專利名稱：金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，屬于對(duì)藥材進(jìn)行質(zhì)量控制的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
金鐵鎖(Psammosilene tunicoides),為石竹科金鐵鎖屬植物金鐵鎖的干燥根，以根入藥。主要分布在貴州、云南、四川、西藏等中國西南地區(qū)，是我國西南地區(qū)特有的單屬種植物，也是貴州民間常用中草藥，現(xiàn)已作為稀有瀕危物種列于《中國植物紅皮書》中，屬國家二級(jí)保護(hù)植物。金鐵鎖具有散瘀定痛、止血及消癰排膿之功效，用于跌打損傷、風(fēng)濕痛、胃氣痛、創(chuàng)傷出血等的治療。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，金鐵鎖藥材在鎮(zhèn)痛、抗炎、抑菌及調(diào)節(jié)免疫功能等方面均具有顯著性效果，且發(fā)現(xiàn)金鐵鎖中主要的化學(xué)成分為三萜皂苷類和環(huán)肽類化合物。但是目前，還沒有關(guān)于金鐵鎖藥材質(zhì)量控制方法研究的文獻(xiàn)報(bào)道。雖然金鐵鎖被收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版 中，但在該標(biāo)準(zhǔn)中既無薄層色譜鑒別項(xiàng)，也無含量測(cè)定項(xiàng)；而且在《中國藥典》2010年版中也只有對(duì)照藥材的薄層鑒別項(xiàng)。而如果沒有嚴(yán)密的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和科學(xué)的檢測(cè)手段，就難以有效地控制其內(nèi)在質(zhì)量，不能保證用藥的安全、有效，也不符合國際醫(yī)藥市場的要求，因而可能會(huì)嚴(yán)重制約我國中藥行業(yè)的發(fā)展。因此，加強(qiáng)中藥材質(zhì)量控制研究是中藥規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化的關(guān)鍵問題，只有對(duì)中藥材進(jìn)行科學(xué)的質(zhì)量控制，才能保證中藥質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)中藥材的“安全、有效、穩(wěn)定、可控”。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法。本發(fā)明通過對(duì)金鐵鎖中具有生物活性的入血化學(xué)成分尿囊素的含量進(jìn)行定量研究，完善了金鐵鎖藥材的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，使金鐵鎖藥材的質(zhì)量檢測(cè)方法更為科學(xué)、合理。本發(fā)明是這樣構(gòu)成的:一種金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，即以尿囊素對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動(dòng)相的高效液相色譜法。具體的含量測(cè)定方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定:色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動(dòng)相；流速為0.5 2mL.mirT1 ;柱溫為30 5(TC ;檢測(cè)波長為21(T240nm ；理論板數(shù)應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備:精密稱取尿囊素對(duì)照品，加109^50%乙醇制成每ImL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得；供試品溶液的制備:取金鐵鎖藥材粉末0.5飛g，精密稱定，置于具塞錐形瓶或三角瓶中，加入10% 50%乙醇l(T40mL，稱定重量，超聲提取l(T60min，用10% 50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各f 10 U L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。優(yōu)選的含量測(cè)定方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定:色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動(dòng)相；流速為ImL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測(cè)波長為220nm ;理論板數(shù)應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備:精密稱取尿囊素對(duì)照品，加20%乙醇制成每ImL含0.05
0.30mg尿囊素的溶液，即得；供試品溶液的制備:取金鐵鎖藥材粉末2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶或三角瓶中，加入20%乙醇30mL，稱定重量，超聲提取40min，用20%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 U L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。金鐵鎖(Psammosilene tunicoides)藥材收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2003年版中，但在該標(biāo)準(zhǔn)中既無金鐵鎖藥材的薄層色譜鑒別項(xiàng)，也無含量測(cè)定項(xiàng)，同時(shí)在《中國藥典》2010年版中也只有金鐵鎖的對(duì)照藥材的薄層鑒別項(xiàng)，因此為了更有效的控制金鐵鎖藥材的質(zhì)量，本發(fā)明人對(duì)其質(zhì)量檢測(cè)方法進(jìn)行了專門研究。通過查閱國內(nèi)外文 獻(xiàn)資料發(fā)現(xiàn):金鐵鎖藥材質(zhì)量控制方法方面的研究文獻(xiàn)報(bào)道很少，為此，發(fā)明人對(duì)金鐵鎖的入血化學(xué)成分進(jìn)行了研究，確定了金鐵鎖的生物活性成分尿囊素屬于入血化學(xué)成分；在確定入血化學(xué)成分的基礎(chǔ)上，再對(duì)金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法進(jìn)行了試驗(yàn)研究。以下是本發(fā)明人對(duì)金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法進(jìn)行試驗(yàn)研究的過程:一、金鐵鎖藥材入血化學(xué)成分的確定本發(fā)明人對(duì)有關(guān)金鐵鎖藥材的文獻(xiàn)進(jìn)行了大量的研究，而且根據(jù)發(fā)明人所在課題組前期對(duì)金鐵鎖展開的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，尿囊素為金鐵鎖藥材中的生物活性成分，因此選取金鐵鎖藥材的尿囊素為指標(biāo)進(jìn)行了入血試驗(yàn)研究:取金鐵鎖藥材干燥、粉碎后，用l(T50mL的10% 40%食用乙醇提取兩次；合并提取液，減壓濃縮回收溶劑后得金鐵鎖提取物。取適量金鐵鎖提取物用水溶解，配成濃度為20mg -mr1的水溶液；取金鐵鎖提取物水溶液2 4mL，對(duì)重量為180 220g的大鼠灌胃給藥，分別在10min、30min、60min及120min對(duì)大鼠進(jìn)行采血；將血液離心后取上層血衆(zhòng),用乙腈或甲醇沉淀蛋白，渦旋混勻后離心，將上層清液置于氮吹儀上吹干；取適量吹干物，加入乙腈-水=93:7 (體積比)溶液進(jìn)行溶解、離心，作為供試品溶液；空白血漿按照同樣的方法進(jìn)行處理；取尿囊素對(duì)照品制成對(duì)照品溶液。高效液相色譜條件為:以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動(dòng)相；流速為ImL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測(cè)波長為220nm ;理論板數(shù)應(yīng)不低于3000。測(cè)定結(jié)果如

圖1 圖6所示，從圖1 圖6可以看出，尿囊素為金鐵鎖藥材中的一種入血化學(xué)成分。
二、金鐵鎖藥材中尿囊素的含量測(cè)定方法的研究1.儀器與試藥:Ultimate300高效液相色譜儀，其包括四元泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、二極管陣列檢測(cè)器和柱溫箱；十萬分之一電子天平(由梅特勒-托利多儀器上海有限公司提供)；KQ5200E型超聲波清洗(由昆明市超聲儀器有限公司提供)；色譜乙腈、水(重蒸水，臨用前制備)、無水乙醇、尿囊素對(duì)照品(由中國藥品生物制品檢定所提供)和金鐵鎖藥材(采自6個(gè)不同產(chǎn)地)。2.色譜條件的選擇發(fā)明人在進(jìn)行尿囊素色譜條件的選擇時(shí)，尤其對(duì)色譜柱及流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了選擇。根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定尿囊素的色譜條件為:Z0RBAX NH2 (4.6 X 150mm, 5 um)色譜柱，乙腈-水(93: 7)為流動(dòng)相，流速為ImL mirT1，檢測(cè)波長為220nm。選擇條件見表I。表I尿囊素色譜條件的選擇
權(quán)利要求
1.一種金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，其特征在于，所述含量測(cè)定方法是以尿囊素對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈或甲醇:水=60 100:0 40為流動(dòng)相的高效液相色譜法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，其特征在于，具體方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇:水=60~100:0 40為流動(dòng)相；流速為0.5 2mL*min-1 ;柱溫為30~50°C ;檢測(cè)波長為21 0~240nm ;理論板數(shù)應(yīng)不低于3000 ； 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取尿囊素對(duì)照品，加10%~50%乙醇制成每1mL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取金鐵鎖藥材粉末0.5~5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶或三角瓶中，加入10% 50%乙醇l0~40mL，稱定重量，超聲提取l0~60min，用10% 50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各1~1Ou L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，其特征在于，具體方法為:按照《中國藥典》2010年版一部附錄VID高效液相色譜法測(cè)定: 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以氨基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈:水=93:7為流動(dòng)相；流速為1mL miiT1 ;柱溫為40°C ;檢測(cè)波長為220nm ;理論板數(shù)應(yīng)不低于3000 ； 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取尿囊素對(duì)照品，加20%乙醇制成每1mL含0.05 0.30mg尿囊素的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取金鐵鎖藥材粉末2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶或三角瓶中，力口A 20%乙醇30mL，稱定重量，超聲提取40min，用20%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種金鐵鎖藥材中入血化學(xué)成分尿囊素的含量測(cè)定方法，所述方法即以尿囊素對(duì)照品為對(duì)照，以乙腈或甲醇水=60～1000～40為流動(dòng)相的高效液相色譜法。本發(fā)明選擇金鐵鎖藥材中的入血化學(xué)成分——尿囊素為指標(biāo)進(jìn)行含量測(cè)定，該測(cè)定方法精密度高、重現(xiàn)性好、穩(wěn)定性好、回收率高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制金鐵鎖藥材的質(zhì)量，從而確保其臨床用藥的安全、有效。
文檔編號(hào)G01N30/02GK103115976SQ20131003099
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者周欣, 龔小見, 陳華國, 趙超, 趙楊 申請(qǐng)人:貴州師范大學(xué)