稀釋制備成標(biāo)準(zhǔn) 儲備溶液，然后分別加入定量的內(nèi)標(biāo)溶液，制備成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； (3) 樣品溶液的制備：收集好卷煙煙氣中的目標(biāo)物，準(zhǔn)確加入定量的內(nèi)標(biāo)溶液以及萃 取溶劑，振蕩提?。晦D(zhuǎn)移全部萃取液，經(jīng)固相萃取柱凈化，凈化液濃縮后，得樣品溶液； (4) 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析：用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品溶 液進行檢測分析；色譜分析條件為：采用DB-5MS毛細管色譜柱；載氣為氦氣，恒流速度為 lmL/min ;進樣量為1 μ L ;進樣口溫度為250°C ;傳輸線溫度為280°C ;采用脈沖不分流進 樣，脈沖壓力為25psi ;升溫程序為初始溫度為60°C，以4°C /min的速率升高至160°C，再以 10°C /min的速率升高至300°C ;質(zhì)譜分析條件為：電離方式為EI源，正離子模式；離子源 溫度：230°C ;四極桿溫度：均為150°C ;碰撞氣：氮氣，流速1. 5mL/min，載氣流速為2. 25mL/ min ;多反應(yīng)監(jiān)測模式，詳細參數(shù)見表1 ; 表1目標(biāo)物的MRM參數(shù)表
(5) 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制及樣品結(jié)果的計算：以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中黃樟素與內(nèi)標(biāo)的濃度 之比為橫坐標(biāo)，以色譜圖中黃樟素與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比為縱坐標(biāo)，進行線性回歸分析，得到 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；將相同條件下測得的樣品溶液中黃樟素與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積比，代入標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線，換算求得卷煙樣品主流煙氣中黃樟素的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于：步驟（1) 中，所述的內(nèi)標(biāo)溶液的制備具體包括以下步驟：1)內(nèi)標(biāo)儲備液：準(zhǔn)確稱取200mg內(nèi)標(biāo)物正 十七碳烷，用乙醇定容到lOOmL，得濃度為2000 μ g/mL的內(nèi)標(biāo)儲備液；2)內(nèi)標(biāo)溶液：準(zhǔn)確移 取0. lmL內(nèi)標(biāo)儲備液，用乙醇定容到100mL，得濃度為2μ g/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于：步驟（2) 中，所述的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備具體包括以下步驟：（1) 一級標(biāo)準(zhǔn)儲備液：準(zhǔn)確稱取l〇〇mg 黃樟素，用乙醇定容到100mL，得濃度為1000 μ g/mL的一級標(biāo)準(zhǔn)儲備液；（2)二級標(biāo)準(zhǔn)儲備 液：準(zhǔn)確移取〇. lmL -級標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用乙醇定容到100mL，得濃度為1 μ g/mL的二級標(biāo)準(zhǔn) 儲備液；（3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取二級標(biāo)準(zhǔn)儲備液20 μ L、50 μ L、100 μ L、400 μ L 和1000 μ L，以及內(nèi)標(biāo)溶液各100 μ L，用乙醇作溶劑定容至100mL的容量瓶中，得濃度分別 為0· 2ng/mL、0. 5ng/mL、lng/mL、4ng/mL和10ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其中內(nèi)標(biāo)濃度為 2ng/mL〇
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于：步驟（3) 中，所述的樣品溶液的制備具體包括以下步驟：1)卷煙抽吸：按照GB/T19609標(biāo)準(zhǔn)的要求收 集20支卷煙的總粒相物；2)樣品萃?。簩⑸喜襟E得到的捕集有總粒相物的玻璃纖維濾片放 置于100mL錐形瓶中，準(zhǔn)確加入40 μ L內(nèi)標(biāo)溶液，并加入40mL正己烷，置于回旋式振蕩器內(nèi) 于160轉(zhuǎn)/min條件下振蕩萃取40min，靜置片刻；3)萃取液凈化：將萃取液全部轉(zhuǎn)移至固相 萃取柱，待萃取液往下移至萃取小柱的頂端后，分3次加入10mL正己烷進行淋洗，淋洗速度 保持在1?2mL/min，收集所有淋洗液；4)淋洗液濃縮：將盛有所有淋洗液的濃縮瓶連接到 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，在80°C、高純氮氣保護下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，或者55°C、真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮 至lj lmL左右，得到樣品進樣液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于：步驟（5) 中，與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線相對應(yīng)的回歸方程為Y = 0. 309X+0. 0008,相關(guān)系數(shù)R2為0. 9998,檢出 限為0· 015ng/支，濃度范圍為0· 2138?10. 69ng/mL。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定卷煙主流煙氣中黃樟素的方法，其特征在于：步驟（5) 中，求得卷煙樣品中黃樟素的含量的計算公式如下：
式中：W為卷煙樣品中黃樟素的含量，單位為ng/支；A為黃樟素的峰面積；As為內(nèi)標(biāo) 正十七碳烷的峰面積；b為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的截距；Ms為樣品溶液中內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量，單位為ng ; a為標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的斜率;Μ為煙支的數(shù)量，單位為支。
【文檔編號】G01N30/02GK104090042SQ201410337474
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月15日
【發(fā)明者】廖惠云, 莊亞東, 石懷彬, 李朝建, 曹毅, 王珂清, 尤曉娟, 張媛, 韓開冬, 朱龍杰, 朱瑩, 秦艷華 申請人:江蘇中煙工業(yè)有限責(zé)任公司