專利名稱：一種檢測安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種用于檢測甘草提取物膠囊、 優(yōu)選安胃瘍膠囊的內(nèi)容物中總黃酮含量的方法。
背景技術(shù)：
安胃瘍膠囊具有補(bǔ)中益氣，解毒生肌，抑制胃液分泌，修復(fù)和保護(hù)胃粘膜的功效。 適用于胃及十二指腸球部潰瘍，對虛寒型和氣滯型患者療效較好。亦可用于潰瘍愈合后的維持治療。該膠囊的內(nèi)容物為甘草提取物一安胃瘍(原料藥)經(jīng)5%淀粉漿制粒、干燥、 總混、灌裝及包裝而得，其主要活性成分為甘草黃酮，因此對該甘草提取物的總黃酮進(jìn)行檢測具有重要意義。安胃瘍膠囊現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)編號為WS3-002-(Z-002)-98-(Z)，其中規(guī)定其總黃酮含量測定的方法為重量法，由于重量法操作誤差較大，受人為因素的影響較大，故重現(xiàn)性較差。隨著時(shí)間的推移與科學(xué)技術(shù)的日新月異，安胃瘍膠囊的檢測標(biāo)準(zhǔn)已跟不上發(fā)展的形勢，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制與產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，工藝水平和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也有待提高。因此，目前需要提供一種簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好的檢測安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法。

發(fā)明內(nèi)容
作為安胃瘍膠囊內(nèi)容物的甘草提取物一安胃瘍(原料藥)，主要成份為甘草黃酮，以二氫黃酮類(如甘草苷)和查爾酮類化合物為主，并且二氫黃酮類易在堿液中開環(huán)， 轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的異構(gòu)體——查爾酮類化合物。因此，如果在堿性條件下測定安胃瘍膠囊中甘草黃酮的含量，就能夠近似代表安胃瘍膠囊中總黃酮的含量。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，查爾酮類化合物在紫外337nm波長處有特征峰， 同時(shí)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，在堿性條件下所測得的結(jié)果是測試品中二氫黃酮類化合物和查爾酮類化合物的總量，而這些化合物是安胃瘍原粉中的主要黃酮成份。因此，采用紫外法測定可得安胃瘍膠囊中總黃酮的含量。因此本發(fā)明的目的在于，提供一種用于檢測甘草提取物膠囊、優(yōu)選安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法，且該方法與重量法相比，具有簡便、精確度高、受人為因素的影響小、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。針對上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案本發(fā)明提供一種用于檢測甘草提取物膠囊、優(yōu)選安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法，所述方法包括測定所述藥物中內(nèi)容物的堿性溶液在337nm處的吸光度。所述方法優(yōu)選包括以下步驟1)將甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品溶解于低級醇水溶液中制備不同濃度的甘草苷溶液，并調(diào)節(jié)溶液的PH為堿性；2)測定步驟1)中制備的甘草苷溶液在337nm處的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
3)將待測藥物內(nèi)容物溶解于低級醇水溶液中制備溶液，并調(diào)節(jié)溶液的PH為堿性， 在337nm處測定吸光度，然后根據(jù)步驟幻中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以甘草苷計(jì)，得到所述藥物中總黃酮的含量。優(yōu)選地，步驟1)中的低級醇水溶液為甲醇水溶液和/或乙醇水溶液；其中，低級醇水溶液優(yōu)選為乙醇水溶液，進(jìn)一步優(yōu)選為60 80% (體積/體積) 乙醇水溶液，更優(yōu)選為70%乙醇水溶液。本說明書和所附權(quán)利要求書中采用的70%乙醇水溶液其濃度都以體積/體積計(jì)算。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，該檢測方法包括以下步驟1)精密稱取甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇水溶液制成O.aiig/ml的溶液，然后精密量取該溶液0. ImUO. 3ml、0. 5ml、0. 7ml、0. 9ml，分別置IOml量瓶中，各加70%乙醇水溶液 Iml，再加10 % (重量/體積)氫氧化鉀水溶液0. 5ml，混勻，放置5分鐘，加70 %乙醇水溶液稀釋至刻度；2)以相應(yīng)的試劑制成的溶液為空白(即，除不含待測物外其它成分相同)，按照紫外-可見分光光度法在337nm波長處測定步驟1)中制備的溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，溶液中甘草苷的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)精密稱取待測藥物內(nèi)容物，用70%乙醇水溶液配制成0. 16mg/ml的溶液，然后精密量取該溶液Iml置IOml量瓶中，加70%乙醇水溶液1ml，再加10%氫氧化鉀溶液 0. 5ml，混勻，放置5分鐘，加70%乙醇水溶液稀釋至刻度，以相應(yīng)的試劑制成的溶液為空白 (即，除不含待測物外其它成分相同)，按照紫外-可見分光光度法在337nm波長處測定溶液的吸光度，從步驟2)中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出該吸光度對應(yīng)的甘草苷的濃度，從而得到以甘草苷計(jì)的待測藥物中的總黃酮含量。其中該紫外-可見分光光度法參照《中國藥典2010年版一部》附錄VA。
優(yōu)選地，上述方法步驟3)中的0. 16mg/ml的溶液制法如下精密稱取待測藥物內(nèi)容物0. 2g，置25ml容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理，室溫放置，加70%乙醇水溶液至刻度，搖勻；然后精密量取0. 2ml置IOml容量瓶中，加70%乙醇水溶液至刻度，搖勻。此外，該超聲處理的條件包括功率120W，頻率25KHz，處理20分鐘。本發(fā)明提供了一種用于檢測甘草提取物膠囊、優(yōu)選安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法，該方法采用紫外-可見分光光度法，在堿性條件下，檢測藥物內(nèi)容物的溶液在337nm的吸光度。與重量法相比，采用紫外法測定安胃瘍膠囊中總黃酮的含量具有方法簡便、精確度高、受人為因素的影響小、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。


下文將結(jié)合下列附圖來詳細(xì)說明
具體實(shí)施例方式圖1至圖7為實(shí)施例1的200 450nm吸光度掃描圖，其中圖1為甘草苷對照品溶于70%乙醇水溶液后在200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰 1 為 268. OOnm,吸光度 0. 7759 ；峰 2 為 219. OOnm,吸光度 1. 5495 ；谷 1 為 265. OOnm,吸光度0. 6618 ；谷2為247. OOnm,吸光度0. 3648 ；谷3為205. OOnm,吸光度0. 4259 ；谷4為 203. OOnm,吸光度 0. 4026 ；
圖2為甘草苷對照品溶于70%乙醇水溶液，再加入10%氫氧化鉀水溶液后在 200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為400. OOnm,吸光度0. 1667 ；峰2為337. OOnm,吸光度 0. 5901 ；峰 3 為 255. OOnm,吸光度 0. 2025 ；谷 1 為 368. OOnm,吸光度 0. 1140 ；谷 2 為 269. OOnm,吸光度 0. 1008 ；谷 3 為 207. OOnm,吸光度 0. 2714 ；圖3為安胃瘍膠囊內(nèi)容物(批號050801)溶于70%乙醇水溶液后在200-450nm 的光譜掃描圖，圖中峰1為268. OOnm，吸光度0. 3532 ；峰2為OOnm，吸光度0. 4266 ；峰 3 為 218. OOnm,吸光度 0. 6817 ；谷 1 為 266. OOnm,吸光度 0. 2848 ；谷 2 為 230. OOnm,吸光度 0. 1818 ；谷 3 為 206. OOnm,吸光度 0. 1494 ；圖4為安胃瘍膠囊內(nèi)容物(批號050801)溶于70%乙醇水溶液，再加入10%氫氧化鉀水溶液后在200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為409. OOnm,吸光度0. 6307 ；峰2 為 338. OOnm,吸光度 0. 8354 ；谷 1 為 379. OOnm,吸光度 0. 5494 ；谷 2 為 293. OOnm,吸光度 0. 5231 ；谷 3 為 205. OOnm,吸光度 0. 5990 ；谷 4 為 203. OOnm,吸光度 0. 6060 ；圖5為70%乙醇水溶液在200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為沈3. OOnm,吸光度 0. 0031 ；峰 2 為 224. OOnm，吸光度 0. 0025 ；峰 3 為 220. OOnm，吸光度 0. 0030 ；谷 1 為 269. OOnm,吸光度-0. 0061 ；谷 2 為 220. OOnm,吸光度-0. 0235 ；谷 3 為 214. OOnm,吸光度-0. 0104 ；圖6為10%氫氧化鉀水溶液在200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為四0. OOnm, 吸光度0. 0551 ；圖7為空白溶液(即，除不含待測物外其它成分相同)在200-450nm的光譜掃描圖；圖8為本發(fā)明實(shí)施例2中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖9為本發(fā)明實(shí)施例3中采用本發(fā)明的檢測方法測定的安胃瘍膠囊內(nèi)含物在 200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為409. OOnm,吸光度0. 4082 ；峰2為337. OOnm,吸光度 0. 5341 ；峰 3 為 219. OOnm,吸光度 0. 7042 ；谷 1 為 379. OOnm,吸光度 0. 3746 ；谷 2 為 293. OOnm,吸光度 0. 3312 ；谷 3 為 214. OOnm,吸光度 0. 4500 ；谷 4 為 208. OOnm,吸光度 0. 3920 ；谷 5 為 203. OOnm,吸光度 0. 3747 ；圖10為本發(fā)明實(shí)施例3的穩(wěn)定性試驗(yàn)中，采用本發(fā)明的檢測方法測定的安胃瘍膠囊內(nèi)含物在200-450nm的光譜掃描圖，圖中峰1為409. OOnm，吸光度0. 4116 ；峰2 為 337. OOnm,吸光度 0. 5208 ；峰 3 為 220. OOnm,吸光度 0. 7049 ；峰 4 為 202. OOnm,吸光度 0. 4007 ；谷 1 為 376. OOnm,吸光度 0. 3726 ；谷 2 為 294. OOnm,吸光度 0. 3251 ；谷 3 為 214. OOnm,吸光度 0. 4249 ；谷 4 為 212. OOnm,吸光度 0. 4363 ；谷 5 為 208. OOnm,吸光度 0.3821。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。實(shí)施例中采用紫外分光光度計(jì)Tu 1900(購自瑞士 CAMAG公司)，光度模式Abs ；掃描速度快速；光譜帶寬2nm ；采樣間隔1. OOnm。實(shí)施例中使用的甘草苷購于中國藥品生物制品檢定所，批號111610-200503。安胃瘍膠囊供試品由新疆金鹿藥業(yè)科技有限責(zé)任公司提供，按(《中國藥典2010 年版一部》附錄I L)膠囊劑檢查項(xiàng)下應(yīng)做水分、裝量差異、崩解時(shí)限，結(jié)果見下表1。表 權(quán)利要求
1.一種用于檢測甘草提取物膠囊、優(yōu)選安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法，所述方法包括測定所述藥物內(nèi)容物在337nm處的吸光度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括1)將甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品溶解于低級醇水溶液中制備不同濃度的甘草苷溶液，并調(diào)節(jié)溶液的 PH為堿性；2)測定步驟1)中制備的甘草苷溶液在337nm處的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)將待測藥物內(nèi)容物溶解于低級醇水溶液中制備溶液，并調(diào)節(jié)溶液的pH為堿性，在 337nm處測定吸光度，然后根據(jù)步驟2、中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以甘草苷計(jì)，得到所述藥物中總黃酮的含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步驟1)中的低級醇水溶液為甲醇水溶液和/或乙醇水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述低級醇水溶液為乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述低級醇水溶液為60 80%乙醇水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求3至5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述低級醇水溶液為70% 乙醇水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法包括1)精密稱取甘草苷標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇水溶液制成0.2mg/ml的溶液，然后精密量取該溶液0. ImUO. 3ml,0. 5ml,0. 7ml,0. 9ml，分別置IOml量瓶中，各加70%乙醇水溶液lml，再加10% (重量/體積)氫氧化鉀水溶液0. 5ml，混勻，放置5分鐘，加70%乙醇水溶液稀釋至刻度；2)以相應(yīng)的試劑制成的溶液為空白，按照紫外-可見分光光度法在337nm波長處測定步驟1)中制備的溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，溶液中甘草苷的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)精密稱取待測藥物內(nèi)容物，用70%乙醇水溶液配制成0.16mg/ml的溶液，然后精密量取該溶液Iml置IOml量瓶中，加70%乙醇水溶液1ml，再加10%氫氧化鉀溶液0. 5ml，混勻，放置5分鐘，加70%乙醇水溶液稀釋至刻度，以相應(yīng)的試劑制成的溶液為空白，按照紫外-可見分光光度法在337nm波長處測定溶液的吸光度，從步驟幻中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線讀出該吸光度對應(yīng)的甘草苷的濃度，從而得到以甘草苷計(jì)的待測藥物中的總黃酮含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法步驟幻中的 0. 16mg/ml的溶液制法如下精密稱取待測藥物內(nèi)容物0. 2g，置25ml容量瓶中，加70%乙醇適量，超聲處理，室溫放置，加70%乙醇水溶液至刻度，搖勻；然后精密量取0. 2ml置IOml容量瓶中，加70%乙醇水溶液至刻度，搖勻。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述超聲處理的條件為功率120W，頻率 25KHz，處理20分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于檢測甘草提取物膠囊、優(yōu)選安胃瘍膠囊中總黃酮含量的方法，該方法包括測定待測藥物內(nèi)容物堿性溶液在337nm處的吸光度。與現(xiàn)有檢測安胃瘍膠囊總黃酮含量的重量法相比，本發(fā)明的檢測方法具有方法簡便、精確度高、受人為因素影響小和重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號G01N21/33GK102288567SQ20111016764
公開日2011年12月21日 申請日期2011年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月21日
發(fā)明者于新蘭, 劉曉芳, 李革, 王海峰, 鄧?yán)^華 申請人:新疆全安藥業(yè)有限公司