一種利用電泳檢測(cè)pcr產(chǎn)物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征包括以下步驟：配制1×電泳緩沖液，導(dǎo)入電泳槽；洗刷干凈制膠板，插好制膠孔的梳子；稱量：根據(jù)你要得到的靶基因片段的大小確定瓊脂糖凝膠的濃度；溶解：用電泳緩沖液溶解瓊脂糖，放在微波爐里加熱，幫助溶解，盡量注意避免沸騰；從微波爐里拿出三角瓶，待冷卻至約60℃時(shí)加入熒光DNA染料，搖勻后把熔膠液倒入制膠板，等待凝固；凝固后，拔掉梳子；把凝膠放進(jìn)電泳槽中；加樣；插上電源，電泳。本發(fā)明采用電泳的方法可方便快捷的檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
【專利說(shuō)明】 —種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction),簡(jiǎn)稱PCR,是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段。可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。
[0003]PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60° C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72° C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5’-3’)的方向合成互補(bǔ)鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。
[0004]帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)，稱為電泳(electrophoresis, EP)。利用帶電粒子在電場(chǎng)中移動(dòng)速度不同而達(dá)到分離的技術(shù)稱為電泳技術(shù)。
[0005]瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45°C開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。由于糖一磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì)，相同數(shù)量堿基的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此它們能以同樣的速度向正極方向移動(dòng)。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA，主要是利用分子篩效應(yīng):在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下，DNA分子的遷移速度取決于分子本身的大小和構(gòu)型，具有不同分子量的DNA片段遷移速度不一樣，遷移速度與DNA分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系。凝膠電泳不僅可分離不同分子量的DNA，也可以分離分子量相同、但構(gòu)型不同的DNA分子。例如，一般提取的質(zhì)粒有3種構(gòu)型:超螺旋的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA (covalentlyclosedcircularDNA,簡(jiǎn)稱cccDNA),開環(huán)DNA,即共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA有一條鏈斷裂，(opencircularDNA,簡(jiǎn)稱ocDNA),線狀質(zhì)粒DNA，即質(zhì)粒DNA在同一處兩條鏈都發(fā)生斷裂(linearDNA，簡(jiǎn)稱LDNA)。由于這3種構(gòu)型的質(zhì)粒DNA分子在凝膠電泳中的遷移率不同，因此通常抽提的質(zhì)粒在電泳后往往出現(xiàn)3條帶，其中超螺旋質(zhì)粒DNA泳動(dòng)最快，其次為線狀DNA，最慢的為開環(huán)質(zhì)粒DNA。溴化乙錠(EB)為扁平狀分子，在紫外照射下發(fā)射熒光。EB可與DNA分子形成EB-DNA復(fù)合物，其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上，且熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測(cè)到5ng以上的DNA。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，以檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征包括以下步驟:
A.配制IX電泳緩沖液，導(dǎo)入電泳槽； B.洗刷干凈制膠板，插好制膠孔的梳子；
C.稱量:根據(jù)你要得到的靶基因片段的大小確定瓊脂糖凝膠的濃度；
D.溶解:用電泳緩沖液溶解瓊脂糖，放在微波爐里加熱，幫助溶解，盡量注意避免沸
騰；
E.從微波爐里拿出三角瓶，待冷卻至約60°C時(shí)加入熒光DNA染料，搖勻后把熔膠液倒入制膠板，等待凝固；
F.凝固后，拔掉梳子；
G.把凝膠放進(jìn)電泳槽中；
H.加樣；
1.插上電源，電泳。
[0008]所述步驟D的瓊脂糖為1%。
[0009]所述步驟I的電泳為200v，250mA。
[0010]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明采用電泳的方法可方便快捷的檢測(cè)PCR產(chǎn)物。
【具體實(shí)施方式】
[0011]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0012]實(shí)施例:
一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征包括以下步驟:
A.配制IX電泳緩沖液，導(dǎo)入電泳槽；
B.洗刷干凈制膠板，插好制膠孔的梳子；
C.稱量:根據(jù)你要得到的靶基因片段的大小確定瓊脂糖凝膠的濃度；
D.溶解:用電泳緩沖液溶解瓊脂糖，放在微波爐里加熱，幫助溶解，盡量注意避免沸
騰；
E.從微波爐里拿出三角瓶，待冷卻至約60°C時(shí)加入熒光DNA染料，搖勻后把熔膠液倒入制膠板，等待凝固；
F.凝固后，拔掉梳子；
G.把凝膠放進(jìn)電泳槽中；
H.加樣；
1.插上電源，電泳。
[0013]步驟D的瓊脂糖為1%。
[0014]步驟I的電泳為200v，250mA。
[0015]上述雖然結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了描述，但并非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性的勞動(dòng)即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征包括以下步驟: A.配制IX電泳緩沖液，導(dǎo)入電泳槽； B.洗刷干凈制膠板，插好制膠孔的梳子； C.稱量:根據(jù)你要得到的靶基因片段的大小確定瓊脂糖凝膠的濃度； D.溶解:用電泳緩沖液溶解瓊脂糖，放在微波爐里加熱，幫助溶解，盡量注意避免沸騰； E.從微波爐里拿出三角瓶，待冷卻至約60°C時(shí)加入熒光DNA染料，搖勻后把熔膠液倒入制膠板，等待凝固； F.凝固后，拔掉梳子； G.把凝膠放進(jìn)電泳槽中； H.加樣； 1.插上電源，電泳。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征在于:所述步驟D的瓊脂糖為1%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種利用電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物的方法，其特征在于:所述步驟I的電泳為 200v, 250mA。
【文檔編號(hào)】G01N27/447GK103645235SQ201310599391
【公開日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月25日
【發(fā)明者】簡(jiǎn)玉君 申請(qǐng)人:簡(jiǎn)玉君