一種測定血漿中丹酚酸l的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥物在血漿中的含量的方法，步驟如下：（1）樣品處理：取血漿樣品，加入酸溶液和內(nèi)標溶液適量，混合；之后加入有機溶劑混合進行萃取；上述混合液離心后取有機溶劑層，在水浴下吹干，然后用液相流動相復(fù)溶后離心，取上清液進樣測定；（2）液相分離：液質(zhì)聯(lián)用儀的液相部分采用反相硅膠色譜柱作為分離介質(zhì)，進樣后用固定比例流動相進行等度洗脫，使干擾物、待測物和內(nèi)標獲得初步分離；其中流動相A相選自甲酸水溶液、乙酸水溶液、三氟乙酸水溶液或醋酸銨水溶液，B相選自乙腈或甲醇，A相占整個流動相的30-90%；（3）質(zhì)譜檢測：液質(zhì)聯(lián)用儀的質(zhì)譜部分按照設(shè)定的離子化條件，采用SRM掃描功能檢測血漿樣品中丹酚酸L和內(nèi)標的含量。
【專利說明】一種測定血漿中丹酚酸L的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物在血漿中的含量的方法，特別涉及一種測定血漿中丹酚酸L 的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 丹酚酸L是由天津天士力集團研究院發(fā)現(xiàn)的一種新的酚酸類化合物，具有抗氧 化、清除自由基、抑制血小板聚集和抗血栓形成等藥理作用。
[0003] 其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0004]

【權(quán)利要求】
1. 一種測定血漿中丹酚酸L的方法，其特征在于，步驟如下： (1) 樣品處理：取血漿樣品，加入酸溶液和內(nèi)標溶液適量,混合；之后加入有機溶劑混 合進行萃取；上述混合液離心后取有機溶劑層，在水浴下吹干，然后用液相流動相復(fù)溶后離 心，取上清液進樣測定； (2) 液相分離：液質(zhì)聯(lián)用儀的液相部分采用反相硅膠色譜柱作為分離介質(zhì)，進樣后用固 定比例流動相進行等度洗脫，使干擾物、待測物和內(nèi)標獲得初步分離；其中流動相A相選自 選自甲酸水溶液、乙酸水溶液、三氟乙酸水溶液或醋酸銨水溶液，B相選自乙腈或甲醇，A相 占整個流動相的30-90% ; (3) 質(zhì)譜檢測：液質(zhì)聯(lián)用儀的質(zhì)譜部分按照設(shè)定的離子化條件，采用SRM掃描功能檢測 血漿樣品中丹酚酸L和內(nèi)標的含量。
2. 權(quán)利要求1所述測定血漿中丹酚酸L的方法，其特征在于，步驟如下： (1) 樣品處理：取1體積血漿樣品，加入0. 25倍體積酸溶液、內(nèi)標溶液適量，渦旋混合 10s-3min ;之后加入有機萃取溶劑，潤旋混合l-10min ;上述混合液在2000-6000r/min下離 心l-10min后取有機溶劑層，在10-60°C水浴下氮氣吹干，然后用0. 5倍體積的流動相復(fù)溶， 10000_15000r/min離心l-10min后取上清液進樣測定； (2) 液相分離：液質(zhì)聯(lián)用儀的液相部分采用反相C8或C18硅膠色譜柱作為分離介質(zhì)，進 樣后用固定比例流動相進行等度洗脫，流動相流速為〇. 1-0. 4mL/min ;流動相選自0. 02-5% 的甲酸水溶液和乙腈的組合或〇. 02-5%的甲酸水溶液和甲醇的組合，兩種組合中甲酸水溶 液的比例為30-90% ; (3) 質(zhì)譜檢測：液質(zhì)聯(lián)用儀的質(zhì)譜部分采用電噴霧離子化（ESI)離子源將液相洗脫液 離子化，采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀的SRM掃描功能檢測血漿樣品中丹酚酸L內(nèi)標的含量。
3. 權(quán)利要求1所述測定血漿中丹酚酸L的方法，其特征在于，步驟如下： (1) 樣品處理：取1體積血漿樣品，加入0. 25倍體積酸溶液、0. 1倍體積內(nèi)標迷迭香酸 溶液，潤旋混合30s ;之后加入萃取用有機溶劑，潤旋混合3min ;上述混合液在3500r/min 下離心6min后取有機溶劑層，在30°C水浴下氮氣吹干，然后用0. 5倍體積的流動相復(fù)溶， 12000r/min離心3min后取上清液進樣測定； (2) 液相分離：液質(zhì)聯(lián)用儀的液相部分采用反相C18硅膠色譜柱作為分離介質(zhì)，進樣后 用流動相進行洗脫，流動相流速為〇. 25mL/min ;流動相A相為0. 1%的甲酸水溶液，B相為乙 腈，A相占流動相的百分比為70% ; (3) 質(zhì)譜檢測：液質(zhì)聯(lián)用儀的質(zhì)譜部分采用電噴霧離子化（ESI)離子源將液相洗脫液 離子化，采用三重四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀的SRM掃描功能檢測血漿樣品中丹酚酸L內(nèi)標的含量。
4. 如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，中步驟（1)所述的酸選自鹽酸、硫 酸、硝酸、磷酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸所組成的組中的至少一種。
5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述酸為0. 01-5mol/L的鹽酸水溶液或 0. 1-10%的甲酸水溶液或0. 01-0. 1%的磷酸水溶液。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述酸為lmol/L的鹽酸水溶液。
7. 如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，中步驟（1)所述內(nèi)標溶液選自丹參 素、咖啡酸、阿魏酸、迷迭香酸、丹酚酸A、丹酚酸B中的一種。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述內(nèi)標溶液為迷迭香酸水溶液。
9. 如權(quán)利要求1-3所述的方法，其特征在于，中步驟（1)所述機溶劑選自乙酸乙酯、石 油醚、正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷所組成的組中的至少一種。
10. 如權(quán)利要求9所述的方法，特征在于，所述有機溶劑為5-25倍血漿體積的乙酸乙酯 或5-25倍血漿體積的二氯甲烷：正己烷=1 :9-9 :1或5-25倍血漿體積的三氯甲烷：正己烷 =1 :9-9 :1。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于所述有機溶劑為15倍血漿體積的乙酸乙 酯。
12. 如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，步驟（3)所述離子化條件，其特征 在于離子化條件選用電噴霧離子化（ESI )，其參數(shù)設(shè)置為噴霧電壓：-2500--3500V ;殼氣： l-15arb ;輔助氣：5-30arb ;毛細管溫度：250-400°C。
13. 如權(quán)利要求1-3所述的方法，其特征在于，步驟（3)所述離子化條件參數(shù)設(shè)置為噴 霧電壓：-3000V ;殼氣：5arb ;輔助氣：20arb ;毛細管溫度：350°C。
14. 如權(quán)利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，步驟（3) SRM掃描，檢測丹酚酸L 離子對選自m/z537- 295或537-493或537-185中的一種，碰撞能CE=5-40eV ;檢測迷迭 香酸離子對選自：m/z359-161，碰撞能CE=5_30eV。
15. 如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，步驟（3) SRM掃描，為檢測丹酚酸L離子 對選自：m/z537- 295，CE=20eV;檢測迷迭香酸離子對選自：m/z359- 161，CE=19eV。
【文檔編號】G01N30/02GK104062392SQ201310093029
【公開日】2014年9月24日 申請日期:2013年3月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月22日
【發(fā)明者】李偉, 李淑明, 王相陽, 褚揚, 郭嘉華, 馬曉慧, 周水平, 朱永宏 申請人:天士力制藥集團股份有限公司