一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用HPLC法測定長春胺有關物質(zhì)的方法，其特征在于選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-0.1M碳酸銨溶液（7:3）為流動相等度洗脫，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為260nm。該方法具有分離度良好，簡單快速，專屬性強，靈敏度高等特點，可用于長春胺制備過程中可能產(chǎn)生的相關雜質(zhì),包括中間體、副產(chǎn)物等有機雜質(zhì)的檢測和質(zhì)量控制。
【專利說明】一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質(zhì)的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用HPLC法測定長春胺有關物質(zhì)的方法，尤其是合成長春胺過程的中間體的測定方法，屬于藥物分析領域。
【背景技術】
[0002]長春胺是由夾竹桃植物蔓長春花(Vinca major)、小蔓長春花(V.minor)、直立長春花(V.erecta)、異性蔓長春花(V.dilormis)分離的生物堿。長春胺為腦血管擴張藥，能維持或恢復腦血管的生理擴張，增加缺血區(qū)的正常腦血流量，提高腦對血氧的利用率，改善缺氧腦組織代謝。
[0003]長春胺國際市場需求量很大，目前已可半合成，其合成路線有很多，關于其原料藥及中間體有關物質(zhì)控制的報道國內(nèi)幾乎沒有，中國藥典尚無與其相關的質(zhì)量控制標準，建立一種高效，快速，準確，專屬性強的高效液相色譜方法對其有關物質(zhì)進行檢測和控制具有非常重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于建立一種HPLC方法測定長春胺有關物質(zhì)的方法?？捎糜陂L春胺原料藥及長春胺在合成和儲藏過程中可能產(chǎn)生的有關物質(zhì)的檢測和質(zhì)量控制。
[0005]本發(fā)明提供了一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質(zhì)的方法，選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流動相為乙腈-0.1M碳酸銨溶液(7:3)，檢測器選用紫外檢測器，檢測波長為 260nm。
[0006]本發(fā)明具體的實施方案中，所述流動相選自0.1M碳酸銨和0.2M乙酸銨溶液，優(yōu)選
0.1M碳酸銨溶液。
[0007]本發(fā)明具體的實施方案中，乙腈與0.1M碳酸銨溶液比例為80%?55%:20%?45%，優(yōu)選乙腈比例為70%。
[0008]本發(fā)明具體的實施方案中，流動相流速根據(jù)色譜柱長短進行選擇，可選用0.8 ml/min?L 5 ml/min。
[0009]本發(fā)明具體的實施方案中，檢測波長優(yōu)選260nm。
[0010]本發(fā)明提供的一種高效液相色譜法測定長春胺有關物質(zhì)的方法，其具體的實施步驟包括:
取長春胺成品25mg,流動相超聲溶解,配制成長春胺濃度為lmg/ml的供試品溶液。
[0011]取長春胺標準品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為lmg/ml的標準品溶液，取上述標準品溶液適量，流動相稀釋500倍，配制成濃度為標準品溶液0.2%濃度的溶液，作為有關物質(zhì)定量測定的對照品溶液。
[0012]取0.1ml合成長春胺的中間體I的終反應液，流動相稀釋至10ml，作為中間體對照溶液I。
[0013]取0.1ml合成長春胺的中間體II的終反應液，流動相稀釋至10ml，作為中間體對照溶液2。
[0014]分別準確吸取供試品溶液，對照品溶液，中間體對照溶液I和中間體對照溶液
(2)5 μ 1，注入液相色譜儀，長春胺主峰與相有關物質(zhì)雜質(zhì)峰之間的分離度應大于1.5，符合中國藥典對分離度的要求，按主峰長春胺峰計算，理論塔板數(shù)為11549，大于5000，主峰與其他對照溶液峰的對稱因子分別為0.98和0.96，均符合中國藥典的標準。
[0015]本發(fā)明方法適用于長春胺測定的可以是長春胺純品，粗品，原料藥等以長春胺為主成分的產(chǎn)品。本發(fā)明的測定方法還適用于合成過程中的中間體1、中間體II及其他在合成過程中產(chǎn)生的未知中間產(chǎn)物的測定和質(zhì)量控制。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為長春胺供試品溶液色譜圖。
[0017]圖2為對照品溶液色譜圖。
[0018]圖3為長春胺合成過程中中間體I和中間體II的色譜圖。
[0019]
【具體實施方式】
[0020]實施例1
長春胺純品，購自歐洲sigma公司，純度為99.83%。高效液相色譜儀選用美國Agilentl260型號儀器,檢測器為DAD檢測器,色譜柱為thermo C18,4.6 X 250mm, 5 μ m,檢測波長260nm，進樣量:5μ 1(G131?自動進樣器)，流速lml/min，柱溫:35°C，流動相:乙腈-0.1M碳酸銨溶液(7:3)等度洗脫。
[0021]實驗步驟:
取長春胺純品25mg,流動相超聲溶解,配制成長春胺濃度為lmg/ml的供試品溶液。
[0022]取長春胺標準品25mg，流動相超聲溶解，配制成長春胺濃度為lmg/ml的標準品溶液，取上述標準品溶液適量，流動相稀釋500倍，配制成濃度為標準品溶液0.2%濃度的溶液，作為有關物質(zhì)定量測定的對照品溶液。
[0023]分別取供試品溶液和對照品溶液，按照本發(fā)明色譜條件，分別注入液相色譜儀，按照本發(fā)明分析條件分析并記錄色譜圖。
[0024]圖1為長春胺供試品溶液所得色譜圖，長春胺保留時間為8.8min，5.4min，
11.4min分別為長春胺純品中相關雜質(zhì)。結果表明，在本發(fā)明色譜條件下，長春胺與其他雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，主峰及有關物質(zhì)峰對稱因子分別為0.98,0.95和1.02，符合中國藥典相關標準。圖2為對照品溶液圖譜，所得主峰面積為7.41437，有關物質(zhì)百分含量(C%)由如下公式計算:C= (A*W1*25*1*100) / (B*W2*500*25)
A為供試品溶液中雜質(zhì)峰的峰面積 B為對照溶品溶液對照品峰面積 Wl為對照品重量 W2為供試品重量
經(jīng)計算，得長春胺純品中兩個有關物質(zhì)含量分別為0.1%和0.05%，長春胺純度為99.85%，檢測結果準確、可靠，該檢測方法可用于才長春胺純品中有關物質(zhì)檢測及其質(zhì)量控制。
[0025]實施例2
采用與實施例1中類似的儀器設備和操作步驟進行實驗，對本公司長春胺合成過程中的中間體進行測定和質(zhì)量控制。
[0026]高效液相色譜儀選用美國Agilentl260型號儀器，檢測器為VWD檢測器，色譜柱為thermo C18，4.6 X 150mm，5 μ m，檢測波長 260nm，進樣量:5 μ I (G1315D 自動進樣器)，流速lml/min,柱溫:35°C，流動相:乙腈-0.1M碳酸銨溶液(7:3)等度洗脫。
[0027]實驗步驟:
分別取0.1ml合成長春胺的中間體I的終反應液和合成長春胺的中間體II的終反應液，流動相稀釋至10ml，作為長春胺有關物質(zhì)定性對照液。另取車間合成的長春胺成品25mg,流動相超聲溶解,配制成長春胺濃度為lmg/ml的供試品溶液。
[0028]分別取長春胺中間體1、中間體II對照液和供試品溶液，按本發(fā)明色譜條件進行測定并分析記錄色譜圖。
[0029]圖3中化合物I和2分別為為中間體I和中間體II，中間體I和中間體II之間的峰分離度為1.53，峰對稱因子分別為1.03和0.95，均符合中國藥典標準，該檢測方法可用于長春胺合成過程中的中間體的檢測與質(zhì)量控制。圖3中中間體I和中間體II相對保留時間為2.1min和3.8min,供試品溶液中有關物質(zhì)保留時間分別為5.4min和11.4min,本公司生產(chǎn)長春胺包含的關物質(zhì)為合成過程中產(chǎn)生的其他未知雜質(zhì)，非中間體I和中間體II。結果表明，本發(fā)明方法能較好的分離長春胺和長春胺合成過程中的中間體，可以用于長春胺合成過程中中間體的檢測和質(zhì)量控制。
【權利要求】
1.一種HPLC法測定長春胺有關物質(zhì)的方法，其特征在于:選用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈-0.1M碳酸銨溶液(7:3)為流動相等度洗脫，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為260nmo
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基鍵合硅膠色譜柱填料的顆粒粒徑為3-5 μ m。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相比例為乙腈體積分數(shù)為70%，0.1M碳酸銨溶液體積分數(shù)為30%。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，檢測器為紫外檢測器，DAD檢測器和VWD檢測器均適用，檢測波長為260nm。
【文檔編號】G01N30/02GK103869018SQ201410116092
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月27日 優(yōu)先權日:2014年3月27日
【發(fā)明者】彭學東, 張梅, 趙金召, 祁亞楠 申請人:張家港威勝生物醫(yī)藥有限公司