評估抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)風(fēng)險的方法
【專利摘要】一種預(yù)測患者發(fā)生苯妥英引發(fā)之不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，包括：史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)，毒性表皮溶解癥(TEN)，或藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀（DRESS）。CYP2C基因的基因多型性(包括CYP2C9，CYP2C19，CYP2C8及CYP2C18)，HLA基因型(包括HLA-A*0207，HLA-A*2402，HLA-B*1301，HLA-B*1502，HLA-B*4001，HLA-B*4609，HLA-B*5101，HLA-DRB1*1001及HLA-DRB1*1502)，以及患者血漿中的苯妥英濃度都可能造成苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)。
【專利說明】評估抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)風(fēng)險的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種用于預(yù)測患者對于藥物不良反應(yīng)的風(fēng)險之方法，尤指抗癲癇藥物苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)的風(fēng)險評估。
【背景技術(shù)】
[0002]藥物不良反應(yīng)(簡稱ADRs)是指在正常劑量下使用藥物而引起傷害之表現(xiàn)。藥物過敏反應(yīng)是一種在用藥治療中常見的不良反應(yīng)且約占通報藥物不良反應(yīng)案件的20%。這些過敏反應(yīng)可能從輕微的皮膚起紅疹(MPE)到造成生命威脅的藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀(DRESS)，史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)和毒性表皮壞死溶解癥(TEN)。
[0003]許多芳香環(huán)類抗癲癇藥物(AEDs)，如苯妥英，卡馬西平或拉莫三嗪經(jīng)常與過敏反應(yīng)有關(guān)。特別是，苯妥英是第一線芳香環(huán)類抗癲癇用藥，然而，超過19%使用苯妥英治療的病人會發(fā)生過敏反應(yīng)。先前文獻(xiàn)指出微胞體環(huán)氧化物水解酶缺失及人類白血球組織抗原基因型(HLA)可能與芳香環(huán)類抗癲癇藥物引起的過敏反應(yīng)有關(guān)聯(lián)。然而，藥物代謝/遺傳基因易感性和苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)之間的關(guān)系仍尚未明了。
[0004]因此，仍然需要一種新穎并改進(jìn)的方法用來預(yù)測苯妥英引發(fā)藥物過敏反應(yīng)的風(fēng)險，其中該風(fēng)險可以通過評估包括CYP2C9的基因多型性，苯妥英血中濃度和HLA基因型等因素進(jìn)行預(yù)估。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，特別是史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)，毒性表皮壞死溶解癥(TEN)及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀(DRESS)等嚴(yán)重型皮膚不良反`應(yīng)。針對58位苯妥英引發(fā)嚴(yán)重型皮膚不良反應(yīng)(SCARs)病患，包括史帝文生強(qiáng)生癥候群，毒性表皮溶解癥及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀及198位對照組進(jìn)行全基因掃貓(Affymetrix6.0)。在一實(shí)施例中，評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險的方法包括檢測10號染色體上CYP2Cs區(qū)域的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)的步驟，如CYP2C18 上的 rsl7110192, rs7896133 ；CYP2C9 上的 rsl057910 (CYP2C9*3)，rsl7110321,rs9332093, rs9332245 ；CYP2C19 基因上的 rs3758581, rs2860905, rs4086116 及 CYP2C8 上的 rs7899038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967。
[0006]另一實(shí)施例中，評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之不良反應(yīng)風(fēng)險的方法包含了偵測結(jié)合 rsl057910 (CYP2C9*3)， rs3758581, rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037 (尤其是rsl7110192，rsl057910和rs3758581)之單倍型的步驟，此單倍型會增加統(tǒng)計學(xué)上的顯著相關(guān)性當(dāng)苯妥英引發(fā)之史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀病患與苯妥英耐受性對照組相比較時。沒有苯妥英耐受性個體帶有結(jié)合的 rsl057910 (CYP2C9*3)， rs3758581, rsl7110192, rs9332245 或 rsl592037 (尤其是rsl057910和rs3758581，0/95)，然而，近三分之一的苯妥英過敏患者帶有此組合(30/96)。這些SNPs中有一些會造成胺基酸序列改變，例如CYP2C19exon7上造成錯義改變的rs3758581顯著與苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀相關(guān)，進(jìn)一步更發(fā)現(xiàn)CYP2C9*3與苯妥英引發(fā)之史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀有顯著相關(guān)性。
[0007]在又一實(shí)施例中，本發(fā)明提供評估病患發(fā)生苯妥英引發(fā)之過敏反應(yīng)風(fēng)險的方法，包括利用候選基因(CYP2Cs和HLA)檢測152位苯妥英藥物過敏病患，包含53例苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥，24例苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀和75例苯妥英-皮膚紅疹，以及118位耐受性對照組病人為服用苯妥英超過3個月，但沒有任何不良反應(yīng)。結(jié)果顯示高達(dá)30.2%的苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥病患及37.5%的苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀病患帶有CYP2C9*3基因型，相比之下，14.7%的苯妥英-皮膚紅疹病患及只有2.5%的耐受性對照組病人帶有CYP2C9*3。本發(fā)明也指出CYP2C9以及CYP2C19，CYP2C8和CYP2C18的基因變異型涉及苯妥英低下代謝能力并會增加血漿中的藥物累積進(jìn)而導(dǎo)致過敏反應(yīng)。除了 CYP2CS的基因關(guān)連之外，HLA-A*0207，HLA_A*2402，HLA_B*1301，HLA_B*1502，HLA_B*4001，HLA_B*4609，HLA_B*5101，HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也顯示出與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)有顯著關(guān)系。因此，這些數(shù)據(jù)表明CYP2C9/2C19/2C8/2C18的基因多型性或其缺陷之等位基因，苯妥英血中濃度和特定之HLA基因型都有助于苯妥英引發(fā)嚴(yán)重皮膚藥物不良反應(yīng)。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0008]圖1說明苯妥英引發(fā)嚴(yán)重皮膚藥物不良反應(yīng)(SCARs)的全基因組關(guān)聯(lián)研究，其中每個點(diǎn)代表一個SNP。X軸表示的SNP在染色體上的位置，y軸表示SNP在病患-對照關(guān)聯(lián)研究的-1oglO的顯著性差異。此研究包含58例苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀及198例一般人控制組。顯著性差異〈10-6的SNP以紅色突顯。強(qiáng)度信號座落于在10號染色體上的CYP2C區(qū)域。
[0009]圖2顯示苯妥英藥物不良反應(yīng)病患及耐受性控制組的苯妥英血中濃度。苯妥英的正常治療濃度通常介于10-20微克/毫升，耐受性控制組的苯妥英血中濃度介于5-15微克/毫升。然而，苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥患者的苯妥英血中濃度介于40-50微克/毫升，高于耐受性控制組。
【具體實(shí)施方式】
[0010]以下詳細(xì)描述的目的在于作為一個根據(jù)本發(fā)明的各方面提供了現(xiàn)前的示例性描述，而不是旨在表示本發(fā)明可以制備或利用的唯一形式。而可被理解的是，能在不同實(shí)施例中被實(shí)施的相同或等同之功能及要素也包括在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。
[0011]除非另有定義，在本文中所使用的所有技術(shù)性和科學(xué)性術(shù)語對于本發(fā)明所屬領(lǐng)域的任一普通技術(shù)人員都具有通常理解的相同含義。雖然任何類似或等同于本發(fā)明所述的方法、裝置和材料都能在本發(fā)明的實(shí)踐或試驗(yàn)中使用，現(xiàn)在開始描述該示例性方法、裝置和材料。
[0012]所有提及的發(fā)表文獻(xiàn)都被并入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)并目的在于描述和揭露，舉例來說，在發(fā)表文獻(xiàn)描述過的設(shè)計和方法可能被用來和本發(fā)明連結(jié)。本文上下及全文中所列出或討論的發(fā)表文獻(xiàn)僅在提供其在本發(fā)明申請日之前的發(fā)現(xiàn)，不應(yīng)被解釋為承認(rèn)本發(fā)明人沒有資格由于先前發(fā)明早于這些公開內(nèi)容。
[0013]史蒂文生癥候群(SJS)和毒性表皮壞死溶解癥(TEN)的診斷是依照具共識性標(biāo)準(zhǔn)的臨床癥狀來定義(Bastuj1-Garin S，Rzany B等人，1993)。史帝文生強(qiáng)生癥候群被定義為皮膚剝離面積小于體表面積的10%，重迭史帝文生強(qiáng)生癥候群_毒性表皮溶解癥為皮膚剝離介于10-29%，毒性表皮溶解癥為大于等于30%。藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀(DRESS)的診斷標(biāo)準(zhǔn)為皮疹(如彌漫性斑丘疹、剝脫性皮炎)伴隨嗜酸粒細(xì)胞增多、非典型淋巴細(xì)胞循環(huán)，急性肝細(xì)胞損傷或腎功能惡化等癥狀(Kardaun SH, Sidoroff A等人,2007)。符合由苯妥英引發(fā)史帝文生強(qiáng)生癥候群、毒性表皮溶解癥或藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀診斷標(biāo)準(zhǔn)之患者將經(jīng)長庚紀(jì)念醫(yī)院體系鑒定并選入本研究。
[0014]本發(fā)明發(fā)現(xiàn)特定CYP2C基因變異型，包括CYP2C9，CYP2C19, CYP2C8和CYP2C18涉及苯妥英的低代謝活性并與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)有關(guān)。除了 CYP2C變異型，HLA-A*0207，HLA-A*2402， HLA_B*1301， HLA_B*1502， HLA_B*4001， HLA_B*4609， HLA_B*5101，HLA-DRB1*1001或HLA-DRB1*1502也被發(fā)現(xiàn)與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)或皮膚藥物不良反應(yīng)有
顯著關(guān)聯(lián)。
[0015]因此，本發(fā)明提供一種評估苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)風(fēng)險的方法，系檢測染色體10號上CYP2C區(qū)域的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)之存在，包括CYP2C9，CYP2C19，CYP2C8和CYP2C18。透過58位苯妥英引發(fā)嚴(yán)重型皮膚藥物不良反應(yīng)患者(包括史帝文生強(qiáng)生癥候群、毒性表皮溶解癥及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀)和198位一般人對照組進(jìn)行全基因掃瞄(AffymetriX6.0)，發(fā)現(xiàn)最有顯著相關(guān)的單點(diǎn)核苷酸變異(SNP)大部分皆都位于10號染色體上的 CYP2C 區(qū)域(見圖1),例如 CYP2C18 上的 rsl7110192, rs7896133 ；CYP2C9 上的rsl7110321, rs9332093, rs9332245 ；CYP2C19 上的 rs3758581, rs2860905, rs4086116 ；和 CYP2C8 上的 rs789 9038, rsl592037, rsl934952, rsll572139, rs6583967 (見表 I)。其他位于 CYP2C 區(qū)域附近之 SNP 如 rs2274222, rslll88183, rs7921561, rsl0882544,rs7084271,rs644437,rsl2769577,rs617848,rsl0882551,rs585381,rs648638,rs664093,rsl2262878,rsl7524438,rsl2413028,rslll88246,rsl2415795, rsll596107, rsll596737,rsl0509685, rs7912686, rsl7453729, rsl7453764, rsl7526000 及 rsl2769370 與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)亦有顯著之關(guān)聯(lián)(見表1)。
[0016]先前研究指出CYP2C9*3會增加苯妥英引發(fā)皮膚紅疹(MPE)之風(fēng)險(Lee AY等人，2004)。在一實(shí)施例中，CYP2C9*3被用于預(yù)測苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)的風(fēng)險。為試驗(yàn)CYP2C9*3于苯妥英引發(fā)其他類型之藥物不良反應(yīng)(ADRs)的角色，尤其是針對皮膚粘膜起水泡之史帝文生強(qiáng)生癥候群或毒性表皮溶解癥，單點(diǎn)核苷酸變異基因型鑒定(SNPgenotyping)將進(jìn)行于苯妥英藥物不良反應(yīng)患者上。152例苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)之患者加入本研究，其中包括53例苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥，24例苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀和75例苯妥英-皮膚紅疹，以及118位耐受性對照組病人為服用苯妥英超過3個月，但沒有過敏反應(yīng)。結(jié)果顯示53例苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥病患中，有16位帶有CYP2C9*3變異型(30.2%) ;24例苯妥英-藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀病患中，有9位帶有CYP2C9*3變異型(37.5%),75例皮膚紅疹病患中，有11位帶有CYP2C9*3變異型(14.7% )，相較之下此變異型只在2.5%(3/118)耐受性病人中被發(fā)現(xiàn)(見表2)。苯妥英過敏病例和耐受性對照組的統(tǒng)計分析顯示CYP2C9*3與苯妥英引發(fā)的史帝文生癥候群/毒性表皮壞死溶解癥最具顯著相關(guān)(SJS/TENvs.耐受性控制組:顯著性差異=3.3X10_7，優(yōu)勢比=17.5(4.8-63.7))或與藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀有顯著相關(guān)(DRESS vs.耐受性控制組:顯著性差異=6.1 X 10_5，優(yōu)勢比=19.2(4.4-82.7));但只與苯妥英引起的皮膚紅疹微弱相關(guān)(MPE vs.耐受性控制組:顯著性差異=0.004,優(yōu)勢比=6.2(1.6-23.3))。這意味著CYP2C9*3變異型的存在可以被用來鑒定苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)(ADRs)的高風(fēng)險病人，特別是指苯妥英引發(fā)的史帝文生強(qiáng)生癥候群，毒性表皮溶解癥及藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀。
[0017]在另一實(shí)施例中，CYP2C上造成胺基酸改變的SNP也可用于評估苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)的風(fēng)險上。一些CYP2C基因上會造成胺基酸改變的SNP被進(jìn)一步進(jìn)行檢測，如:CYP2C9 上的 371G>A (rsl2414460, Argl24Gln),895A>G (rs72558192, Thr299Ala,又稱為 CYP2C9*16)，1362G>C (Gln454His,又稱為 CYP2C9*19) ;CYP2C19 上的 991A>G(rs3758581, Ile331Val), 395G>A (rs72558184, Argl32Gln,又稱為 CYP2C19*6)，636G>A(rs4986893, Trp212end，又稱為 CYP2C19*3)，681G>A，(rs4244285，造成重組位點(diǎn)突變，又稱 CYP2C19*2)，781C>T (Arg261Trp);及 CYP2C18 上的 204T>A (rs41291550, Tyr68end),370C>T (Argl24Trp),576G>C (Glnl92His),1154C>T (rs2281891, Thr385Met)。 CYP2C 酵素的這些變異可同時影響其活性及其受質(zhì)特異性。舉例來說，CYP2C19eXon7上造成錯義改變的rs3758581與苯妥英-史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀有顯著相關(guān)(SJS/TEN/DRESS vs.耐受性:顯著性差異=0.0003，優(yōu)勢比=7.28(2.3564-22.4912))(見表 I)。
[0018]表1:位于10號染色體CYP2C區(qū)域上與苯妥英引發(fā)史帝文生強(qiáng)生癥候群/毒性表皮溶解癥/藥物疹合并嗜伊紅血癥及全身癥狀有相關(guān)之SNP列表。
【權(quán)利要求】
1.一種評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險(ADRs)的方法，包括以下步驟: 從病人的檢體檢測染色體10號上靠近或位于CYP2C基因的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)之存在 '及 將染色體10號上靠近或位于CYP2C基因的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)存在與苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險結(jié)合，該等風(fēng)險包括:史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)，毒性表皮溶解癥(TEN)，藥物疹合并嗜伊紅血癥和全身癥狀(DRESS)，及皮膚紅疹(MPE)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，其中檢測靠近或位于CYP2C基因的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)存在的步驟，包括檢測CYP2C基因變異型包含CYP2C9, CYP2C8, CYP2C18 及 CYP2C19 上的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，其中在染色體10號上靠近或位于CYP2C基因與苯妥英引發(fā)藥物不良反應(yīng)風(fēng)險增加有關(guān)的單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)存在的步驟，包括結(jié)合至少一個或更多單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)以預(yù)測苯妥英引發(fā)病人過敏反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的步驟。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測染色體10號上靠近或位于CYP2C基因的基因變異存在步驟，包括使用一寡核苷酸與基因變異的核酸碼雜交的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測染色體10號上靠近或位于 CYP2C基因的基因變異存在步驟，包括使用從病人抽出血液中的DNA的 步驟。
6.一種評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險(ADRs)的方法，包括以下步驟: 檢測人類白血球抗原(HLA)等位基因存在，包括:HLA-A，HLA-B，及HLA-DRBl ;及 將HLA等位基因存在與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)風(fēng)險結(jié)合，該等風(fēng)險包括:史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)，毒性表皮溶解癥(TEN)，藥物疹合并嗜伊紅血癥和全身癥狀(DRESS)，及皮膚紅疹(MPE)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測HLA等位基因存在的步驟，包括使用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性寡核苷酸探針法(PCR-SSO)以鑒定 HLA-A，HLA-B，及 HLA-DRBl 基因型。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測(HLA等位基因存在步驟，包括使用一寡核苷酸與等位基因雜交的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測HLA等位基因存在步驟，包括使用從病人抽出血液中的DNA的步驟。
10.一種評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險(ADRs)的方法，包括以下步驟: 檢測病人血漿中的苯妥英濃度；及 將苯妥英濃度與苯妥英引發(fā)過敏反應(yīng)風(fēng)險結(jié)合，該等風(fēng)險包括:史帝文生強(qiáng)生癥候群(SJS)，毒性表皮溶解癥(TEN)，藥物疹合并嗜伊紅血癥和全身癥狀(DRESS)，及皮膚紅疹(MPE)。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)(ADRs)風(fēng)險的方法，其中檢測病人血漿中苯妥英濃度的步驟，包括使用高效液相色譜法(HPLC)以分析苯妥英濃度，及藉由非線性藥物動力公式來估計抗癲癇藥物苯妥英濃度的步驟:
12.如權(quán)利要求1所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，尚包括檢測氨基酸改變的步驟。
13.如權(quán)利要求2所述評估苯妥英引發(fā)不良反應(yīng)風(fēng)險的方法，其中檢測CYP2C變異型(包括CYP2C9，CYP2C8，CYP2C18，及CYP2C19)上單點(diǎn)核苷酸變異(SNPs)的步驟，包括檢測CYP2C9*3變異型存在的步驟。
【文檔編號】G01N33/15GK103827312SQ201180071752
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2011年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2011年6月23日
【發(fā)明者】鐘文宏, 洪舜郁 申請人:長庚醫(yī)療財團(tuán)法人基隆長庚紀(jì)念醫(yī)院