專利名稱：一種檢測(cè)微痕量克百威的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)農(nóng)藥的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及氨基甲酸酯類農(nóng)藥中克百威檢測(cè)方法，具體涉及ー種檢測(cè)微痕量克百威的方法。
背景技術(shù)：
克百威屬于氨基甲酸酯類農(nóng)藥， 氨基甲酸酯類農(nóng)藥是常用的三大農(nóng)藥之一。該類農(nóng)藥常用來(lái)處理農(nóng)作物的種子，可以有效的抑制多種害蟲?？税偻俑叨練⑾x劑，對(duì)眼睛和皮膚無(wú)刺激作用。在試驗(yàn)劑量?jī)?nèi)對(duì)動(dòng)物無(wú)致崎、致突變、致癌作用，對(duì)魚、鳥高毒，對(duì)蜜蜂無(wú)毒害。但是由于克百威的高毒性和難降解等性質(zhì)，其適當(dāng)?shù)挠昧亢驼_的使用方式直接影響其對(duì)作用的發(fā)揮及對(duì)人和環(huán)境的影響，在蔬菜、水果等直接食用的農(nóng)作物上，國(guó)內(nèi)外一般的做法都是對(duì)其使用量做了嚴(yán)格的限制；在其他農(nóng)作物上比如水稻、棉花、煙草、大豆等作物上也限制了其用量。這主要是由于，克百威高毒性和難降解等性質(zhì)，一旦用量超標(biāo)就會(huì)導(dǎo)致農(nóng)產(chǎn)品和土壤中產(chǎn)生大量的農(nóng)藥殘留，從而對(duì)人體和生態(tài)環(huán)境帶來(lái)不利的影響。因此，對(duì)克百威殘留量簡(jiǎn)單、快速和靈敏的檢測(cè)非常重要。近年來(lái)對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)用的較多的是色譜法，包括氣相色譜(GC)、氣相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用(GC MS)，高效液相色譜(HPLC)等。這些方法靈敏度高，準(zhǔn)確性好。但是由于這類檢測(cè)手段需要大型的設(shè)備、專業(yè)的操作人員以及需要消耗大量的試劑，這使色譜法檢測(cè)的成本非常高，從而限制了色譜法的廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是如何提供一種對(duì)植物中克百威殘留量成本低廉，操作簡(jiǎn)單，且檢測(cè)準(zhǔn)確性高的檢測(cè)方法。解決該技術(shù)問題，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的一種檢測(cè)微痕量克百威的方法，具體步驟如下
一種檢測(cè)微痕量克百威的方法，其特征在于具體步驟如下，
步驟I :將面粉和蒸餾水以1:5的重量比進(jìn)行混合得到面糊，對(duì)該面糊進(jìn)行攪拌使面粉與水均勻混合,然后將所述面糊在4000r/min的離心速度之下離心IOmin,收集上清液，即得粗酶；
步驟2 :取ImL步驟I中的粗酶，將該粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH2P04體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，取出PEG相，將取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH2P04/6%(NH
4)2S04 體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，對(duì)由磷酸ニ氫鈉與硫酸銨組成的無(wú)機(jī)鹽相進(jìn)行透析、濃縮和冷凍干燥，得到純化后的植物酯酶粉末，然后再將該植物酯酶粉末用蒸餾水溶解得到植物酯酶酶液；步驟3 :配制濃度為70 165 μ mol/L四苯基鋅卟啉溶液，其中四苯基鋅卟啉的粉末為溶質(zhì)，N，N-ニ甲基甲酰胺為溶剤；
步驟4 :將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液及pH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖液均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液，其中植物酷酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液和PH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :0. 5 2 :48. 5 47 ;
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線；
步驟6 :將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液和pH值為
6.5 7. 25的磷酸鹽緩沖液均勻混合，再加入待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰 胺清洗液，攪拌均勻混合后得到樣品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，PH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液的體積比為I :0. 5 2 42 43. 5 5 ；
步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線；
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線進(jìn)行比較，如果兩個(gè)光譜曲線完全相同，則待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的檢測(cè)限；如果兩個(gè)光譜曲線不同，則待檢測(cè)樣品中含有克百威。作為上述技術(shù)方案的優(yōu)化，步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為70 μ mol/L ；步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液pH值為6. 5，制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :2 47 ;步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液的體積比為I :2 42 :5。由于加入的磷酸鹽緩沖液PH值為6. 5，此時(shí)植物酯酶的活力最高，因此檢測(cè)的靈敏度會(huì)提高。步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為90 μ mol/L ;步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液PH值為7. 0，制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和PH值為7. O的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :1. 5 47. 5 ;步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，PH值為7. O的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液的體積比為I :1. 5 42. 5 :5。由于四苯基鋅卟啉的濃度提高，紫外分光光度計(jì)在步驟5和步驟7兩次檢測(cè)得到的光譜曲線的峰值變大，從而相放大了檢測(cè)信號(hào)，檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性提高，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。更進(jìn)一歩地，上述檢測(cè)方法適用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜、水果和食品中克百威殘留量的檢測(cè)。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)
I、本發(fā)明中使用的植物酯酶來(lái)源廣泛，價(jià)格便宜，價(jià)格稍高的四苯基鋅卟啉溶液用量 非常少，從而大大降低了檢測(cè)成本。2、采用本發(fā)明對(duì)克百威殘留量進(jìn)行檢測(cè)，最低檢測(cè)限可達(dá)lppt，因此可以對(duì)微痕
量
的克百威進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)精度尚。
3、本發(fā)明市售的紫外分光光度計(jì)進(jìn)行吸收光譜的檢測(cè)，紫外分光光度計(jì)操作簡(jiǎn)單，對(duì)
操作人員的技能要求低，而且其相比同類的檢測(cè)儀價(jià)格更低，因此該檢測(cè)方法在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)的地區(qū)也可適用。4、本發(fā)明檢測(cè)方法以液體化植物酯酶酶液、四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6. 5
7.25 的磷酸鹽緩沖液制得的復(fù)合溶液作為檢測(cè)原件，檢測(cè)時(shí)只需要準(zhǔn)備待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液即可，檢測(cè)時(shí)需準(zhǔn)備的藥品和儀器較少，因此該檢測(cè)方法可適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，更便于推廣。5、本發(fā)明檢測(cè)方法檢測(cè)速度快，用本發(fā)明方法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將待測(cè)樣品的N，N
甲基甲酰胺清洗液加入到植物酯酶酶液、四苯基鋅卟啉溶液和PH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖液中，待測(cè)樣品的N，N ニ甲基甲酰胺清洗液可在幾分鐘內(nèi)完成反應(yīng)，因此檢測(cè)效率高，對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)實(shí)時(shí)檢測(cè)非常適用。6、本發(fā)明檢測(cè)方法所使用的植物酯酶，經(jīng)過雙水相體系純化，植物酯酶酶液的純度非
常高，因此該檢測(cè)結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性較高。7、本發(fā)明檢測(cè)方法具有廣泛的應(yīng)用，其可應(yīng)用于對(duì)甘蔗、大豆和水稻等農(nóng)作物中
克百
威含量的檢測(cè)，根據(jù)該檢測(cè)方法的特性，還可應(yīng)用于對(duì)蔬菜、水果和食品等易含克百威殘留的物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，還可用于食品安全評(píng)估和環(huán)境檢測(cè)。


圖I 為實(shí)施例I的方法檢測(cè)甘蔗表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。圖2 為實(shí)施例2的方法檢測(cè)甘蔗表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。圖3 為實(shí)施例3的方法檢測(cè)甘蔗表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。圖4 為實(shí)施例4的方法檢測(cè)甘蔗表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。圖5 為實(shí)施例5的方法檢測(cè)水稻表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。圖6 為實(shí)施例I的方法檢測(cè)大豆表面N，N ニ甲基甲酰胺清洗液所得的光譜圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明。本發(fā)明中27%PEG1000/13% NaH2PO4體系是指磷酸二氫鈉水溶液和分子量為1000的聚乙二醇水溶液的混合溶液，其中磷酸二氫鈉與分子量為1000聚乙二醇的質(zhì)量份數(shù)比為13 :27，該混合溶液靜置過夜后會(huì)分成上下兩層，該兩層分別為磷酸二氫鈉相和分子量為1000聚乙二醇相。27%PEG1000/13% NaH2P046%(NH4)2SO4 體系是指磷酸二氫鈉水溶液、分子量為1000聚乙二醇水溶液和硫酸銨水溶液的混合溶液，其中磷酸二氫鈉、分子量為1000聚乙二醇和硫酸銨的質(zhì)量份數(shù)比為27 1313 27:6，該混合溶液靜置過夜后會(huì)分成上下兩層，該兩層分別為磷酸二氫鈉與硫酸銨組成的無(wú)機(jī)鹽相、分子量為1000聚乙二醇相。實(shí)施例I :結(jié)合附圖1，一種檢測(cè)微痕量克百威的方法，本實(shí)施例中待測(cè)樣品為甘蔗，具體檢測(cè)步驟如下
步驟I :以市面銷售的面粉為原料，面粉和蒸餾水以1:5的重量比進(jìn)行混合得到面糊，對(duì)該面糊進(jìn)行攪拌使面粉與水均勻混合，然后將該面糊在4000r/min的離心速度之下離心lOmin，收集上清液，即得粗酶；
步驟2 -M ImL步驟I中的粗酶H將該粗酶加入到27%PEG1000/13% NaH2PO4體系中，攪拌混合均勻，靜分相后，取出PEG相，將取出的PEG相加入到27%PEG1000/13% NaH2PO4/6% (NH4) 2S04 體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，對(duì)由磷酸二氫鈉與硫酸銨組成的無(wú)機(jī)鹽相進(jìn)行透析、濃縮和冷凍干燥，得到純化后的植物酯酶粉末，然后再將該植物酯酶粉末用蒸餾水溶解，制得植物酯酶酶液；
步驟3 :配制濃度為70 165 μ mol/L四苯基鋅卟啉溶液，其中四苯基鋅卟啉的粉末為溶質(zhì)，N，N-二甲基甲酰胺為溶劑；
步驟4 :取步驟2制備的植物酯酶酶液O. lmL、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 75 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取步驟2制備的植物酯酶酶液O. lmL、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 25mL均勻混合，再加入O. 5mL的甘蔗表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液；
步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2);
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明甘蔗表面含有克百威。我們還可以通過差譜曲線(3)計(jì)算出甘蔗表面克百威的含量，根據(jù)差譜曲線(3)的吸光度與噴灑的克百威的濃度建立線性回歸方程如式(a )
y= (-9. 1408X 10_4) X+0. 0868(a)
其中y表示甘蔗表面克百威的含量，X表示吸光度值，計(jì)算得甘蔗表面含有Ippt的克百威殘留。實(shí)施例2 :結(jié)合附圖2，本實(shí)施例中的步驟I、步驟2與實(shí)施例I中的步驟I、步驟2相同，步驟3-8具體如下
步驟3 :四苯基鋅卟啉溶液的濃度為70 μ mol/L ；
步驟4 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 05 mL及pH值為6. 9的磷酸鹽緩沖液4. 7 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 05 mL及pH值為6. 9的磷酸鹽緩沖液4. 7mL均勻混合，再加入O. 5mL的甘蔗表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液； 步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2)；
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明甘蔗表面含有克百威。實(shí)施例3 :結(jié)合附圖3，本實(shí)施例中的步驟I、步驟2與實(shí)施例I中的步驟I、步驟2相同，步驟3-8具體如下
步驟3 :四苯基鋅卟啉溶液的濃度為90 μ mol/L ；
步驟4 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. I mL及pH值為7. O的磷酸鹽緩沖液4. 81 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. I mL及pH值為7. O的磷酸鹽緩沖液4. 8ImL均勻混合，再加入O. 5mL的甘蔗表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液；
步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2)；
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明甘蔗表面含有克百威。實(shí)施例4 結(jié)合附圖4，本實(shí)施例中的步驟I、步驟2與實(shí)施例I中的步驟I、步驟2相同，步驟3-8具體如下
步驟3 :四苯基鋅卟啉溶液的濃度為140 μ mol/L ；
步驟4 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 2 mL及pH值為7. 25的磷酸鹽緩沖液4. 85 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 2 mL及pH值為7. O的磷酸鹽緩沖液4. 85mL均勻混合，再加入O. 5mL的甘蔗表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液；步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2)；
步驟8:對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明甘蔗
表面含有克百威。實(shí)施例1-4中采用了來(lái)自同一塊地的甘蔗作為待檢測(cè)樣品，通過最終的檢測(cè)結(jié)果可以看出，四個(gè)實(shí)施例檢測(cè)的結(jié)果一致即甘蔗表面中含有克百威，由此推出，本發(fā)明檢測(cè)方法檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性很高 。實(shí)施例5 :結(jié)合附圖5，本實(shí)施例中樣品采用水稻，其檢測(cè)方法中步驟I、步驟2與實(shí)施例I中的步驟I、步驟2相同，步驟3-8具體如下
步驟3 :四苯基鋅卟啉溶液的濃度為165 μ mol/L ；
步驟4 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 75 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 25mL均勻混合，再加入O. 5mL的水稻表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液；
步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2);
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明水稻表面含有克百威。根據(jù)實(shí)施例I提到的我們還可以通過差譜曲線(3)計(jì)算出水稻表面克百威的含量，根據(jù)差譜曲線(3)的吸光度與噴灑的克百威的濃度建立線性回歸方程，最終得到水稻表面含有IOppt的克百威。實(shí)施例6 :結(jié)合附圖6，本實(shí)施例中樣品采用大豆，其檢測(cè)方法中步驟I、步驟2與實(shí)施例I中的步驟I、步驟2相同，步驟3-8具體如下
步驟3 :四苯基鋅卟啉溶液的濃度為165 μ mol/L ；
步驟4 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 75 mL均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液；
步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(I)；
步驟6 :取植物酯酶酶液O. lmL、四苯基鋅卟啉溶液O. 15 mL及pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液4. 25mL均勻混合，再加入O. 5mL的大豆表面N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌使均勻混合得到樣品混合溶液；
步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線即曲線(2)；
步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線(I)與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線(2)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)吸收光譜曲線不同，同時(shí)得到了兩個(gè)吸收光譜曲線的差譜曲線(3)，因此說明大豆
表面含有克百威。根據(jù)實(shí)施例I提到的我們還可以通過差譜曲線(3)計(jì)算出大豆表面克百威的含量，根據(jù)差譜曲線(3)的吸光度與噴灑的克百威的濃度建立線性回歸方程，最終得到大豆表面含有5ppt的克百威。`結(jié)合上述實(shí)施例和附圖，本發(fā)明檢測(cè)方法操作方法極其簡(jiǎn)單，檢測(cè)結(jié)果的重現(xiàn)性和一致性高，而且本發(fā)明檢測(cè)方法應(yīng)用非常廣泛可適用于甘蔗、水稻和大豆等農(nóng)作物，還可推廣到蔬菜、水果、食品等領(lǐng)域中克百威含量殘留的微痕量進(jìn)行檢測(cè)。最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)微痕量克百威的方法，其特征在于具體步驟如下， 步驟I :將面粉和蒸餾水以1:5的重量比進(jìn)行混合得到面糊，對(duì)該面糊進(jìn)行攪拌使面粉與水均勻混合,然后將所述面糊在4000r/min的離心速度之下離心IOmin,收集上清液，即得粗酶； 步驟2 :取ImL步驟I中的粗酶，將該粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH2P04體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，取出PEG相，將取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH2P04/6%(NH4)2S04體系中，攪拌混合均勻，靜置分相后，對(duì)由磷酸二氫鈉與硫酸銨組成的無(wú)機(jī)鹽相進(jìn)行透析、濃縮和冷凍干燥，得到純化后的植物酯酶粉末，然后再將該植物酯酶粉末用蒸餾水溶解得到植物酯酶酶液； 步驟3 :配制濃度為70 165 μ mol/L四苯基鋅卟啉溶液，其中四苯基鋅卟啉的粉末為溶質(zhì)，N，N-二甲基甲酰胺為溶劑； 步驟4 :將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液及pH值為6.5 7. 25的磷酸鹽緩沖液均勻混合得到四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液和PH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :0. 5 2 :48. 5 47 ; 步驟5 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟4中制得的四苯基鋅卟啉 植物酯酶復(fù)合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線； 步驟6 :將步驟2制備的植物酯酶酶液、步驟3制備的四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5 7. 25的磷酸鹽緩沖液均勻混合，再加入待測(cè)樣品N，N 二甲基甲酰胺清洗液，攪拌均勻混合后得到樣品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，PH值為6. 5 7. 25的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N 二甲基甲酰胺清洗液的體積比為I :0. 5 2 42 43. 5 5 ； 步驟7 :使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)步驟6中制得樣品混合溶液對(duì)波長(zhǎng)300nm 750nm的光波的吸收光譜曲線； 步驟8 :對(duì)步驟5測(cè)得的吸收光譜曲線與步驟7測(cè)得的吸收光譜曲線進(jìn)行比較，如果兩個(gè)光譜曲線完全相同，則待測(cè)樣品的N，N 二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的檢測(cè)限；如果兩個(gè)光譜曲線不同，則待檢測(cè)樣品中含有克百威。
2.如權(quán)利要求I所述的克百威殘留量的檢測(cè)方法，其特征在于步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為70 μ mol/L ;步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液pH值為6. 5，制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :2 47 ;步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，PH值為6. 5的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N 二甲基甲酰胺清洗液的體積比為 I :2 42 :5。
3.如權(quán)利要求I所述的克百威殘留量的檢測(cè)方法，其特征在于步驟3中制得四苯基鋅卟啉溶液的濃度為90 μ mol/L ;步驟4中加入的磷酸鹽緩沖液pH值為7. O,制得的四苯基鋅卟啉-植物酯酶復(fù)合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉的溶液和PH值為7. O的磷酸鹽緩沖液的體積比為I :1. 5 47. 5 ;步驟6中，制得的樣品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基鋅卟啉溶液，pH值為7. O的磷酸鹽緩沖溶液和待測(cè)樣品的N，N 二甲基甲酰胺清洗液的體積比為 I :1. 5 42. 5 :5。
4.如權(quán)利要求I所述的克百威殘留量的檢測(cè)方法，其特征在于所述檢測(cè)方法適用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜、水果和食品中克百威殘留量的檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)農(nóng)藥的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及氨基甲酸酯類農(nóng)藥中克百威檢測(cè)方法，具體涉及一種檢測(cè)微痕量克百威的方法；該方法以面粉、四苯基鋅卟啉溶液和pH值為6.5～7.25的磷酸鹽緩沖液為原料，分別制備出四苯基鋅卟啉～植物酯酶復(fù)合溶液和樣品混合溶液，然后分別檢測(cè)它們對(duì)波長(zhǎng)300nm～750nm的光波的吸收光譜曲線，然后對(duì)檢測(cè)到的兩條光譜曲線進(jìn)行對(duì)比，如果兩個(gè)光譜曲線完全相同，則待測(cè)樣品N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的檢測(cè)限；如果兩個(gè)光譜曲線不同，則待檢測(cè)樣品中含有克百威；本方法檢測(cè)成本低，使用的地區(qū)廣，檢測(cè)結(jié)果的精確度、重復(fù)性和穩(wěn)定性高，還可以進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單，且環(huán)境對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響較小。
文檔編號(hào)G01N1/34GK102841067SQ20121034600
公開日2012年12月26日 申請(qǐng)日期2012年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月18日
發(fā)明者侯長(zhǎng)軍, 沈才洪, 何昆, 張良, 霍丹群, 張宿義, 彭云, 江勇 申請(qǐng)人:瀘州品創(chuàng)科技有限公司, 重慶大學(xué)