專利名稱：一種嗎啡檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測卡，尤其涉及一種嗎啡檢測卡。
背景技術(shù)：
目前，國際上對(duì)藥物濫用檢測通用的方法是先篩選后確認(rèn)的方法，即首先采用一種方法對(duì)吸毒群體進(jìn)行初步篩選，而后再對(duì)初篩結(jié)果顯陽性的人體采用另一種方法進(jìn)行確認(rèn)。初篩方法往往較確認(rèn)方法費(fèi)用上便宜，操作上簡便，最好能是即時(shí)快速檢測方法，現(xiàn)在常用的初篩方法有放射免疫分析法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測試技術(shù)(ELISA)、膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)等。確認(rèn)方法主要用高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜一質(zhì)譜法(GC-MS)等理化檢測方法。GC-MS技術(shù)在藥物濫用檢測中的應(yīng)用較為廣泛，是目前國際上公認(rèn)的最后確證毒品的定性、定量的有效手段之一，其檢測結(jié)果具有權(quán)威性，國際上常用的興奮劑檢測也是采用此法的。但是GC-MS技術(shù)費(fèi)用昂貴，耗材成本較高，樣品需預(yù)處理，耗時(shí)長，對(duì)操作人員要求也較高，并且不適合于進(jìn)行現(xiàn)場檢測，難以適應(yīng)社會(huì)需求。HPLC檢測投資適中，耗材成本低，操作較為簡單，檢測靈敏度較高，但是測試也必須在實(shí)驗(yàn)室由專業(yè)技術(shù)人員操作液相色譜儀來完成。RIA是最早建立的經(jīng)典的免疫分析方法，檢測的準(zhǔn)確度較高，樣品用量少，且不需要作預(yù)處理，但是投資成本較高，且對(duì)操作人員有較大危害，對(duì)環(huán)境有污染，難以推廣應(yīng)用。ELISA是在免疫學(xué)和細(xì)胞工程學(xué)基礎(chǔ)上發(fā)展出來的一種微量檢測技術(shù)，克服了放射性同位素所引起的危害，并具有明確可讀的優(yōu)點(diǎn)，但是檢測時(shí)間長，同時(shí)需要酶標(biāo)儀，并由專業(yè)技術(shù)人員操作，不適合現(xiàn)場篩查。GICA是90年代初期，在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一種簡易快速的免疫學(xué)檢測技術(shù)。它以條狀纖維層材料為固相，通過毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上泳動(dòng)，并同時(shí)使樣品中的待測物與層析材料上待測物的受體發(fā)生高特異高親和性的免疫反應(yīng)。層析過程中免疫復(fù)合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶)，直接運(yùn)用可目測的標(biāo)記物(膠體金)而得到直觀的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象(顯色)，而游離標(biāo)記物則越過檢測帶，達(dá)到與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離的目的。嗎啡是鴉片(俗稱阿片)中最主要的生物堿(含量約10-15%)，1806年法國化學(xué)家F 澤爾蒂納首次從鴉片中分離出來。由于純度關(guān)系，嗎啡的顏色可呈白色、淺黃色或棕色，可將其干燥成結(jié)晶粉末狀，也可做成塊狀。嗎啡具有鎮(zhèn)痛及催眠作用，在醫(yī)學(xué)上，一直為麻醉性鎮(zhèn)痛藥，被視為解除劇痛最有效的傳統(tǒng)止痛藥，臨床上有其鹽酸鹽、硫酸鹽、醋酸鹽和酒石酸鹽等形式。嗎啡最常用的給藥方法是注射，以便迅速生效，但口服亦有效。其最大的缺點(diǎn)是易成癮，因而被濫用。海洛因是嗎啡的二乙?；苌?，其化學(xué)名為二乙酰嗎啡。它是1874年由一位英國化學(xué)家在嗎啡中加入醋酸而得到的一種白色結(jié)晶粉末，其鎮(zhèn)痛效力是嗎啡的4 8倍，對(duì)支氣管炎、哮喘、肺結(jié)核等頗有奇效。以后人們發(fā)現(xiàn)它不僅止痛效果好，同時(shí)更兼有非凡的提神作用。大約在1989年德國開始生產(chǎn)，并作為強(qiáng)度麻醉劑推銷，并正式定名為海洛因用于臨床。它比嗎啡的水溶性更大，吸收亦更快，且其脂溶性也較大，易通過血腦屏障進(jìn)入中樞發(fā)揮其作用，因而它本身的成癮性更強(qiáng)烈，不良的副作用和對(duì)個(gè)人及社會(huì)造成的危害后果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了其醫(yī)用價(jià)值。根據(jù)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院的研究認(rèn)為，正常人體內(nèi)有內(nèi)源性腦啡肽，它作用于阿片受體，從而影響著以下十類系統(tǒng)去甲腎上腺素系統(tǒng)、多巴胺系統(tǒng)、5羥色胺系統(tǒng)、乙酞膽堿系統(tǒng)、垂體-性腺系統(tǒng)、甲狀腺系統(tǒng)、Ca++通道系統(tǒng)、腺苷酸環(huán)化酶-環(huán)磷酸腺苷系統(tǒng)、鳥苷酸結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白系統(tǒng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)，而達(dá)到體內(nèi)平衡。一旦有阿片類藥物進(jìn)入人體，內(nèi)源性阿片肽分泌就逐漸減少，以致垂體中斷了分泌；這時(shí)外源性阿片類藥物也作用于阿片受體，再影響上述十類系統(tǒng)，也達(dá)到體內(nèi)平衡。要使這種平衡保持下去，就必須不斷地補(bǔ)充外源性阿片類藥物，補(bǔ)充量達(dá)到一定程度后，人體就產(chǎn)生了欣快感、幻覺感。但外源性阿片類藥物一旦停止進(jìn)入人體，十大系統(tǒng)功能很快出現(xiàn)紊亂，就會(huì)出現(xiàn)不安、焦慮、忽冷忽熱、起雞皮疙瘩、流淚、流涕、出汗、惡心、嘔吐、腹痛、腹灣，甚至全身抽搐，抱頭撞墻等，人體如墜入無底魔窯，似乎五臟六腑都要被掏空，即為成癮發(fā)作癥狀。這種戒斷反應(yīng)的痛苦，反過來又促使吸毒者為避免這種痛苦而千方百計(jì)地維持吸毒狀態(tài)。 阿片類藥物成癮后，將嚴(yán)重影響身心健康。其直接藥理作用可引起便秘、呼吸抑制及惡心、嘔吐等。由于對(duì)內(nèi)分泌和免疫系統(tǒng)功能的影響，可使吸毒者體質(zhì)下降，面黃肌瘦。對(duì)外傷、手術(shù)及感染等狀態(tài)下抵抗力下降更為明顯。生活規(guī)律混亂，性欲、生育能力下降，還可引起胰腺管和膽囊痙攣，有時(shí)會(huì)造成胰腺炎和膽囊梗阻。產(chǎn)婦吸毒可使產(chǎn)程延長，造成新生兒呼吸抑制。吸毒者67%以上出現(xiàn)心、肺、腦、肝、腎等主要器官受損。海洛因可引起肺部積液，非心源性肺水腫，腎病等。50%以上出現(xiàn)心電圖異常，腦電圖出現(xiàn)慢波或快波。并伴有食道炎、胃炎、皮膚彈性減弱、面部色素沉著、鼻粘膜萎縮、眼底血、咽喉炎等。女性吸毒可出現(xiàn)月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、不孕等，孕婦吸毒還可累及下一代。用不清潔注射器吸毒者易并發(fā)病毒性肝炎、肺膿腫、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、菌血癥、注射部位膿腫、肢體壞疽、破傷風(fēng)、血栓性靜脈炎、肺結(jié)核、貫穿性脊髓炎、性病和艾滋病等等。嗎啡進(jìn)入人體后，能在二磷酸尿苷葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)催化下與二磷酸尿苷(UDP)葡糖醛酸結(jié)合，結(jié)合部位在C3或C6位。代謝的主要部位是肝臟，但腎臟、腸、大腦也有UDPGT活性。嗎啡與葡糖苷酸結(jié)合產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物有60%-75%轉(zhuǎn)化成嗎啡_3_葡糖苷酸(M3G)，9%-10% 轉(zhuǎn)化成嗎啡-6-葡糖苷酸(M6G)，M3G/M6G 比值為 7. 5-36. 3 ；2 %-18 % 以原形經(jīng)尿清除。還有少量(約4%)轉(zhuǎn)化為嗎啡-3. 6- 二葡糖苷酸(M3. 6G)、嗎啡-3-乙醚的硫酸鹽、去甲嗎啡及去甲嗎啡-6-葡糖苷酸等。其余可經(jīng)糞便和汗液等途徑清除。海洛因被注射后，由于自身的水解和膽堿脂酶的水解作用，在血中很快代謝為6-單乙酰嗎啡，半衰期約為3min，在10 15min內(nèi)完全轉(zhuǎn)化，6-單乙酰嗎啡繼續(xù)去乙?；D(zhuǎn)化為嗎啡，半衰期約為5 25min，在肝和其他組織中，6-單乙酰嗎啡以較慢的速度轉(zhuǎn)化為嗎啡，約在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完全轉(zhuǎn)化。因此及時(shí)準(zhǔn)確檢測嗎啡對(duì)于防止阿片類藥物泛濫，禁毒及戒毒，保護(hù)人民身心健康有著極為重大的意義。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種嗎啡檢測卡，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。[0013]為了解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型通過下述技術(shù)方案得以解決—種嗎啡檢測卡,包括卡殼和試紙，卡殼為長方體，卡殼前方有觀察窗和加樣孔，試紙固定于卡殼內(nèi)部，試紙包括支持物、樣品墊、膠體金墊和硝酸纖維素膜，支持物上從加樣端開始依次粘貼有硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊，硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對(duì)照區(qū)，檢測區(qū)包被嗎啡人工免疫抗原，對(duì)照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體。作為優(yōu)選，嗎啡人工免疫抗原為嗎啡-牛血清白蛋白偶聯(lián)物(MOP-BSA)。是按以下方法自制得到從嗎啡鹽酸鹽中提取游離的嗎啡，根據(jù)嗎啡上氨基的活潑性，氨基可與丁二酸酐發(fā)生酰胺反應(yīng)，產(chǎn)生羧基，再利用碳二亞胺法，將該產(chǎn)物中的羧基與載體蛋白上的氨基脫水形成酰胺鍵，進(jìn)行偶聯(lián)，生成嗎啡抗原M0P-BSA。將合成產(chǎn)物置入pH 7.4 IOmM磷酸鹽緩沖液4°C攪拌透析2天，每天換液2次，以去除未結(jié)合的嗎啡或其它小分子物質(zhì)，透析 后-20°C密閉保存。作為優(yōu)選，觀察窗與硝酸纖維素膜的位置相對(duì)應(yīng)，加樣孔與樣品墊的位置相對(duì)應(yīng)。本實(shí)用新型的一種嗎啡檢測卡，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。在免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。

圖I為本實(shí)用新型所述一種嗎啡檢測卡的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖I與實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例—種嗎啡檢測卡,如圖I所不，包括卡殼I和試紙2,卡殼I為長方體,卡殼I前方有觀察窗3和加樣孔4，試紙2固定于卡殼I內(nèi)部，試紙2包括支持物、樣品墊、膠體金墊和硝酸纖維素膜，支持物上從加樣端開始依次粘貼有硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊，硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對(duì)照區(qū)，檢測區(qū)包被嗎啡人工免疫抗原，對(duì)照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體。嗎啡人工免疫抗原為嗎啡-牛血清白蛋白偶聯(lián)物。觀察窗3與硝酸纖維素膜的位置相對(duì)應(yīng)，加樣孔4與樣品墊的位置相對(duì)應(yīng)。利用膠體金免疫層析的原理，在硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)包被M0P-BSA，對(duì)照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體。當(dāng)待測物中有被測的抗原物質(zhì)(即嗎啡)時(shí)，待測物中的抗原物質(zhì)就會(huì)與標(biāo)記膠體金的抗嗎啡抗體形成Ag-Ab-Au復(fù)合物，該復(fù)合物中抗體的活性位點(diǎn)將因被樣品溶液中的藥物占據(jù)而無法與T線上藥物抗原結(jié)合；所以當(dāng)樣品中的嗎啡含量達(dá)300ng/ml以上時(shí)，檢測卡上的T線不顯色，可以判定為陽性。反之，當(dāng)樣品中嗎啡含量在300ng/ml以下或不含有時(shí)，檢測卡上的T線顯色，判定為陰性?？傊陨纤鰞H為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，凡依本實(shí)用新型申請(qǐng)專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本實(shí)用新型專利的涵蓋范圍。
權(quán)利要求1.一種嗎啡檢測卡，包括卡殼(I)和試紙(2)，卡殼(I)為長方體，卡殼(I)前方有觀察窗(3)和加樣孔(4)，試紙(2)固定于卡殼(I)內(nèi)部，其特征在于試紙(2)包括支持物、樣品墊、膠體金墊和硝酸纖維素膜，支持物上從加樣端開始依次粘貼有硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊，硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對(duì)照區(qū)，檢測區(qū)包被嗎啡人工免疫抗原，對(duì)照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種嗎啡檢測卡，其特征在于嗎啡人工免疫抗原為嗎啡-牛血清白蛋白偶聯(lián)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種嗎啡檢測卡，其特征在于觀察窗(3)與硝酸纖維素膜的位置相對(duì)應(yīng)，加樣孔(4)與樣品墊的位置相對(duì)應(yīng)。
專利摘要本實(shí)用新型屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測卡，尤其涉及一種嗎啡檢測卡，包括卡殼和試紙，卡殼為長方體，卡殼前方有觀察窗和加樣孔，試紙固定于卡殼內(nèi)部，試紙包括支持物、樣品墊、膠體金墊和硝酸纖維素膜，支持物上從加樣端開始依次粘貼有硝酸纖維素膜、膠體金墊和樣品墊，硝酸纖維素膜上有檢測區(qū)和對(duì)照區(qū)，檢測區(qū)包被嗎啡人工免疫抗原，對(duì)照區(qū)包被羊抗鼠多克隆抗體，觀察窗與硝酸纖維素膜的位置相對(duì)應(yīng)，加樣孔與樣品墊的位置相對(duì)應(yīng)，操作簡單、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)和適合現(xiàn)場檢測，而且還具有生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。在免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N33/558GK202494680SQ201220092729
公開日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月13日
發(fā)明者周文良, 殷秀飛, 陳國琴 申請(qǐng)人:杭州隆基生物技術(shù)有限公司