用于診斷中風(fēng)的nt-原anp和nt-原bnp的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作(TIA)的方法，所述受試者被懷疑已展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但尚未展現(xiàn)中風(fēng)。該方法基于來自所述受試者的樣品中NT-原ANP量的測定。而且，本發(fā)明還針對一種用于診斷受試者中的急性腦缺血事件的方法，其基于來自所述受試者的樣品中NT-原BNP和NT-原ANP量的測定。所述方法還包括計(jì)算NT-原BNP和NT-原ANP的量的比率的步驟。本發(fā)明還涵蓋適用于實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒和裝置。上面提到的量/比率的高數(shù)值指示了病癥。優(yōu)選地，所述患者在收集樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選地24小時內(nèi)已經(jīng)懷疑具有TIA的癥狀。然而，優(yōu)選地，所述樣品在癥狀結(jié)束后不早于1小時獲得。
【專利說明】用于診斷中風(fēng)的NT-原ANP和NT-原BNP 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，所述受試 者被懷疑已展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作（Transitory ischemic attack),但尚未展現(xiàn)中風(fēng) (stroke)。該方法基于來自所述受試者的樣品中NT-原ANP量的測定。而且，本發(fā)明還針對 一種用于診斷受試者中的急性腦缺血事件（acute cerebral ischemic event)的方法，其 基于來自受試者的樣品中NT-原BNP和NT-原ANP量的測定。所述方法還包括計(jì)算NT-原 BNP和NT-原ANP的量的比率的步驟。本發(fā)明還涉及用于實(shí)施TIA診斷和用于診斷急性腦 缺血事件的系統(tǒng)，和在實(shí)施本文所公開的方法中使用的試劑和試劑盒。本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋 適用于實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒和裝置。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 中風(fēng)是繼缺血性心臟病后第二位的在高收入國家中的傷殘調(diào)整壽命年損失（lost disability-adjusted-life years)的起因和全球范圍內(nèi)的死亡起因。如果早期呈現(xiàn)， 中風(fēng)的不良后果可通過融栓改善，在后期呈現(xiàn)的情況中通過使用阿司匹林和抗凝的二級預(yù) 防（預(yù)防二級中風(fēng)）似乎是避免疾病進(jìn)展的唯一適宜方法（van der Worp B和van Gijn J. NEJM 2007:357:572. 578)。
[0004] 短暫性缺血發(fā)作（TIA)是僅短暫持續(xù)的中風(fēng)癥狀的發(fā)作，標(biāo)準(zhǔn)定義是低于24h，但 大多數(shù)TIA持續(xù)低于lh。TIA的起因類似于缺血性中風(fēng)的起因，但由于TIA可能預(yù)報中風(fēng)， 因此它們是應(yīng)當(dāng)分開考慮的一項(xiàng)重要的風(fēng)險因子（參見W. E. Smith等，Cerebrovascular Diseases, Chapter 364 in Harrison, Principles of Internal Medicine,17th edition)〇
[0005] -項(xiàng)特定的挑戰(zhàn)代表為對短暫性缺血發(fā)作（TIA)的診斷，因?yàn)榘Y狀僅持續(xù)數(shù)小 時，然后癥狀消失，而結(jié)果是主治醫(yī)師不確定診斷和需要的工作。而且，癥狀依賴于受影響 的區(qū)域（和伴隨的血管）。大腦中動脈（arteria cerebri media)經(jīng)常受影響，相關(guān)的癥 狀包括失語癥、對側(cè)臂或腿的虛弱。大腦前部（cerebri anterior)的TIA可能與失語癥、 apractnosia、意識錯亂（confusion)、失讀癥等有關(guān)，如果腦下部的中心部分受影響，那么 癥狀可能是意向震顫（intention tremor)、共濟(jì)失調(diào)感覺遲鈍（ataxia dysesthesia)等。 髓質(zhì)的損傷可以包括眩暈、復(fù)視、惡心和嘔吐。如此，許多癥狀可能是非特定的。而且，由于 它們僅暫時存在而不能得到驗(yàn)證。因此，TIA的診斷可能是困難的而且不能容易地與其他 疾病分開。
[0006] TIA由腦局部區(qū)域的暫時灌注不足和缺血導(dǎo)致，而功能障礙由產(chǎn)生代謝和離子擾 亂的局部水腫引起的腦的可逆性功能異常所導(dǎo)致。TIA的診斷是重要的，因?yàn)橛羞^TIA的 人相比于沒有這些TIA發(fā)作的人有顯著增加的中風(fēng)風(fēng)險。中風(fēng)的風(fēng)險在TIA的2天后是 4-5 %，而在7天后是11 %。在先前的48小時內(nèi)患有過TIA，TIA持續(xù)>10分鐘，有心房纖 維顫動，而且有進(jìn)展性頸動脈狹窄和TIA按照漸強(qiáng)模式發(fā)生超過一次的患者具有最大的中 風(fēng)風(fēng)險。
[0007] NT-原BNP和NT-原ANP是公知的心臟標(biāo)志物。NT-原BNP屬于已知從腦釋放的 腦利鈉肽（natriuretic peptide),然而大多數(shù)BNP源于心臟。NT-原BNP和NT-原ANP都 與中風(fēng)的心栓性（cardioembolic)起因相關(guān)（Rodrigues-Yanez M.等，Disease Markers 2009:26:189 - 195)。
[0008] Estrada 等.1994 (Am J Hypertens, 7:1085-1089)披露了用于診斷患者中的缺血 性中風(fēng)的基于ANP檢測的方法。依照Estrada，ANP水平在中風(fēng)患者中高于在正常志愿者 中。
[0009] Sato等· 1995(Kurume Med J, 42:71-77)披露了用于區(qū)分高風(fēng)險和低風(fēng)險中風(fēng)患 者且還用于區(qū)分心栓性中風(fēng)和腔隙性（lacunar)中風(fēng)的基于ANP檢測的方法。
[0010] MSkikallio 等· 2005 (Stroke, 36:1016-1020)披露了 NT-原 ANP 和 NT-原 BNP 的 血漿水平在（急性）中風(fēng)患者中等于或高于患有急性心肌梗塞的患者，且該水平在中風(fēng)患 者中相對于健康患者升高。還涵蓋腦損傷的幅度與NT-原ANP和NT-原BNP的水平平行。
[0011] Shibazaki等· 2009 (Int Med 48:259-264)披露了用于在中風(fēng)患者中區(qū)分心栓性 中風(fēng)和其他中風(fēng)類型（包括小血管疾病、大血管疾?。┑幕谘獫{BNP檢測的方法。
[0012] Rodrigues-Yanez 等· 2009 (Disease Markers 26:189-195)披露了用于在中風(fēng)患 者中將心栓性中風(fēng)與動脈粥樣硬化血栓形成（atherothrombotic)、腔隙性和其他中風(fēng)類型 區(qū)分開來的基于血清NT-原BNP檢測的方法。對NT-原ANP的相應(yīng)測量顯示類似的效用， 盡管可信的數(shù)據(jù)要少一些。
[0013] Naruse等（Stroke 1991:22:61 - 65)描述了一項(xiàng)研究，其中使大鼠中的中左側(cè)腦 動脈閉塞以誘發(fā)腦水腫。進(jìn)一步灌注ANP。ANP灌注導(dǎo)致腦水腫的降低。該結(jié)果解釋為一 種保護(hù)效應(yīng)。最近，Wiggins A.K.等.（Neuroscience 2003:118:715 - 26)報道了在擴(kuò)散 性抑制（spreading depression)模型的大鼠中的ANP表達(dá)并將ANP視為一種神經(jīng)保護(hù)途 徑。
[0014] 發(fā)明人在較大的TIA和中風(fēng)患者的分組中測定了 NT-原ANP和NT-原BNP的量。 發(fā)現(xiàn)NT-原ANP是TIA的可靠標(biāo)志物。該觀察是有利的，因?yàn)門IA的診斷是困難的（尤其 是相對于中風(fēng)的診斷而言）。而且，顯示TIA患者中的NT-原ANP水平在TIA后升高達(dá)相當(dāng) 長的時間。這允許甚至在TIA后數(shù)天對TIA的診斷。
[0015] 需要用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作的手段和方法。因此，本發(fā)明的根本性 技術(shù)問題可視為提供用于滿足前述需要的手段和方法。
[0016] 所述技術(shù)問題由權(quán)利要求和下文中表征的實(shí)施方案解決。
[0017] 發(fā)明概述
[0018] 用于診斷短暫件缺血發(fā)作（TIA)的方法
[0019] 本發(fā)明涉及一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，所述受試者 被懷疑已展現(xiàn)出短暫性缺血發(fā)作，但尚未展現(xiàn)中風(fēng)，所述方法包括測定來自所述受試者的 樣品中NT-原ANP的量。
[0020] 在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，前述方法進(jìn)一步包括將測定的NT-原ANP量與參照量 比較。由此，診斷短暫性缺血發(fā)作。
[0021] 如此，本發(fā)明具體地涉及一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方 法，所述受試者被懷疑已展現(xiàn)出短暫性缺血發(fā)作，但尚未展現(xiàn)中風(fēng)，所述方法包括以下步 驟：
[0022] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0023] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此診斷短暫性缺血發(fā)作。
[0024] 優(yōu)選地，基于步驟b)中實(shí)施的比較的結(jié)果，通過實(shí)施進(jìn)一步的步驟c)診斷所述受 試者是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，來診斷所述受試者是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。
[0025] 優(yōu)選地，本發(fā)明的方法是離體方法。而且，它除了上文明確提及的那些外還可以包 括其他步驟。例如，另外的步驟可以涉及樣品預(yù)處理或評估由所述方法獲得的結(jié)果。所述 方法可以手動或由自動化輔助進(jìn)行。優(yōu)選地，步驟（a)和/或（b)可以全部或部分由自動 化輔助，例如通過適用于步驟（a)中測定或計(jì)算機(jī)執(zhí)行的比較和/或基于步驟（b)中所述 比較的診斷的機(jī)器人和感應(yīng)設(shè)備。更優(yōu)選地是完全以自動化方式實(shí)施所述方法。在這種情 況下，在步驟b)中建立的診斷結(jié)果以適宜的輸出形式生成，從而其可用作例如醫(yī)學(xué)專業(yè)人 員建立最終臨床診斷的輔助。
[0026] 因此，本發(fā)明優(yōu)選地還涉及一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作（TIA)的系 統(tǒng)，所述受試者被懷疑已展現(xiàn)出短暫性缺血發(fā)作，但尚未展現(xiàn)中風(fēng)，所述系統(tǒng)包含：
[0027] a)配置為使來自所述受試者的樣品的一部分與對標(biāo)志物NT-原ANP具有特異性結(jié) 合親和力的配體體外接觸的分析單元，
[0028] b)配置為檢測來自與所述配體接觸的所述受試者樣品部分的信號的分析單元，
[0029] c) -種計(jì)算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處于可操作聯(lián)系中，和
[0030] d) -種非短暫性機(jī)器可讀媒體（media)，其包含可由所述處理器執(zhí)行的多個指 令，所述指令在執(zhí)行時計(jì)算所述標(biāo)志物的量，并將所述標(biāo)志物的量與參照量比較，由此診斷 出短暫性缺血發(fā)作。
[0031] 發(fā)明詳述
[0032] 如本文中使用的，術(shù)語"受試者"指動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選是人。依照本發(fā)明 的受試者應(yīng)被懷疑為展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。優(yōu)選地，所述受試者應(yīng)被懷疑為在獲得待測 試樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選48小時內(nèi)，且最優(yōu)選24小時內(nèi)展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。因此， 應(yīng)依照本發(fā)明診斷測試受試者是否展現(xiàn)過TIA或尚未展現(xiàn)過TIA，優(yōu)選地在獲得待測試樣 品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選48小時內(nèi)，且最優(yōu)選24小時內(nèi)。
[0033] 優(yōu)選地，待測試的受試者（以及得到參照量的受試者）不具有受損的腎功能。 如何評估受試者是否展現(xiàn)受損的腎功能是本領(lǐng)域中公知的?？梢酝ㄟ^已知的且認(rèn)為合 適的任何手段來診斷腎病癥。具體地，可以通過腎小球?yàn)V過率（GFR)來評估腎功能。例 如，GFR 可以通過 Cockgroft-Gault 或 MDRD 公式計(jì)算（Levey 1999, Annals of Internal Medicine, 461-470)。GFR是每單位時間從腎小球毛細(xì)血管過濾到Bowman囊中的流體體積。 臨床上經(jīng)常將其用于測定腎功能。GFR最初通過將菊粉（inulin)注射到血漿中來估測（從 來都不能測定GFR，從公式如Cockgroft Gault公式或MDRD公式衍生的所有計(jì)算僅遞送估 測值而非"真實(shí)的"GFR)。由于菊粉在腎小球過濾后不被腎再吸收，因此其排泄速率直接與 水和溶質(zhì)越過腎小球?yàn)V器的過濾速率成比例。然而，在臨床實(shí)踐中，將肌酸酐清除率用于測 量GFR。肌酸酐是一種在身體中合成的內(nèi)源性分子，其由腎小球游離過濾（但還由腎小管 以非常小的量分泌）。肌酸酐清除率（CrCl)因此是GFR的緊密近似。GFR通常以毫升每分 鐘（mL/min)記錄。男性GFR的正常范圍為97至137mL/min，女性GFR的正常范圍為88至 128ml/min。如此，特別涵蓋不展現(xiàn)受損的腎功能的受試者的GFR在此范圍內(nèi)。而且，所述 受試者優(yōu)選具有低于0. 9mg/dl，更優(yōu)選低于1. lmg/dl且最優(yōu)選低于1. 3mg/dl的血液肌酸 酐水平（特別是血清肌酸酐水平）。
[0034] 優(yōu)選地，所述受試者具有針對急性腦缺血事件，特別是TIA的風(fēng)險因子。術(shù)語"急 性腦缺血事件"在本文中別處描述。優(yōu)選的風(fēng)險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是急 性心力衰竭）、收縮和/或舒張性心功能障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風(fēng)險因子 是糖尿病和肥胖。因此，所述測試受試者優(yōu)選限制這些風(fēng)險因子中的至少一種。具體地，涵 蓋所述測試受試者（和參照受試者，即得到參照量的受試者）患有冠狀動脈病和/或心力 衰竭。
[0035] 最優(yōu)選地，所述受試者患有心力衰竭。這尤其適用于如果在本發(fā)明方法的背景中 計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP量的比率的情況下（見本文中別處）。術(shù)語"心力衰竭"(heart failure)是本領(lǐng)域中公知的。如本文中使用的，該術(shù)語優(yōu)選指受損的收縮和/或舒張性心 功能，伴有心力衰竭的明顯跡象。優(yōu)選地，心力衰竭在本文中指慢性心力衰竭。更優(yōu)選地， 它是急性心力衰竭。術(shù)語"急性心力衰竭"優(yōu)選指在最長2周內(nèi)心功能的惡化，有或特別地 沒有在前的慢性心力衰竭。
[0036] 可將HF分類為多種嚴(yán)重程度。根據(jù)NYHA(紐約心臟協(xié)會）分類，心力衰竭患者被 分成屬于NYHA I、II、III和IV類?；加行牧λソ叩幕颊咭呀?jīng)歷其心包、心肌膜、冠狀循環(huán) 或心瓣膜的結(jié)構(gòu)性和功能性變化。他將不能完全恢復(fù)其健康，而且需要治療學(xué)處理。NYHA I類患者沒有明顯的心血管疾病的癥狀，但已經(jīng)具有功能受損的客觀證據(jù)。NYHA II類患者 具有輕微的身體活動限制。NYHA III類患者顯示顯著的身體活動限制。NYHA IV類患者無 法沒有不適地進(jìn)行任何身體活動。他們在休息時顯示心功能不全的癥狀。
[0037] 這一功能分類得到更新近的 American College of Cardiology 和 American Heart Association 的分類的補(bǔ)充（參見 J. Am. Coll. Cardiol. 2001 ;38 ;2101-2113, 2005 年更新，參見 J.Am. Coll.Cardiol.2005;46;el-e82)。定義了 4 個階段 A、B、C 和 D。階段 A和B不是HF但視為幫助鑒定早在形成"真正的" HF之前的患者。A和B階段患者最佳定 義為那些具有形成HF的風(fēng)險因子的患者。例如，患有冠狀動脈病、高血壓或糖尿病，但尚未 顯現(xiàn)受損的左心室（LV)功能、肥大或幾何室變形（geometric chamber distortion)的患 者將被視為階段A，而無癥狀但顯示LV肥大和/或受損的LV功能的患者將稱為階段B。階 段C指具有與根本的結(jié)構(gòu)性心臟病有關(guān)的HF的當(dāng)前或過去的癥狀的患者（許多患有HF的 患者），而階段D指患有真正的頑固性HF的患者。
[0038] 如本文中使用的，術(shù)語"心力衰竭"優(yōu)選指上文提述的ACC/AHA分類的階段C和D。 在這些階段，受試者顯示典型的心力衰竭癥狀。因此，患有心力衰竭的患者患有根據(jù)ACC/ AHA分類的階段C或D心力衰竭。更優(yōu)選地，術(shù)語"心力衰竭"根據(jù)NYHA分類歸為NYHA III 或IV。
[0039] 還涵蓋依照本發(fā)明方法要測試的受試者（以及不展現(xiàn)急性冠脈綜合癥（縮寫為 "ACS"）的參照受試者）。如本文中使用的，術(shù)語"ACS"優(yōu)選包括STEMI(ST-升高心肌梗 塞）；NSTEMI (非ST-升高心肌梗塞）和不穩(wěn)定的心絞痛。還涵蓋要測試的受試者優(yōu)選不 具有ACS的病史。優(yōu)選地，所述受試者不應(yīng)在實(shí)施本發(fā)明方法前一周內(nèi)，或更優(yōu)選地一月內(nèi) (更準(zhǔn)確地，在獲得樣品前一月內(nèi)）患有過ACS。
[0040] 優(yōu)選地，所述受試者也不患有心臟循環(huán)事件（特別是在獲得樣品時）。術(shù)語"心臟 循環(huán)事件"優(yōu)選指心功能的突然衰退（deterioration)。這類衰退優(yōu)選由心律失常、短暫的 心臟驟?；蚍嗡ㄈ麑?dǎo)致。心律失常可以兩種形式發(fā)生：緩慢心律失常（bradyarrhythmia) 和快速心律失常（tachyarrhythmia)。在緩慢心律失常中，心跳的頻率相比于健康的 受試者病理性降低，優(yōu)選地，在緩慢心律失常中，心率低于60次心跳每分鐘。最頻繁的 緩慢心律失常形式是竇性心動過緩（sinus bradycardia)、竇房傳導(dǎo)阻滯（sinoatrial block)、竇性停搏（sinus arrest)、病態(tài)竇綜合征（sick sinus syndrome)和房室傳導(dǎo) 阻滯（atriventricular block)。在快速心律失常中，頻率相比于健康的受試者病理性 升高，優(yōu)選地，在快速心律失常中，心率高于100次心跳每分鐘。大多數(shù)快速心律失常的 病例是患有結(jié)構(gòu)性心血管疾病的室上性心動過速（supraventricular tachycardia)、患 有 Wolf f-Parkinson-White 綜合癥的心房顫動（atrial fibrillation)、具有 1:1 房室 傳導(dǎo)（atrioventricular conduction)的心房撲動（atrial flutter)和室性心動過速 (ventricular tachycardia)。肺栓塞是由血液凝塊（血栓栓塞）或氣泡（空氣栓塞）導(dǎo) 致的肺動脈阻塞。血液凝塊通常在骨盆靜脈或下肢靜脈中形成并遷移到肺動脈，在該處它 們被堵住。空氣栓塞優(yōu)選由潛水事故或漏靜脈導(dǎo)管導(dǎo)致。肺栓塞的癥狀包括胸部疼痛、呼 吸困難和咳血（咳出血）。肺循環(huán)中的壓強(qiáng)可能上升且可能導(dǎo)致右心室衰竭。心臟循環(huán)事 件也可以通過目前已知的方法測定或確認(rèn)。
[0041] 術(shù)語"短暫性缺血發(fā)作"（本文中縮寫為TIA)是本領(lǐng)域中公知的（參見W. E. Smith 等,Cerebrovascular Diseases, chapter 364 in Harrison, Principles of Internal Medicine, 17th edition)。如本文中使用的，該術(shù)語優(yōu)選指由缺血導(dǎo)致的神經(jīng)功能障礙的 短暫性發(fā)作（印isode)，沒有急性梗塞形成，由此沒有組織死亡。如此，與中風(fēng)相對，TIA不 引起由于腦細(xì)胞死亡所致的不可逆的組織損傷。TIA與中風(fēng)共享相同的根本性病因?qū)W：腦 血液流動的破壞（CBF)。而且，TIA的癥狀通常與中風(fēng)的相同。TIA和中風(fēng)的癥狀是本領(lǐng)域 中公知的。而且，本領(lǐng)域中公知它們可能依賴于受缺血影響的腦部區(qū)域（亦參見下文）且 它們的嚴(yán)重性可以變化。癥狀包括暫時性視覺損失（一過性黑朦（amaurosis fugax))、講 話困難（失語癥）；身體一側(cè)虛弱（輕偏癱），和麻木或刺痛（感覺異常（paresthesia))， 通常在身體一側(cè)。別的癥狀是言語障礙（dysphasia)、構(gòu)音困難（dysarthria)、偏盲 (hemianopia)、虛弱、共濟(jì)失調(diào)和疏忽（neglect)。頭暈、缺少協(xié)調(diào)或不良平衡也是與TIA有 關(guān)的癥狀。
[0042] TIA的癥狀是短暫的且通常持續(xù)幾秒至幾分鐘，而且大多數(shù)癥狀在60分鐘內(nèi)消 失。因此，癥狀僅簡短地持續(xù)，優(yōu)選短于24小時，特別是短于1小時。
[0043] 依照前述方法要測試的受試者未展現(xiàn)中風(fēng)，即受試者不應(yīng)已展現(xiàn)過中風(fēng)。優(yōu)選地， 所述受試者不應(yīng)在獲得要測試的樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選地48小時內(nèi)，甚至更優(yōu)選地24 小時內(nèi)展現(xiàn)過中風(fēng)。最優(yōu)選地，受試者不應(yīng)在獲得所述測試樣品前1或2周內(nèi)展現(xiàn)過中風(fēng)。
[0044] 術(shù)語"中風(fēng)"是本領(lǐng)域中公知的。該術(shù)語優(yōu)選地涵蓋缺血性中風(fēng)。術(shù)語"缺 血性中風(fēng)"也是熟練技術(shù)人員充分理解的（參見例如Adams等.，Guidelines for the Early Management of Adults With Ischemic Stroke, A Guideline From the American Heart Association/American Stroke Association Stroke Council,Clinical Cardiology Council, Cardiovascular Radiology and Intervention Council, and the Atherosclerotic Peripheral Vascular Disease and Quality of Care Outcomes in Research Interdisciplinary Working Groups in Stroke. 2007 ;38:1655,通過提述將其 完整公開內(nèi)容據(jù)此并入）。如本文中使用的，該術(shù)語優(yōu)選地指腦缺血中風(fēng)。而且，其優(yōu)選指 由減少的到腦部或其部分的血液流動（導(dǎo)致降低的到腦細(xì)胞的氧氣投遞（供應(yīng)不足））導(dǎo) 致的中風(fēng)。在本發(fā)明方法的背景中的中風(fēng)導(dǎo)致由腦細(xì)胞死亡所致的不可逆的組織損傷。因 此，如本文中使用的術(shù)語"中風(fēng)"不包括TIA。
[0045] 中風(fēng)的癥狀是本領(lǐng)域中公知的。優(yōu)選地，它們是與上文對于TIA所公開的相同的 癥狀。
[0046] 缺血性中風(fēng)可能由腦大動脈的動脈粥樣硬化血栓形成（atherothrombosis)或 栓塞、由凝固病癥或非動脈粥樣化血管疾病、由導(dǎo)致降低的總體血液流動的心臟缺血所 造成。缺血性中風(fēng)優(yōu)選選自下組：動脈粥樣硬化血栓形成性中風(fēng)、心栓性中風(fēng)和腔隙性 中風(fēng)。確定中風(fēng)類型是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的且包括不同的成像技術(shù)如心回波描記術(shù) (echocardiography)、心電圖和doppler超聲。優(yōu)選地，所述缺血性中風(fēng)是急性缺血性中 風(fēng)。
[0047] TIA和中風(fēng)是腦部特定或所有部分缺血和/或灌注不足的結(jié)果。癥狀依賴于受影 響的區(qū)域（和伴隨的血管）。大腦中動脈（arteria cerebri media)經(jīng)常受影響，相關(guān)的 癥狀包括失語癥、對側(cè)臂或腿的虛弱，大腦前部（cerebri anterior)的TIA可能與失語癥、 apractnosia、意識錯亂、失讀癥等有關(guān)，如果腦下部的中心部分受影響，那么癥狀可能是意 向震顫、共濟(jì)失調(diào)感覺遲鈍等。髓質(zhì)的損傷可以包括眩暈、復(fù)視、惡心和嘔吐。
[0048] 術(shù)語"缺血性中風(fēng)"優(yōu)選不包括出血性中風(fēng)。
[0049] 可通過公知的方法來確定受試者是否患有過中風(fēng)，特別是缺血性中風(fēng)。而且，中風(fēng) 的癥狀是本領(lǐng)域中公知的，且例如記載于Adams等.（在上文引文）。例如，中風(fēng)癥狀包括突 然的臉、臂或腿，尤其是在身體一側(cè)上的麻木或虛弱、突然的意識錯亂、講話或理解有問題、 突然在一只或兩只眼睛中有視力問題、和突然走路有問題、頭暈、失去平衡或協(xié)調(diào)。
[0050] 如上文陳述的，依照前述方法要測試的受試者應(yīng)被懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。 優(yōu)選地，懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作的受試者是已顯示TIA癥狀的受試者。優(yōu)選地，所述受 試者在獲得測試樣品前的某段窗口期內(nèi)已顯示TIA的癥狀。優(yōu)選地，所述受試者在獲得樣 品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選地48小時內(nèi)，和最優(yōu)選地24小時內(nèi)已顯示TIA的癥狀。然而，優(yōu)選 地，所述測試樣品應(yīng)在不早于TIA癥狀結(jié)束后1小時，特別是不早于2小時獲得。另外，涵 蓋所述測試樣品在不早于TIA癥狀結(jié)束后4小時獲得。還涵蓋所述測試樣品在不早于TIA 癥狀結(jié)束后6小時獲得。
[0051] 還涵蓋受試者在獲得樣品前12小時內(nèi)顯示過TIA的癥狀。
[0052] 通過本發(fā)明的前述方法，應(yīng)診斷出TIA。如本文中使用的，術(shù)語"診斷"意為評估 依照本發(fā)明方法所指的受試者是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。具體地，應(yīng)診斷所述受試者是 否在獲得要測試的樣品前的某段窗口期內(nèi)展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案 中，應(yīng)診斷出所述受試者在獲得樣品前72小時內(nèi)是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。在一個進(jìn)一 步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)診斷所述受試者在獲得樣品前48小時內(nèi)是否展現(xiàn)過短暫性缺 血發(fā)作。在一個甚至進(jìn)一步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)診斷所述受試者在獲得樣品前24小時 內(nèi)是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。優(yōu)選地，所述受試者在獲得樣品時已不再顯示TIA的癥狀。
[0053] 如本領(lǐng)域技術(shù)人員會理解的，評估本文中所指的受試者是否展現(xiàn)過TIA通常不意 圖對100%的要診斷的受試者是正確的。然而，該術(shù)語要求該評估對于受試者的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯 著的部分（例如分組研究中的一個組）是正確的。而如此，本發(fā)明的方法至少提供了對于 建立最終臨床診斷的輔助。使用多種公知的統(tǒng)計(jì)學(xué)評估工具，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以不用再 費(fèi)周折地確定該部分是否是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的，所述統(tǒng)計(jì)學(xué)評估工具例如確定置信區(qū)間、P值確 定、Student's t 檢驗(yàn)、Mann-Whitney 檢驗(yàn)等。詳情見于 Dowdy 和 Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983。優(yōu)選的置信區(qū)間為至少 90%、至少 95%、 至少 97%、至少 98%或至少 99%。P 值優(yōu)選為 0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、或 0. 0001。
[0054] 術(shù)語"樣品"指體液樣品、分離細(xì)胞樣品或來自組織或器官的樣品。體液樣品可通 過公知的技術(shù)獲得，且優(yōu)選包括血液、血漿、血清或尿液樣品，更優(yōu)選地，血液、血漿、尿液或 血清樣品，最優(yōu)選地，血液、血漿或血清。組織或器官樣品可通過例如活組織檢查從任意組 織或器官獲得。分離的細(xì)胞可通過分離技術(shù)如離心或細(xì)胞分選從體液或組織或器官獲得。 優(yōu)選地，細(xì)胞、組織或器官樣品獲自那些表達(dá)或產(chǎn)生本文中所指的肽的細(xì)胞、組織或器官。 優(yōu)選地，所述樣品在短暫性缺血發(fā)作的癥狀開始后不超過72小時獲得。更優(yōu)選地，所述樣 品在短暫性缺血發(fā)作的癥狀開始后不超過48小時，且最優(yōu)選地不超過24小時獲得。優(yōu)選 地，所述受試者在獲得所述樣品時不再顯示TIA的癥狀。
[0055] 標(biāo)志物NT-原ANP (N端原心房利鈉（natriuretic)肽）是本領(lǐng)域中公知的（參見 例如Bonow, 1996, Circulation 93:1946-1950,其通過提述完整據(jù)此并入）。NT-原ANP屬 于利鈉肽組。NT-原ANP通過從前體分子前-原ANP肽的蛋白水解切割生成，從而得到活 性激素 ANP (心房利鈉肽）和相應(yīng)的N端片段NT-原ANP。ANP在心房肌細(xì)胞中合成。在釋 放時，激素原被分裂成等摩爾量的高度生物學(xué)活性的原ANP (氨基酸99至126)和NT-原 ANP(氨基酸1至98)。該活性激素涉及身體水、鈉、鉀和脂肪組織的內(nèi)穩(wěn)態(tài)控制。它由肌 細(xì)胞在心臟的上部室中應(yīng)答高血壓而釋放。如本文中使用的，NT-原ANP優(yōu)選指人NT-原 ANP。術(shù)語"NT-原ANP"優(yōu)選還涵蓋前述人NT-原ANP多肽的變體。這類變體具有與前述 NT-原ANP多肽相同的基本的生物學(xué)和免疫學(xué)特性。具體地，如果它們通過本文中所述的相 同的測定法例如通過使用特異性識別所述NT-原ANP多肽的多克隆或單克隆抗體的ELISA 測定法是可檢測的，那么它們共享相同的基本的生物學(xué)和免疫學(xué)特性。具體的NT-原ANP 和NT-原BNP的變體的例子及其測量方法是已知的（Ala-Kopsala, Μ·，Magga, J.，Peuhkuri nen, K.等·（2004):Molecular heterogeneity has a major impact on the measurement of circulating N-terminal fragments of A-type and B-type natriuretic peptides. Clinical Chemistry, vol. 50 (9)，1576-1588)。而且，應(yīng)理解如依照本發(fā)明所指的變體應(yīng)具 有由于至少一個氨基酸取代、缺失和/或添加而不同的氨基酸序列，其中所述變體的氨基 酸序列優(yōu)選仍然與特定的NT-原ANP多肽的氨基酸序列分別至少50%、60%、70%、80%、 85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%相同，優(yōu)選在人階'-原八即的整個長度內(nèi)（特別 是在整個長度內(nèi)）。兩個氨基酸序列之間的同一性程度可通過本領(lǐng)域公知的和本文中別 處描述的算法來測定。上文所指的變體可以是等位變體或任何其他物種特異性的同源物、 paralog (側(cè)系同源物）、或直系同源物。而且，本文所指的變體包括特定NT-原ANP多肽 或前述變體類型的片段或亞基，只要這些片段具有如上文所述的基本的免疫學(xué)和生物學(xué)特 性。這類片段可以是例如NT-原ANP多肽的降解產(chǎn)物。還包括由于翻譯后修飾如磷酸化或 十四燒基化（myristylation)而不同的變體。
[0056] 測定本說明書中所指的肽或多肽的量涉及測量量或濃度，優(yōu)選半定量或定量地。 測量可以直接或間接完成。直接測量涉及基于從所述肽或多肽本身獲得且其強(qiáng)度直接與樣 品中存在的肽分子數(shù)相關(guān)的信號來測量所述肽或多肽的量或濃度。這類信號-有時在本文 中稱為強(qiáng)度信號-可例如通過測量所述肽或多肽的特定物理或化學(xué)特性的強(qiáng)度值來獲得。 間接測量包括測量從次要組分（即不是肽或多肽本身的組分）或生物學(xué)讀出系統(tǒng)例如可測 量的細(xì)胞應(yīng)答、配體、標(biāo)記或酶反應(yīng)產(chǎn)物獲得的信號。
[0057] 依照本發(fā)明，測定肽或多肽的量可通過所有已知用于測定樣品中肽的量的手段來 實(shí)現(xiàn)。所述手段包括可以以多種夾心、競爭或其他測定形式利用經(jīng)標(biāo)記分子的免疫測定和 方法。這類測定法優(yōu)選地基于檢測劑如特異性識別要測定的肽或多肽的抗體。檢測劑應(yīng)能 夠直接或間接地生成指示所述肽或多肽的存在或不存在的信號。而且，優(yōu)選地，信號強(qiáng)度可 與樣品中存在的多肽量直接或間接相關(guān)（例如成反比）。別的適宜的方法包括測量特異于 所述肽或多肽的物理或化學(xué)特性，如其準(zhǔn)確的分子質(zhì)量或NMR譜。所述方法包括，優(yōu)選地， 生物傳感器、偶聯(lián)于免疫測定法的光學(xué)裝置、生物芯片、分析裝置如質(zhì)譜儀、NMR分析儀、或 層析裝置。另外，方法包括基于ELISA的微板方法、全自動或機(jī)器人免疫測定法（例如可在 Elecsys? 分析儀上獲得）、CBA (酶促 ￡obalt ginding Jssay，例如可在 Roche-Hitachi? 分 析儀上獲得）、和膠乳凝集測定法（例如可在Roche-Hitachi?分析儀上獲得）。
[0058] 優(yōu)選地，測定肽或多肽的量包括以下步驟：(a)使能引發(fā)細(xì)胞應(yīng)答的細(xì)胞與肽或 多肽接觸達(dá)適宜的一段時間，所述細(xì)胞應(yīng)答的強(qiáng)度指示所述肽或多肽的量，（b)測量所述細(xì) 胞應(yīng)答。對于測量細(xì)胞應(yīng)答，優(yōu)選地將所述樣品或經(jīng)加工樣品添加到細(xì)胞培養(yǎng)物并測量內(nèi) 部或外部細(xì)胞應(yīng)答。所述細(xì)胞應(yīng)答可以包括報道基因的可測量的表達(dá)或物質(zhì)例如肽、多肽 或小分子的分泌。所述表達(dá)或物質(zhì)應(yīng)生成與所述肽或多肽的量相關(guān)的強(qiáng)度信號。
[0059] 還優(yōu)選地，測定肽或多肽的量包括測量可從樣品中的所述肽或多肽獲得的特定強(qiáng) 度信號的步驟。如上文描述的，這類信號可以是在特異于所述肽或多肽的質(zhì)譜或NMR譜中 觀察到的特異于所述肽或多肽的m/z變量處觀察到的信號強(qiáng)度。
[0060] 測定肽或多肽的量優(yōu)選地可以包括以下步驟：（a)使所述肽與特定配體接觸，（b) (任選地）除去未結(jié)合的配體，（c)測量結(jié)合的配體的量。
[0061] 依照一個優(yōu)選的實(shí)施方案，所述接觸、除去和測量的步驟可以由本文中公開的系 統(tǒng)的分析單元實(shí)施。依照一些實(shí)施方案，所述步驟可以由所述系統(tǒng)的單個分析單元或彼此 處于可操作聯(lián)系的超過一個分析單元實(shí)施。例如，依照一個特定的實(shí)施方案，本文中公開的 所述系統(tǒng)可以包含用于實(shí)施所述接觸和除去步驟的第一分析單元和通過運(yùn)輸單元（例如 機(jī)器人臂）可操作地連接于所述第一分析單元的第二分析單元，其實(shí)施所述測量步驟。
[0062] 結(jié)合的配體，特別是配體或配體/肽復(fù)合物，將生成強(qiáng)度信號。依照本發(fā)明的結(jié)合 包括共價和非共價結(jié)合。依照本發(fā)明的配體可以是任何化合物，例如肽、多肽、核酸或小分 子，其結(jié)合本文中描述的肽或多肽。優(yōu)選的配體包括抗體、核酸、肽或多肽（如所述肽或多 肽的受體或結(jié)合伴侶及其包含針對該肽的結(jié)合域的片段）、和適體（例如核酸或肽適體）。 制備這類配體的方法是本領(lǐng)域中公知的。例如，對適宜的抗體或適體的鑒定和生產(chǎn)亦由商 業(yè)供應(yīng)商提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉開發(fā)具有更高的親和力或特異性的這類配體的衍生物 的方法。例如，可將隨機(jī)突變引入核酸、肽或多肽中。然后，可依照本領(lǐng)域中已知的篩選規(guī) 程例如噬菌體展示來測試這些衍生物的結(jié)合。如本文中所指的抗體包括多克隆和單克隆抗 體兩者，以及它們的片段如能結(jié)合抗原或半抗原的Fv、Fab和F (ab) 2片段。本發(fā)明還包括單 鏈抗體和人源化雜合抗體，其中將展現(xiàn)期望的抗原特異性的非人供體抗體的氨基酸序列與 人接受抗體的序列組合。所述供體序列通常將含有至少該供體的抗原結(jié)合氨基酸殘基，但 也可包含供體抗體的其他結(jié)構(gòu)和/或功能相關(guān)的氨基酸殘基。這類雜合體可通過本領(lǐng)域中 公知的幾種方法來制備。優(yōu)選地，所述配體或試劑特異性結(jié)合所述肽或多肽。依照本發(fā)明 的特異性結(jié)合意指所述配體或試劑不應(yīng)實(shí)質(zhì)性結(jié)合（與其"交叉反應(yīng)"）要分析的樣品中存 在的另一種肽、多肽或物質(zhì)。優(yōu)選地，特異性結(jié)合的肽或多肽應(yīng)以比任何其他相關(guān)肽或多肽 高至少3倍，更優(yōu)選至少高10倍，甚至更優(yōu)選至少高50倍的親和力結(jié)合。非特異性結(jié)合可 以是可容忍的，如果其仍然能區(qū)分并明確測量的話，例如根據(jù)其在Western印跡上的大小， 或其在樣品中的相對更高的豐度。配體的結(jié)合可通過本領(lǐng)域已知的任意方法來測量。優(yōu)選 地，所述方法是半定量或定量的。下文記載了用于測定多肽或肽的別的適宜的技術(shù)。
[0063] 首先，配體的結(jié)合可通過，例如NMR或表面等離振子共振直接測量。根據(jù)優(yōu)選的具 體實(shí)施方案，配體結(jié)合的測量通過本文公開的系統(tǒng)的分析單元執(zhí)行。此后，測量的結(jié)合量可 通過本文公開的系統(tǒng)的計(jì)算設(shè)備進(jìn)行計(jì)算。第二，如果所述配體還充當(dāng)感興趣的肽或多肽 的酶促活性底物，還可測量酶促反應(yīng)產(chǎn)物（例如通過測量例如在Western印跡上經(jīng)切割的 底物的量測量蛋白酶的量）。或者，配體本身可能顯示酶促特性，可使"配體/肽或多肽"復(fù) 合物或所述肽或多肽結(jié)合的配體分別與合適的底物接觸，通過生成強(qiáng)度信號而允許檢測。 對于酶促反應(yīng)產(chǎn)物的測量，優(yōu)選底物的量是飽和的。所述底物也可以在反應(yīng)之前用可檢測 的標(biāo)記物標(biāo)記。優(yōu)選地，樣品與底物接觸達(dá)適宜的時間段。適宜的時間段指產(chǎn)生可檢測量 的，優(yōu)選可測量量的產(chǎn)物所必需的時間。可測量出現(xiàn)給定（例如可檢測的）量的產(chǎn)物所必需 的時間，而不必測量產(chǎn)物的量。第三，所述配體可與允許所述配體被檢測和測量的標(biāo)記物共 價或非共價偶聯(lián)。標(biāo)記可通過直接或間接的方法進(jìn)行。直接標(biāo)記包括將標(biāo)記物直接（共價 或非共價地）偶聯(lián)到配體上。間接標(biāo)記牽涉將第二配體與所述第一配體（共價或非共價地） 結(jié)合。第二配體應(yīng)特異地結(jié)合第一配體。所述第二配體可以與合適的標(biāo)記物偶聯(lián)和/或作 為結(jié)合于第二配體的第三配體的靶物（受體）。第二，第三或甚至更高級別的配體的作用通 常是用來增強(qiáng)信號。合適的第二配體或更高級別的配體可以包括抗體，第二抗體，以及公知 的鏈霉親合素蛋白 -生物素系統(tǒng)（Vector Laboratories, Inc.)。所述配體或底物也可以用 本領(lǐng)域已知的一個或多個標(biāo)簽"加上標(biāo)簽"。此種標(biāo)簽可從而作為更高級別配體的靶物。合 適的標(biāo)簽包括生物素，洋地黃毒苷，His-Tag，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶，F(xiàn)LAG，GFP，myc-標(biāo)簽，甲型 流感病毒血凝素（HA)，麥芽糖結(jié)合蛋白，等等。對于肽或多肽，所述標(biāo)簽優(yōu)選位于N端和/ 或C端。適合的標(biāo)記物是任何可通過適當(dāng)?shù)臋z測方法檢測的標(biāo)記物。通常的標(biāo)記物包括金 顆粒、乳膠珠、9，1〇-二氫化[!丫陡酯（3(31^(^1108七61')、魯米諾（111111；[1101)、釕、酶活性的標(biāo)記 物、放射性標(biāo)記物、磁性標(biāo)記物（例如"磁性珠子"，包括順磁性或超順磁性標(biāo)記物），以及熒 光標(biāo)記物。酶活性標(biāo)記物包括，例如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β -半乳糖苷酶、螢光素 酶及其衍生物。用于檢測的合適的底物包括二氨基聯(lián)苯胺（DAB)、3, 3' -5, 5' -四甲基聯(lián)苯 胺、NBT-BCIP (氯化4-硝基四氮唑藍(lán)和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸，現(xiàn)成的儲液在Roche Diagnostics 有售）、CDP-Star?(Amersham Biosciences) ,ECF?(Amersham Biosciences) 0 合適的酶-底物組合可產(chǎn)生著色的反應(yīng)產(chǎn)物、熒光或化學(xué)發(fā)光，其可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的 方法進(jìn)行測量（例如使用光敏膠片或合適的照相系統(tǒng)）。對于酶促反應(yīng)的測量，類似地應(yīng) 用上述標(biāo)準(zhǔn)。通常的熒光標(biāo)記物包括熒光蛋白（如GFP及其衍生物）、Cy3、Cy5、德克薩斯 紅、熒光素和Alexa染料（例如Alexa 568)。更多的熒光標(biāo)記物可購自例如Molecular Pr0bes(0 regon)。還涵蓋用量子點(diǎn)作為熒光標(biāo)記物。典型的放射性標(biāo)記物包括35S，125I， 32P， 33P等等。放射性標(biāo)記物可以通過任意已知的適當(dāng)方法檢測，例如光敏膠片或磷光顯影儀 (phosphor imager)。本發(fā)明的適當(dāng)測量方法還包括沉淀法（尤其是免疫沉淀法）、電化學(xué) 發(fā)光法（電促化學(xué)發(fā)光，electro-generated chemiluminescence)、RIA(放射免疫分析）、 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附分析）、夾層酶免疫試驗(yàn)（sandwich enzyme immune tests)、電化學(xué)發(fā) 光夾層免疫分析（ECLIA)、解離-增強(qiáng)的鑭系元素突光免疫分析（dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay,DELFIA)、閃爍親近測定法（scintillation proximity assay，SPA)、比濁法、濁度法、乳膠-增強(qiáng)的比濁法或濁度法，或者固相免疫試驗(yàn)。本領(lǐng)域已 知的其它方法（如凝膠電泳、2D凝膠電泳、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE)、Western 印跡法和質(zhì)譜法）可單獨(dú)使用，或與標(biāo)記或者上述其它檢測方法組合使用。
[0064] 所述肽或多肽的量也可以，優(yōu)選地依照下述步驟確定：(a)使包含所述肽或多肽 的樣品與含上述肽或多肽的配體的固體支持物接觸，（b)測量與所述支持物結(jié)合的肽或多 肽的量。優(yōu)選選自由核酸，肽，多肽，抗體和適體組成的組的配體，優(yōu)選地以固定化的形式 存在于固體支持物上。制備固體載體的材料是本領(lǐng)域公知的，除其它已知材料外，包括可 商購的柱材料，聚苯乙烯珠，乳膠珠，磁性珠，膠體金屬顆粒，玻璃和/或硅芯片或表面，硝 酸纖維素條，膜，片，Duracyte，反應(yīng)盤的孔和壁，塑料管，等等。所述的配體或試劑可以與 很多不同的載體結(jié)合。公知的載體的實(shí)例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、 聚碳酸酯、葡聚糖、尼龍、直鏈淀粉、天然或經(jīng)修飾的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和磁鐵礦。 依照本發(fā)明的目的所述載體的性質(zhì)可以是可溶性的或不溶性的。固定（fixing)/固定化 (immobi 1 izing)所述載體適當(dāng)方法是本領(lǐng)域所公知的，包括但不限于離子的、疏水的、共價 的相互作用等等。還可以考慮使用"懸浮陣列"作為根據(jù)本發(fā)明的陣列（Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1) :9-12)。在此種懸浮陣列中，所述的載體，例如微珠或微球以懸浮狀態(tài)存 在。所述的陣列由不同的微珠或微球組成，所述的微珠或微球可能是經(jīng)標(biāo)記的，載有不同的 配體。制備此種陣列的方法，例如基于固相化學(xué)或?qū)獠环€(wěn)定的保護(hù)基團(tuán)，是本領(lǐng)域公知的 (US 5, 744, 305)。
[0065] 如本文中使用的，術(shù)語"量"包括所述多肽或肽的絕對量，所述多肽或肽的相對量 或濃度，以及與之相關(guān)或者從其衍生的任何值或參數(shù)。這類值或參數(shù)包括來自通過直接測 量從所述肽所獲得的全部特定物理或化學(xué)特性的強(qiáng)度信號值，例如質(zhì)譜或NMR譜中的強(qiáng)度 值。此外，還包括本說明書其它部分所描述的、通過間接測量所獲得的全部值或參數(shù)，例如 在所述肽的應(yīng)答中由生物讀出系統(tǒng)確定的應(yīng)答水平，或者從特異性結(jié)合配體獲得的強(qiáng)度信 號。應(yīng)理解，與前述的量或參數(shù)相關(guān)的值也可以通過所有的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)學(xué)運(yùn)算獲得。根據(jù)本 發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述"量"的確定通過所述公開的系統(tǒng)執(zhí)行，其中基于由所述系統(tǒng)的 一個或多個分析單元執(zhí)行的接觸和測量步驟，計(jì)算設(shè)備測定所述"量"。
[0066] 優(yōu)選地，如本文中所指的多肽，如此NT-原ANP和NT-原BNP的量以實(shí)施例部分所 描述的測定法測定。例如，可通過檢測前-原ANP肽的氨基酸1至98來測定NT-原ANP的 量。
[0067] 如本文中使用的，術(shù)語"比較"涵蓋將要分析的樣品所包含的所述肽或多肽的量與 本說明書中別處指定的適宜參照源的量進(jìn)行比較。應(yīng)理解如本文中使用的比較指相應(yīng)的參 數(shù)或值的比較，例如將絕對量與絕對參照量比較，而將濃度與參照濃度或從測試樣品獲得 的強(qiáng)度信號與參照樣品的同一類型的強(qiáng)度信號比較。本發(fā)明方法的步驟（b)中所指的比較 可以手動或計(jì)算機(jī)輔助（例如通過（例如本文公開的系統(tǒng)的）計(jì)算裝置）進(jìn)行。對于計(jì)算 機(jī)輔助的比較，可通過計(jì)算機(jī)程序?qū)y定量的值與存儲于數(shù)據(jù)庫中的對應(yīng)于適宜參照的值 比較。所述計(jì)算機(jī)程序可以進(jìn)一步評估比較的結(jié)果，即自動化地提供適宜輸出形式的期望 評估，即診斷結(jié)果。所述診斷結(jié)果優(yōu)選地可以充當(dāng)用于例如醫(yī)學(xué)專業(yè)人員建立最終臨床診 斷的輔助。
[0068] 基于測定的和參照量的比較，應(yīng)當(dāng)可以評估測試受試者是否展現(xiàn)過TIA。例如，t匕 較的結(jié)果可以以原始數(shù)據(jù)給出（絕對或相對量），而在一些情況中以詞、短語、符號、或數(shù)值 的形式的指示物給出，其可以指示具體的診斷。因此，要選擇參照量從而比較的量中的不同 或身份允許鑒定出那些屬于已展現(xiàn)過或未展現(xiàn)過TIA的受試者組的測試受試者。該方法允 許排除（除去）或鑒定（劃入）已展現(xiàn)過或未展現(xiàn)過TIA的受試者。如本文中使用的，量 中的差異即升高或降低是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異?？赏ㄟ^本文中別處所述的統(tǒng)計(jì)學(xué)技術(shù)來確定 差異是否是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。類似地，量中的身份涵蓋相等的量和那些量中的不統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著 且對于測量參數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)偏差內(nèi)的差異。
[0069] 如本文中使用的，術(shù)語"參照量"指允許將受試者分成⑴已展現(xiàn)過TIA的受試者 組或（ii)未展現(xiàn)過TIA的受試者組的量。所述劃入和/或排除診斷可由本文中公開的系 統(tǒng)的計(jì)算裝置基于計(jì)算的"量"對參照或閾值的比較提供。例如，系統(tǒng)的計(jì)算裝置可以提供 以詞、符號、或數(shù)值的形式的指示物，其指示劃入或排除診斷之一。適用于個體受試者的參 照量可以根據(jù)多種生理學(xué)參數(shù)如年齡、性別或亞群，以及用于測定本文中所指的多肽或肽 的手段而變化。適宜的參照量可從要與測試樣品一起（即同時或隨后）分析的參照樣品測 定。
[0070] 從原理上講，可通過應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法基于給定生物標(biāo)志物的平均值或均值 對如上文指出的受試者分組計(jì)算參照量。具體地，測試如目標(biāo)為診斷一種事件與否的方法 的準(zhǔn)確度由其接受者操作屬性（receiver-operating characteristics) (R0C)最佳描述 (尤其參見Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577)。R0C圖是從在觀察的數(shù)據(jù)的整個范圍內(nèi) 連續(xù)變化決策閾值所得到的所有敏感性對特異性對的圖。診斷方法的臨床表現(xiàn)取決于其準(zhǔn) 確度，即其正確將受試者分為特定預(yù)后或診斷的能力。R0C圖通過繪出適用于進(jìn)行區(qū)分的完 整閾值范圍的敏感性對1-特異性來指示兩個分布之間的重疊。Y軸上是敏感性或真-陽性 分?jǐn)?shù)，其定義為真-陽性測試結(jié)果的數(shù)目對真-陽性數(shù)目與假-陰性測試結(jié)果數(shù)目的乘積 的比率。這亦稱為在存在疾病或狀況情況下的陽性。它僅從受影響的亞組計(jì)算。X軸上是 假-陽性分?jǐn)?shù)或1-特異性，其被定義為假-陽性結(jié)果的數(shù)目對真-陰性數(shù)目與假-陽性結(jié) 果數(shù)目的乘積的比率。它是特異性的指標(biāo)且完全從未受影響的亞組計(jì)算。由于真陽性和假 陽性分?jǐn)?shù)是完全分開計(jì)算的，通過使用來自兩個不同亞組的測試結(jié)果，R0C圖獨(dú)立于分組中 事件的流行性。R0C圖上的每個點(diǎn)代表對應(yīng)于具體決策閾值的敏感性/-特異性對。具有完 美區(qū)分的測試（兩個結(jié)果分布中沒有重疊）具有穿過左上角的R0C圖，其中真陽性分?jǐn)?shù)是 1.0、或100% (完美敏感性），而假陽性分?jǐn)?shù)是0(完美特異性）。沒有區(qū)分力的測試的理論 圖（兩個組有相同的分布結(jié)果）是從左下角到右上角的45°對角線。大多數(shù)圖落入這兩種 極端之間。如果ROC圖完全在45°對角線之下，那么這可以通過將"陽性"的標(biāo)準(zhǔn)從"大于" 逆轉(zhuǎn)為"小于"或反之來修正。定性地，圖離左上角越近，測試的總體準(zhǔn)確性越高。根據(jù)期 望的置信區(qū)間，可從R0C曲線衍生出允許以適宜的敏感性和特異性平衡分別診斷或預(yù)測給 定事件的閾值。因此，要用于本發(fā)明前述方法的參照，即允許在展現(xiàn)過TIA或未展現(xiàn)過TIA 的受試者之間區(qū)分的閾值，優(yōu)選可通過為如上文描述的所述分組建立R0C并從其衍生出閾 值量來生成。根據(jù)對診斷方法的期望的敏感性和特異性，R0C圖允許衍生適宜的閾值。應(yīng) 理解對于排除TIA(即除去）期望最佳敏感性，而對于要評估為展現(xiàn)過TIA(即劃入）的受 試者則希望有最佳特異性。而且，優(yōu)選將在本發(fā)明方法的步驟a)中測定的量與超過一個參 照量比較，例如用于劃入TIA的參照量和用于排除TIA的參照量。
[0071] 優(yōu)選地，所述參照量源自來自已知展現(xiàn)過TIA(特別是在如本文中別處指定的窗 口期內(nèi)）的受試者（或受試者組）的樣品，和/或來自已知未展現(xiàn)過TIA(特別是在如本文 中別處指定的窗口期內(nèi)）的受試者（或受試者組）的樣品。
[0072] 已知未展現(xiàn)過TIA的受試者優(yōu)選為健康的受試者。還優(yōu)選地，已知未展現(xiàn)過TIA 的受試者未展現(xiàn)過中風(fēng)，特別是在如上文所提述的窗口期內(nèi)。
[0073] 還優(yōu)選所述參照受試者（即已知展現(xiàn)過TIA的受試者或已知未展現(xiàn)過TIA的受試 者）具有急性腦缺血事件，特別是TIA的風(fēng)險因子。優(yōu)選的急性腦缺血事件特別是TIA的 風(fēng)險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是心力衰竭）、收縮性和/或舒張性心功能障礙、 瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風(fēng)險因子是糖尿病和肥胖。因此，所述參照受試者優(yōu)選 地顯示這些風(fēng)險因子中的至少一種。優(yōu)選地，所述參照受試者患有冠狀動脈病。甚至更優(yōu) 選地，所述參照受試者患有心力衰竭。最優(yōu)選地，所述參照受試者以及測試受試者患有心力 衰竭。還優(yōu)選地，所述參照受試者以及測試受試者患有心力衰竭。這尤其適用于如果測定 NT-原ANP和NT-原BNP的量且如果在本發(fā)明方法的背景中（見本文中別處）計(jì)算NT-原 ANP對NT-原BNP的量的比率。
[0074] 如果僅測定NT-原ANP的量，那么還優(yōu)選參照受試者或測試受試者都不患有心力 衰竭或冠狀動脈病。
[0075] 以下適用作診斷算法。
[0076] 優(yōu)選地，參照量是：
[0077] a.源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品，其中來自測試受試者的 樣品中NT-原ANP的量基本等于所述參照量或大于所述參照量指示所述受試者已展現(xiàn)過短 暫性缺血發(fā)作，和/或
[0078] b.源自來自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品，其中來自測試受試者的樣品中 NT-原ANP的量基本等于所述參照量或低于所述參照量指示所述受試者未展現(xiàn)過短暫性缺 血發(fā)作。
[0079] 源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的優(yōu)選參照量是約54500pg/ ml至約150000pg/ml，且更優(yōu)選地，約54500至約137800pg/ml。甚至更優(yōu)選地，源自已知展 現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的參照量是約137500、或94800,或最優(yōu)選地，54500pg/ ml〇
[0080] 源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的優(yōu)選的參照量是約1000pg/ml 至約33600pg/ml，更優(yōu)選地，是約1000至約12570pg/ml。甚至更優(yōu)選地，源自已知未展現(xiàn) 過TIA的受試者（或受試者組）的參照量是約33600、或15000,或最優(yōu)選地12570pg/ml。 還優(yōu)選所述參照量是4662pg/ml。
[0081] 另外，所述參照量可以限定閾值量，具體為計(jì)算的參照量，由此測試受試者的樣品 中大于相應(yīng)閾值的NT-原ANP量應(yīng)指示TIA，而測試受試者的樣品中低于計(jì)算的參照量的 NT-原ANP量應(yīng)指示受試者未展現(xiàn)過TIA。特別優(yōu)選的閾值量作為計(jì)算的參照量，優(yōu)選為約 54500pg/ml，或更優(yōu)選地為 45000pg/ml。
[0082] 如本文中使用的，術(shù)語"約"意指從所提述的特定值+/-20%、+/-10%、+/_5%、 +/_2 或 +/_1 。
[0083] 在本發(fā)明方法的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)劃入TIA。在該情況中，參照量源自已 知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品）。
[0084] 因此，本發(fā)明涵蓋一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn)過中風(fēng)的受 試者中劃入短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，所述方法包括以下步驟：
[0085] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0086] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此劃入短暫性缺血發(fā)作，
[0087] 其中所述參照量源自來自已知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣 品），其中來自測試受試者的樣品中NT-原ANP的量基本等于或大于所述參照量指示所述受 試者已展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。
[0088] 在本發(fā)明方法的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)劃入TIA。在該情況中，參照量源自已 知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品）。
[0089] 因此，本發(fā)明涵蓋一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn)過中風(fēng)的受 試者中排除短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，所述方法包括以下步驟：
[0090] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0091] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此排除短暫性缺血發(fā)作，
[0092] 其中所述參照量源自來自已知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣 品），其中來自測試受試者的樣品中NT-原ANP的量基本等于或低于所述參照量指示所述受 試者未展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。
[0093] 在本發(fā)明的一個進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，前述方法進(jìn)一步包括以下步驟：測定 來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，并計(jì)算NT-原ANP的量和NT-原BNP的量的比 率。兩種標(biāo)志物的測定是有利的，因?yàn)閮煞N標(biāo)志物的量的比率允許特別可靠的診斷出患有 心力衰竭的受試者中的TIA(見實(shí)施例）。
[0094] 因此，本發(fā)明具體地針對一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn)過中 風(fēng)的受試者中診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，包括：
[0095] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0096] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和
[0097] c.計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
[0098] 優(yōu)選地，上文a)和b)中測定的量是在同一樣品中測定的。然而，還涵蓋在不同的 樣品中測定量。
[0099] 在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法還包括將如此計(jì)算的比率與參照比率比較， 由此診斷出所述受試者中的TIA。
[0100] 如此，本發(fā)明還涉及一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn)過中風(fēng)的 受試者中診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，包括：
[0101] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0102] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，
[0103] c.計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率，和
[0104] d.比較計(jì)算的比率與參照比率，由此診斷出所述受試者中的TIA。
[0105] 標(biāo)志物NT-原BNP (N端原腦利鈉肽）是本領(lǐng)域中公知的。NT-原BNP是優(yōu)選包含 對應(yīng)于人腦利鈉肽（BNP)分子N端部分的長度為76個氨基酸的多肽?，F(xiàn)有技術(shù)中已詳細(xì) 描述了人BNP和NT-原BNP的結(jié)構(gòu)，例如WO 02/089657，W0 02/083913或Bonow(在上述引 文中）。優(yōu)選地，如本文中使用的人NT-原BNP是如EP 0 648 228 B1中披露的人NT-原 BNP。這些現(xiàn)有技術(shù)文件通過提述將其中披露的特定NT-原BNP序列及其變體納入本文。依 照本發(fā)明所指的NT-原BNP還涵蓋上文論述的人NT-原BNP的所述特定序列的等位和其他 變體。具體地，涵蓋在氨基酸水平上與人NT-原BNP，優(yōu)選在整個長度上至少60 %等同，更優(yōu) 選至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %等同的變體多肽。從 原理上講，可通過本領(lǐng)域公知的算法來確定兩個氨基酸序列之間的同一性程度。優(yōu)選地，同 一性程度要通過在比較窗口內(nèi)比較兩個最佳比對的序列測定，其中比較窗口中的氨基酸序 列的片段可以包含如相比于參照序列（不包含添加或缺失）的添加或缺失（例如缺口或懸 突）以用于最佳比對。百分比通過計(jì)算兩個序列中存在相同氨基酸殘基所在的位置的數(shù)目 以得到匹配位置的數(shù)目，將匹配的位置數(shù)目除以比較窗口中的總位置數(shù)目，并將結(jié)果乘以 100以得到序列同一'I"生的百分?jǐn)?shù)。用于比較的序列最佳比對可通過Smith 1981，Add. APL. Math. 2:482的局部同源性算法，通過Needleman 1970, J. Mol. Biol. 48:443的同源性比對 算法，通過Pearson 1988, Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85:2444的尋找相似性方法，通過這 些算法的計(jì)算機(jī)化執(zhí)行（GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA 和 TFASTA，于 Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr.，Madison, WI),或通 過視覺觀察來進(jìn)行。在已鑒定兩個序列用于比較時，優(yōu)選采用GAP和BESTFIT來測定其最 佳比對，由此測定同一性程度。優(yōu)選地，對于缺口權(quán)重使用5. 00的缺省值，而對于缺口權(quán)重 長度（gap weight length)使用0.30的缺省值?；绢愃魄乙嗪w的是蛋白水解性降解 產(chǎn)物，其仍由診斷手段或由針對相應(yīng)全長肽的配體識別。還涵蓋相比于人NT-原BNP氨基 酸序列具有氨基酸缺失、取代和/或添加的變體多肽，只要所述多肽具有NT-原BNP特性。 如本文中所指的NT-原BNP特性是免疫學(xué)和/或生物學(xué)特性。優(yōu)選地，所述NT-原BNP變 體具有與NT-原BNP的那些可比的免疫學(xué)特性（即表位組成）。如此，所述變體應(yīng)可由前述 手段或用于測定利尿肽量的配體識別。生物學(xué)和/或免疫學(xué)NT-原BNP特性可由以下中記 載的測定法檢測：Karl 等·（Karl 1999, Scand J Clin Invest 59:177-181)，Yeo 等·（Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115)。變體還包括翻譯后修飾的肽，如糖基化或 十四烷基化肽。還有，依照本發(fā)明的變體還是在樣品收集后經(jīng)修飾的肽或多肽，例如通過對 肽共價或非共價附接標(biāo)記物，特別是放射性或熒光標(biāo)記物。
[0106] 如本文中使用的，術(shù)語"計(jì)算"指評估在受試者樣品中測定的NT-原ANP和NT-原 BNP量的比率。依照本發(fā)明，可以測定NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率，或NT-原BNP 量對NT-原ANP量的比率。優(yōu)選地，測定NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率。
[0107] 上文中公開了優(yōu)選的參照受試者。優(yōu)選地，所述參照比率源自已知展現(xiàn)過TIA的 受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），和/或已知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來 自受試者組的樣品）（亦見上文的解釋）。
[0108] 如果計(jì)算的比率（和參照比率）是NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率的話，以 下適用作診斷算法：
[0109] 優(yōu)選地，參照比率為
[0110] a.源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自測 試受試者的樣品中的比率基本等于或大于參照比率指示所述受試者展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā) 作，和/或
[0111] b.源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自 測試受試者的樣品中的比率基本等于或低于參照比率指示所述受試者未展現(xiàn)過短暫性缺 血發(fā)作。
[0112] 如果計(jì)算的比率（和參照比率）是NT-原BNP量對NT-原ANP量的比率的話，以 下適用作診斷算法。
[0113] 優(yōu)選地，參照比率為
[0114] a.源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自測 試受試者的樣品中的比率基本等于或低于參照比率指示所述受試者展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā) 作，和/或
[0115] b.源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自 測試受試者的樣品中的比率基本等于或大于參照比率指示所述受試者未展現(xiàn)過短暫性缺 血發(fā)作。
[0116] 另外，參照比率可以限定閾值比率，特別是計(jì)算的參照比率，由此測試受試者樣品 中NT-原ANP對NT-原BNP量的比率大于相應(yīng)閾值應(yīng)指示TIA，而測試受試者樣品中NT-原 ANP對NT-原BNP量的比率低于相應(yīng)閾值指示受試者未展現(xiàn)過TIA (如果測定NT-原ANP對 NT-原BNP量的比率）。
[0117] 源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原 BNP量的參照比率是約10至約125,且更優(yōu)選地，約20至約100、或約20至約90。甚至更 優(yōu)選地，源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參照比率是約125,或最 優(yōu)選地約80。
[0118] 優(yōu)選地，如果參照比率源自具有TIA的風(fēng)險因子的受試者（如本文中別處描述的， 特別是來自患有心力衰竭的受試者），源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣 品的NT-原ANP量對NT-原BNP量的參照比率是約10至約40,更優(yōu)選地，約20至約40、或 約20至約30。甚至更優(yōu)選地，源自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參 照比率是約40,或最優(yōu)選地約30。
[0119] 源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原 BNP量的參照比率是約150至約300,且更優(yōu)選地，約150至約250、或約200至約250。甚 至更優(yōu)選地，源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參照比率是約250,或 最優(yōu)選地約200。
[0120] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法還包括推薦適宜療法的步驟，如果 已診斷出TIA的話。
[0121] 如本文中使用的，術(shù)語"推薦/建議"意指建立可應(yīng)用于受試者的療法的建議。然 而，應(yīng)理解應(yīng)用何種適宜的療法不由該術(shù)語包含。要推薦的療法依賴于由本發(fā)明的方法提 供的診斷結(jié)果。上文提述的推薦步驟優(yōu)選地還可以是自動化的。優(yōu)選地，從本發(fā)明方法的 步驟b)獲得的診斷或輔助，即所述方法的診斷結(jié)果，將用于搜索包含針對個體可能診斷結(jié) 果的治療手段推薦的數(shù)據(jù)庫。在已診斷TIA的情況中推薦的適宜的療法是本領(lǐng)域中公知 的，且優(yōu)選地，涵蓋目標(biāo)是減少進(jìn)一步的腦缺血事件風(fēng)險，特別是中風(fēng)和/或TIA的風(fēng)險的 那些治療方案。這些治療包括藥物的施用、干預(yù)以及生活方式變化。所述治療可能依賴于 TIA的起因。優(yōu)選的治療方案包括抗凝療法、抗血小板療法、攝取阿司匹林和/或肝素、支架 (stenting)(參見Chimowitz等· NEJM 2011:993-1003)，和動脈內(nèi)膜切除術(shù)，特別是頸動脈 動脈內(nèi)膜切除術(shù)。優(yōu)選的生活方式變化是戒煙和/或戒酒，和減輕體重（特別是降低的卡 路里攝取和/或增加的身體鍛煉）。
[0122] 在本發(fā)明的一個方面，涵蓋一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn)過 中風(fēng)的受試者中建立診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的輔助的方法，所述方法包括：
[0123] a)測定標(biāo)志物NT-原ANP的量，其通過（i)使樣品與特異性結(jié)合所述標(biāo)志物的 檢測劑接觸達(dá)一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標(biāo)志物的復(fù)合物， (i i)測量形成的復(fù)合物的量，其中所述形成的復(fù)合物的量與樣品中存在的標(biāo)志物的量成比 例，和（iii)將形成的復(fù)合物的量轉(zhuǎn)化成標(biāo)志物的量，其反映樣品中存在的標(biāo)志物的量；
[0124] b)將所述量與參照比較；并
[0125] c)基于步驟b)中進(jìn)行的比較的結(jié)果，建立用于診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的輔 助。
[0126] 在本發(fā)明的另一個方面，涵蓋一種用于在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作，但未展現(xiàn) 過中風(fēng)的受試者中診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的系統(tǒng)，包含：
[0127] a)分析單元，其配置為使所述樣品與特異性結(jié)合標(biāo)志物NT-原ANP的檢測劑接觸 達(dá)一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標(biāo)志物的復(fù)合物，
[0128] b)分析單元，其配置為測量形成的復(fù)合物的量，其中所述形成的復(fù)合物的量與樣 品中存在的標(biāo)志物的量成比例，
[0129] c)計(jì)算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處于可操作聯(lián)系中，和
[0130] d) -種非短暫性機(jī)器可讀媒體，其包含可由所述處理器執(zhí)行的多個指令，所述指 令在執(zhí)行時將形成的復(fù)合物的量轉(zhuǎn)化成標(biāo)志物的量，該量反映樣品中存在的標(biāo)志物的量， 并建立用于在與所述參照的所述比較的結(jié)果上診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的輔助。
[0131] 在一個方面，適宜的檢測劑可以是特異性結(jié)合要通過本發(fā)明方法研究的受試者樣 品中的標(biāo)志物的抗體。在一個方面，另一種可應(yīng)用的檢測劑可以是特異性結(jié)合樣品中標(biāo)志 物的適體（aptamere)。在再一個方面，在測量檢測劑與標(biāo)志物之間形成的復(fù)合物的量之前， 從復(fù)合物除去樣品。因此，在一個方面，所述檢測試劑可以固定化于固體支持物上。在另一 方面，可通過施用清洗溶液使樣品與在固體支持物上形成的復(fù)合物分離。所形成的復(fù)合物 與存在于樣品中的標(biāo)志物的量是成比例的。應(yīng)理解待應(yīng)用的檢測試劑的特異性和/或靈敏 度限定了樣品中包含的可被特異性結(jié)合的至少一種標(biāo)志物的比例程度。在本文中別處還可 見關(guān)于如何實(shí)施測定的更詳細(xì)的描述。所形成的復(fù)合物的量將被換算為標(biāo)志物的量，其反 映實(shí)際存在于樣品中至少一種標(biāo)志物的量。該量一方面可能基本上就是存在于樣品中的 量，或者在另一方面也可能是由于所形成的復(fù)合物與原始樣品中的量的關(guān)系所呈現(xiàn)出的為 其特定比例的量。
[0132] 在前述方法的又一方面，步驟a)可通過分析單元實(shí)施，在一方面，所述的分析單 元如本文中別處所定義的。
[0133] 在本發(fā)明方法的一個方面，將步驟a)中測定的量與參照比較。在一個方面，所述 參照是如本文中別處定義的參照。在再一個方面，所述參照考慮到測量的復(fù)合物量和原始 樣品中存在的量之間的比例關(guān)系。如此，在本發(fā)明方法的一個方面中應(yīng)用的參照是人為參 照，其被用于反映使用的檢測劑的限制。在另一個方面，在實(shí)施比較時還可以考慮所述關(guān) 系，例如通過在實(shí)際比較測定量與參照的值之前對于測定量納入標(biāo)準(zhǔn)化和/或校正計(jì)算步 驟。對于測定量的標(biāo)準(zhǔn)化和/或校正計(jì)算步驟再次采用比較步驟，從而適當(dāng)?shù)胤从骋咽褂?的檢測劑的限制。在一個方面，自動化實(shí)施所述比較，例如通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)等的輔助。
[0134] 基于在步驟b)中，通過如本文別處所述的、將受試者劃歸為展現(xiàn)過TIA或未展現(xiàn) 過TIA的受試者組所進(jìn)行的比較，建立診斷TIA的輔助。如本文別處已討論過的，在所研究 的病例中，對于待研究的受試者的劃分不一定是100%正確的。而且，研究的受試者所歸入 的受試者組是人為的組，這是因?yàn)檫@些組是基于統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的考慮建立的，即某種預(yù)先 選擇的可能性程度，本發(fā)明的方法將基于其運(yùn)行。在本發(fā)明的一個方面，所述用于診斷TIA 的輔助是自動建立的，例如，由如本文所描述和公開的計(jì)算設(shè)備等輔助。
[0135] 在本發(fā)明的方法的一個方面中，所述方法還包括根據(jù)如本文別處詳細(xì)列舉的在步 驟c)中建立的結(jié)果建議和/或管理受試者，和/或調(diào)整疾病監(jiān)控的密集性的步驟。
[0136] 在前述方法的一個方面，通過本文中別處所述的一個或多個分析單元來實(shí)施步驟 b)和/或c)。
[0137] 上文給出的解釋和定義如作適當(dāng)變動也適用于以下。
[0138] 用于診斷急件腦缺血事件的方法
[0139] 發(fā)明人還顯示NT-原ANP量和NT-原BNP量的比率是用于診斷受試者中的急性腦 缺血事件的有價值的指示物。
[0140] 因此，本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種用于診斷懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中的 急性腦缺血事件的方法，包括：
[0141] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0142] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和
[0143] c.計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
[0144] 在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，前述方法還包括將如此計(jì)算的比率與參照比率比較， 由此診斷急性腦缺血事件。
[0145] 因此，本發(fā)明具體地涉及一種用于診斷懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中的 急性腦缺血事件的方法，包括：
[0146] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0147] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，
[0148] c.計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率，和
[0149] d.將如此計(jì)算的比率與參照比率比較，由此診斷急性腦缺血事件。
[0150] 本領(lǐng)域技術(shù)人員充分理解術(shù)語"急性腦缺血事件"。該術(shù)語具體地涉及一種急性狀 況，其中到腦（或腦的部分）的血液流動不足以達(dá)到腦的代謝需求。優(yōu)選地，有兩種類型的 急性腦缺血事件：1.與事件有關(guān)的缺血可能受限于腦的特定區(qū)域（局灶性缺血）；或2.與 事件有關(guān)的缺血可能涵蓋腦組織的廣泛區(qū)域（系統(tǒng)性缺血）。所述事件應(yīng)是急性的，由此應(yīng) 突然出現(xiàn)。優(yōu)選地，所述急性腦缺血事件選自中風(fēng)和短暫性缺血發(fā)作。術(shù)語"中風(fēng)"和"短 暫性缺血發(fā)作"在本文中別處定義。
[0151] 如本文中使用的，已在本文別處描述的術(shù)語"受試者"指動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu) 選是人。依照本發(fā)明的受試者應(yīng)被懷疑為展現(xiàn)過急性腦缺血事件。優(yōu)選地，所述受試者應(yīng) 被懷疑為在獲得待測試樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選48小時內(nèi)，且最優(yōu)選24小時內(nèi)展現(xiàn)過急 性腦缺血事件。因此，應(yīng)依照本發(fā)明診斷所述測試受試者是否展現(xiàn)過急性腦缺血事件或尚 未展現(xiàn)過急性腦缺血事件，優(yōu)選地在獲得待測試樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選48小時內(nèi)，且最 優(yōu)選24小時內(nèi)。
[0152] 優(yōu)選地，測試受試者（和參照受試者）具有急性腦缺血事件的風(fēng)險因子。優(yōu)選的 風(fēng)險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是急性心力衰竭）、收縮性和/或舒張性心功能 障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風(fēng)險因子是糖尿病和肥胖。因此，測試受試者優(yōu)選 地顯示這些風(fēng)險因子中的至少一種。具體地，測試受試者（和參照受試者，即得到參照量的 受試者）患有冠狀動脈病和/或心力衰竭。最優(yōu)選地，所述受試者患有心力衰竭。優(yōu)選地， 這同樣適用于參照受試者。
[0153] 如上文陳述的，依照前述方法要測試的受試者應(yīng)被懷疑患有急性腦缺血事件，如 此在如本文中別處所述的特定窗口期內(nèi)展現(xiàn)過急性腦缺血事件。優(yōu)選地，懷疑展現(xiàn)過急性 腦缺血事件的受試者是已顯示急性腦缺血事件癥狀的受試者。優(yōu)選地，所述受試者是在獲 得測試樣品前的特定窗口期內(nèi)已顯示急性腦缺血事件癥狀的受試者。優(yōu)選地，所述受試者 是在獲得樣品前72小時內(nèi)，更優(yōu)選地48小時內(nèi)，和最優(yōu)選地24小時內(nèi)已顯示急性腦缺血 事件的癥狀。然而，優(yōu)選地，所述測試樣品應(yīng)在不早于急性腦缺血事件癥狀開始后1小時， 特別是不早于2小時獲得。
[0154] 通過本發(fā)明的前述方法，應(yīng)診斷出急性腦缺血事件。如本文中使用的，術(shù)語"診斷" 意為評估依照本發(fā)明方法所指的受試者是否展現(xiàn)過急性腦缺血事件。具體地，應(yīng)診斷所述 受試者是否在獲得要測試的樣品前的某段窗口期內(nèi)展現(xiàn)過急性腦缺血事件。在一個優(yōu)選的 實(shí)施方案中，應(yīng)診斷出所述受試者在獲得待測試樣品前72小時內(nèi)是否展現(xiàn)過急性腦缺血 事件。在一個進(jìn)一步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)診斷所述受試者在獲得待測試樣品前48小時 內(nèi)是否展現(xiàn)過急性腦缺血事件。在一個甚至進(jìn)一步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，應(yīng)診斷所述受試 者在獲得待測試樣品前24小時內(nèi)是否展現(xiàn)過急性腦缺血事件。優(yōu)選地，所述受試者在獲得 樣品時已不再顯示急性腦缺血事件的癥狀。
[0155] 優(yōu)選地，所述樣品在不超過急性腦缺血事件癥狀開始后72小時獲得。更優(yōu)選地， 所述樣品在不超過急性腦缺血事件癥狀開始后48小時，最優(yōu)選不超過24小時獲得。優(yōu)選 地，所述受試者在獲得樣品時已不再顯示急性腦缺血事件的癥狀。
[0156] 優(yōu)選地，所述參照比率源自已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品（或來自 受試者組的樣品），和/或已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品（或來自受試者組 的樣品）。
[0157] 優(yōu)選地，參照受試者（即已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者或已知未展現(xiàn)過急 性腦缺血事件的受試者）具有急性腦缺血事件的風(fēng)險因子。急性腦缺血事件的優(yōu)選的風(fēng)險 因子在上文中公開且包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是心力衰竭）、收縮性和/或舒張性 心功能障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風(fēng)險因子是糖尿病和肥胖。因此，參照受試 者優(yōu)選地顯示這些風(fēng)險因子中的至少一種。優(yōu)選地，參照受試者患有冠狀動脈病。更優(yōu)選 地，參照受試者患有心力衰竭。最優(yōu)選地，測試受試者以及參照受試者患有心力衰竭。還優(yōu) 選地，測試受試者以及參照受試者患有冠狀動脈病。
[0158] 如果計(jì)算的比率（和參照比率）是NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率的話，以 下適用作診斷算法：
[0159] 優(yōu)選地，參照比率源自已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品，其中來自測 試受試者的樣品中的NT-原ANP對NT-原BNP比率基本等于或大于參照比率指示所述受試 者展現(xiàn)過急性腦缺血事件，和/或
[0160] 參照比率源自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品，其中來自測試受試 者的樣品中的NT-原ANP對NT-原BNP比率基本等于或低于參照比率指示所述受試者未展 現(xiàn)過急性腦缺血事件。
[0161] 源自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP 量對NT-原BNP量的優(yōu)選參照比率是約10至約100,且更優(yōu)選地，約20至約90、或約20至 約80。甚至更優(yōu)選地，源自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品 的參照比率是約100,或最優(yōu)選地約80。
[0162] 優(yōu)選地，如果參照比率源自具有急性腦缺血事件的風(fēng)險因子的受試者（特別是 來自患有心力衰竭或冠狀動脈病的受試者），源自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者 (或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原BNP量的優(yōu)選的參照比率是約10至約40， 更優(yōu)選地，約20至約40、或約20至約30。甚至更優(yōu)選地，源自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事 件的受試者（或受試者組）的樣品的參照是約40,或最優(yōu)選地約30。
[0163] 源自已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量 對NT-原BNP量的優(yōu)選參照比率是約100至約250,且更優(yōu)選地，約100至約200、或約100 至約150。甚至更優(yōu)選地，源自已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品 的參照是約100,或最優(yōu)選地約150。TIA的優(yōu)選的參照量在本文中別處公開。
[0164] 在本發(fā)明的一個方面，涵蓋一種用于在懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中建 立診斷急性腦缺血事件的輔助的方法，所述方法包括：
[0165] a)測定標(biāo)志物NT-原ANP和NT-原BNP的量，其通過⑴使樣品與特異性結(jié)合所 述標(biāo)志物的檢測劑接觸達(dá)一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標(biāo)志物 的復(fù)合物，（ii)測量形成的復(fù)合物的量，其中所述形成的復(fù)合物的量與樣品中存在的標(biāo)志 物的量成比例，和（iii)將形成的復(fù)合物的量轉(zhuǎn)化成標(biāo)志物的量，其反映樣品中存在的標(biāo) 志物的量；
[0166] b)計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率；
[0167] c)將所述比率與參照比較；并
[0168] d)基于步驟c)中進(jìn)行的比較的結(jié)果，建立用于診斷急性腦缺血事件的輔助。
[0169] 在本發(fā)明的另一個方面，涵蓋一種用于在懷疑患有急性腦缺血事件的受試者中診 斷急性腦缺血事件的系統(tǒng)，包含：
[0170] a)分析單元，其配置為使所述樣品與特異性結(jié)合標(biāo)志物NT-原ANP的檢測劑接觸 達(dá)一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標(biāo)志物的復(fù)合物，
[0171] b)分析單元，其配置為測量形成的復(fù)合物的量，其中所述形成的復(fù)合物的量與樣 品中存在的標(biāo)志物的量成比例，
[0172] c)計(jì)算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處于可操作聯(lián)系中，和
[0173] d) -種非短暫性機(jī)器可讀媒體，其包含可由所述處理器執(zhí)行的多個指令，所述指 令在執(zhí)行時將形成的復(fù)合物的量轉(zhuǎn)化成標(biāo)志物的量，該量反映樣品中存在的標(biāo)志物的量， 并基于與所述參照的所述比較的結(jié)果，建立用于診斷急性腦缺血事件的輔助。
[0174] 在一個方面，適宜的檢測劑可以是特異性結(jié)合要通過本發(fā)明方法研究的受試者樣 品中的標(biāo)志物的抗體，如本文中別處陳述的。
[0175] 在前述方法的又一個方面，可通過分析單元來實(shí)施步驟a)，所述分析單元在一個 方面是如本文中別處定義的分析單元。
[0176] 在本發(fā)明方法的一個方面，將步驟b)中計(jì)算的比率與參照比率比較。在一個方 面，所述參照比率是如本文中別處定義的參照比率。如此，在本發(fā)明方法的一個方面中應(yīng)用 的參照可以是人為參照，其被用于反映使用的檢測劑的限制。在另一個方面，在實(shí)施比較時 還可以考慮所述關(guān)系，例如通過在實(shí)際比較測定量與參照的值之前對于測定量或比率納入 標(biāo)準(zhǔn)化和/或校正計(jì)算步驟。在一個方面，自動化實(shí)施所述比較，例如通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)等的 輔助。
[0177] 基于在步驟c)中所進(jìn)行的比較，通過如本文別處所述的、將受試者劃歸為患有急 性腦事件或未患有急性腦事件的受試者組，建立診斷急性腦缺血事件的輔助。如本文別處 已經(jīng)討論過的，在所研究的病例中，對于所研究的受試者的劃分不一定是100%研究例正確 的。而且，研究的受試者所歸入的受試者組是人為的組，這是因?yàn)檫@些組是基于統(tǒng)計(jì)學(xué)考慮 建立的，即特定的預(yù)先選擇的可能性程度，本發(fā)明的方法將基于其運(yùn)行。在本發(fā)明的一個方 面中，用于診斷急性腦事件的輔助是自動建立的，例如，由如本文所描述和公開的計(jì)算設(shè)備 等輔助。
[0178] 在本發(fā)明的方法的一個方面中，所述方法還包括根據(jù)如本文別處詳細(xì)列舉的在步 驟c)中建立的結(jié)果推薦和/或管理受試者，和/或調(diào)整疾病監(jiān)控的密集性的步驟。
[0179] 在前述方法的一個方面，通過本文中別處所述的一個或多個分析單元來實(shí)施步驟 b)和/或c)。
[0180] 此外，本發(fā)明涉及NT-原ANP多肽和/或特異性結(jié)合其的檢測劑在懷疑展現(xiàn)過短 暫性缺血發(fā)作（TIA)的受試者的樣品中用于診斷短暫性缺血發(fā)作的用途。
[0181] 另外，本發(fā)明涉及NT-原ANP多肽和NT-原BNP多肽在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā) 作（TIA)的受試者的樣品中用于診斷短暫性缺血發(fā)作的用途。
[0182] 還有，本發(fā)明涉及特異性結(jié)合NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結(jié)合NT-原BNP 多肽的檢測劑在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作（TIA)的受試者的樣品中用于診斷短暫性缺 血發(fā)作的用途。
[0183] 而且，本發(fā)明涉及NT-原ANP多肽和NT-原BNP多肽在懷疑患有急性腦缺血事件 的受試者的樣品中用于診斷急性腦缺血事件的用途。
[0184] 另外，本發(fā)明涉及特異性結(jié)合NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結(jié)合NT-原BNP 多肽的檢測劑在懷疑患有急性腦缺血事件的受試者的樣品中用于診斷急性腦缺血事件的 用途。
[0185] 如本文中使用的，術(shù)語"檢測劑"指能特異性識別和結(jié)合本文中所述的生物標(biāo)志物 (NT-原ANP或NT-原BNP)(在存在于樣品中時）的試劑。而且，所述試劑應(yīng)允許直接或間 接檢測由所述試劑和生物標(biāo)志物形成的復(fù)合物。直接檢測可通過將可檢測標(biāo)記納入所述試 劑來實(shí)現(xiàn)。間接標(biāo)記可通過特異性結(jié)合包含生物標(biāo)志物和檢測劑的復(fù)合物的一種別的試劑 來實(shí)現(xiàn)，其中所述別的試劑能生成可檢測信號?？捎米鳈z測劑的適宜的化合物是本領(lǐng)域中 公知的。優(yōu)選地，所述檢測劑是特異性結(jié)合生物標(biāo)志物的抗體或適體。如本文中所指的抗 體包括多克隆和單克隆抗體以及它們的能結(jié)合抗原或半抗原的片段如Fv、Fab和F(ab) 2片 段。還涵蓋單鏈抗體和人源化雜合抗體，其中將展現(xiàn)期望的抗原特異性的非人供體抗體的 氨基酸序列與人接受抗體的序列組合。
[0186] 本發(fā)明還涉及一種用于診斷短暫性缺血發(fā)作的裝置，所述裝置包含：
[0187] a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP 多肽的量；和
[0188] b) -種包含數(shù)據(jù)處理器的評估單元，所述數(shù)據(jù)處理器配備有用于將通過所述分析 單元測定的量與數(shù)據(jù)庫中存儲的參照量進(jìn)行比較從而建立NT-原ANP診斷的算法，其中所 述參照量源自用于診斷TIA的方法的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述 算法是如在所述方法的背景中陳述的算法。
[0189] 依照本發(fā)明的一個別的方面，提供適用于實(shí)施本發(fā)明方法的裝置，包含：
[0190] a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP 多肽的量；和
[0191] b) -種用于將測定的量與參照量進(jìn)行比較的分析單元，由此診斷出所述受試者是 否展現(xiàn)過TIA，所述單元包含具有參照量值的數(shù)據(jù)庫和實(shí)施該比較的計(jì)算機(jī)執(zhí)行的算法。
[0192] 本發(fā)明還涉及一種用于診斷短暫性缺血發(fā)作的裝置，所述裝置包含：
[0193] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0194] b) -種包含數(shù)據(jù)處理器的評估單元，所述數(shù)據(jù)處理器用于計(jì)算由分析單元測定的 NT-原ANP和NT-原BNP量的比率，所述數(shù)據(jù)處理器配備有用于將所述比率與數(shù)據(jù)庫中存儲 的參照比率進(jìn)行比較以建立TIA診斷的算法，其中所述參照比率源自用于診斷TIA的方法 的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的背景中所述 的算法。
[0195] 本發(fā)明還涉及一種用于診斷急性腦缺血事件的裝置，所述裝置包含：
[0196] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0197] b) -種包含數(shù)據(jù)處理器的評估單元，所述數(shù)據(jù)處理器用于計(jì)算由分析單元測定的 NT-原ANP和NT-原BNP量的比率，所述數(shù)據(jù)處理器配備有用于將所述比率與數(shù)據(jù)庫中存儲 的參照比率進(jìn)行比較以建立TIA診斷的算法，其中所述參照比率源自用于診斷急性腦缺血 事件的方法的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的 背景中陳述的算法。
[0198] 還涵蓋一種用于診斷急性腦缺血事件的裝置，所述裝置包含：
[0199] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0200] b) -種包含數(shù)據(jù)處理器的分析單元，所述數(shù)據(jù)處理器用于計(jì)算NT-原ANP和 NT-原BNP量的比率，所述數(shù)據(jù)處理器配備有用于將所述比率與數(shù)據(jù)庫中存儲的參照比率 進(jìn)行比較以建立事件診斷的算法，其中所述參照比率源自用于診斷急性腦缺血事件的方法 的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的背景中陳述 的算法。
[0201] 如本文中使用的，術(shù)語"裝置"指一種包含可操作地彼此連接以允許依照本發(fā)明方 法的診斷的前述單元的系統(tǒng)。本文中別處公開了可用于分析單元的優(yōu)選的檢測劑。所述分 析單元優(yōu)選地包含在固體支持物上處于固定化形式的所述檢測劑，檢測劑將與包含要測定 其量的生物標(biāo)志物的樣品接觸。而且，分析單元還可包含測定特異性結(jié)合生物標(biāo)志物的檢 測劑量的檢測器。測定的量可傳輸至評估單元。所述評估單元包含數(shù)據(jù)處理元件如計(jì)算機(jī)， 具有用于實(shí)施測定量和適宜參照之間比較的執(zhí)行算法。適宜的參照可以源自要用于生成如 本文中別處描述的參照量的受試者樣品。診斷結(jié)果可以以參數(shù)診斷性原始數(shù)據(jù)給出，優(yōu)選 地作為絕對或相對量。應(yīng)理解這些數(shù)據(jù)可能需要臨床醫(yī)師的解譯。然而，還涵蓋專家系統(tǒng) 裝置，其中輸出包含經(jīng)加工的診斷性原始數(shù)據(jù)，其解譯不需要專門的臨床醫(yī)師。優(yōu)選地，本 發(fā)明的裝置可用于以自動化方式實(shí)施本發(fā)明的前述方法。
[0202] 本公開的一個優(yōu)選的實(shí)施方案包括一種用于診斷如別處公開的TIA或急性腦事 件的系統(tǒng)。所述系統(tǒng)的實(shí)例包括用于檢測化學(xué)或生物反應(yīng)結(jié)果或者監(jiān)控化學(xué)或生物反應(yīng) 進(jìn)程的，臨床化學(xué)分析儀，凝聚化學(xué)分析儀（coagulation chemistry analyzers),免疫化 學(xué)分析儀，尿分析儀，核酸分析儀。更具體而言，本申請的示例性系統(tǒng)包括Roche Elecsys? Systems 和Cobas? e Immunoassay 分析儀，Abbott Architect?和 Axsym?分析儀，Siemens Centaur? 和 Immulite? 分析儀，以及 Beckman Coulter UniCel? 和 AcessT? 分析儀，等等。
[0203] 所述系統(tǒng)的實(shí)施方案可包括一個或以上的用于實(shí)踐本申請的主題的分析單元。本 申請中所公開的系統(tǒng)的分析單元可通過已知的任何有線連接，藍(lán)牙，LANS，或無線信號與本 申請所公開的計(jì)算設(shè)備可操作地通訊。此外，根據(jù)本申請，分析單元可以包括較大設(shè)備中 用于診斷目的的樣品檢測，例如定性和/或定量評估之一或兩者的獨(dú)立的裝置或元件。例 如，分析單元可以執(zhí)行或輔助樣品和/或試劑的移液、劑量施用（dosing)、混合。分析單元 可包括用來夾持試劑以進(jìn)行測定的試劑夾持單元。試劑的安排可以是，例如在盛有單獨(dú)的 試劑或一組試劑的容器或盒（cassettes)里，置于儲藏室或輸送器中合適的托座或位置之 中。檢測試劑還可以固定在與樣品相接觸的固體支持物上。分析單元還可以包括對于特定 的分析最優(yōu)化的處理和/或檢測組件。
[0204] 根據(jù)一些實(shí)施方案，分析單元可配置為對樣品中的分析物，例如標(biāo)志物，進(jìn)行光學(xué) 檢測。用于光學(xué)檢測的分析單元的示例包括配置為將電磁能轉(zhuǎn)化成電信號的設(shè)備，其包 括單一的和多元件或陣列光學(xué)探測器。根據(jù)本公開，光學(xué)探測器能監(jiān)控光電磁信號并提 供代表置于光路中的樣品內(nèi)分析物的存在和/或濃度的電輸出信號，或與相對于基線信 號的應(yīng)答信號。所述設(shè)備還可以包括，例如光電二極管，包括雪崩光電二極管（avalanche photodiodes)，光電晶體管，光電導(dǎo)檢測器，線性傳感器陣列，CCD檢測器，CMOS檢測器，包 括CMOS陣列檢測器，光電倍增管，以及光電倍增管陣列。根據(jù)某些實(shí)施方案，光學(xué)檢測器， 例如光電二極管或光電倍增管可包括附加的信號調(diào)節(jié)或處理電器元件。例如光學(xué)檢測器可 包括至少一個預(yù)放大器，電子過濾器，或集成電路。合適的預(yù)放大器包括，例如集成、跨阻 抗，和電流增益（電流反射鏡）預(yù)放大器。
[0205] 此外，本申請的一個或以上的分析單元可包含用于發(fā)射光的光源。例如，分析單 兀的光源可以由至少一個光發(fā)射兀件（例如，發(fā)光二極管，電力發(fā)射源如白熾燈，電致發(fā)光 燈，氣體放電燈，高強(qiáng)度放電燈，激光）組成，用于測量待測樣品中分析物的濃度，或使得能 夠能量轉(zhuǎn)換（例如，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移或催化酶）。
[0206] 此外，所述系統(tǒng)的分析單元可包括一個或以上的溫育單元（例如用于將樣品或試 劑保持在特定的溫度或溫度范圍）。在一些實(shí)施方案中，分析單元可包括用于使樣品處于重 復(fù)的溫度循環(huán)中并監(jiān)測樣品中擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化的熱循環(huán)儀，包括實(shí)時熱循環(huán)儀。
[0207] 本文中公開的系統(tǒng)的分析單元還可包括或可操作地連接于反應(yīng)容器或小杯 (cuvette)輸送單元。輸送單元的示例包括液體加工單元，例如移液單元，用來將樣品和/ 或試劑遞送到反應(yīng)容器。所述移液單元可包含可重復(fù)使用的耐洗針，例如鋼針，或者一次性 的移液頭。所述的分析單元還可包括一個或以上的混合單元，例如用于振蕩含液體的小杯 的振蕩器，或用來混合小杯或試劑容器中的液體的攪拌槳。
[0208] 根據(jù)上文描述，依照本公開的一些實(shí)施方案，本文中公開和描述的方法的一些步 驟的部分可通過計(jì)算裝置實(shí)施。計(jì)算裝置可以是例如一般目的計(jì)算機(jī)或手提式計(jì)算裝 置。應(yīng)理解可一起使用多重計(jì)算裝置，如網(wǎng)絡(luò)或轉(zhuǎn)移數(shù)據(jù)的其他方法來實(shí)施本文中公開方 法的一個或多個步驟。例示性的計(jì)算裝置包括桌面計(jì)算機(jī)、便攜式計(jì)算機(jī)、個人數(shù)據(jù)助手 ("PDA"）如BLACKBERRY牌裝置、手機(jī)裝置（cellular device)、平板電腦、服務(wù)器等。一般 而言，計(jì)算裝置包含能執(zhí)行多個指令（如軟件程序）的處理器。
[0209] 優(yōu)選地，計(jì)算裝置能訪問存儲器。存儲器是計(jì)算機(jī)可讀媒體且可以包含單個存儲 裝置或多個存儲裝置，例如局部位于計(jì)算裝置的或可跨網(wǎng)絡(luò)為計(jì)算裝置可訪問。計(jì)算機(jī)可 讀媒體可以是任何可由計(jì)算裝置可訪問的介質(zhì)，而且包括穩(wěn)定和不穩(wěn)定介質(zhì)。另外，計(jì)算機(jī) 可讀媒體可以是可移除和不可移除介質(zhì)之一或兩者。舉例而言且無限制地，計(jì)算機(jī)可讀媒 體可以包含計(jì)算機(jī)存儲介質(zhì)。例示性的計(jì)算機(jī)存儲介質(zhì)包括但不限于，RAM、ROM、EEPR0M、 閃存或任何其他存儲技術(shù)，CD-ROM、Digital Versatile Disk(DVD)或其他光盤存儲器、磁 帶盒、磁帶、磁盤存儲器，或任何其他可用于存儲多個指令的媒體，所述指令能由計(jì)算裝置 訪問并由計(jì)算機(jī)裝置的處理器執(zhí)行。
[0210] 依照本公開的實(shí)施方案，軟件可以包含指令，其在由計(jì)算裝置的處理器執(zhí)行時，可 以實(shí)施本文公開方法的一個或多個步驟。一些指令可改編為產(chǎn)生控制其他機(jī)器運(yùn)行的信 號，如此可以經(jīng)由那些控制信號運(yùn)行以轉(zhuǎn)化離計(jì)算機(jī)遠(yuǎn)距離的材料。這些描述和示例是由 數(shù)據(jù)處理領(lǐng)域技術(shù)人員使用的手段，例如以最有效地將其工作物傳達(dá)給本領(lǐng)域其他技術(shù)人 員。
[0211] 所述多個指令還可以包含一種算法，其一般理解為產(chǎn)生期望結(jié)果的自身一致的步 驟序列。這些步驟是需要物理操作物理量的那些步驟。通常盡管非必要地，這些量采用能 被存儲、轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)化、組合、比較和另外操作的電或磁脈沖或信號的形式。主要出于普遍使用 的原因，將這些信號指為值、字符、展示數(shù)據(jù)、數(shù)字等作為其中實(shí)體化或表示這類信號的物 理項(xiàng)或顯示的提述在多次證明是方便的。然而，應(yīng)當(dāng)記住，所有這些和相似的術(shù)語應(yīng)與適宜 的物理量有關(guān)且本文中僅用作應(yīng)用于這些量的方便的標(biāo)記。依照本公開的一些實(shí)施方案， 將用于實(shí)施本文中所公開的一種或多種標(biāo)志物的測定量和適宜參照之間的比較的算法實(shí) 體化，而且通過執(zhí)行指令來進(jìn)行。結(jié)果可以參數(shù)診斷性原始數(shù)據(jù)或絕對或相對量輸出。依 照本文所公開系統(tǒng)的多個實(shí)施方案，"診斷"可以由本文中公開的系統(tǒng)的計(jì)算裝置基于計(jì)算 的"量"對參照或閾值的比較來提供。例如，系統(tǒng)的計(jì)算裝置可以以詞、符號或數(shù)值的形式 提供指示物，其指示具體的診斷。
[0212] 所述計(jì)算裝置還可以訪問輸出裝置。例示性的輸出裝置包含例如傳真機(jī)、顯示器、 打印機(jī)和文檔。依照本公開的一些實(shí)施方案，計(jì)算裝置可以實(shí)施本文公開方法的一個或多 個步驟，且其后提供經(jīng)由輸出裝置輸出，其涉及方法的結(jié)果、指示、比率或其他因子。
[0213] 本發(fā)明還涵蓋一種用于診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對 NT-原ANP多肽的檢測劑，以及優(yōu)選地，反映從已知展現(xiàn)過TIA的受試者和/或已知未展現(xiàn) 過TIA的受試者衍生的參照量的標(biāo)準(zhǔn)。
[0214] 本發(fā)明還涵蓋一種用于診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對 NT-原ANP多肽的檢測劑和針對NT-原BNP多肽的檢測劑，以及優(yōu)選地，反映從已知展現(xiàn)過 TIA的受試者和/或已知未展現(xiàn)過TIA的受試者衍生的參照比率的標(biāo)準(zhǔn)。
[0215] 本發(fā)明還涵蓋一種用于診斷受試者中的急性腦缺血事件的試劑盒，所述試劑盒至 少包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑和針對NT-原BNP多肽的檢測劑，以及優(yōu)選地，反映從 已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者或已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者衍生的參 照比率的標(biāo)準(zhǔn)。
[0216] 如本文中使用的，術(shù)語"試劑盒"指上述組分的集合，優(yōu)選地，其單獨(dú)地或在單一的 容器內(nèi)提供。所述的容器內(nèi)還包括實(shí)施本發(fā)明的方法的操作指南。這些操作指南可以是 使用手冊的形式，也可以通過計(jì)算機(jī)程序代碼提供，當(dāng)在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理設(shè)備上運(yùn)行所 述計(jì)算機(jī)程序代碼時，其能夠執(zhí)行本發(fā)明的方法中的比較，并相應(yīng)地建立診斷。所述的計(jì) 算機(jī)程序代碼可以是在數(shù)據(jù)存儲介質(zhì)或設(shè)備上，例如光學(xué)存儲介質(zhì)（例如光盤），或者直接 在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理設(shè)備上提供。而且，所述試劑盒優(yōu)選地可包含反映如本文中別處詳細(xì) 描述和陳述的參照量的標(biāo)準(zhǔn)。所述檢測劑優(yōu)選地固定化于載體上，且優(yōu)選為測試條（test stripe)〇
[0217] 本說明書中引用的全部參考文獻(xiàn)通過參考其所公開的全部內(nèi)容以及本說明書中 特別引用的公開內(nèi)容的形式并入本申請。
[0218] 下述的實(shí)施例僅用來解釋本發(fā)明。它們不以任何形式限制本發(fā)明的范圍。 實(shí)施例
[0219] 實(shí)施例1 :NT-原BNP和NT-原ANP的測定
[0220] 使用 Roche 的電化學(xué)發(fā)光 ELISA 夾層測試 Elecsys 原 BNP II STAT (Short Turn Around Time)測定來測定NT-原BNP。該測試采用識別位于原BNP (1-108) N端部分（1-76) 中的表位的兩種單克隆抗體。
[0221] 使用來自 Biomedica Medizinprodukte GmbH(Vienna, Austria)的NT-原 ANP測定 來測定NT-原ANP (前-原ANP肽的氨基酸1至98)。目錄號為BI-20892。檢測限為0. 05 nmol/1。該測定利用多克隆綿羊抗原ANP抗體。
[0222] 在下列受試者組的血清樣品中測試生物標(biāo)志物的水平。
[0223] ?健康受試者（η = 149)
[0224] ?患有穩(wěn)定冠狀動脈病CAD的患者（即其中經(jīng)常形成中風(fēng)的患者，η = 235)，
[0225] ?患有心臟代償失調(diào)的患者（η = 64)，
[0226] ?患有 ΤΙΑ 的患者（η = 79)。
[0227] ?患有小中風(fēng)和大中風(fēng)的患者（分別的η = 61和108)
[0228] CAD患者:將患有慢性動脈病的總計(jì)235位患者納入本研究中，均值年齡64歲， 141位男性和94位女性。在所有患者中，通過血管造影術(shù)驗(yàn)證冠狀動脈病。血管直徑中 50%降低被用于1、2或3級血管病的分類。心臟功能通過心回波描記術(shù)和NT-原ΒΝΡ的測 定評估。
[0229] 心力衰竭:另一組的64位患者患有代償失調(diào)性心力衰竭（24位女性和40位男性， 均值年齡69歲）。他們的特征為在先前2周內(nèi)增加的呼吸短促，所有患者均可依照NYHA分 類歸為NYHA III或IV。
[0230] 健康控制:將149位臨床健康的人受試者納入研究作為對照，52位男性和97位女 性（均值年齡41歲，范圍為19至56歲）。這些受試者沒有心臟病，如通過醫(yī)學(xué)病史和心電 圖評估的，沒有糖尿病和這些疾病的風(fēng)險因子。而且，他們有正常的腎功能，如通過正常肌 酸酐值和惡性病癥評估的。
[0231] 中風(fēng)/TIA患者:將患有TIA或缺血性中風(fēng)的總計(jì)255位患者（均值年齡70歲） 納入本研究中。在23位患者中存在短暫性缺血發(fā)作，在61位患者中診斷出小中風(fēng)，而在 108位患者中發(fā)現(xiàn)大中風(fēng)。除了上文描述的以外，還實(shí)施頸動脈和經(jīng)顱超聲（caotoid and transcranial ultrasound)以及心電描記術(shù)和心回波描記術(shù)，并依照TOAST標(biāo)準(zhǔn)將患者分 類。在患有中風(fēng)和TIA的患者中，在呈現(xiàn)時獲得的樣品和在呈現(xiàn)后6和24小時獲得的樣品 中測量生物標(biāo)志物NT-原ANP和NT-原BNP。癥狀開始和允入（admission)之間的中值間 期為4. 2小時（25th百分比：2. 5, 75th百分比：8小時）。
[0232] 實(shí)施例2 :結(jié)果
[0233] 獲得以下結(jié)果（顯示為中值水平，以及25th和75th百分比） ：
[0234]
【權(quán)利要求】
1. 一種用于診斷受試者中的短暫性缺血發(fā)作（TIA)的方法，所述受試者被懷疑展現(xiàn)過 短暫性缺血發(fā)作，但尚未展現(xiàn)中風(fēng)，所述方法包括測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP 的量。
2. 權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包含將測定的NT-原ANP的量與參照量比較，由此診斷所 述受試者是否展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。
3. 權(quán)利要求1和2的方法，其中懷疑展現(xiàn)過TIA的所述受試者是已顯示TIA癥狀的受 試者。
4. 權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，其中懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作的所述受試者在 獲得所述樣品前72小時內(nèi)已顯示TIA的癥狀，特別是其中所述受試者在獲得所述樣品前24 小時內(nèi)已顯示TIA的癥狀。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中在獲得所述樣品前72小時內(nèi)診斷出所述受試者是否展現(xiàn)過 TIA，特別是其中在獲得所述樣品前24小時內(nèi)診斷出所述受試者是否展現(xiàn)過TIA。
6. 權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者在獲得所述樣品時不再顯示TIA 的癥狀。
7. 權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的方法，其中在不早于TIA癥狀結(jié)束后一小時從所述受試 者獲得所述樣品。
8. 權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)的方法，其中： a. 所述參照量源自來自已知展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品，且其中來自測試受試者的樣 品中NT-原ANP的量基本等于所述參照量或大于所述參照量指示所述受試者已展現(xiàn)過短暫 性缺血發(fā)作，和/或 b. 其中所述參照量源自來自已知未展現(xiàn)過TIA的受試者的樣品，且其中來自測試受試 者的樣品中NT-原ANP的量基本等于所述參照量或低于所述參照量指示所述受試者未展現(xiàn) 過短暫性缺血發(fā)作。
9. 權(quán)利要求2至7中任一項(xiàng)的方法，其中所述參照量是計(jì)算的參照量，且其中來自測試 受試者的樣品中NT-原ANP的量大于所述計(jì)算的參照量指示所述受試者已展現(xiàn)過短暫性缺 血發(fā)作，且其中來自測試受試者的所述樣品中NT-原ANP的量低于所述計(jì)算的參照量指示 所述受試者未展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作。
10. 權(quán)利要求1至9的方法，其中所述受試者不患有心力衰竭和/或冠狀動脈病。
11. 一種用于診斷受試者中的急性腦缺血事件的方法，所述受試者被懷疑患有急性腦 缺血事件，所述方法包括： a. 測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量， b. 測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和 c. 計(jì)算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
12. 權(quán)利要求11的方法，進(jìn)一步包括將由此計(jì)算的比率與參照比率比較，從而診斷出 所述急性腦缺血事件。
13. 權(quán)利要求11和12的方法，其中所述受試者患有心力衰竭和/或冠狀動脈病。
14. 權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)的方法，其中所述急性腦缺血事件選自中風(fēng)和短暫性缺 血發(fā)作。
15. 權(quán)利要求11至14中任一項(xiàng)的方法，其中計(jì)算NT-原ANP對NT-原BNP的比率，而 且 a. 其中所述參照比率源自來自已知展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品，且其中來 自測試受試者的樣品中NT-原ANP對NT-原BNP的比率基本等于所述參照比率或大于所述 參照比率指示所述受試者已展現(xiàn)過急性腦缺血事件，和/或 b. 其中所述參照比率源自來自已知未展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品，且其中 來自測試受試者的樣品中NT-原ANP對NT-原BNP的比率基本等于所述參照比率或低于所 述參照比率指示所述受試者未展現(xiàn)過急性腦缺血事件。
16. 權(quán)利要求11至15中任一項(xiàng)的方法，其中懷疑展現(xiàn)過急性腦事件的所述受試者是已 顯示急性腦事件癥狀的受試者。
17. 權(quán)利要求11至16中任一項(xiàng)的方法，其中懷疑展現(xiàn)過急性腦事件的所述受試者在獲 得所述樣品前24小時內(nèi)已顯示急性腦事件的癥狀。
18. 權(quán)利要求11至17中任一項(xiàng)的方法，其中懷疑展現(xiàn)過急性腦事件的所述受試者在獲 得所述樣品前24小時內(nèi)已顯示急性腦事件的癥狀。
19. 權(quán)利要求11至17中任一項(xiàng)的方法，其中在不早于所述急性腦事件癥狀的發(fā)作后1 小時獲得所述樣品。 20. NT-原ANP多肽和/或特異性結(jié)合其的檢測劑在懷疑展現(xiàn)過短暫性缺血發(fā)作（TIA) 的受試者的樣品中用于診斷短暫性缺血發(fā)作（TIA)的用途。 21. i) NT-原ANP和NT-原BNP多肽，或 ii)特異性結(jié)合所述NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結(jié)合所述NT-原BNP多肽的檢 測劑，在懷疑展現(xiàn)過急性腦缺血事件的受試者的樣品中用于診斷急性腦缺血事件的用途。
22. 權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)的方法，或權(quán)利要求20或21的用途，其中所述樣品是血 液、血清或血漿樣品。
23. 權(quán)利要求1至19中任一項(xiàng)的方法，或權(quán)利要求20或21的用途，其中所述受試者是 人。
24. -種用于診斷短暫性缺血發(fā)作的裝置，所述裝置包含： a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP多肽 的量；和 b) -種包含數(shù)據(jù)處理器的評估單元，所述數(shù)據(jù)處理器配備有用于將通過所述分析單元 測定的量與數(shù)據(jù)庫中存儲的參照量進(jìn)行比較從而建立NT-原ANP診斷的算法，其中所述參 照量源自如權(quán)利要求15中限定的受試者的樣品，且所述算法是如權(quán)利要求4中限定的算 法。
25. -種用于診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和優(yōu)選地，反映如源自已知展現(xiàn)過TIA的受試者和/或已知未展現(xiàn)過TIA的受試 者的參照量的標(biāo)準(zhǔn)。
【文檔編號】G01N33/68GK104094121SQ201280068882
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2012年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月1日
【發(fā)明者】G.赫斯, A.霍希, D.祖內(nèi)克 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司