專利名稱：細胞分份裝置、細胞分份系統(tǒng)及細胞分份方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細胞分份裝置、細胞分份系統(tǒng)及細胞分份方法。
背景技術(shù)：
以往，作為用于從在病理診斷等中使用的組織的薄切片切下并提取幾十微米左右的微小區(qū)域的技術(shù)，公知有LMD (IaserMicrodissection :激光顯微切割)法。在LMD法中，通過向組織切片的應(yīng)提取的微小區(qū)域照射UV激光來從薄切片切下微小區(qū)域。非專利文獻l:Leica MI CRO SYSTEMS、“Leica LMD7000”、[online]、[日本平成 22年 4 月 23 日檢索]、網(wǎng)址〈URL http://www. leica-microsystems. co. jp/ffebsite/Products, nsf/(ALLIDs)/9482D2B75AA53E5F49257555001FB123> 但是，在從薄切片上切下存在癌細胞等特定細胞的區(qū)域、并想要使用從切下的微小的斷片所含有的細胞中提取的基因?qū)嵤┗驒z查的情況下，利用LMD法提取的斷片所含有的細胞數(shù)量過少導(dǎo)致無法提取檢查所需量的基因。因而，必須對許多薄切片進行顯微解剖來收集足夠數(shù)量的細胞，存在進行一次基因檢查要花費大量勞力和時間的問題。另一方面，考慮增大切下的斷片的面積或者增加從生物體組織切下的薄切片的厚度。但是，在想要增大通過LMD法切下的斷片的情況下，需要增大能夠掃描激光的區(qū)域，或者為了利用激光的壓力吹走通過掃描激光而切下的斷片而需要增大激光的輸出。因此，存在裝置的結(jié)構(gòu)進一步大型化且裝置的價格也激增的不良情況。另外，在增加了薄切片厚度的情況下，存在為了利用激光切斷薄切片而仍然需要增大激光的輸出的不良情況。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的，其目的在于提供一種能夠通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作從生物體組織的薄切片提取對于基因檢查也足量的細胞的細胞分份裝置、細胞分份系統(tǒng)及細胞分份方法。為了達到上述目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案。本發(fā)明的第I技術(shù)方案所涉及的細胞分份裝置包括基板，其設(shè)置為能夠借助規(guī)定的分割線而分割成多個小片，且該基板具有能夠粘貼生物體組織的薄切片的平坦的表面；片狀的伸展構(gòu)件，其以能夠剝離的方式粘接該基板，并且能夠朝向沿著上述表面的方向伸展；伸展部件，其使上述伸展構(gòu)件至少在粘接有上述基板的區(qū)域中朝向沿著上述表面的方向伸展；以及提取部件，其從上述伸展構(gòu)件剝離并提取被分割出的上述小片。根據(jù)上述第I技術(shù)方案，在將粘結(jié)有生物體組織的薄切片的基板粘接于伸展構(gòu)件的狀態(tài)下，通過利用伸展部件使伸展構(gòu)件伸展，從而使粘貼在基板上的薄切片與基板一起借助規(guī)定的分割線被分割。因而，通過利用提取部件從被分割成的多個小片當(dāng)中提取含有所期望的細胞的薄切片的斷片，能夠僅通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作從薄切片提取細胞。在該情況下，通過增加薄切片的厚度或者在平面方向上使小片增大，能夠增加附著于各個小片的細胞的量，僅靠提取一個或多個小片就能夠容易地提取對于基因檢查也足量的細胞。在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述伸展構(gòu)件在表面上具有粘合性。通過如此設(shè)置，能夠容易地將基板粘接于伸展構(gòu)件。另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述基板以多個分離的小片以彼此相鄰地排列的狀態(tài)粘接于上述伸展構(gòu)件而形成。通過如此設(shè)置，在使伸展構(gòu)件伸展時，能夠容易且可靠地將基板分割成小片。另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述分割線由形成在上述基板的表面上的槽構(gòu)成。通過如此設(shè)置，在使伸展構(gòu)件伸展時，能夠在槽的位置容易地分割基板。
另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述伸展構(gòu)件由光學(xué)上透明或半透明的材料構(gòu)成。通過如此設(shè)置，在利用光學(xué)顯微鏡觀察伸展構(gòu)件的透過光圖像時，能夠確認伸展構(gòu)件上的小片的位置。另外,在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述小片呈具有O. 05mm O. 5mm的厚度尺寸和O. 05mm 5. Omm的邊尺寸的立方體狀。通過如此設(shè)置，能夠以充分高的精度從薄切片選擇并提取所期望的區(qū)域，并且使足夠量的細胞附著于各個小片。另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述伸展部件包括固定構(gòu)件，其將上述伸展構(gòu)件的、粘接有上述基板的區(qū)域的周邊部位固定為規(guī)定的形狀；以及按壓構(gòu)件，其從與粘接有上述基板的面相反的面的一側(cè)按壓由該固定構(gòu)件固定的上述伸展構(gòu)件的上述區(qū)域。通過如此設(shè)置，僅通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作就能夠使伸展構(gòu)件伸展。另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述提取部件具有針構(gòu)件，該針構(gòu)件從與粘接有上述小片的面相反一側(cè)的面刺入上述伸展構(gòu)件的粘接有該小片的位置。通過如此設(shè)置，能夠容易地使多個小片中的特定的小片從伸展構(gòu)件剝離并進行提取。另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述細胞分份裝置具有將上述伸展構(gòu)件的上述區(qū)域保持為伸展?fàn)顟B(tài)的保持構(gòu)件。通過如此設(shè)置，能夠使伸展構(gòu)件伸展而保持為在各個小片彼此之間隔開有間隔的狀態(tài)，從而能夠更容易地利用提取部件進行小片的提取。另外，在上述結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，也可以是，上述保持構(gòu)件能夠?qū)⑸鲜錾煺箻?gòu)件的粘接有上述基板的一側(cè)的面保持為朝向下方。通過如此設(shè)置，通過在以基板朝下的方式保持伸展構(gòu)件的狀態(tài)下利用保持構(gòu)件使小片剝離，能夠利用自重使小片落下并容易地回收。另外，在具有上述保持構(gòu)件的結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，也可以是，該細胞分份裝置具有吸引構(gòu)件，該吸引構(gòu)件配置在由上述保持構(gòu)件保持的上述伸展構(gòu)件的、粘接有上述基板的面的一側(cè)，且該吸引構(gòu)件的內(nèi)部被吸引而形成負壓。通過如此設(shè)置，僅使吸引構(gòu)件靠近應(yīng)提取的小片就能夠容易地將該小片回收到吸引構(gòu)件內(nèi)。
另外，在上述第I技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，也可以是，上述小片是具有O. OOlmm O. 5mm的直徑尺寸的磁性微粒。通過如此設(shè)置，能夠例如在溶液中對回收的小片進行處理時使利用磁力從溶液中分離該小片等處理高效化。另外，在上述結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，優(yōu)選的是，上述提取部件在與上述小片的尺寸大致相同大小的空間內(nèi)具有產(chǎn)生使上述磁性微粒靠近的磁力的磁體。通過如此設(shè)置，通過使磁體靠近所期望的小片，能夠?qū)⒃撔∑蹲降酱朋w上并容易地從伸展構(gòu)件提取。另外，本發(fā)明的第2技術(shù)方案所涉及的細胞分份系統(tǒng)包括上述任一項所述的細胞分份裝置；以及觀察裝置，其用于觀察粘接于上述伸展構(gòu)件的上述基板上的上述薄切片。 根據(jù)上述第2技術(shù)方案，通過利用觀察裝置對粘貼在基板上的薄切片、分割后形成的小片等進行觀察，能夠更容易且更準(zhǔn)確地選擇應(yīng)當(dāng)提取的小片、提取所選擇的小片。另外，本發(fā)明的第3技術(shù)方案所涉及的細胞分份方法包括將生物體組織的薄切片以跨越上述分割線的方式粘貼在能夠借助規(guī)定的分割線而分割成多個小片的基板的表面上的粘貼步驟；通過朝向沿著上述表面的方向拉伸粘貼有上述薄切片的上述基板而利用上述分割線使上述基板和上述生物體組織的薄切片分割的分割步驟；以及提取在該分割步驟中被分割的上述薄切片的上述小片的提取步驟。根據(jù)上述第3技術(shù)方案，在粘貼步驟中將薄切片粘貼在基板上之后，通過在分割步驟中拉伸基板來將基板與粘貼在該基板上的薄切片一起分割成多個小片，通過在提取步驟中從分割成的多個小片中選擇并提取小片，能夠通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作從生物體組織的薄切片提取對于基因檢查也足量的細胞。根據(jù)本發(fā)明，發(fā)揮了能夠通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作從生物體組織的薄切片提取對于基因檢查也足量的細胞的效果。


圖I是本發(fā)明的一個實施方式的細胞分份系統(tǒng)的整體結(jié)構(gòu)圖。圖2A是粘接在粘合片上的玻璃基板的側(cè)視圖，表示使槽朝向粘合片側(cè)時。圖2B是粘接在粘合片上的玻璃基板的側(cè)視圖，表示使槽朝向與粘合片相反一側(cè)時。圖3A是表示粘接在粘合片上的玻璃基板的圖。圖3B是表示通過粘合片的伸展而被分割的玻璃基板的圖。圖4是表示伸展用臺和夾具的結(jié)構(gòu)的圖。圖5A是說明圖4的伸展用臺和夾具的使用方法的圖，表示使粘合片伸展前的狀態(tài)。圖5B是說明圖4的伸展用臺和夾具的使用方法的圖，表示使粘合片伸展后的狀態(tài)。圖5C是說明圖4的伸展用臺和夾具的使用方法的圖，表示利用夾持環(huán)保持粘合片的狀態(tài)。圖6是說明使用圖I的細胞分份裝置和細胞分份系統(tǒng)從薄切片提取細胞的過程的流程圖。圖7是表示基板的變形例的圖。圖8是表不基板的另一個變形例的圖。圖9是表示圖I的細胞分份系統(tǒng)的變形例的圖。
圖10是表示圖I的細胞分份系統(tǒng)的另一個變形例的圖。圖11是表示使用圖I的細胞分份系統(tǒng)提取細胞的過程的變形例的流程圖。圖12是表示使應(yīng)用了外筒和內(nèi)筒的粘合片伸展的方法的變形例的圖，且是表示在外筒設(shè)置有粘合片的狀態(tài)的圖。圖13是表示使用圖12的外筒和內(nèi)筒使粘合片伸展后的狀態(tài)的圖。圖14是表示通過另一方法利用圖12的外筒和內(nèi)筒使粘合片伸展后的狀態(tài)的圖。圖15A是表示使粘合片伸展的方法的另一個變形例的圖，表示粘合片伸展前。圖15B是表示使粘合片伸展的方法的另一個變形例的圖，表示粘合片伸展后。圖16是表示夾持環(huán)的變形例的圖。圖17是通過本發(fā)明的實施例制成的薄切片的照片，表示分割前的狀態(tài)。圖18是表示圖17的薄切片的分割后的狀態(tài)的照片。圖19是表示從伸展結(jié)束的粘合性片分離并提取小片的狀態(tài)的例子的圖。圖20A是表示從伸展結(jié)束的粘合性片分離小片并利用吸引構(gòu)件提取小片的狀態(tài)的例子的圖。圖20B是表示從伸展結(jié)束的粘合性片分離小片并利用吸引構(gòu)件提取小片的狀態(tài)的例子的放大圖。圖21A是表示使伸展結(jié)束的粘合片傾斜并利用針提取小片的狀態(tài)的圖。圖21B是表示使伸展結(jié)束的粘合片傾斜并利用吸引構(gòu)件提取小片的形態(tài)的圖。
具體實施例方式以下，參照

本發(fā)明的一個實施方式的細胞分份裝置I和細胞分份系統(tǒng)100。如圖I所示，本實施方式的細胞分份系統(tǒng)100具有光學(xué)顯微鏡(觀察裝置)2和本實施方式的細胞分份裝置I。光學(xué)顯微鏡2是正置型。光學(xué)顯微鏡2在攝像機用端口 2a處連接有拍攝其視野的C C D攝像機等攝像裝置3，由攝像裝置3拍攝的影像顯示在未圖示的監(jiān)視器中。由攝像裝置3拍攝的影像也可以在由圖像處理器等未圖示的影像處理裝置實施影像處理之后顯示在監(jiān)視器中。細胞分份裝置I具有粘貼生物體組織的薄切片的玻璃基板(基板)4、能夠朝向沿著其表面的方向伸展并供玻璃基板4粘接的粘合片(伸展構(gòu)件)5、使該粘合片5伸展的伸展用臺(伸展部件、按壓構(gòu)件)6、在利用該伸展用臺6進行伸展時保持粘合片5的夾具7以及從粘合片5提取玻璃基板4的小片4b的提取部件8。玻璃基板4呈具有平坦的表面的平板狀。如圖2A及圖3A所示，在玻璃基板4的表面上隔開規(guī)定的間隔地形成有方格狀的槽(分割線)4a。槽4a既可以通過例如激光加工、化學(xué)蝕刻、切割等來形成，也可以借助操作者的手動操作使用玻璃切刀等來形成。
玻璃基板4優(yōu)選為能夠穩(wěn)定地支承生物體組織的薄切片的厚度、例如O. 05mm O. 5_。槽4a的間隔雖能夠根據(jù)應(yīng)從薄切片提取的斷片的大小而適當(dāng)?shù)刈兏菫榱艘猿浞旨毼⒌奈恢镁葟谋∏衅瑑?nèi)提取所期望的區(qū)域的斷片、并且在所提取的斷片中含有足夠量的細胞，槽4a的間隔優(yōu)選為O. 05mm 5. 0mm。玻璃基板4使用在光學(xué)上透明的構(gòu)件，以便能夠利用光學(xué)顯微鏡2觀察粘貼在該玻璃基板4上的薄切片的透光圖像。另外，對于玻璃基板4，為了提高其表面與薄切片之間的緊密接觸性，也可以對表面實施硅烷化等化學(xué)處理，也可以根據(jù)在提取小片4b之后進行的檢查等的目的而實施例如用于防止核酸、蛋白質(zhì)等吸附的涂敷處理等。粘合片5在一個面上涂布有粘接劑而具有能夠足夠牢固并且以能夠借助后述的提取部件8剝離的方式粘接玻璃基板4的粘合性。另外，粘合片5能夠向沿著其表面的方向伸展。當(dāng)在使玻璃基板4粘接于粘合片5的狀態(tài)下使粘合片5向沿著其表面的方向伸展時，伴隨著粘合片5的伸展，玻璃基板4也向沿著其表面的方向被拉伸，如圖3B所示，玻璃基板4在槽4a的位置被切斷而被分割為多個小片4b。另外，此時，粘貼在玻璃基板4的表1·面上的薄切片A也同時向沿著其表面的方向被拉伸而沿著槽4b被切斷。粘合片5在光學(xué)方面具有透過性或半透過性，當(dāng)利用光學(xué)顯微鏡2觀察粘合片5時，也能夠觀察隔著該粘合片5配置在與光學(xué)顯微鏡2的物鏡相反側(cè)的物體。作為粘合片5，例如能夠酌情使用在半導(dǎo)體制造工藝的切割工序中使用于暫時固定晶片的切割帶。另外，圖2A中示出玻璃基板4以使槽4a朝向粘合片5側(cè)的方式粘接于粘合片5的例子，但是如圖2B所示，也可以使玻璃基板4以使槽4a朝向與粘合片5相反的一側(cè)的方式粘接于該粘合片5。如圖4所示，伸展用臺6呈大致圓柱狀，兩端形成為大致平行且平坦。伸展用臺6以上端側(cè)的部分(以下，稱做小徑部分。)6a具有比其他部分(以下，稱作大徑部分。)6b小的直徑尺寸的方式在側(cè)表面形成有臺階。夾具7具有能夠以擴展了粘合片5的狀態(tài)粘貼該粘合片5的下框(固定構(gòu)件)9a、從上方覆蓋于該下框9a的上框9b以及將粘合片5保持為伸展?fàn)顟B(tài)的夾持環(huán)10a、10b (保持構(gòu)件)。夾持環(huán)10a、10b由外環(huán)IOa與內(nèi)環(huán)IOb構(gòu)成,外環(huán)IOa的內(nèi)徑尺寸與內(nèi)環(huán)IOb的外徑尺寸形成為大致相同。下框9a與上框9b在大致中央部分分別形成有沿壓板方向貫通的窗孔9c、9d。在上框9b的窗孔9d的內(nèi)側(cè)沿著其內(nèi)周面嵌入有外環(huán)10a。下框9a的窗孔9c具有小徑部分6a的外徑尺寸以上的直徑。夾具7以如下方式使用。首先，沿著小徑部分6a的外周嵌入內(nèi)環(huán)10b。然后，在將玻璃基板4配置在窗孔9c的位置并使粘接有玻璃基板4的一側(cè)朝向上方的狀態(tài)下，將粘接有玻璃基板4的粘合片5粘接于下框9a的下表面。由此，如圖5A所示，粘合片5的粘接有玻璃基板4的區(qū)域的周邊被固定為規(guī)定的形狀。接著，在將粘合片5的與窗孔9c對齊的部分壓靠于伸展用臺6的上端面的狀態(tài)下，向下方按壓下框9a而使其移動。由此，如圖5B所示，粘合片5的與窗孔9c對齊的部分從伸展用臺6被按壓而伸展，玻璃基板4伴隨著粘合片5的伸展而被分割為多個小片4b。接著，如圖5C所示，通過在使粘合片5伸展的狀態(tài)下將上框9b覆蓋于下框9a，使外環(huán)IOa與內(nèi)環(huán)IOb嵌合。由此，粘合片5的與窗孔9c對齊的部分被夾持環(huán)10a、IOb保持為伸展?fàn)顟B(tài)。
另外，在以此方式使粘合片5伸展時，也可以在粘合片5上附加用于獲知該粘合片5伸展到何種程度的記號例如刻度。提取部件8具有提取針11和操作該提取針11的操縱器12。提取針11的頂端部具有與小片4b大致相同或其以下的直徑尺寸。操縱器12在臂12a的頂端保持有提取針
11。操縱器12根據(jù)由操作者進行的操作相應(yīng)地使臂12a沿三維方向移動。以下，參照圖6說明使用如此構(gòu)成的細胞分份裝置I和細胞分份系統(tǒng)100從生物體組織的薄切片提取含有所期望的細胞的斷片的方法。為了使用本實施方式的細胞分份裝置I和細胞分份系統(tǒng)100從生物體組織的薄切片提取目標(biāo)細胞，首先，從生物體組織切下提取用薄切片(薄切片)(步驟Si)，將切下的提取用薄切片粘貼于玻璃基板4 (步驟S2、粘貼步驟)。然后，利用光學(xué)顯微鏡2觀察提取用薄切片并獲取檢體圖像(步驟S3)。 提取用薄切片的切下例如通過冷凍切片法、石蠟切片法等來進行。提取用薄切片的厚度雖根據(jù)所提取的細胞的用途而不同，但是比普通的在病理標(biāo)本等中使用的薄切片的厚度(約幾μ m 10 μ m)厚,例如以約50 μ m的厚度切下提取用薄切片。當(dāng)切下的提取用薄切片的尺寸小于玻璃基板4的槽4a之間的間隔時，以提取用薄切片跨越槽4a的方式將提取用薄切片粘貼在玻璃基板4上。另外，相對于提取用薄切片另外從生物體組織的與提取用薄切片的切下位置相鄰的位置切下厚度幾Pm ΙΟμπι左右的染色用薄切片。所切下的染色用薄切片在粘貼于滑動玻璃上之后，例如預(yù)先實施病理診斷用的染色(步驟S4)。然后，利用光學(xué)顯微鏡2觀察染色完成的染色用薄切片而獲取染色圖像(步驟S5)，確定在所獲取的染色圖像內(nèi)存在有期望的細胞的應(yīng)提取的區(qū)域、例如被癌細胞侵蝕的區(qū)域(步驟S6)。接著，將所獲取的檢體圖像與染色圖像以各個圖像內(nèi)的薄切片恰好重合的方式重疊地顯示(步驟S7)，記錄與染色用薄切片內(nèi)的確定了的應(yīng)提取的區(qū)域?qū)R的小片4b的位置、例如該小片4b的列編號與段編號(步驟S8)。接著，將玻璃基板4粘接在粘合片5上。另外，也可以在預(yù)先粘接于粘合片5的玻璃基板4上粘貼所切下的提取用薄切片。接著，通過使用伸展用臺6和夾具7使粘合片5伸展來分割玻璃基板4 (步驟S9、分割步驟)。此時，粘貼在玻璃基板4上的提取用薄切片也與玻璃基板4 一起沿其平面方向被拉伸而在槽4a的位置分割為斷片。接著，利用夾持環(huán)10a、IOb將粘合片5保持為伸展?fàn)顟B(tài)，以使粘接有玻璃基板4的一側(cè)的面朝向下方的方式將粘合片5設(shè)置在標(biāo)本臺2b上。此時，既可以將粘合片5以從下框9a剝離后的狀態(tài)設(shè)置在標(biāo)本臺2b上，也可以將粘合片5與下框9a —起設(shè)置在標(biāo)本臺2b上。接著，通過一邊利用光學(xué)顯微鏡2觀察預(yù)先記錄的位置的小片4b —邊在其視野內(nèi)操作操縱器12來將提取針11配置在應(yīng)提取的小片4b背后，通過利用提取針11刺入應(yīng)提取的小片4b的背面來使小片4b從粘合片5剝離并落下(步驟S10、提取步驟)。此時，也可以在標(biāo)本臺2b的下方配置管支架13，在小片4b的落下位置預(yù)先設(shè)置回收管13a。通過以上過程，能夠從提取用薄切片提取存在所期望的細胞的區(qū)域的斷片和小片4b。所提取的細胞例如在基因檢查等中使用。這樣，根據(jù)本實施方式，具有僅通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作就能夠從薄切片選擇性地提取存在所期望的細胞的區(qū)域的優(yōu)點。另外，由于不需要UV激光光源這樣的昂貴的結(jié)構(gòu)，因此具有能夠?qū)⒅圃斐杀究刂频幂^便宜的優(yōu)點。另外，由于與LMD不同，通過力學(xué)切斷薄切片，因此即使是比較厚的薄切片也能夠容易地切斷，并且僅調(diào)節(jié)槽4a之間的間隔就能夠容易地擴大小片4b的大小。因而，以往為了回收足夠的細胞數(shù)量而需要從多個薄切片提取斷片從而需要花費巨大的勞力的作業(yè)僅提取I個或少數(shù)小片4b就可完成，因此具有能夠大幅度削減作業(yè)所需的勞力和時間的優(yōu)點。在上述實施方式中，雖使用形成有方格狀的槽4a的玻璃基板4作為粘貼薄切片的基板，但代替該情況，也可以使用玻璃的小片4b沿平面方向排列而成的玻璃基板4。在該情況下，為了保持玻璃基板4的形狀，如圖7所示，使玻璃的小片4b以預(yù)先排列的狀態(tài)粘合在粘合片5上。通過如此設(shè)置，當(dāng)使粘合片5伸展時，能夠在小片4b彼此的邊界(分割線)處更容易且可靠地分割玻璃基板4。另外，為了形成分割的小片預(yù)先排列在粘合片5上的狀態(tài)，作為一例，能夠采用如 下所述的方法。在粘合片5上粘接玻璃基板4，利用玻璃切刀在該玻璃基板4上呈方格狀劃出痕跡。然后，通過在劃痕位置徒手分割玻璃基板4而能夠容易地如圖7所示那樣形成小片4b排列在粘合片5上的狀態(tài)。此時，優(yōu)選的是，一邊利用薄膜等保護玻璃基板4表面一邊進行分割，以使得玻璃基板4不會弄臟。另外，在上述實施方式中采用的基板的結(jié)構(gòu)僅是一例，并不限定于該結(jié)構(gòu)。例如，基板的材料除了玻璃以外也可以是樹脂等。作為小片4b的形狀，只要是能夠緊密排列在粘合片5的表面上的形狀即可，例如也可以是正六邊形、三角形。另外，如圖8所示，也可以使用球狀的玻璃串珠、樹脂串珠4c作為小片，通過使這些串珠在粘合片5上以作為優(yōu)選方式的單層排列來構(gòu)成基板4’。另外，作為基板，也可以使用具有磁性的基板。例如，也可以使直徑為Ιμπι 500 μ m的磁性微粒緊密地排列在粘合片5的表面上，也可以將不銹鋼等金屬板用作基板。在作為基板而使用金屬那樣的不會使可見光透過的基板的情況下，當(dāng)利用光學(xué)顯微鏡觀察粘合片5的透光圖像時，即使小片4b較小也能夠清楚地目視確認。在該情況下，也可以使用磁體作為提取部件8。例如，在提取針11的頂端設(shè)有與磁性微粒大致相同大小的磁體。進而，通過使提取針11的頂端從與粘合片5相反的一側(cè)靠近磁性微粒，能夠利用磁力在提取針11的頂端捕捉所期望的磁性微粒并從粘合片5進行提取。另外，在上述實施方式中使用正置型的光學(xué)顯微鏡2，雖采用了伸展用臺6與光學(xué)顯微鏡2分開設(shè)置的結(jié)構(gòu)，但是細胞分份系統(tǒng)100的結(jié)構(gòu)并不限定于此。例如，作為光學(xué)顯微鏡2，也可以使用倒立型，也可以將伸展用臺6搭載于光學(xué)顯微鏡2。圖9表示在倒立型的光學(xué)顯微鏡2中設(shè)置伸展用臺6與夾具7的結(jié)構(gòu)的一例。標(biāo)本臺2b設(shè)置為能夠在光學(xué)顯微鏡2的觀察位置與離開光學(xué)顯微鏡2的主體的位置之間沿著導(dǎo)軌2c在水平方向上滑動。在這種結(jié)構(gòu)中，通過在將標(biāo)本臺配置于觀察位置的狀態(tài)下使夾具7向下方移動而使粘合片5在伸展用臺6上伸展。之后，使標(biāo)本臺2b滑動，使用與光學(xué)顯微鏡2分開設(shè)置的提取部件8提取小片4b。圖10表示在正置型的光學(xué)顯微鏡2中設(shè)置有伸展用臺6、夾具7及提取部件8的結(jié)構(gòu)的一例。伸展用臺6設(shè)置為能夠在標(biāo)本臺2b的上方與物鏡一體地沿上下方向移動，使伸展用臺6從上方壓緊借助夾具7保持在標(biāo)本臺2b上方的粘合片5。在該結(jié)構(gòu)中，在標(biāo)本臺2b上能夠進行從粘合片5的伸展到小片4b的提取這一連串的操作。另外，在上述實施方式中，雖通過使提取用薄切片的檢體圖像與染色用薄切片的染色圖像對齊來確定應(yīng)提取的小片4b，但是代替這種情況，也可以根據(jù)提取用薄切片的圖像來確定應(yīng)提取的小片4b。在比較厚的提取用薄切片的情況下，由于細胞在厚度方向上重疊，因此即使實施染色也難以根據(jù)圖像準(zhǔn)確地識別各個細胞的形狀、細胞的分布等。但是，在根據(jù)這種染色圖像、未染色的薄切片的圖像也能夠基于大概的組織形狀、細胞的分布判斷應(yīng)提取的區(qū)域的情況下，例如，如圖11所示，可以一邊利用光學(xué)顯微鏡2觀察提取用薄切片一邊當(dāng)場選擇應(yīng)提取的小片4b (步驟S11)，也可以進行粘合片5的伸展(步驟S9)和小片4b的提取(步驟S10)。通過如此設(shè)置，能夠根據(jù)需要進一步簡化過程。
另外，在上述實施方式中，雖使用大致圓柱狀的伸展用臺6使粘合片5伸展，但是使粘合片5伸展的方法并不限定于此。例如，取代伸展用臺6，也可以使用外筒14a和能夠容納在該外筒14a內(nèi)的內(nèi)筒14b。在該情況下，如圖12所示，將粘合片5覆蓋在外筒14a的上端面并固定在外筒14a的側(cè)表面。附圖標(biāo)記15示出用于將粘合片5固定在外筒14a的側(cè)表面的固定構(gòu)件。接著，如圖13所示,使內(nèi)筒14b從外筒14a的內(nèi)部相對地突出，或者如圖14所示,從外筒14a的外部向該外筒14a內(nèi)相對地壓入內(nèi)筒14b,從而能夠使粘合片5向各個方向大致均勻地伸展。另外，如圖15A所示，利用保持件16在觀察粘接有玻璃基板4的區(qū)域的位置將粘合片5保持為恒定的形狀，如圖15B所示，通過使粘接有玻璃基板4的區(qū)域壓緊伸展用臺6，也可以使粘合片5伸展。另外，作為夾持環(huán)，也可以使用能夠借助于磁力維持為相互緊密接觸狀態(tài)的構(gòu)件。例如，如圖16所示，夾持環(huán)10c、10d由具有相同直徑尺寸且利用由磁體構(gòu)成的上環(huán)IOc和由不銹鋼等金屬構(gòu)成的下環(huán)IOd構(gòu)成，通過使粘合片5以伸展的狀態(tài)夾在上環(huán)IOc與下框IOd之間并利用磁力使兩環(huán)10c、IOd相互緊密接觸，也能夠?qū)⒄澈掀?保持為伸展?fàn)顟B(tài)。兩個環(huán)10c、10d也可以由相互產(chǎn)生引力的磁體構(gòu)成。另外，在上述實施方式中，雖通過利用提取針11從背后刺入小片4b而使該小片4b從粘合片5剝離并進行回收，但是代替這種情況，也可以使用能夠?qū)?nèi)部吸引為負壓的吸引構(gòu)件。即使這樣，通過使吸引構(gòu)件從與粘合片5相反的一側(cè)靠近應(yīng)提取的小片4b，從而能夠使小片4b從粘合片5剝離并回收到吸引構(gòu)件內(nèi)。另外，作為粘合片5，也可以使用通過照射紫外線使粘合性喪失的構(gòu)件。在該情況下，例如在光學(xué)顯微鏡2上搭載紫外光源(提取部件)。并且，通過經(jīng)由物鏡向應(yīng)提取的小片4b的位置局部地照射從紫外光源放射的紫外線，從而能夠使小片4b容易地從粘合片5剝離并進行回收。此外，即使利用光纖引導(dǎo)紫外光并使纖維端朝向應(yīng)提取的小片4b的位置局部地進行照射，也能夠獲得相同的效果?！蠢梦齺硖崛⌒∑姆绞健?br> 也可以利用在頂端開設(shè)有小片無法通過的大小的孔的管狀的吸引構(gòu)件從粘合片提取任意的小片。吸引構(gòu)件的內(nèi)部能夠根據(jù)需要形成為負壓，從而能夠在頂端吸附小片而從粘合性片輸送并提取該小片。該管狀的吸引構(gòu)件既可以呈捆束有多個的形態(tài)，也可以按照與伸展后的小片的間隔吻合的配置在管狀的吸引構(gòu)件的頂端開設(shè)有多個小片無法通過的大小的孔。只要使用這種構(gòu)件，就能夠同時提取多個小片。另外，也可以使管狀吸引構(gòu)件的孔的大小比小片大，通過進行吸引將小片回收到管內(nèi)。而且，也可以利用具有導(dǎo)電性的材料制作吸引構(gòu)件并設(shè)置吸引構(gòu)件。這樣，即使小片帶電也能夠進行去電，因此小片的處理變?nèi)菀住?lt;在從伸展完成的粘合性片上分離所有或一部分小片之后進行提取的方式>
只要在粘合性片中使用具有紫外線敏感性的粘合劑，就能夠通過照射紫外線來能夠降低粘合性。在利用這種粘合性片使粘合性降低的狀態(tài)下，可以利用圖19所示的集合針構(gòu)件17在平板18上分離所有或者任意的小片，并在平板18上從分離的小片組提取所需的小片。作為提取方法，既可以利用鑷子把持來進行提取，也可以使用先前所述的管狀吸引構(gòu)件19如圖20A或圖20B所示那樣通過吸引來進行提取。<使伸展完成的粘合片傾斜并利用針或吸引構(gòu)件提取小片的方式>也可以不使伸展完成的粘合片鉛垂地朝下，而是使該粘合片相對于鉛垂線傾斜來使小片落下并進行提取。在這種情況下，與使粘合片水平的時候相比，用于觀察小片的觀察部24和用于回收落下的小片的容器23的配置變?nèi)菀?。作為提取方法，既可以如圖21A所示那樣使用漏斗狀引導(dǎo)構(gòu)件22從伸展完成的粘合片5背側(cè)提取利用針21按壓而落下的小片，另外，也可以使用先前所述的管狀吸引構(gòu)件19如圖21B所示那樣通過吸引來進行提取。<通過在容器的上方配置漏斗狀的構(gòu)件來回收小片的方式>也可以將足夠大的漏斗狀的構(gòu)件配置在回收容器的上方。這樣，即使是較小的開口的回收容器，也能夠穩(wěn)妥且容易地提取小片。實施例接著，說明上述實施方式的實施例。在本實施例中，為了確認利用細胞分份裝置分割生物體組織的薄切片的情況而進行以下實驗。使用豬的結(jié)腸作為生物體組織，利用冷凍切片法從生物體組織切下厚度為50 μ m、4邊約為10_的薄切片。將切下的薄切片以角部彼此相鄰的方式排列在切割片(伸展構(gòu)件)上，并在以跨越該玻璃蓋片的邊界(分割線)的方式粘貼在相粘貼的兩片玻璃蓋片上之后使薄切片風(fēng)干。玻璃蓋片使用各邊尺寸為18mm、厚度為O. 13mm O. 17mm的玻璃蓋片。接著，以薄切片配置在窗孔的大致中央部分的方式，將切割帶粘貼于在大致中央部貫通地形成有圓狀的窗孔而成的上框。接著，使粘貼有玻璃蓋片側(cè)的面朝向上方，通過在窗孔內(nèi)配置有圓柱狀的臺的狀態(tài)下一邊將上框保持為大致水平一邊下壓該上框，從而使切割帶的配置在窗孔內(nèi)的部分沿其平面方向伸展。由此，使兩片玻璃蓋片彼此分離，在玻璃蓋片的邊界處將粘貼在玻璃蓋片上的薄切片分割為兩個斷片。在圖17、圖18中示出將如此分割薄切片之前、之后的薄切片的照片。圖17表示使切割帶伸展前的狀態(tài)。在照片的大致中央呈縱向顯示的線L是玻璃蓋片的邊界(分割線)。圖18表示使切割帶伸展后的狀態(tài)，可知薄切片沿著玻璃蓋片的邊界被徹底地分割。根據(jù)以上實驗?zāi)軌虼_認，通過使用本發(fā)明的細胞分份裝置和細胞分份系統(tǒng)，即使是比較厚的薄切片，也能夠容易地且沿著分割線足夠徹底地進行分割。附圖標(biāo)記說明I細胞分份裝置；2光學(xué)顯微鏡(觀察裝置)；2a攝像機用端口 ；2b標(biāo)本臺；3攝像裝置；4玻璃基板(基盤)；4a槽(分割線)；4b 小片；5粘合片(伸展構(gòu)件)；6伸展用臺(伸展部件、按壓構(gòu)件)；7夾具；8提取部件；9a下框(固定構(gòu)件);9b上框；9c、9d窗孔；IOa夾持環(huán)、外環(huán)(保持構(gòu)件)；10b 夾持環(huán)、內(nèi)環(huán)(保持構(gòu)件)；10c 夾持環(huán)、上環(huán)(保持構(gòu)件)；10d 夾持環(huán)、下環(huán)(保持構(gòu)件)；11提取針(針構(gòu)件)；12操縱器；12a 臂；13管支架；13a回收管；14a外筒；14b內(nèi)筒；15固定構(gòu)件；16保持件；17集合針構(gòu)件；18平板；19 吸引構(gòu)件；21針；22漏斗狀引導(dǎo)構(gòu)件；23回收容器；24觀察部；100細胞分份系統(tǒng)。
權(quán)利要求
1.一種細胞分份裝置，包括 基板，其設(shè)置為能夠借助規(guī)定的分割線而分割成多個小片，且該基板具有能夠粘貼生物體組織的薄切片的平坦的表面； 片狀的伸展構(gòu)件，其以能夠剝離的方式粘接該基板，并且能夠朝向沿著上述表面的方向伸展； 伸展部件，其使上述伸展構(gòu)件至少在粘接有上述基板的區(qū)域中朝向沿著上述表面的方向伸展；以及 提取部件，其從上述伸展構(gòu)件剝離并提取被分割出的上述小片。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的細胞分份裝置，其中， 上述伸展構(gòu)件在表面上具有粘合性。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的細胞分份裝置，其中， 上述基板以多個分離的小片彼此相鄰地排列的狀態(tài)粘接于上述伸展構(gòu)件而形成。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的細胞分份裝置，其中， 上述分割線由形成在述基板的表面上的槽構(gòu)成。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任一項所述的細胞分份裝置，其中， 上述伸展構(gòu)件由光學(xué)上透明或半透明的材料構(gòu)成。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任一項所述的細胞分份裝置，其中， 上述小片呈具有O. 05mm O. 5mm的厚度尺寸和O. 05mm 5. Omm的邊尺寸的立方體狀。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6中任一項所述的細胞分份裝置，其中， 上述伸展部件具有 固定構(gòu)件，其將上述伸展構(gòu)件的、粘接有上述基板的區(qū)域的周邊部位固定為規(guī)定的形狀；以及 按壓構(gòu)件，其從與粘接有上述基板的面相反的面的一側(cè)按壓由該固定構(gòu)件固定的上述伸展構(gòu)件的上述區(qū)域。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7中任一項所述的細胞分份裝置，其中， 上述提取部件具有針構(gòu)件，該針構(gòu)件從與粘接有上述小片的面相反一側(cè)的面刺入上述伸展構(gòu)件的粘接有該小片的位置。
9.根據(jù)權(quán)利要求I至8中任一項所述的細胞分份裝置，其中， 該細胞分份裝置具有將上述伸展構(gòu)件的上述區(qū)域保持為伸展?fàn)顟B(tài)的保持構(gòu)件。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的細胞分份裝置，其中， 上述保持構(gòu)件能夠?qū)⑸鲜錾煺箻?gòu)件的粘接有上述基板的一側(cè)的面保持為朝向下方。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的細胞分份裝置，其中， 該細胞分份裝置具有吸收構(gòu)件，該吸收構(gòu)件配置在由上述保持構(gòu)件保持的上述伸展構(gòu)件的、粘接有上述基板的面的一側(cè)，且該吸收構(gòu)件內(nèi)部被吸引而形成負壓。
12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的細胞分份裝置，其中， 上述小片是具有O. OOlmm O. 5mm的直徑尺寸的磁性微粒。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的細胞分份裝置，其中， 上述提取部件在與上述小片的尺寸大致相同大小的空間內(nèi)具有產(chǎn)生使上述磁性微?？拷拇帕Φ拇朋w。
14.一種細胞分份系統(tǒng)，其中，該細胞分份系統(tǒng)具有 權(quán)利要求I至13中任一項所述的細胞分份裝置；以及 觀察裝置，其用于觀察粘接于上述伸展構(gòu)件的上述基板上的上述薄切片。
15.—種細胞分份方法,該細胞分份方法包括 將生物體組織的薄切片以跨越上述分割線的方式粘貼在能夠借助規(guī)定的分割線而分割成多個小片的基板的表面上的粘貼步驟； 通過朝向沿著上述表面的方向拉粘貼有上述薄切片的上述基板而利用上述分割線使上述基板和上述生物體組織的薄切片分割的分割步驟；以及 提取在該分割步驟中分割出的上述薄切片的上述小片的提取步驟。
全文摘要
本發(fā)明提供一種細胞分份裝置、細胞分份系統(tǒng)及細胞分份方法。通過簡單的結(jié)構(gòu)和操作從生物體組織的薄切片提取對于基因檢查也足量的細胞。該細胞提取裝置包括基板(4)，其設(shè)置為能夠借助規(guī)定的分割線而分割成多個小片，且該基板(4)具有能夠粘貼生物體組織的薄切片(A)的平坦的表面；片狀的伸展構(gòu)件(5)，其以能夠剝離的方式粘接該基板(4)，并且能夠朝向沿著表面的方向伸展；伸展部件(6)，其使伸展構(gòu)件(5)在至少粘接有基板(4)的區(qū)域中朝向沿著表面的方向伸展；以及提取部件，其從伸展構(gòu)件(5)剝離并提取被分割出的小片。
文檔編號G01N1/28GK102918376SQ20118002606
公開日2013年2月6日 申請日期2011年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月28日
發(fā)明者森本伸彥 申請人:奧林巴斯株式會社