專利名稱：有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定試紙，屬于農(nóng)藥檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
民以食為天，農(nóng)藥使用或濫用的食品安全問題日益加劇，對集貿(mào)市場、批發(fā)市場、超市、生產(chǎn)基地蔬菜的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的快速檢測，實現(xiàn)蔬菜的無公害化，具有重大意義。終端現(xiàn)場，包括家庭、市場、社區(qū)等的共同特點是應(yīng)在較短時間內(nèi)完成檢測，不需要給出量化值，只需了解是否超標即可。此類技術(shù)應(yīng)具有易用性、快速性和足夠靈敏度，能進行超標或不超標的判斷。急需探索一種操作簡便、快速、靈敏度足夠高的技術(shù)和手段對農(nóng)藥殘留測定。目前，按國家標準(GB/T 5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測)廣泛應(yīng)用的農(nóng)藥殘毒速測卡是利用對有機磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥高敏感的膽堿酯酶和顯色劑做成的速測卡，不易保存，操作需人工用手捏壓，難度大，增加了隨機性和不確定性，并且，易受溫度影響，檢測耗時長。溫敏性微膠囊對環(huán)境溫度變化能智能響應(yīng)，具有溫度敏感性的微膠囊在溫度發(fā)生變化時，其囊壁會表現(xiàn)為通透性的改變，能夠有效控制囊心的負載和釋放。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，在保持成本低廉的同時提供操作方便、保存時間長、易于推廣、提高檢測精度、減少檢測時間的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測試紙，可以作定性及半定量分析使用。本發(fā)明的檢測原理是膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯(紅色)水解為乙酸與靛酚(藍色)，有機磷或氨基甲酸脂類農(nóng)藥對膽堿酯酶有抑制作用，膽堿酯酶便失去催化靛酚乙酸酯水解的能力，根據(jù)水解、變色過程的顏色改變，可判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在，靠目測就可判斷農(nóng)藥殘留情況，即:藍色(_)、淺藍色( + )、白色(+)。本發(fā)明的技術(shù)方案是利用溫敏微膠囊技術(shù)制成檢測試紙，在特定溫度臨界區(qū)域，釋放包裹的膽堿酯酶，催化靛酚乙酸酯水解顯色，進而判定農(nóng)藥殘留情況。一種有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙，包括如下制作步驟:
(I)溫敏微膠囊制備
按照2g =IOOmL的比例，配制瓊脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液的混合液，力口入壓力鍋中加熱至0.05KPa，保持15-20min，常壓自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒溫進行甲基化反應(yīng)，邊攪拌邊逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,調(diào)節(jié)pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的膽堿酯酶，加入已消毒處理的37°C石蠟油，使之分散均勻，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min離心除去油相3min，反復(fù)3次，油相除凈后，得到溫敏微膠囊； (2)顯色液制備
取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸緩沖液中；
(3)試紙制備
將溫敏微膠囊和顯色液按1:1比例混合后，涂布在原試紙上，并在室溫下風(fēng)干得到溫敏微膠囊涂層，涂層厚度約為100-200 μ m。本發(fā)明方法制作的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙的使用按照如下步驟:
(1)選取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icrn左右見方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、約37°C -40°C的蒸餾水或緩沖溶液，震搖50次左右，靜置2_5分鐘；
(2)每批測定時設(shè)一個蒸餾水或緩沖液作為樣本提取液的空白對照，以作參照；
(3)取試紙浸入約37°C_40°C的樣本提取液中，靜止30s-lmin，觀察顏色變化；
(4)與空白對照比較，顏色變?yōu)樘焖{色或與空白對照相同，為陰性結(jié)果，白色不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量較高，對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。本發(fā)明的有益效果是，一次性使用，價格低廉，不需要專門配制試劑，省去分析儀器的維護工作；使用較人工擠壓更簡單，結(jié)果判定一目了然，無須培訓(xùn)；試劑用量更少，檢測時間更短，在Imin內(nèi)完成；膽堿酯酶受微膠囊保護更穩(wěn)定，保存時間長；溶液的370C -40°C熱環(huán)境容易實現(xiàn)，溫度控制更方便、精準，不會出現(xiàn)不夠濕潤和溫度太低情況；便于推廣，是農(nóng)貿(mào)市場、超市、學(xué)校、酒店、工廠等場所快速檢測農(nóng)藥殘留的首選。


下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一步說明。圖1是溫敏微膠囊的DSC升降溫熱分析曲線。圖2是部分農(nóng)藥的檢測結(jié)果表。
具體實施例方式一種有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙，包括如下制作步驟:
(1)溫敏微膠囊制備
按照2g =IOOmL的比例，配制瓊脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液的混合液，力口入壓力鍋中加熱至0.05KPa，保持15-20min，常壓自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒溫進行甲基化反應(yīng)，邊攪拌邊逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,調(diào)節(jié)pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的膽堿酯酶，加入已消毒處理的37°C石蠟油，使之分散均勻，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min離心除去油相3min，反復(fù)3次，油相除凈后，得到溫敏微膠囊；
(2)顯色液制備
取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸緩沖液中；
(3)試紙制備
將溫敏微膠囊和顯色液按1:1比例混合后，涂布在原試紙上，并在室溫下風(fēng)干得到溫敏微膠囊涂層，涂層厚度約為100-200 μ m。
本發(fā)明方法制作的有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙的使用按照如下步驟:
(1)選取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icrn左右見方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、約37°C -40°C的蒸餾水或緩沖溶液，震搖50次左右，靜置2_5分鐘；
(2)每批測定時設(shè)一個蒸餾水或緩沖液作為樣本提取液的空白對照，以作參照；
(3)取試紙浸入約37°C_40°C的樣本提取液中，靜止30s-lmin，觀察顏色變化；
(4)與空白對照比較，顏色變?yōu)樘焖{色或與空白對照相同，為陰性結(jié)果，白色不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量較高，對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。使用DSC (Pyris Diamond，PERKIN-ELMER)對溫敏微膠囊進行量熱分析，結(jié)果如圖1所示，可知升溫降溫曲線幾乎完全相同，相變熱變化相同，凝固溫度和融化溫度分別為23°C和36°C?？芍?，當使用溫度為37°C_40°C，微膠囊壁材發(fā)生融化，釋放膽堿酯酶，并催化靛酚乙酸酯分解。按本發(fā)明所述步驟對部分常用農(nóng)藥實施檢測，配制農(nóng)藥的不同濃度標準樣液，并噴灑至蔬菜表面，模擬樣品進行檢測，結(jié)果如圖2所示，與“GB/T 5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測”比較，均達到國標所述的靈敏度要求的檢出限，并且全部50份陽性樣品，經(jīng)氣相色譜法驗證，陽性結(jié)果的符合率達95%。
權(quán)利要求
1.一種有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙，其特征在于，包括如下制作步驟: (1)溫敏微膠囊制備 按照2g =IOOmL的比例，配制瓊脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸鹽緩沖液的混合液，力口入壓力鍋中加熱至0.05KPa，保持15-20min，常壓自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒溫進行甲基化反應(yīng)，邊攪拌邊逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,調(diào)節(jié)pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的膽堿酯酶，加入已消毒處理的37°C石蠟油，使之分散均勻，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min離心除去油相3min，反復(fù)3次，油相除凈后，得到溫敏微膠囊； (2)顯色液制備 取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸緩沖液中； (3)試紙制備 將溫敏微膠囊和顯色液按1:1比例混合后，涂布在原試紙上，并在室溫下風(fēng)干得到溫敏微膠囊涂層，涂層厚度約為100-200 μ m。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測試紙，其特征在于，使用方法按照如下步驟: (1)選取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icm左右見方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、約37°C -40°C的蒸餾水或緩沖溶液，震搖50次左右，靜置2_5分鐘； (2)每批測定時設(shè)一個蒸餾水或緩沖液作為樣本提取液的空白對照，以作參照； (3)取試紙浸入約37°C_40°C的樣本提取液中，靜止30s-lmin，觀察顏色變化； (4)與空白對照比較，顏色變?yōu)樘焖{色或與空白對照相同，為陰性結(jié)果，白色不變色或略有淺藍色均為陽性結(jié)果，說明農(nóng)藥殘留量較高，對陽性結(jié)果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速篩選測定試紙。本發(fā)明的技術(shù)方案是利用溫敏微膠囊技術(shù)制成檢測試紙，在特定溫度臨界區(qū)域，釋放包裹的膽堿酯酶，催化靛酚乙酸酯水解顯色，進而判定農(nóng)藥殘留情況。本發(fā)明為一次性使用，價格低廉，不需要專門配制試劑，省去分析儀器的維護工作；使用較人工擠壓更簡單，結(jié)果判定一目了然，無須培訓(xùn)；試劑用量更少，檢測時間更短，在1min內(nèi)完成；膽堿酯酶受微膠囊保護更穩(wěn)定，保存時間長；溶液的37℃-40℃熱環(huán)境容易實現(xiàn)，溫度控制更方便、精準，不會出現(xiàn)不夠濕潤和溫度太低情況；便于推廣，是農(nóng)貿(mào)市場、超市、學(xué)校、酒店、工廠等場所快速檢測農(nóng)藥殘留的首選。
文檔編號G01N21/78GK103163131SQ20131011660
公開日2013年6月19日 申請日期2013年4月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月7日
發(fā)明者鄭藝華, 劉君 申請人:青島大學(xué)