專利名稱：一種檢測普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的檢測方法，屬于食品分析領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
普洱茶原產(chǎn)地主要在云南的思茅地區(qū)和西雙版納。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們保健意識(shí)的增強(qiáng)，普洱茶因其滋味醇厚回甘，陳香獨(dú)特的優(yōu)良品質(zhì)和其對(duì)人體的特殊保健功效起全社會(huì)的關(guān)注和重視，產(chǎn)品深受消費(fèi)者的青睞?！がF(xiàn)代研究表明茶葉降脂、減肥、降糖等保健功能是多種成分綜合作用的結(jié)果，其中起主要作用的有兩大類物質(zhì)，一類是多酚類化合物(簡稱茶多酚)，另一類是脂多糖類化合物(簡稱茶多糖)。試驗(yàn)研究標(biāo)明，普洱茶中茶多糖的保健作用可能更顯著。吳文華等研究普洱茶多糖降血脂功能量效關(guān)系結(jié)果表明，與高脂對(duì)照組比較，低劑量茶多糖組(3組)小鼠血清甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平及Al值沒有顯著差異。而中、高劑量組(4、5組)小鼠血清TG、TC、LDL-C水平分別下降了 40. 60%,25. 36%,24. 38% ；40. 02%,26. 68%,33. 59%。同時(shí)，HDL-C 水平分別提高了73.44%、82.81%。但中、高2個(gè)劑量組之間沒有明顯差異。表明茶多糖抑制高脂飲食小鼠血脂升高可能存在量效關(guān)系。吳文華等(2007年)研究了普洱茶中茶多糖和茶多酚降血脂功能比較。結(jié)果顯示與高脂對(duì)照組相比，茶多糖組(3組)小鼠血清TG、TC、LDL-C水平分別下降了 40. 60%,25. 36%、24. 38%，同時(shí)HDL-C水平上升了 73. 44%。而茶多酚組(4組)小鼠血脂以上各項(xiàng)指標(biāo)均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表明普洱茶中茶多糖抑制高脂飲食小鼠血脂升高的作用大于茶多酚。茶多糖還有顯著的降低血糖保健功能。倪德江等研究表明不同茶類多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)型糖尿病小鼠均有極顯著的降低血糖作用。在低、中劑量下，烏龍茶、紅茶、黑茶、白茶中茶多糖降低血糖的作用明顯優(yōu)于綠茶茶多糖。日本學(xué)者清水岑夫也揭示了茶葉中降血糖的有效成分是水溶性的組分復(fù)合多糖，即茶多糖。由于普洱茶中茶多糖具有良好的保健功效，因此準(zhǔn)確測定茶多糖含量對(duì)選擇原料和評(píng)價(jià)提取、純化工藝非常重要，但卻一直困擾著茶多糖的測定。目前，國內(nèi)外快速測定多糖含量主要是用蒽酮-硫酸法或苯酚-硫酸法。由于普洱茶中含有大量茶紅素、茶褐素、茶黃素等色素物質(zhì)，對(duì)茶多糖檢測中的顯色反應(yīng)會(huì)造成很大干擾，造成檢測結(jié)果偏高，無法準(zhǔn)確得到茶多糖含量。因此，為準(zhǔn)確測定普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的含量，盡量減少其他物質(zhì)的干擾，本發(fā)明提供了一種快速檢測普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖含量的檢測方法，該方法可準(zhǔn)確測定茶多糖的含量克服了現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種檢測普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的檢測方法。
本發(fā)明的檢測方法采用紫外分光光度法。本發(fā)明所述檢測方法，采用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照，配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用紫外分光光度儀器測定并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明所述檢測方法，包括將普洱茶或普洱茶提取物進(jìn)行處理得到檢測液，用紫外分光光度儀器進(jìn)行檢測，得到吸光度數(shù)據(jù)。
本發(fā)明所述檢測方法，包括對(duì)所得吸光度數(shù)據(jù)用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行核定計(jì)算，得到茶
多糖含量。因此，本發(fā)明的檢測方法，包括以下步驟步驟1，配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照；步驟2，將普洱茶或普洱茶提取物樣品經(jīng)醇沉、酸水解和聚酰胺柱分離，配制成檢測液；從而分離茶多糖和色素，使多糖含量的測定結(jié)果更準(zhǔn)確。步驟3，用紫外分光光度法測定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和檢測液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.
-^4 ，步驟4，計(jì)算普洱茶或普洱茶提取物樣品中茶多糖含量。其中，步驟I中的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為D-無水葡萄糖；步驟I中的配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液包括以下步驟取D-無水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定(精確至O. OOlg)，加水溶解并稀釋制成每Iml中含O. 2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。步驟2中的將普洱茶樣品配制成檢測液包括以下步驟取普洱茶2g，置250ml燒瓶中，分別加入10-30ml (優(yōu)選20ml)沸水浸提2_4次(優(yōu)選3次)，每次5-20min (優(yōu)選lOmin)，合并濾液。加乙醇調(diào)整至乙醇含量60-90% (優(yōu)選80%);過濾，用熱濃度為60-90% (優(yōu)選80%)乙醇洗滌濾渣2-4次(優(yōu)選3次)，20-40ml/次(優(yōu)選30ml/次)，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加20-80ml (優(yōu)選50ml)水，力口熱回流0.5-1. 5h (優(yōu)選Ih)，趁熱過濾，用60-100°C熱水洗滌，合并濾液，定容至100ml。精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為O. 2-1. Omol/L (優(yōu)選O. 5mol/L)，在30-70°C (優(yōu)選40°C )下水解15-60min (優(yōu)選30min)，冷卻后調(diào)pH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱(15CmX2Cm)中，用60-100°C (優(yōu)選70_90°C )熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。步驟2中的將普洱茶提取物樣品配制成檢測液包括以下步驟取普洱茶提取物lg，置250ml燒瓶中，加60-90% (優(yōu)選80%)乙醇20_80ml (優(yōu)選50ml), 80-95 0C (優(yōu)選95°C )水浴回流15_60min (優(yōu)選30min)，趁熱濾過，用熱60-90% (優(yōu)選80%)乙醇洗滌2-4次(優(yōu)選3次)，20-40ml/次(優(yōu)選30ml/次)，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加20-80ml (優(yōu)選50ml)水，加熱回流O. 5-1. 5h (優(yōu)選Ih)，趁熱過濾，用熱水洗滌，合并濾液，定容至100ml。精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為 O. 2-1. Omol/L (優(yōu)選 0. 5mol/L)，在 30-70°C (優(yōu)選 40°C )下水解 15_60min (優(yōu)選30min)，冷卻后調(diào)pH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱(15cmX2cm)中，用60-100°C (優(yōu)選70-90°C)熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。其中，步驟3中用紫外分光光度法測定包括以下步驟，將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液溶液和檢測液分別加入5%的苯酚溶液I. 0ml，振搖混勻，加5. Oml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第I管為空白，照中國藥典2005年版一部附錄VB紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度。其中，步驟3中標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制包括以下步驟分別精密吸取對(duì)照品溶液O. 0,0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5ml分別置IOml具塞試管中，分別加二純水至I. 0ml，各精密加入5%的苯酚溶液(稱取2. 5g重蒸酚，加水溶解并稀釋至50ml,搖勻，即得。)I. Oml,振搖混勻,加5. Oml硫酸,用微型鏇潤混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第I管為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄VB)，在487nm波長處測定吸光度(在I小時(shí)內(nèi)測定完 畢)。以吸光度⑴和質(zhì)量⑴作標(biāo)準(zhǔn)曲線。本發(fā)明所述的普洱茶為任何一種市場上可以購買的普洱茶及其制品，如茶餅，塊茶，液體茶飲料，速溶茶等。本發(fā)明所述的普洱茶提取物為任何一種通過現(xiàn)有技術(shù)或新技術(shù)對(duì)普洱茶進(jìn)行提取分離得到的普洱茶提取物，如制備速溶茶的原料，制備液體茶飲料的原料，制備含有普洱茶成分的食品，藥品，保健品的原料等。有關(guān)方法包括方法1，取普洱茶，加水劇烈沸騰煎煮提取1-5次，煎煮時(shí)間0.5-5小時(shí)，加水總倍數(shù)5-50倍，提取液40-300目過濾，濾液自然或換熱降溫至30-55°C，10-30萬分子量膜過濾，得膜過濾液和膜截留液；將膜截留液濃縮至固含量為5-30%的濃縮液，濃縮液一次離心，一次離心液二次離心，將膜過濾液和二次離心液單獨(dú)或合并濃縮至比重I. 01-1. 4/55-65°C，濃縮膏干燥。方法2，取普洱茶，灌組逆流循環(huán)提取，每組由2-5罐組成；每罐沸騰煎煮提取3-8次，每次加水3-10倍，每次提取時(shí)間O. 5-1. 5h ;每罐的第一次提取液進(jìn)入儲(chǔ)液罐，每罐的后續(xù)提取液依次作為下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后進(jìn)入循環(huán)，開始新的提取，提取液40-300目過濾，濾液濃縮至茶葉(重量)濃縮液(體積)=I O. 5-10，濃縮液一次離心，一次離心液再經(jīng)過二次離心，二次離心液濃縮至比重I. 01-1. 4/55-65°C，濃縮骨干燥。方法3，取普洱茶，灌組逆流循環(huán)提取，每組由2-5罐組成；每罐沸騰煎煮提取3-8次，每次加水3-10倍，每次提取時(shí)間O. 5-1. 5h ;每罐的第一次提取液進(jìn)入儲(chǔ)液罐，每罐的后續(xù)提取液依次作為下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后進(jìn)入循環(huán)，開始新的提取，提取液過濾提取液60-300目過濾，濾液自然或換熱降溫至30-55 °C，10-30萬分子量膜過濾，得膜過濾液和膜截留液；將膜截留液濃縮至固含量為5-30%的濃縮液，濃縮液一次離心，一次離心液二次離心，將膜過濾液和二次離心液單獨(dú)或合并濃縮至比重I. 01-1. 4/55-65°C，濃縮膏干燥。方法4，取普洱茶，灌組逆流循環(huán)提取，每組由2-5罐組成；每罐沸騰煎煮提取3-8次，每次加水3-10倍，每次提取時(shí)間O. 5-1. 5h ;每罐的第一次提取液進(jìn)入儲(chǔ)液罐，每罐的后續(xù)提取液依次作為下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后進(jìn)入循環(huán)，開始新的提取，提取液40-300目過濾，濾液濃縮至茶葉(重量)濃縮液(體積)=1 2-1 10，濃縮液4-7°C下靜置8-16小時(shí)，上清液用紙漿板或?yàn)V紙壓濾或?yàn)V芯過濾，濾液濃縮至比重I. 01-1. 4/55-65°C，濃縮膏干燥。 方法5，取普洱茶超微粉碎粉，加水于75_98°C浸提1_4次，加水倍數(shù)8_30倍，浸提時(shí)間1-3小時(shí)；提取和放料過程中連續(xù)攪拌，每次的提取漿料用離心機(jī)離心，合并離心液，離心液自然或換熱降溫至30-55°C，10-30萬分子量膜過濾，得膜過濾液和膜截留液；將膜截留液濃縮至固含量為5-30%的濃縮液，濃縮液一次離心，一次離心液二次離心，將膜過濾液和二次離心液單獨(dú)或合并濃縮至比重I. 01-1. 4/55-65°C，濃縮膏干燥。本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明采用酸水解和聚酰胺柱分離兩個(gè)步驟改進(jìn)了普洱茶和普洱茶提取物樣品的制備方法，有效地分離了對(duì)測定結(jié)果產(chǎn)生干擾的茶色素等物質(zhì)，實(shí)現(xiàn)了準(zhǔn)確的多糖含量測定。采用本法(水解過柱法)測定數(shù)據(jù)與直接采用苯酚-硫酸法(醇沉后直接顯色法不含樣品酸水解和聚酰胺柱分離步驟，其余操作均與本發(fā)明操作相同，取樣品醇沉后加熱回流的定容液進(jìn)行測定)測定數(shù)據(jù)比較見表I。數(shù)據(jù)表明，直接采用苯酚-硫酸法檢測由于有茶色素的干擾造成結(jié)果偏高；采用本法檢測有效去除了茶色素等物質(zhì)的干擾，結(jié)果較準(zhǔn)確。

表I :苯酚-硫酸法檢測普洱茶中茶多糖含量
權(quán)利要求
1.一種普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 步驟I，配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液作為對(duì)照； 步驟2，將普洱茶或普洱茶提取物樣品經(jīng)醇沉、酸水解和聚酰胺柱分離，配制成檢測液； 步驟3，用紫外分光光度法測定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和檢測液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 步驟4，計(jì)算普洱茶或普洱茶提取物樣品中茶多糖含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，步驟I中的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為D-無水葡萄糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，步驟I中的配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液包括以下步驟取D-無水葡萄糖對(duì)照品，加水溶解并稀釋制成每Iml中含O. 2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，步驟2中的將普洱茶樣品配制成檢測液，包括以下步驟取普洱茶2g，置250ml燒瓶中，分別加入10-30ml沸水浸提2_4次，每次5-20min，合并濾液；加乙醇調(diào)整至乙醇含量60-90% ;過濾，用熱濃度為60-90%乙醇洗滌濾渣2-4次，20-40ml/次，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加20_80ml水，加熱回流O. 5-1. 5h，趁熱過濾，用60-10(TC熱水洗滌，合并濾液，定容至IOOml ;精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為O. 2-1. Omol/L，在30-70°C下水解15_60min，冷卻后調(diào)PH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱中，用60-100°C熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液； 或取普洱茶提取物lg，置250ml燒瓶中，加60-90%乙醇20-80ml，80_95°C水浴回流15-60min，趁熱濾過，用熱60-90%乙醇洗滌2_4次，20_40ml/次，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加20-80ml水，加熱回流O. 5-1. 5h，趁熱過濾，用熱水洗滌，合并濾液，定容至IOOml ;精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為O. 2-1. Omol/L,在30-70°C下水解15-60min，冷卻后調(diào)pH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱中，用60-100°C熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的檢測方法，其特征在于，其中，步驟2中的將普洱茶提取物樣品配制成檢測液，包括以下步驟取普洱茶2g，置250ml燒瓶中，分別加入20ml沸水浸提3次，每次lOmin，合并濾液；加乙醇調(diào)整至乙醇含量80%;過濾，用熱濃度為80%乙醇洗滌濾渣3次，30ml/次，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加50ml水，加熱回流lh，趁熱過濾，用60-10(TC熱水洗滌，合并濾液，定容至IOOml ;精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為0. 5mol/L，在40°C下水解30min，冷卻后調(diào)pH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱(15cmX2cm)中，用70_90°C熱水洗脫,收集濾液,定容至100ml,作為供試品溶液； 或取普洱茶提取物lg，置250ml燒瓶中，優(yōu)選80%乙醇50ml，95°C水浴回流30min，趁熱濾過，用熱80%乙醇洗滌3次，30ml/次，揮干溶劑，濾紙連同濾渣一起置燒瓶中，加50ml水，加熱回流lh，趁熱過濾，用熱水洗滌，合并濾液，定容至IOOml ;精密吸取5ml提取溶液，加入鹽酸溶液，混合液中鹽酸的濃度為0. 5mol/L，在40°C下水解30min，冷卻后調(diào)pH至中性；將酸水解后的多糖提取液置聚酰胺層析柱(15CmX2Cm)中，用70_90°C熱水洗脫，收集濾液，定容至100ml，作為供試品溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，步驟3中用紫外分光光度法測定包括以下步驟，將葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和檢測液分別加入5%的苯酚溶液I. Oml，振搖混勻，力口5.Oml硫酸，用微型漩渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第I管為空白，照中國藥典2005年版一部附錄VB紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度。
7.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，步驟3中標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制包括以下步驟分別精密吸取對(duì)照品溶液O. 0,0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5ml分別置IOml具塞試管中，分別加二純水至I. Oml,各精密加入5%的苯酹溶液I. Oml,振搖混勻,加5. Oml硫酸,用微型鏇渦混合儀迅速振搖混勻，室溫下放置30分鐘，以第I管為空白，照中國藥典2005年版一部附錄VB紫外-可見分光光度法，在487nm波長處測定吸光度，以吸光度和質(zhì)量作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
8.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，所述的普洱茶為任何一種市場上可以購買的普洱茶及其制品，如茶餅，塊茶，液體茶飲料，速溶茶。
9.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中，所述的普洱茶提取物為任何一種通過現(xiàn)有技術(shù)或新技術(shù)對(duì)普洱茶進(jìn)行提取分離得到的普洱茶提取物，如制備速溶茶的原料，制備液體茶飲料的原料，制備含有普洱茶成分的食品，藥品，保健品的原料。
10.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，用紫外分光光度法測定在I小時(shí)內(nèi)測定完畢。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種普洱茶或普洱茶提取物中茶多糖的檢測方法，屬于食品分析領(lǐng)域，本發(fā)明的檢測方法，包括以下步驟步驟1，配制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液溶液；步驟2，將普洱茶或普洱茶提取物樣品配制成檢測液；步驟3，用紫外分光光度法測定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液和檢測液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；步驟4，計(jì)算普洱茶或普洱茶提取物樣品中茶多糖含量。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102954943SQ20111023625
公開日2013年3月6日 申請日期2011年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月16日
發(fā)明者徐詠全, 李麗維, 李長文 申請人:云南天士力帝泊洱生物茶集團(tuán)有限公司