專利名稱：一種快速判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的鑒定方法
一種快速判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材及飲片真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒定領(lǐng)域，尤其是使用特定技術(shù)檢測(cè)特征化學(xué)成分判定中藥材及飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的鑒別方法。
背景技術(shù)：
硫磺熏蒸作為一種傳統(tǒng)的中藥材養(yǎng)護(hù)方法，具有增白、防蟲(chóng)、防腐和防霉變等作用，在中藥材及飲片的加工貯藏過(guò)程中應(yīng)用普遍。然而近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，中藥材及飲片經(jīng)硫磺熏蒸后會(huì)殘留毒性二氧化硫，且固有生物活性成分會(huì)發(fā)生量或質(zhì)的改變，造成藥材和飲片質(zhì)量改變，藥理功效下降，甚至毒性增大。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局在2004年已將硫磺熏蒸后的藥材視為劣藥。2005年版《中國(guó)藥典》(一部)取消了山藥、葛根等中藥材的硫熏工藝。在2010版《中國(guó)藥典》附錄中增加了二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法。這表明，國(guó)家對(duì)于中藥材及飲片的加工貯藏已不再允許使用硫磺熏蒸的方法。白芍是一種臨床常用中藥材，部分不法商販為降低生產(chǎn)成本，達(dá)到增白、防蟲(chóng)、防腐和防霉變的目的，在白芍藥材初加工時(shí)，仍會(huì)采用硫磺熏蒸的方法。因此，建立白芍是否為硫磺熏蒸品的檢測(cè)方法不但是確保白芍療效和臨床用藥安全的需要，也是打擊不法商販的重要技術(shù)手段。目前人們判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的方法主要靠觀察外觀顏色，品嘗氣味，主觀性強(qiáng)，缺乏客觀依據(jù)。2010版《中國(guó)藥典》附錄IXU 二氧化硫殘留量測(cè)定法中采用滴定法測(cè)定，靈敏度低，樣品取樣數(shù)量也較大(10克)。另外，白芍藥材經(jīng)硫磺熏蒸后，隨著存放時(shí)間的延長(zhǎng)，氣體揮散后有可能檢測(cè)不到二氧化硫成分，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。有人發(fā)現(xiàn)白芍經(jīng)硫磺熏蒸后，其主要成分之一芍藥苷會(huì)部分轉(zhuǎn)化為芍藥苷硫化物，因此應(yīng)用芍藥苷硫化物做對(duì)照品，建立色譜分析方法判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸。曾有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)到硫磺熏蒸白芍中芍藥苷硫化物，但在沒(méi)有芍藥苷硫化物做對(duì)照品的情況下，方法的專屬性不強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是運(yùn)用現(xiàn)代分析檢測(cè)技術(shù)，使用特定的檢測(cè)方法，判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸。本發(fā)明基本原理我們對(duì)經(jīng)硫磺熏蒸前后的白芍樣品進(jìn)行對(duì)比研究發(fā)現(xiàn)，白芍經(jīng)硫磺熏蒸后，其主要成分之一芍藥苷會(huì)部分轉(zhuǎn)化為芍藥苷硫化物。對(duì)芍藥苷和芍藥苷硫化物兩個(gè)化合物進(jìn)行質(zhì)譜研究發(fā)現(xiàn)，芍藥苷會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)特征碎片離子m/z449. 4和m/z327. 2，而芍藥苷硫化物除產(chǎn)生分子離子m/z543. 3外，還有特征碎片離子m/z259. 3，見(jiàn)圖1。利用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用的多反應(yīng)離子檢測(cè)模式掃描兩組多反應(yīng)離子m/z449. 4 —m/z327. 2和m/z543. 3 — m/z259. 3，不但可從非硫熏白芍樣品中快速檢測(cè)芍藥苷，而且可以在硫熏白芍樣品中快速檢測(cè)芍藥苷和芍藥苷硫化物，且靈敏度高。另外，芍藥苷硫化物在反相液相色譜上表現(xiàn)出比芍藥苷更短的保留時(shí)間，見(jiàn)圖2。本發(fā)明即是通過(guò)測(cè)定兩組多反應(yīng)離子m/z449. 4 — m/z327. 2和m/z543. 3 — m/ z259. 3色譜峰的存在及順序，判定白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸。本發(fā)明技術(shù)方案采用50%甲醇超聲波提取白芍樣品，提取液用聚四氟乙烯微孔濾膜過(guò)濾，濾液采用反相液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)測(cè)定，記錄色譜圖和質(zhì)譜圖，其特征為 通過(guò)觀察白芍樣品色譜圖中是否按順序存在兩組多反應(yīng)離子m/z449. 4 — m/z327. 2和 m/z543. 3 — m/z259. 3的色譜峰來(lái)判斷白芍是否采用硫磺熏蒸。如按如下順序存在反應(yīng)離子為m/z543. 3 — m/z259. 3和m/z449. 4 — m/z327. 2的色譜峰，說(shuō)明該白芍樣品已經(jīng)硫磺熏蒸；如僅出現(xiàn)離子反應(yīng)為m/z449. 4 — m/z327. 2的色譜峰，未出現(xiàn)離子反應(yīng)為m/ z543. 3 — m/z259. 3的色譜峰，則可判斷該白芍未經(jīng)硫磺熏蒸。本發(fā)明與現(xiàn)有的判斷白芍藥材是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的二氧化硫殘留檢測(cè)方法相比較，具有取樣量小(可小至ang)、樣品處理簡(jiǎn)單和結(jié)果準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。亦有文獻(xiàn)報(bào)道的色譜法檢測(cè)芍藥苷硫化物相比，利用多反應(yīng)離子檢測(cè)掃描模式m/z449. 4 — m/z327. 2和m/ z543. 3 — m/z259. 3同時(shí)檢測(cè)芍藥苷和芍藥苷硫化物，結(jié)合出峰順序，不但方法的靈敏度高，而且專屬性強(qiáng)，無(wú)需不易得到的芍藥苷硫化物對(duì)照品即可進(jìn)行分析判斷。

圖1芍藥苷及芍藥苷硫化物質(zhì)譜圖其中A為芍藥苷；B為芍藥苷硫化物圖2硫磺熏蒸前后白芍樣品HPLC-ESI (_)_MS色譜圖其中A為未經(jīng)硫磺熏蒸白芍樣品；B為硫磺熏蒸白芍樣品，1為芍藥苷硫化物色譜峰，2為芍藥苷色譜峰圖3實(shí)施例1中硫磺熏蒸前后白芍樣品HPLC-ESI㈠-MS色譜圖，其中A為未經(jīng)硫磺熏蒸白芍樣品；B為硫磺熏蒸白芍樣品，1為芍藥苷硫化物色譜峰，2為芍藥苷色譜峰圖4實(shí)施例2中硫磺熏蒸前后白芍樣品HPLC-ESI (-) -MS色譜圖其中A為未經(jīng)硫磺熏蒸白芍樣品；B為硫磺熏蒸白芍樣品，1為芍藥苷硫化物色譜峰，2為芍藥苷色譜峰圖5實(shí)施例3中硫磺熏蒸前后白芍樣品HPLC-ESI (-) -MS色譜圖其中A為未經(jīng)硫磺熏蒸白芍樣品；B為硫磺熏蒸白芍樣品，1為芍藥苷硫化物色譜峰，2為芍藥苷色譜峰
具體實(shí)施方式實(shí)施例一1.色譜系統(tǒng)Waters 2695 HPLC-PDA 系統(tǒng)。色譜柱Waters Nova-Pak C18 柱(3. 9X 150mm， 5μπι)。流動(dòng)相組成為0.1%甲酸水與0.1%甲酸甲醇。梯度洗脫見(jiàn)表1。洗脫流速為 1. OmL/min。柱溫箱及樣品室溫度分別為35V及10°C。樣品進(jìn)樣量均為20 μ L。表1梯度洗脫表
權(quán)利要求
1.一種快速判斷白芍是否經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸的鑒定方法，采用50%甲醇超聲波提取白芍樣品，提取液用聚四氟乙烯微孔濾膜過(guò)濾，濾液采用反相液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)的多反應(yīng)離子檢測(cè)模式掃描兩組多反應(yīng)離子m/z449. 4 — m/z327. 2和m/ z543. 3 — m/z259. 3，記錄色譜圖，其特征為通過(guò)觀察白芍樣品色譜圖中是否按前后順序存在多反應(yīng)離子m/z449. 4 —m/z327. 2和m/z543. 3 — m/z259. 3的兩個(gè)色譜峰來(lái)判斷白芍是否采用硫磺熏蒸。
2.如權(quán)利要求1所述的一種快速判斷白芍是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜方法的色譜柱填料為碳十八或碳八鍵合硅膠。
3.如權(quán)利要求1所述的一種快速判斷白芍是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動(dòng)相為水相與乙腈有機(jī)相，或水相與甲醇有機(jī)相。
4.如權(quán)利要求3所述的一種快速判斷白芍是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動(dòng)相中含有0-1 %的甲酸或乙酸。
5.如權(quán)利要求3所述的一種快速判斷白芍是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動(dòng)相水相和有機(jī)相進(jìn)行梯度洗脫，方法為水相的變化范圍為90% -10%。
6.如權(quán)利要求1所述的一種快速判斷白芍是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為電噴霧離子化，檢測(cè)模式為多反應(yīng)離子檢測(cè)，離子極性為負(fù)離子。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥材及飲片真?zhèn)蝺?yōu)劣鑒定領(lǐng)域，尤其是使用特定分析方法檢測(cè)特征化學(xué)成分判定中藥材及飲片質(zhì)量?jī)?yōu)劣的鑒別方法。硫磺熏蒸白芍的不法行為時(shí)有發(fā)生，急需快速的鑒定方法。本發(fā)明基于白芍經(jīng)過(guò)硫磺熏蒸后芍藥苷轉(zhuǎn)化為芍藥苷硫化物，采用50％甲醇超聲波提取白芍樣品，采用反相液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)觀察白芍樣品色譜圖中是否按順序存在兩組多反應(yīng)離子m/z449.4→m/z327.2和m/z543.3→m/z259.3的色譜峰來(lái)判斷白芍是否采用硫磺熏蒸。如按如下順序存在反應(yīng)離子為m/z543.3→m/z259.3和m/z449.4→m/z327.2的色譜峰，說(shuō)明該白芍樣品已經(jīng)硫磺熏蒸，如僅出現(xiàn)離子反應(yīng)為m/z449.4→m/z327.2的色譜峰，未出現(xiàn)離子反應(yīng)為m/z543.3→m/z259.3的色譜峰，則可判斷該白芍未經(jīng)硫磺熏蒸。本發(fā)明具有取樣量小(可低至2mg)、靈敏度高、專屬性強(qiáng)、且無(wú)需使用不易得到的芍藥苷硫化物做對(duì)照品的突出優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/60GK102288713SQ20111021507
公開(kāi)日2011年12月21日 申請(qǐng)日期2011年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月29日
發(fā)明者朱玲英, 李松林, 武潔, 沈紅, 蔡皓, 賈曉斌 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)藥研究院