專(zhuān)利名稱(chēng)：一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法
一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種紅花逍遙片的指紋圖譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
紅花逍遙片由當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓、紅花、皂角刺、竹葉柴胡、薄荷、甘草九味藥組成，功能主治為舒肝、理氣、活血，用于肝氣不舒，胸脅脹痛，頭暈?zāi)垦?，食欲減退，月經(jīng)不調(diào)，乳房脹痛或伴見(jiàn)顏面黃褐斑。
由于中藥具有成分復(fù)雜多變、活性成分多、藥效成分和毒性成分不甚明確等特點(diǎn)， 紅花逍遙片做為中成藥，其藥效不是來(lái)自任何單一的活性成分，其藥效作用基本上是多種活性成分共同協(xié)作的結(jié)果。然而，目前對(duì)紅花逍遙片的研究?jī)H針對(duì)處方中當(dāng)歸、白芍、甘草、 竹葉柴胡、薄荷的薄層鑒別方法和白芍的高效液相色譜含量測(cè)定。顯然，對(duì)于紅花逍遙片這樣一個(gè)由9味中藥組成的復(fù)方制劑，其質(zhì)量控制檢測(cè)方法過(guò)于簡(jiǎn)單，不能較準(zhǔn)確全面所映產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，也無(wú)法用于生產(chǎn)過(guò)程中、以及產(chǎn)品質(zhì)量的有效控制。
中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段， 得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖。采用中藥指紋圖譜方式，一方面可以通過(guò)指紋圖譜的特征性，有效的鑒別樣品的真?zhèn)魏彤a(chǎn)地；另一方面通過(guò)對(duì)主要指紋圖譜特征峰的面積或比例的控制，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定一致，從而保證產(chǎn)品安全有效。 因此建立紅花逍遙片的指紋圖譜勢(shì)在必行，建立一種能全面檢測(cè)紅花逍遙片中有效成分的質(zhì)量檢測(cè)方法具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上面所述紅花逍遙片的質(zhì)量控制現(xiàn)狀，提供一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法提供一種基于高效液相色譜法的紅花肖遙片的指紋圖譜檢測(cè)方法，可行到紅花逍遙片的HPLC (高效液相色譜)指紋圖譜，可有效控制紅花逍遙片的質(zhì)量及保證其臨床療效。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。
一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟(1)對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液的制備取紅花逍遙片制劑粉末，置錐形瓶中，加入甲醇，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；(3)色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為4. 6_Χ250_，5μπι;流動(dòng)相Α為乙腈，B為O. 1%磷酸水溶液；采用梯度洗脫，洗脫程序如下O分鐘時(shí),9%流動(dòng)相A、91%流動(dòng)相B ；5分鐘時(shí)，12%流動(dòng)相A、88%流動(dòng)相B ；25分鐘時(shí)，12%流動(dòng)相A、88%流動(dòng)相B ；30分鐘時(shí)，15%流動(dòng)相A、85%流動(dòng)相B ；65分鐘時(shí)，45%流動(dòng)相A、55%流動(dòng)相B ；85分鐘時(shí)，45%流動(dòng)相A、55%流動(dòng)相B ；流速1. OmL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)230nm ;柱溫25°C ；(4)以芍藥苷為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各8批，每批10 μ L，分別注入高效液相色譜儀中， 按高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，依據(jù)所得的8批對(duì)照品的指紋圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖所述紅花逍遙片的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，各共有峰以芍藥苷為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積；(5)指紋圖譜的質(zhì)量控制將紅花逍遙片的供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，計(jì)算相似度， 識(shí)別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，確定相似度。
所述步驟(2)中超聲處理時(shí)間為25 35min。
所述步驟(2)中微孔濾膜的孔徑為O. 45 μ m。
所述步驟(4)中相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算公式為相對(duì)保留時(shí)間=其它各組分峰的保留時(shí)間/參照峰的保留時(shí)間。
相對(duì)峰面積的計(jì)算公式為相對(duì)峰面積=其它各組分峰的峰面積/參照峰的峰面積。
所述參照峰為芍藥苷峰。
步驟(4)中所述相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積分別為相對(duì)保留時(shí)間1 (O. 192 O. 193),2 (O. 579 O. 591),3 (O. 795),4 (I. 000),5 (I. 317 I. 324)，6 (I. 590 I. 602)，7 (I. 701 I. 711)，8 (I. 777 I. 793)，9 (I. 807 I.822)，10(1. 992 2. 014)；相對(duì)峰面積1 (O. 6296 O. 7345)，2 (O. 8666 I. 1740)，3 (O. 7374 O. 8077)，4 (I. 000),5 (O. 2065 O. 2473),6 (O. 0378 O. 0440), 7 (O. 0485 O. 0514),8 (O. 0532 O.0600,9(0. 0314 O. 0501)，10(0. 0614 O. 0706)；步驟(5)中所述確定相似度是指將紅花逍遙片的供試品溶液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比對(duì)，其相似度應(yīng)為O. 90 I. 00。
本發(fā)明所述指紋圖譜的質(zhì)量控制，運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)制定的《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》(2004)，經(jīng)過(guò)多點(diǎn)校正，色譜峰的匹配，計(jì)算供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度；指紋圖譜相似度計(jì)算參數(shù)設(shè)置為時(shí)間寬度為O. 2秒；校正方式采用多點(diǎn)校正，校正色譜峰的匹配點(diǎn)為共有峰，峰1(0. 192 O. 193)，峰2 (O. 579 O. 591)， 峰 3 (O. 795)，峰 4 (I. 000)，峰 10 (I. 992 2. 014)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是a.本發(fā)明采用高效液相建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，通過(guò)指紋圖譜得到量化參數(shù)，更有效的控制制劑的質(zhì)量。b.本發(fā)明采用高效液相色譜指紋圖譜，以芍藥藥材中的有效成分(芍藥苷)特征為主的指紋圖譜來(lái)全面控制紅花逍遙片的質(zhì)量，更加完善了制劑的質(zhì)量控制。c.通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明質(zhì)量控制方法對(duì)紅花逍遙片的質(zhì)量控制更為有效，方法精密度較高、穩(wěn)定性、重復(fù)性均良好。能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠，藥性和療效基本一致，從而保證產(chǎn)品的安全有效。


圖I為本發(fā)明所述以芍藥苷為參照制得的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
圖2為本發(fā)明所述紅花逍遙片制得的8批樣品指紋圖譜。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例I :紅花逍遙片標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜建立。
(I)儀器及試劑高效液相色譜儀島津LC - IOATvp高效液相色譜儀(SH) — MlOAvp檢測(cè)器，CLASS-VP軟件)；數(shù)控超聲波清洗器KQ_250DB型，昆山市超聲儀器有限公司；十萬(wàn)分之一天平島津AUW220 ;萬(wàn)分之一天平AB104 — N型，梅特勒一托利多； Millipore超純水儀。
乙腈山東禹王實(shí)驗(yàn)有限公司化工分公司；甲醇上海振興化工一廠；磷酸(優(yōu)級(jí)純)天津精細(xì)化學(xué)品開(kāi)發(fā)有限公司；超純水。
芍藥苷對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所；紅花逍遙片江西普正制藥有限公司。
( 2 )對(duì)照品溶液的制備。
取芍藥苷約23mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，精密吸取 2mL，置25mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻即得。
( 3 )供試品溶液的制備。
取本品20片，除去薄膜衣，研細(xì)，取約O. 35g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理25min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(O. 45 μ m)濾過(guò)，即得。
(4)色譜條件。
色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6 mmX 250 mm，5 μ m);流動(dòng)相A 為乙腈，B為O. 1%磷酸水溶液，梯度洗脫(見(jiàn)表I);進(jìn)樣量10μ L ;檢測(cè)波長(zhǎng)230nm ;流速 I. OmL/min ;柱溫25°C。
表I液相系統(tǒng)洗脫程序。
權(quán)利要求
1.一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟(1)對(duì)照品溶液的制備取芍藥苷對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液的制備取紅花逍遙片制劑粉末，置錐形瓶中，加甲醇，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，濾液作為供試品溶液；(3)色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為4. 6_Χ250_，5μπι;流動(dòng)相Α為乙腈，B為O. 1%磷酸水溶液；采用梯度洗脫，洗脫程序如下O分鐘時(shí),9%流動(dòng)相Α、91%流動(dòng)相B ；5分鐘時(shí)，12%流動(dòng)相Α、88%流動(dòng)相B ；25分鐘時(shí)，12%流動(dòng)相Α、88%流動(dòng)相B ；30分鐘時(shí)，15%流動(dòng)相Α、85%流動(dòng)相B ；65分鐘時(shí)，45%流動(dòng)相Α、55%流動(dòng)相B ；85分鐘時(shí)，45%流動(dòng)相Α、55%流動(dòng)相B ；流速1. OmL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng)230nm ;柱溫25°C ；(4)以芍藥苷為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各8批，每批10 μ L，分別注入高效液相色譜儀中， 按高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，依據(jù)所得的8批對(duì)照品的指紋圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖所述紅花逍遙片的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，各共有峰以芍藥苷為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積；(5)指紋圖譜的質(zhì)量控制將紅花逍遙片的供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，計(jì)算相似度， 識(shí)別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，確定相似度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟(2) 中超聲處理時(shí)間為25-35min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟(2) 中微孔濾膜的孔徑為O. 45 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟(4) 中相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算公式為相對(duì)保留時(shí)間=其它各組分峰的保留時(shí)間/參照峰的保留時(shí)間；相對(duì)峰面積的計(jì)算公式為相對(duì)峰面積=其它各組分峰的峰面積/參照峰的峰面積；所述參照峰為茍藥苷峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于步驟(4)中所述相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積分別為相對(duì)保留時(shí)間1 (O. 192 O. 193),2 (O. 579 O. 591),3 (O. 795),4 (I. 000),5(I. 317 I. 324)，6 (I. 590 I. 602)，7 (I. 701 I. 711)，8 (I. 777 I. 793)，9 (I. 807 I.822)，10(1. 992 2. 014)；相對(duì)峰面積1 (O. 6296 O. 7345)，2 (O. 8666 I. 1740)，3 (O. 7374 O. 8077)，4 (I. 000),5 (O. 2065 O. 2473),6 (O. 0378 O. 0440), 7 (O. 0485 O. 0514),8 (O. 0532 O. 0600,9(0. 0314 O. 0501)，10(0. 0614 O. 0706)。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于步驟(5)中所述確定相似度是指將紅花逍遙片的供試品溶液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比對(duì)，其相似度應(yīng)為O.90 I. 00。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述指紋圖譜的質(zhì)量控制，運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)制定的《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》(2004)，經(jīng)過(guò)多點(diǎn)校正，色譜峰的匹配，計(jì)算供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度；指紋圖譜相似度計(jì)算參數(shù)設(shè)置為時(shí)間寬度為O. 2秒；校正方式采用多點(diǎn)校正，校正色譜峰的匹配點(diǎn)為共有峰，峰 I (O. 192 O. 193)，峰 2 (O. 579 O. 591)，峰 3 (O. 795)，峰 4 (1.000)， 峰 10(1. 992 2. 014)。
全文摘要
一種紅花逍遙片的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于藥物質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。包括如下步驟對(duì)照品溶液的制備、供試品溶液的制備、色譜條件、以芍藥苷為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定、指紋圖譜的質(zhì)量控制。本發(fā)明采用高效液相建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，通過(guò)指紋圖譜得到量化參數(shù)，更有效的控制制劑的質(zhì)量，精密度較高、穩(wěn)定性、重復(fù)性均良好。
文檔編號(hào)G01N30/88GK102944634SQ20121012425
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2012年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月26日
發(fā)明者肖軍平, 饒毅, 吳永忠, 余寶平, 鄒貴陽(yáng) 申請(qǐng)人:江西普正制藥有限公司