專利名稱：一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，尤其是涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿病(血糖)一旦控制不好會引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。臨床觀察胰島素抵抗普遍存在于II型糖尿病中，高達(dá)90%左右。II型糖尿病可導(dǎo)致感染、心臟病變、腦血管病變、腎功能衰竭、雙目失明、下肢壞疽等而成為致死致殘的主要原因。糖尿病高滲綜合癥是糖尿病的嚴(yán)重急性并發(fā)癥，初始階段可表現(xiàn)為多尿、多飲、倦怠乏力、反應(yīng)遲鈍等，隨著機(jī)體失水量的增加病情急劇發(fā)展，出現(xiàn)嗜睡、定向障礙、癲癇樣抽搐，偏癱等類似腦卒中的癥狀，甚至昏迷。糖化血紅蛋白是人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物。糖化血紅蛋白于1958年被使用色譜法首次從其它類型的血紅蛋白中分離出來，并于1968年被分類為一種糖蛋白。1969年，人們發(fā)現(xiàn)糖化血紅蛋白在糖尿病患者中的數(shù)量增加。1975年研究者們得到了生成糖化血紅蛋白的反應(yīng)式。人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物是糖化血紅蛋白，血糖和血紅蛋白的結(jié)合生成糖化血紅蛋白是不可逆反應(yīng)，并與血糖濃度成正比，糖化血紅蛋白則能更全面地反映II型糖尿病患者的血糖控制情況。人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白容易與血糖結(jié)合，結(jié)合的產(chǎn)物就是糖化血紅蛋白。這種結(jié)合基本上是一個不可逆的過程，一旦結(jié)合就難以解離。紅細(xì)胞的生命周期為120天，只有等到紅細(xì)胞衰亡，這種結(jié)合才會終止。當(dāng)然，紅細(xì)胞不斷生存，也不斷死亡。所以，臨床上檢測到的糖化血紅蛋白值反映了患者最近2-3個月的血糖平均水平，并不受一時一刻血糖波動的影響，更客觀，更具有較長的時間性，也更少受到飲食、運(yùn)動等因素的干擾。目前反應(yīng)II型糖尿病血糖的指標(biāo)有多種，如直接反映血糖水平的空腹血糖、餐后 2小時血糖等。雖然這些指標(biāo)都能反映血糖水平，但臨床意義還是有所不同的。通過空腹血糖，我們能了解患者血糖控制的一般狀況。空腹血糖高，意味著患者基礎(chǔ)胰島素分泌能力差。餐后血糖高，則往往提示分泌胰島素的儲備能力差或存在胰島素抵抗。如何根據(jù)糖化血紅蛋白指標(biāo)來進(jìn)行II型糖尿病患者的監(jiān)測和規(guī)范化用藥已經(jīng)成了醫(yī)學(xué)上一個難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于本發(fā)明涉及一種糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)， 尤其是涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，該系統(tǒng)采用本發(fā)明研制的試劑盒進(jìn)行糖化血紅蛋白檢測具有較高的靈敏度和特異性，可以用來指導(dǎo)臨床II型糖尿病臨床。
本發(fā)明提供的II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置，所述取血裝置可以為醫(yī)藥領(lǐng)域任何常用的取血裝置，例如靜脈留置針、注射器以及采血筆等。所述糖化血紅蛋白檢測裝置為糖化血紅蛋白檢測試劑盒，其包含的試劑有糖化血紅蛋白磁分離試劑，酶標(biāo)抗體，增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、控制品，濃縮液以及底物。所述的磁分離試劑含有標(biāo)記有抗糖化血紅蛋白單克隆抗體的磁性微球。所述的酶標(biāo)抗體是含有辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗糖化血紅蛋白單克隆抗體。所述的增強(qiáng)劑是含有Tris的緩沖液。所述的校準(zhǔn)品及控制品是含有一定量的糖化血紅蛋白抗原的溶液。所述濃縮液是含有TWEEN-20和ftx)clin-300的緩沖液。所述的底物為酶促化學(xué)發(fā)光底物。本發(fā)明糖化血紅蛋白的定量檢測試劑盒的制備方法，包括下述步驟第一步磁分離試劑的制備步驟1、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；2、用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中， 置室溫90min ；3、將步驟2獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取
上清；5、每次加入1. 5ml PH9. 50. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟3獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分鐘；7、每次加入1. 5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，去
上清，重復(fù)操作3次；8、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方(質(zhì)量體積比) 為 0. 1% BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20% 乙醇，4°C保存。9、將步驟8獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得本發(fā)明試劑盒中磁分離試劑；所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。第二步酶標(biāo)抗體制備步驟1、2. 5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml 的10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2、將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0. 15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液；然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將收集到的辣根過氧化物酶與糖化血紅蛋白單克隆抗體的偶聯(lián)物用酶標(biāo)抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體稀釋液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。第三步增強(qiáng)劑配制步驟1、稱取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin-300量取0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解調(diào)PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之間；3、稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾
器過濾ο第四步校準(zhǔn)品和控制品的配制校準(zhǔn)品濃度分別為50、100、200、400、800ng/ml ；控制品濃度分別為100、400ng/ ml ο第五步清洗濃縮液配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；2、稱取5g Tween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容
器中；3、用移液器將Proclin-300量取0. 2ml于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后， 倒入上述IL容器中；4、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解?、調(diào)PH，控制其范圍在7. 35-7. 45之間；6、最后定容1000ml，完全溶解后用0. 2um濾器過濾即得。第六步底物配制步驟，配制IL 1、稱取 TRIS 2. 35g、NaCl 6. 41g, Na2SO3 0. 002g 禾口 Proclin-3000. 2ml 于 IL 燒杯中；2、用量筒量取600ml純化水于IL燒杯中，充分?jǐn)嚢瑁敝镣耆芙?，調(diào)PH，控制其范圍在7. 95-8. 05之間；3、加入250ml Lumi-Phos 530后，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。本發(fā)明的主要創(chuàng)新之處在于本發(fā)明II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)可以簡單有效地檢測糖尿病患者的糖化血紅蛋白指標(biāo)，從而監(jiān)測病人的恢復(fù)情況，以及調(diào)節(jié)用藥。本發(fā)明監(jiān)測管理系統(tǒng)所用的試劑盒將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的反應(yīng)體系，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明試劑盒制備工藝簡單可行、具有更高的檢測靈敏度和特異性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定有效，并達(dá)到了較佳的性能參數(shù)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、一、磁分離試劑的制備步驟1、將1. Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取^iig糖化血紅蛋白單克隆抗體(Santa Cruz公司產(chǎn)品)溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；
2、用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中， 置室溫90min ；3、將步驟2的溶液加入到Centricon-10濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮30min至體積為0. 5ml ；4、取0. 5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取
上清；磁珠為本領(lǐng)域常用磁珠，優(yōu)選濃度25mg/mL，直徑為800nm。5、每次加入1. 5ml PH9. 50. lmol/L PB,混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟3獲得的抗體溶液加入到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6、加入 0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37V 15 分鐘；7、每次加入1. 5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，去
上清，重復(fù)操作3次；8、用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方(均為質(zhì)量體積比)為 0. BSA，0.05%吐溫-20，0.02% NaN3，20% 乙醇，4°C保存。9、將步驟8獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得本發(fā)明試劑盒中磁分離試劑；所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。實(shí)施例2一、酶標(biāo)抗體的制備步驟1、2. 5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml 的10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2、將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0. 15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液；然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將收集到的辣根過氧化物酶與糖化血紅蛋白單克隆抗體的偶聯(lián)物用酶標(biāo)抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體稀釋液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液。實(shí)施例3增強(qiáng)劑配制步驟1、稱取TRIS1. 56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin-300量取 0. 2ml于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2、用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解調(diào)PH，控制 PH 在 7. 35-7. 45 之間；3、稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾。Mak33是羅氏公司的商品化的試劑。實(shí)施例4校準(zhǔn)品和控制品的配制步驟1、最高點(diǎn)最高濃度點(diǎn)為X，目標(biāo)點(diǎn)濃度為A，B，C，D，E，F(xiàn)，配制V體積的溶液時，需加入原料的體積為分別為
權(quán)利要求
1. 一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，其特征在于，所述監(jiān)測管理系統(tǒng)包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置；所述取血裝置為靜脈留置針或采血筆；所述糖化血紅蛋白檢測裝置為糖化血紅蛋白檢測試劑盒，所述試劑盒包括糖化血紅蛋白磁分離試劑，酶標(biāo)抗體，增強(qiáng)劑，校準(zhǔn)品、控制品，濃縮液以及底物；所述試劑盒按照如下步驟制備第一步磁分離試劑的制備步驟1)將1.Omg辛二酸二琥珀酰亞胺酯溶于50ul DMSO中，取^iig抗糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于PH 9. 5的0. lmol/L PB緩沖液中至總體積為Iml ；2)用移液槍吸取步驟1中的辛二酸二琥珀酰亞胺酯加入到步驟1的抗體溶液中，置室溫 90min ；3)將步驟2獲得的溶液加入到濃縮管中然后放入到高速冷凍離心機(jī)中在3000g下濃縮 30min至體積為0. 5ml ；4)取0.5ml磁珠，加入5ml反應(yīng)杯中，放入試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；5)加入步驟3獲得的溶液到上述磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時；6)加入0. 3ml lmol/L 的 TRIS 溶液 37°C 15 分鐘；7)加入1.5ml PH 7. 20. lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架，去上清；8)用IOOml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶；磁珠保存液配方為0.1 % BSA, 0. 05%吐溫-20，0. 02% NaN3，20% 乙醇；9)將步驟8獲得的溶液用磁珠緩沖液按照1 1的體積比例混勻，即得磁分離試劑； 所述磁珠緩沖液為濃度是lmol/L的TRIS-HCl緩沖液；第二步酶標(biāo)抗體制備步驟1)2.5mg糖化血紅蛋白單克隆抗體溶于1.0ml的N，N-二甲基甲酰胺中，加入Iml的 10mg/ml辣根過氧化物酶水溶液和1. 3mg碳化二亞胺，1小時后將1. 0ml 20mg/ml的碳化二亞胺加入，混合物不斷攪拌，4°C過夜；2)將步驟1的溶液裝入透析袋中，對0.15M的PH7. 4PBS透析，4°C過夜，收集保留液； 然后加入IOml濃度為15mg/ml的BSA溶液，4°C儲存?zhèn)溆?；最后將上述溶液用酶?biāo)抗體稀釋液以1 1000的體積比混合均勻，即得酶標(biāo)抗體；所述酶標(biāo)抗體稀釋液為濃度是lmol/L的 TRIS-HCl緩沖液；第三步增強(qiáng)劑配制步驟1)稱取TRIS1.56g和NaCl 4. 23g于IL容器中；用移液器將Proclin_300量取0. 2ml 于IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；2)用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解，調(diào)PH在 7. 35-7. 45 之間；3)稱取Mak330.9g于上述IL容器中；最后定容1000ml，完全溶解后，用0. 2um濾器過濾；第四步校準(zhǔn)品和控制品的配制將糖化血紅蛋白抗原配成濃度分別為50、100、200、400、800ng/ml的校準(zhǔn)品；將糖化血紅蛋白抗原配成濃度分別為100、400ng/ml的控制品；第五步濃縮液配制步驟，配制IL :1)稱取TRIS 12. 54g 和 NaCl 325. 6g 于 IL 容器中；2)稱取5gTween-20于IOOml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述IL容器中；3)用移液器將ftx)Clin-300量取0.2ml于盛有IOml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上述IL容器中；4)用量筒量取800ml純化水于上述IL容器中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解?)調(diào)PH，控制其范圍在7.35-7. 45之間；6)最后定容1000ml，完全溶解后用0.2um濾器過濾即得； 第六步底物配制步驟，配制IL :1)稱取TRIS 2. 35g、NaCl 6. 41g、Na2SO3 0. 002g 和 Proclin-3000. 2ml 于 IL 燒杯中；2)用量筒量取600ml純化水于IL燒杯中，充分?jǐn)嚢?，直至完全溶解，調(diào)PH，控制其范圍在 7. 95-8. 05 之間；3)加入250mlLumi-Phos 530后，用0. 2um濾器過濾收集濾液，用純化水定容至 1000ml，混勻后即得。
2.如權(quán)利要求1所述的監(jiān)測管理系統(tǒng)在指導(dǎo)病人用藥中的用途。
3.如權(quán)利要求1所述監(jiān)測管理系統(tǒng)的使用方法，其特征在于，1)采用取血裝置對病人取血獲得檢測樣本；2)加15μ 1糖化血紅蛋白校準(zhǔn)品、控制品、檢測樣本至對應(yīng)試管底部；3)加30μ 1酶標(biāo)抗體、30 μ 1增強(qiáng)劑以及30 μ 1磁分離試劑至每一試管中；4)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；5)試管連架放至磁分離器上，沉淀2分鐘，然后緩慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液；6)濃縮液用純化水稀釋20倍后，加200μ1稀釋后的濃縮液至每一試管中，置多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s ；7)加200μ1底物至試管中混勻3秒，迅速用準(zhǔn)備好的發(fā)光檢測儀進(jìn)行檢測。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，尤其涉及一種II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)，所述監(jiān)測管理系統(tǒng)包括取血裝置和糖化血紅蛋白檢測裝置。本發(fā)明還公開了該監(jiān)測管理系統(tǒng)的制備方法。本發(fā)明II型糖尿病臨床病例監(jiān)測管理系統(tǒng)可以簡單有效地檢測糖尿病患者的糖化血紅蛋白指標(biāo)，從而監(jiān)測病人的恢復(fù)情況，以及調(diào)節(jié)用藥。
文檔編號G01N33/72GK102495217SQ201110399730
公開日2012年6月13日 申請日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者謝文茹 申請人:謝文茹