一種檢測cip清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法。包括如下步驟：（1）取至少3份CIP清洗系統(tǒng)沖洗水置于無菌試劑瓶中，分別量取不等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，分別經(jīng)無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后將無菌濾膜放入樣品杯中，然后在無菌濾膜上滴加復(fù)合熒光試劑，再將樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定各熒光值；（2）分別量取與步驟（1）中等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，經(jīng)無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后洗脫無菌濾膜上的細(xì)菌，測定CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中的菌落總數(shù)得到菌落總數(shù)與熒光值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；（3）取待測的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，根據(jù)（1）得到熒光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即得到待測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中菌落總數(shù)。本發(fā)明方法對于測定方式的發(fā)明創(chuàng)新，簡化了操作程序，減少了誤差來源。
【專利說明】一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法，屬于食品安全檢測方面微生物檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]食品加工企業(yè)，諸如乳品、飲料、酒類等行業(yè)在產(chǎn)品生產(chǎn)加工過程中需要涉及到設(shè)備、管道等的衛(wèi)生清洗工作，任何一個環(huán)節(jié)的疏忽都可能帶來難以挽回的經(jīng)濟(jì)損失和惡劣的社會影響。CIP (Cleaning In Place)就地清洗,是指不用拆開或移動裝置，即采用高溫、高濃度的洗凈液，對設(shè)備裝置加以強(qiáng)力作用，把與食品的接觸面洗凈，對衛(wèi)生級別要求較嚴(yán)格的生產(chǎn)設(shè)備的清洗、凈化，是近幾年食品加工行業(yè)為適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)，符合高品質(zhì)衛(wèi)生要求，降低清洗成本而發(fā)展起來的清洗技術(shù)。隨著食品企業(yè)現(xiàn)代化程度的逐步提高，CIP清洗系統(tǒng)未來將會應(yīng)用到各類食品加工企業(yè)當(dāng)中。CIP工作后要求要對氣味、設(shè)備的視覺外觀、微生物污染幾個方面進(jìn)行評定，其中微生物污染的檢查是難點(diǎn)，也是食品加工的衛(wèi)生關(guān)鍵控制點(diǎn)，如果清洗完畢之后CIP系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌過高，會對后期食品加工帶來微生物污染的隱患，而且CIP過程后殘留菌多為耐熱菌，食品加工后期的高溫滅菌措施也難以將其完全殺滅，因此，CIP系統(tǒng)沖洗水中殘留菌的檢測對于食品生產(chǎn)加工衛(wèi)生管控具有重大的指導(dǎo)意義，必須嚴(yán)格控制。
[0003]CIP清洗效果要求達(dá)到微生物清潔度或無菌清潔度，根據(jù)調(diào)研，CIP過程完畢后，食品企業(yè)的內(nèi)控指標(biāo)要求CIP系統(tǒng)殘留水中細(xì)菌總數(shù)低于菌落總數(shù)國標(biāo)方法(GB4789.2)的檢測范圍，所以國標(biāo)方法無法直接檢測與評價CIP清洗后的微生物污染狀況，所以要尋找其他的檢測方法。目前行業(yè)內(nèi)對CIP系統(tǒng)殘留菌的檢測方法有兩種:一是大體積抽濾后再進(jìn)行平板培養(yǎng)計數(shù)。此方法的優(yōu)點(diǎn)是能夠利用濾膜富集細(xì)菌，但是濾膜截留細(xì)菌依然要轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基上進(jìn)行48小的培養(yǎng)，結(jié)果雖然較為準(zhǔn)確，但是效率太低，CIP清洗之后不可能讓加工設(shè)備閑置48小時等待測定結(jié)果。二是鏡檢法，此法也是與大體積抽濾結(jié)合，方法的優(yōu)點(diǎn)是縮短了檢測時間，然而鏡檢法把濾膜放在適量的無菌水中，搖動、振蕩，然后再用顯微鏡檢測洗脫水中微生物的數(shù)量，程序復(fù)雜易被外源微生物污染，在洗脫濾膜截留細(xì)菌及轉(zhuǎn)移過程中帶來的誤差較大且難以避免。從上述方法可見，目前業(yè)內(nèi)缺少測定CIP清洗水殘留菌的標(biāo)準(zhǔn)方法，而替代方法也存在效率低或程序復(fù)雜操作誤差較大的缺點(diǎn)，因此，仍有必要開發(fā)一種能夠快速、準(zhǔn)確、簡單的檢測CIP系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法，本發(fā)明的方法能夠快速測定CIP系統(tǒng)沖洗水等含菌量極低液體樣品中殘留細(xì)菌總數(shù)，能及時對CIP系統(tǒng)清洗效果進(jìn)行評估、對衛(wèi)生清洗工作進(jìn)行指導(dǎo)。
[0005]本發(fā)明所提供的一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法，包括如下步驟:[0006](I)取至少3份CIP清洗系統(tǒng)沖洗水置于無菌試劑瓶中，分別記為I號瓶、2號瓶和3號瓶；分別從所述I號瓶、2號瓶和3號瓶中量取不等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，分別經(jīng)無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后將所述無菌濾膜放入樣品杯中，然后在所述無菌濾膜上滴加復(fù)合熒光試劑，再將所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定各熒光值；
[0007](2)分別從所述I號瓶、2號瓶和3號瓶中量取與步驟(I)中等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，經(jīng)所述無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后洗脫所述無菌濾膜上的細(xì)菌得到洗脫液，測定所述洗脫液中的菌落總數(shù)；進(jìn)而得到菌落總數(shù)與熒光值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0008](3)取待測的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，經(jīng)所述無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后將所述無菌濾膜放入所述樣品杯中，然后在所述無菌濾膜上滴加所述復(fù)合熒光試劑，再將所述樣品杯置于所述ATP熒光檢測儀中測定熒光值；然后根據(jù)所述熒光值與所述菌落總數(shù)之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線即得到待測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中菌落總數(shù)。
[0009]上述的方法中，步驟(I)中，可分別從所述I號瓶、所述2號瓶和所述3號瓶中量取10mL、50mL和IOOmL所述CIP清洗系統(tǒng)沖洗水。
[0010]上述的方法中，步驟(I)中，所述無菌濾膜的孔徑可為0.45 μ m。
[0011]上述的方法中，所述復(fù)合熒光試劑的主要成分為細(xì)菌裂解劑和熒光素酶，如中質(zhì)賽福(北京)科技儀器有限公司生產(chǎn)的產(chǎn)品編號為ZF0011的復(fù)合突光試劑。
[0012]上述的方法中，步驟(2)中，洗脫所述無菌濾膜上的細(xì)菌的溶劑可為滅菌生理鹽水。
[0013]本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0014]本發(fā)明首次提出并應(yīng)用了膜上裂解、帶膜測定的新方法。本發(fā)明方法對于測定方式的發(fā)明創(chuàng)新，簡化了操作程序，在微生物檢測的過程中，減少一步操作程序，就減少了一個誤差來源。而對于企業(yè)來說該方法具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益方法(本發(fā)明能夠讓企業(yè)及時對CIP清洗的程序進(jìn)行把控，快速檢測還能縮短評估時間提高企業(yè)的生產(chǎn)效率，在保證清洗效果的同時最大限度的節(jié)約水、清洗液、電等資源，還能節(jié)省人力及培養(yǎng)基、培養(yǎng)設(shè)備等的投入，明顯降低清洗成本。CIP清洗效果的及時把控，能夠減少企業(yè)因清洗殘留菌引起的產(chǎn)品微生物污染帶來的浪費(fèi)，減少浪費(fèi)等同于創(chuàng)收。)，同時本發(fā)明還具有良好的社會效益(本發(fā)明能夠幫助企業(yè)識別CIP清洗過程中的細(xì)菌殘留，降低生產(chǎn)過程受微生物污染的可能性，對提高食品安全水平意義明顯，食品安全狀況的提高對于社會穩(wěn)定意義重大。)與環(huán)境效益(本方法中不涉及有毒有害試劑，膜上裂解能夠?qū)⒓?xì)菌全部裂解，沒有殘留活菌，不會給操作人員帶來危害，檢測過程也沒有副產(chǎn)物產(chǎn)生，監(jiān)測器具及一次性耗材皆不用特殊處理也不會污染環(huán)境。)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1為本發(fā)明實施例1中測定的膜上熒光值(RLU)與待測液細(xì)菌總數(shù)線性關(guān)系圖?！揪唧w實施方式】
[0016]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0017]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0018]實施例1、CIP系統(tǒng)殘留水中細(xì)菌總數(shù)的測定[0019]儀器及耗材:
[0020]ATP熒光檢測儀(SR)012型)；
[0021]無菌注射器(IOmL?50mL)；
[0022]過濾器(可重復(fù)使用，先用75%酒精浸泡，用無菌水反復(fù)沖洗，無菌條件下晾干或烘干后備用)
[0023]鑷子(塑料，塑料材質(zhì)用酒精浸泡再用無菌水沖洗，晾干后備用)；
[0024]無菌濾膜(孔徑:0.45 μ m,尺寸:直徑13mm)；
[0025]復(fù)合熒光試劑(中質(zhì)賽福(北京)科技儀器有限公司，產(chǎn)品編號為ZF0011 )，該復(fù)合熒光試劑的主要成分為細(xì)菌裂解劑和熒光素酶。
[0026]玻璃試管(滅菌后裝5mL無菌生理鹽水備用)；
[0027](I)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定
[0028]取CIP系統(tǒng)最后一道程序完結(jié)后的水作為檢測對象，用5個500mL無菌試劑瓶，編號1、2、3、4和5，接待測水儲存?zhèn)溆?。?0個過濾器，用鑷子將無菌濾膜放入過濾器，安裝好備用。用注射器吸取I號瓶中水10mL，用安裝好的無菌濾膜和過濾器進(jìn)行過濾，過濾完畢將無菌濾膜用鑷子取出放入清洗好的樣品杯中，在無菌濾膜上滴加復(fù)合熒光試劑，放入ATP熒光檢測儀中測定其熒光值，再用同一注射器再取I號瓶中水IOmL過濾，過濾完畢用無菌鑷子將濾膜取出放入裝有5mL滅菌生理鹽水的玻璃試管中震蕩洗脫細(xì)菌，然后按照GB47892-2010方法檢測菌落總數(shù)。
[0029]然后分別從2號瓶中取50mL，3號瓶中取100mL，4號瓶中取150mL，5號瓶中取200mL,按照上述操作步驟分別測定各熒光值和菌落總數(shù)，將五組對應(yīng)數(shù)據(jù)做線性回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y=aX+b，其中Y代表測得熒光值，X代表菌落總數(shù)值(CFU/mL)。
[0030]( 2)樣品的測定與計算
[0031]取50mL待測水用安裝好的無菌濾膜和過濾器過濾，過濾完畢將無菌濾膜用鑷子取出放入清洗好的樣品杯，在無菌濾膜上滴加復(fù)合熒光試劑，放入ATP熒光檢測儀中測定熒光值，得熒光值Y，將Y值帶入上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可按照稀釋倍數(shù)算出該樣品中細(xì)菌總數(shù)含量。
[0032]為了驗證本方法的可操作性和準(zhǔn)確性，選擇了一家乳品企業(yè)實地驗證。按照上述操作方法進(jìn)行測定。
[0033]試驗參數(shù):
[0034]濃縮:I號空白IOmL無菌水濃縮,2號IOmL待測水濃縮,3號IOOmL待測水濃縮,4號200mL待測水濃縮。
[0035]洗脫參數(shù):5mL無菌生理鹽水洗脫。
[0036]結(jié)果如表I所示:
[0037]表I實際樣品測定結(jié)果分析-1
【權(quán)利要求】
1.一種檢測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中殘留細(xì)菌的方法，包括如下步驟: (O取至少3份CIP清洗系統(tǒng)沖洗水置于無菌試劑瓶中，分別記為I號瓶、2號瓶和3號瓶；分別從所述I號瓶、2號瓶和3號瓶中量取不等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，分別經(jīng)無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后將所述無菌濾膜放入樣品杯中，然后在所述無菌濾膜上滴加復(fù)合熒光試劑，再將所述樣品杯置于ATP熒光檢測儀中測定各熒光值； (2)分別從所述I號瓶、2號瓶和3號瓶中量取與步驟(I)中等量的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，經(jīng)所述無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后洗脫所述無菌濾膜上的細(xì)菌，測定CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中的菌落總數(shù)；進(jìn)而得到菌落總數(shù)與熒光值之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線； (3)取待測的CIP清洗系統(tǒng)沖洗水，經(jīng)所述無菌濾膜進(jìn)行過濾，過濾完畢后將所述無菌濾膜放入所述樣品杯中，然后在所述無菌濾膜上滴加所述復(fù)合熒光試劑，再將所述樣品杯置于所述ATP熒光檢測儀中測定熒光值；然后根據(jù)所述熒光值與所述菌落總數(shù)之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線即得到待測CIP清洗系統(tǒng)沖洗水中菌落總數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，分別從所述I號瓶、所述2號瓶和所述3號瓶中量取10mL、50mL和IOOmL所述CIP清洗系統(tǒng)沖洗水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于:步驟(I)中，所述無菌濾膜的孔徑為0.45 μ m0
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于:所述復(fù)合熒光試劑的主要成分為細(xì)菌裂解劑和熒光素酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，洗脫所述無菌濾膜上的細(xì)菌的溶劑為生理鹽水。
【文檔編號】G01N21/64GK103776807SQ201410030608
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月22日
【發(fā)明者】侯玉柱, 宋全厚, 尹建軍, 柯潤輝, 張力, 田雨 申請人:中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院