菇蕈類分析方法
【專利摘要】一種菇蕈類分析方法，可快速定性及定量菇蕈類的有效成分，其乃利用三維熒光激發(fā)發(fā)射檢測系統(tǒng)分析一菇蕈類樣品，該三維熒光檢測系統(tǒng)的激發(fā)波長及發(fā)射波長分別設(shè)定在250nm及310nm。
【專利說明】窺章類分析方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是關(guān)于一種茹覃類分析方法，特別是關(guān)于一種可W快速篩檢茹覃類的有效 成分的分析方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 茹覃類富含多糖體，可W刺激巨瞻細(xì)胞活化、分泌腫瘤壞死因子（TNF)及白血球介 素-2 (IL-2)、促進(jìn)抗體產(chǎn)生，因而具有良好防癌抗癌效果。其中，特別如牛棒芝，除多糖體 夕F，另具有高達(dá)200多種H聰類成分，具有抑制腫瘤細(xì)胞生長、修復(fù)肝臟及促進(jìn)肝功能、降 低血脂及血壓、提升免疫能力等功能，因而被認(rèn)為是極佳的保健圣品。
[0003] 由于茹覃類被認(rèn)為具有極佳腫瘤抑制療效，許多業(yè)者研發(fā)各式茹覃類培養(yǎng)或萃取 方法，W提升茹覃類萃取物的有效成分含量；只是，現(xiàn)有茹覃類分析方法卻有如下缺陷：
[0004] 現(xiàn)有的茹覃類分析方法，系萃取一茹覃類樣品的脫氧核糖核酸 (deoxyribonucleic acid,簡稱DNA), W一聚合酶連鎖反應(yīng)（polymerase chain reaction, 簡稱 PCR)或 W - 即時聚合酶連鎖反應(yīng)（rea]_-time chain reaction,簡稱 real-time PCR) 進(jìn)行分析；但是，該現(xiàn)有的茹覃類分析方法僅可W用W分析該茹覃類樣品的品種，無法對該 茹覃類樣品所含有的有效成分進(jìn)行定性或定量分析。
[000引另一現(xiàn)有茹覃類分析方法，則是W逆相層析法（reversed地ase chromatography,如使用C18層析管柱）對茹覃類樣品進(jìn)行分析，雖然可W定性及定量該茹 覃類樣品的主要化合物（即該茹覃類樣品的有效成分)，但是，該逆相層析法不僅分析的時 間較長，在每個樣品分析之后，又需要額外的時間沖洗層析管柱，并且需待該層析管柱回復(fù) 平衡狀態(tài)后，才可W進(jìn)行下一個待測樣品的分析，相當(dāng)耗費時間，因此不適用于大規(guī)模的待 測樣品篩檢。
[0006] 據(jù)此，的確有必要提供一種茹覃類分析方法，W解決上述問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的主要目的是提供一種茹覃類分析方法，W定性及定量茹覃類樣品的有效 成分，而提升市售茹覃類商品的品質(zhì)。
[0008] 本發(fā)明的另一目的是提供一種茹覃類分析方法，W快速檢驗茹覃類樣品的有效成 分，而節(jié)省分析時間。
[0009] 為達(dá)到前述發(fā)明目的，本發(fā)明所運用的技術(shù)手段及借助該技術(shù)手段所能達(dá)到的功 效包含有：
[0010] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，包含：步驟（a):提供一茹覃類樣品；步驟（b): W-H 維英光檢測系統(tǒng)分析該茹覃類樣品，該H維英光檢測系統(tǒng)的激發(fā)波長及發(fā)射波長分別為 250nm 及 310nm。
[0011] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，其中，較佳于W該H維英光檢測系統(tǒng)分析該茹覃類樣 品前，將步驟（a)所提供的該茹覃類樣品經(jīng)分子篩選層析系統(tǒng)分離出一純化的茹覃類樣品， 續(xù)W該H維英光檢測系統(tǒng)分析該純化的茹覃類樣品。
[0012] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，其中，該純化的茹覃類樣品的分子量為100? lOOOODa。
[0013] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，其中，該步驟（a)中的該茹覃類樣品較佳是茹覃類萃取 物經(jīng)稀釋至澄清透明，且W 0. 22 y m過濾膜進(jìn)行過濾。
[0014] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，是借助檢測茹覃類萃取物的分子結(jié)構(gòu)特征，可W定性 及定量該茹覃類萃取物的有效成分，W達(dá)到提升市售茹覃類萃取物品質(zhì)的功效。
[0015] 本發(fā)明的茹覃類分析方法，是借助茹覃類萃取物的分子結(jié)構(gòu)所具有的激發(fā)波長及 發(fā)射波長，W計算該茹覃類萃取物的有效成分含量，可W大幅減少檢測及分析的時間，達(dá)到 快速待測樣品篩檢的功效。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為本發(fā)明第一較佳實施例的茹覃類分析方法的流程圖。
[0017] 圖2A為第1表的牛棒芝稀釋液的外觀圖。
[0018] 圖2B為第1表的牛棒芝過濾液的外觀圖。
[0019] 圖3為第1表的牛棒芝稀釋液及牛棒芝過濾液的粒徑分析結(jié)果圖。
[0020] 圖4A為第A1-1組牛棒芝稀釋液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0021] 圖4B為第A2-1組牛棒芝稀釋液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0022] 圖4C為第A3-1組牛棒芝稀釋液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0023] 圖4D為第A4-1組牛棒芝稀釋液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0024] 圖5A為第A1-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[00巧]圖5B為第A2-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0026] 圖5C為第A3-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0027] 圖抓為第A4-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第一較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0028] 圖6為本發(fā)明第二較佳實施例的茹覃類分析方法的流程圖。
[0029] 圖7為本發(fā)明第二較佳實施例的分子篩選層析系統(tǒng)W分子量標(biāo)準(zhǔn)品及丙麗繪制 的率定曲線圖。
[0030] 圖8為第A4-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的分子篩選層析系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[0031] 圖9為第A4-2組牛棒芝過濾液經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分 析結(jié)果圖。
[003引圖lOA為牛棒芝指標(biāo)成分（4, 7-雙甲氧基-5-甲基-1，3-雙氧苯）經(jīng)本發(fā)明第二 較佳實施例的分子篩選層析系統(tǒng)分析結(jié)果圖。
[0033] 圖10B為牛棒芝指標(biāo)成分(馬偕1號)經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的分子篩選層析系 統(tǒng)分析結(jié)果圖。
[0034] 圖11A為牛棒芝指標(biāo)成分（4, 7-雙甲氧基-5-甲基-1,3-雙氧苯）經(jīng)本發(fā)明第二 較佳實施例的H維英光檢測系統(tǒng)分析結(jié)果圖。
[003引圖11B為牛棒芝指標(biāo)成分巧偕1號)經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的立維英光檢測系 統(tǒng)分析結(jié)果圖。
[003引圖12A為不同濃度的牛棒芝指標(biāo)成分（4, 7-雙甲氧基-5-甲基-1,3-雙氧苯）于 波長205nm吸收值關(guān)系圖。
[0037] 圖12B為牛棒芝指標(biāo)成分（4, 7-雙甲氧基-5-甲基-1,3-雙氧苯）于波長380皿 吸收值關(guān)系圖。
[0038] 圖12C為不同濃度的牛棒芝指標(biāo)成分(馬偕1號）于波長205nm吸收值關(guān)系圖。
[0039] 圖12D為不同濃度的牛棒芝指標(biāo)成分(馬偕1號）于波長380nm吸收值關(guān)系圖。
[0040] 圖13為不同濃度的牛棒芝指標(biāo)成分(馬偕1號）于波長270nm吸收值關(guān)系圖。
[0041] 圖14為冬蟲夏草指標(biāo)成分（蟲草素）經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的H維英光檢測系 統(tǒng)分析結(jié)果圖。
[0042] 圖15為冬蟲夏草指標(biāo)成分（蟲草素）經(jīng)本發(fā)明第二較佳實施例的H維英光檢測系 統(tǒng)分析結(jié)果圖。

【具體實施方式】
[0043] 為讓本發(fā)明的上述及其他目的、特征及優(yōu)點能更明顯易懂，下文特舉本發(fā)明的較 佳實施例，并配合所附附圖，作詳細(xì)說明如下：
[0044] 請參照圖1所示，為本發(fā)明的第一較佳實施例，該第一較佳實施例的茹覃類分析 方法包含：提供一茹覃類樣品，及W -H維英光檢測系統(tǒng)分析該茹覃類樣品。
[0045] 詳而言之，茹覃類樣品可W通過一溶劑進(jìn)行萃取，且該溶劑可W為水或各種有機 溶劑，使該茹覃類所含有的有效成分巧日多糖體或H聰類）可W溶出于該溶劑，又或者，該茹 覃類也能夠W超臨界二氧化碳進(jìn)行萃取，在此不加W設(shè)限。
[0046] 較佳地，茹覃類樣品能夠W溶劑（即用W進(jìn)行萃取的溶劑）稀釋，使該茹覃類樣品 呈澄清透明，并且W 0. 22 y m過濾膜（孔徑）進(jìn)行過濾，W避免該茹覃類樣品的色度及該茹 覃類樣品中的多糖體聚集影響后續(xù)分析的判讀結(jié)果。
[0047] 接著，續(xù)將上述茹覃類樣品維英光檢測系統(tǒng)進(jìn)行分析，其起始及最終激發(fā)波 長設(shè)定為200?900nm，起始及最終發(fā)射波長設(shè)定為200?900nm，激發(fā)及發(fā)射波長光柵為 lOnm，掃描設(shè)定為30000nm/min，并且，選用為700V的光電倍增管；較佳地，該H維英光檢測 系統(tǒng)的激發(fā)波長及發(fā)射波長分別為250nm及310nm。
[0048] 為證實第一較佳實施例的茹覃類分析方法可W有效定性及定量茹覃類樣品所含 有效成分，取一牛棒芝萃取液進(jìn)行測試；其中，該牛棒芝萃取液經(jīng)W下方式獲得：取一牛棒 芝干燥粉末，W-己醇溶劑(濃度為95%)進(jìn)行萃取，該牛棒芝干燥粉末及該己醇溶劑的比例 為1 ;1 (W ;v)，重復(fù)萃取H次后，W獲得一牛棒芝原液，并將該牛棒芝原液進(jìn)行濃縮，W獲得 該牛棒芝萃取液。
[0049] 請參照第1表所示，上述牛棒芝萃取液W己醇溶劑(濃度為95%)分別進(jìn)行稀釋 10X (第 A1-1 組X100X (第 A2-1 組)、1，000X (第 A3-1 組)及 10, 000X (第 A4-1 組)，W獲 得各組的牛棒芝稀釋液，并定量各組牛棒芝稀釋液的總體積為50mU分別取15mL的各組牛 棒芝稀釋液置入離也管中保存，其余樣本則W耐酒精的0. 22 y m醋酸纖維濾膜（Cellulose acetate ester,購自Advantec MFS Inc.、USA)進(jìn)行過濾，W獲得各組的牛棒芝過濾液(分 別命名為第A1-2?A4-2組)。
[0050] 第1表、本試驗各組牛棒芝稀釋液及牛棒芝過濾液的稀釋倍數(shù)
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種菇蕈類分析方法，其特征在于，包含： 步驟（a):提供菇蕈類樣品； 步驟（b):以三維熒光檢測系統(tǒng)分析該菇蕈類樣品，該三維熒光檢測系統(tǒng)的激發(fā)波長 及發(fā)射波長分別為250 nm及310 nm。
2. 如權(quán)利要求1所述的菇蕈類分析方法，其特征在于，于該步驟（b)之前，將步驟（a) 的該菇蕈類樣品經(jīng)分子篩選層析系統(tǒng)分離出純化的菇蕈類樣品，續(xù)以該三維熒光檢測系統(tǒng) 分析該純化的菇蕈類樣品。
3. 如權(quán)利要求2所述的菇蕈類分析方法，其特征在于，該純化的菇蕈類樣品的分子量 為 100 ?10000 Da。
4. 如權(quán)利要求1、2或3所述的菇蕈類分析方法，其特征在于，該步驟（a)中的該菇蕈類 樣品是菇蕈類萃取物經(jīng)稀釋至澄清透明，且以0. 22 y m過濾膜進(jìn)行過濾所得到。
【文檔編號】G01N21/64GK104422677SQ201310407412
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】劉崇喜, 劉怡旻, 賴文亮, 曹靜雯 申請人:漢圣生物科技股份有限公司