專利名稱：一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
桂枝茯苓膠囊是古方桂枝茯苓丸的現(xiàn)代劑型，來(lái)源于漢代張仲景《金匱要略》，主要由桂枝、茯苓、丹皮、芍藥、桃仁等中藥材組成，具有活血化瘀、祛痰利水、消癥化積的功效，可用于治療婦科疾病，如痛經(jīng)、閉經(jīng)、惡露不盡、盆腔炎、盆腔包塊、子宮肌瘤、子宮腺肌癥、卵巢囊腫、乳腺增生、不孕癥、藥物流產(chǎn)后陰道出血、子宮內(nèi)膜異位等多種病癥。
桂枝茯苓膠囊一般按照以下步驟制備提取桂枝、茯苓、丹皮、芍藥、桃仁等中藥材的有效成分，經(jīng)濃縮、干燥等工藝后制備得到膠囊。在桂枝茯苓膠囊中，桂枝的有效成分主要為桂皮醛；丹皮的有效成分主要為丹皮酚和芍藥苷；桃仁的有效成分主要為苦杏仁苷；芍藥的有效成分主要為芍藥苷和苯甲酰芍藥苷；茯苓的有效成分主要為沒(méi)食子酸。上述有效成分既含有揮發(fā)性成分，又含有脂溶性成分，還含有水溶性成分，各有效成分性質(zhì)差異較大，在桂枝茯苓膠囊的制備過(guò)程中其含量較難控制，因此，對(duì)桂枝茯苓膠囊的主要有效成分進(jìn)行檢測(cè)是保證桂枝茯苓膠囊質(zhì)量穩(wěn)定、一致性好的重要手段之目前一般采用高效液相色譜法對(duì)桂枝茯苓膠囊的主要有效成分進(jìn)行檢測(cè)，采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要首先分別制備揮發(fā)性成分、脂溶性成分和水溶性成分的試樣，才能進(jìn)行檢測(cè)，三種試樣的制備方法如下向除去膠囊外殼的粉末中加水和乙醚，于75°C水浴中回流90min，冷卻后取乙醚層，于35°C水浴中揮干后加乙醚溶解，得到揮發(fā)性成分的試樣；向除去膠囊外殼的粉末中加水，沸騰的情況下回流30min，冷卻后離心，將離心后的上清液經(jīng)濾膜過(guò)濾后得到水溶性成分的試樣，將離心后的沉淀在甲醇中沸騰回流30min，冷卻后離心，將得到的甲醇液于75°C水浴中揮干后加甲醇溶解，經(jīng)濾膜過(guò)濾后得到脂溶性成分的試樣。采用高效液相色譜法對(duì)桂枝茯苓膠囊的有效成分進(jìn)行檢測(cè)雖然具有分離效能高、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但是前處理較為繁瑣，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，不利于大批量生產(chǎn)時(shí)對(duì)桂枝茯苓膠囊的質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法無(wú)需進(jìn)行復(fù)雜的樣品前處理，檢測(cè)時(shí)間短、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。本發(fā)明提供了一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法，包括以下步驟以桂枝茯苓膠囊中的固體粉末為待測(cè)樣品，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣品，獲取所述待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；根據(jù)沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近紅外光譜數(shù)據(jù)，得到所述待測(cè)樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。優(yōu)選的，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣品時(shí)，所述待測(cè)樣品的厚度為Imm 3mm,掃描次數(shù)為500次 700次。優(yōu)選的，所述沒(méi)食子酸的校正模型按照以下方法建立all)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；al2)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中沒(méi)食子酸的含量，得到所述樣品中沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值；al3)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；al4)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型。優(yōu)選的，所述步驟al4)中，所述預(yù)處理的波段為1300nm 2300nm。 優(yōu)選的，所述芍藥苷的校正模型按照以下方法建立a21)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a22)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中芍藥苷的含量，得到所述樣品中芍藥苷的化驗(yàn)值；a23)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a24)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立芍藥苷的定量校正模型。優(yōu)選的,所述步驟a24)中，所述預(yù)處理的波段為IlOOnm 2100nm。優(yōu)選的，所述苯甲酸的校正模型按照以下方法建立a31)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a32)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酸的含量，得到所述樣品中苯甲酸的化驗(yàn)值；a33)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a34)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酸的定量校正模型。優(yōu)選的,所述步驟a34)中，所述預(yù)處理的波段為IIOOnm 2300nm。優(yōu)選的，所述苯甲酰芍藥苷的校正模型按照以下方法建立a41)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a42)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酰芍藥苷的含量，得到所述樣品中苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值；a43)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a44)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酰芍藥苷的定量校正模型。優(yōu)選的，所述步驟a44)中，所述預(yù)處理的波段為IlOOnm 1900nm。優(yōu)選的，所述桂皮醛的校正模型按照以下方法建立a51)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；
a52)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中桂皮醛的含量，得到所述樣品中桂皮醛的化驗(yàn)值；a53)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a54)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述桂皮醛的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立桂皮醛的定量校正模型。優(yōu)選的,所述步驟a54)中，所述預(yù)處理的波段為IlOOnm 1900nm。優(yōu)選的，所述丹皮酚的校正模型按照以下方法建立a61)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a62)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中丹皮酚的含量，得到所述樣品中丹皮酚的化驗(yàn)值；a63)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a64)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述丹皮酚的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立丹皮酚的定量校正模型。優(yōu)選的,所述步驟a64)中，所述預(yù)處理的波段為1300nm 2300nm。優(yōu)選的，所述苦杏仁苷的校正模型按照以下方法建立all)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a72)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苦杏仁苷的含量，得到所述樣品中苦杏仁苷的化驗(yàn)值；a73)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a74)采用標(biāo)準(zhǔn)歸一化法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苦杏仁苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苦杏仁苷的定量校正模型。優(yōu)選的，所述步驟a74)中，所述預(yù)處理的波段為IlOOnm 2300nm。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用近紅外分析技術(shù)，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和計(jì)算機(jī)軟件技術(shù)，通過(guò)建立桂枝茯苓膠囊中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型實(shí)現(xiàn)對(duì)桂枝茯苓膠囊主要成分含量的檢測(cè)，從而為桂枝茯苓膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。本發(fā)明提供的檢測(cè)方法無(wú)需對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行分離、提取等復(fù)雜的前處理，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，減少了工作量。此外，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法對(duì)大批量樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。實(shí)驗(yàn)表明，采用本發(fā)明提供的方法對(duì)桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)結(jié)果與采用高效液相色譜法的檢測(cè)結(jié)果相比，沒(méi)食子酸的相對(duì)平均偏差為I. 627%，芍藥苷的相對(duì)平均偏差為I. 550%、苯甲酸的相對(duì)平均偏差為I. 012%、苯甲酰芍藥苷的相對(duì)平均偏差為2. 600%、桂皮醛的相對(duì)平均偏差為2. 398%、丹皮酚的相對(duì)平均偏差為2. 109%、苦杏仁苷的相對(duì)平均偏差為I. 089%，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、精密度良好。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例建立的沒(méi)食子酸定量校正模型；
圖2為本發(fā)明實(shí)施例建立的芍藥苷定量校正模型；圖3為本發(fā)明實(shí)施例建立的苯甲酸定量校正模型；圖4為本發(fā)明實(shí)施例建立的苯甲酰芍藥苷定量校正模型；圖5為本發(fā)明實(shí)施例建立的桂皮醛定量校正模型；圖6為本發(fā)明實(shí)施例建立的丹皮酚定量校正模型；圖7為本發(fā)明實(shí)施例建立的苦杏仁苷定量校正模型。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法，包括以下步驟以桂枝茯苓膠囊中的固體粉末為待測(cè)樣品，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣·品，獲取所述待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；根據(jù)沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近紅外光譜數(shù)據(jù)，得到所述待測(cè)樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。本發(fā)明采用近紅外分析技術(shù)，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和計(jì)算機(jī)軟件技術(shù)，通過(guò)建立桂枝茯苓膠囊中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型實(shí)現(xiàn)對(duì)桂枝茯苓膠囊主要成分含量的檢測(cè)，從而為桂枝茯苓膠囊的質(zhì)量控制提供依據(jù)。在本發(fā)明中，所述桂枝茯苓膠囊為由桂枝、茯苓、丹皮、芍藥和桃仁五味中藥經(jīng)過(guò)提取、濃縮、干燥后制得的膠囊，優(yōu)選為由桂枝、白芍、茯苓、桃仁和丹皮經(jīng)提取、濃縮和干燥后制得的膠囊，其有效成分主要包括沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷等。在對(duì)桂枝茯苓膠囊進(jìn)行檢測(cè)前，首先建立桂枝茯苓膠囊中各主要成分，如沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷等的校正模型，然后根據(jù)待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)分析得到待測(cè)樣品中各主要成分的含量。在本發(fā)明中，所述沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷校正模型優(yōu)選按照以下步驟建立a)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；b)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量；c)采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；d)對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理的結(jié)果和步驟b)得到的含量分別建立沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的定量校正模型。為了清楚的說(shuō)明本發(fā)明，以下分別對(duì)沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立過(guò)程進(jìn)行詳細(xì)描述，但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以獲知，沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立過(guò)程并不是完全獨(dú)立進(jìn)行的，如提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品、利用高效液相色譜儀檢測(cè)等步驟是可以同時(shí)完成的。按照本發(fā)明，所述沒(méi)食子酸的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立
all)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；al2)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中沒(méi)食子酸的含量，得到所述樣品中沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值；al3)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；al4)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型。首先提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品(下文簡(jiǎn)稱樣品)。按照本發(fā)明，所述樣品數(shù)量?jī)?yōu)選為40個(gè)以上，更優(yōu)選為50個(gè)以上，最優(yōu)選為60個(gè)以上。得到樣品后，隨機(jī)將所述樣品分為校正集和驗(yàn)證集，其中，校正集中的樣品用于建立校正模型，驗(yàn)證集中的樣品用于驗(yàn)證校正模型。 按照本發(fā)明，需要對(duì)所述樣品進(jìn)行高效液相色譜分析和近紅外分析，以便獲得所述樣品中沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值和近紅外光譜數(shù)據(jù)，從而建立校正模型。本發(fā)明利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中沒(méi)食子酸的含量，得到所述樣品中沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值。本發(fā)明優(yōu)選按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D中規(guī)定的高效液相色譜條件對(duì)所述桂枝茯苓膠囊中沒(méi)食子酸的含量進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)所述樣品進(jìn)行近紅外分析時(shí)，首先利用近紅外光譜儀采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)。本發(fā)明優(yōu)選在比率模式下、采用靜態(tài)測(cè)樣方式和漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)。進(jìn)行近紅外光譜數(shù)據(jù)采集時(shí)，所述樣品的厚度優(yōu)選為Icm以上，更優(yōu)選為Icm 3cm，實(shí)驗(yàn)表明，樣品厚度小于Icm時(shí)，采集得到的光譜重復(fù)性較差。進(jìn)行近紅外光譜數(shù)據(jù)采集時(shí)，近紅外光譜儀的掃描次數(shù)優(yōu)選為300次 700次，更優(yōu)選為500次 700次。得到所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)后，建立樣品中沒(méi)食子酸的定量校正模型。本發(fā)明優(yōu)選采用以下方法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型。在建立沒(méi)食子酸的定量校正模型前，本發(fā)明優(yōu)選將所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)中的化學(xué)異常值(outlier)通過(guò)光譜影響值(Leverage)和化學(xué)值誤差(Residual)檢驗(yàn)剔除。在建立沒(méi)食子酸的定量校正模型時(shí)，首先對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，所述預(yù)處理的方法可以為多元散射校正法、標(biāo)準(zhǔn)歸一法或一階微分9點(diǎn)平滑法，優(yōu)選為一階微分9點(diǎn)平滑法。采用一階微分9點(diǎn)平滑法進(jìn)行預(yù)處理后，對(duì)得到的沒(méi)食子酸定量校正模型進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，其內(nèi)部交叉決定系數(shù)(R2)最接近于1，內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSEC)和驗(yàn)證均方根偏差(RMSEP)最小。對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理后，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型。在采用偏最小二乘法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型過(guò)程中，偏最小二乘法雖然能夠處理全譜信息，但是波段過(guò)寬時(shí)會(huì)包含大量冗余信息，降低校正模型的預(yù)測(cè)精度。為了提高效正模型的預(yù)測(cè)精度，本發(fā)明中的波段優(yōu)選為1300nm 2300nm，當(dāng)波段處于該范圍時(shí)，對(duì)得到的沒(méi)食子酸定量校正模型進(jìn)行驗(yàn)證時(shí)，其內(nèi)部交叉決定系數(shù)(R2)最接近于1，內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSEC)和驗(yàn)證均方根偏差(RMSEP)最小。在采用偏最小二乘法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型過(guò)程中，最佳主成分?jǐn)?shù)為5。采用偏最小二乘法將所述經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的近紅外光譜數(shù)據(jù)和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值相關(guān)聯(lián)，建立沒(méi)食子酸的定量校正模型，并采用交叉驗(yàn)證法對(duì)所述沒(méi)食子酸的定量校正模型的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化后，得到?jīng)]食子酸的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述芍藥苷的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立a21)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a22)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中芍藥苷的含量，得到所述樣品中芍藥苷 的化驗(yàn)值；a23)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a24)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立芍藥苷的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述苯甲酸的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立a31)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a32)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酸的含量，得到所述樣品中苯甲酸的化驗(yàn)值；a33)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a34)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酸的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述苯甲酰芍藥苷的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立a41)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a42)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酰芍藥苷的含量，得到所述樣品中苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值；a43)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a44)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酰芍藥苷的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述桂皮醛的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立a51)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a52)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中桂皮醛的含量，得到所述樣品中桂皮醛的化驗(yàn)值；a53)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a54)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述桂皮醛的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立桂皮醛的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述丹皮酚的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立
a61)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a62)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中丹皮酚的含量，得到所述樣品中丹皮酚的化驗(yàn)值；a63)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a64)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述丹皮酚的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立丹皮酚的定量校正模型。按照本發(fā)明，所述苦杏仁苷的校正模型優(yōu)選按照以下方法建立a71)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品；a72)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苦杏仁苷的含量，得到所述樣品中苦杏仁苷的化驗(yàn)值； a73)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；a74)采用標(biāo)準(zhǔn)歸一化法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苦杏仁苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苦杏仁苷的定量校正模型。在上述芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型的建立過(guò)程中，除定量模型的建立過(guò)程之外，其他過(guò)程與沒(méi)食子酸校正模型的建立過(guò)程相同。在建立芍藥苷的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用多元散射校正法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為IlOOnm 2100nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為9。在建立苯甲酸的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為IlOOnm 2300nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為10。在建立苯甲酰芍藥苷的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為IlOOnm 1900nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為5。在建立桂皮醛的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為IlOOnm 1900nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為
U O在建立丹皮酚的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用多元散射校正法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為1300nm 2300nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為11。在建立苦杏仁苷的定量校正模型時(shí)，優(yōu)選采用標(biāo)準(zhǔn)歸一化法對(duì)所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理；建立模型時(shí)的波段優(yōu)選為IlOOnm 2300nm ;最佳主成分?jǐn)?shù)為6。分別建立沒(méi)食子酸校正模型、芍藥苷校正模型、苯甲酸校正模型、苯甲酰芍藥苷校正模型、桂皮醛校正模型、丹皮酚校正模型和苦杏仁苷校正模型后，將各校正模型裝入近紅外分析儀，即可實(shí)現(xiàn)對(duì)桂枝茯苓膠囊的快速檢測(cè)，具體包括以下步驟利用裝有上述各校正模型的近紅外光譜儀檢測(cè)待測(cè)桂枝茯苓膠囊樣品，獲取所述待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；上述各校正模型根據(jù)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到所述待測(cè)桂枝茯苓膠囊樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。
在進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，所述待測(cè)桂枝茯苓膠囊樣品的厚度優(yōu)選為Icm以上，更優(yōu)選為Icm 3cm ;所述近紅外光譜儀的掃描次數(shù)為300次 700次，更優(yōu)選為500次 700次。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法無(wú)需對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行分離、提取等復(fù)雜的前處理，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，減少了工作量。此外，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法不受其他因素影響，對(duì)大批量樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。實(shí)驗(yàn)表明，采用本發(fā)明提供的方法對(duì)桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)結(jié)果與采用高效液相色譜法的檢測(cè)結(jié)果相比，沒(méi)食子酸的相對(duì)平均偏差為I. 627%，芍藥苷的相對(duì)平均偏差為I. 550%、苯甲酸的相對(duì)平均偏差為I. 012%、苯甲酰芍藥苷的相對(duì)平均偏差為2. 600%、桂皮醛的相對(duì)平均偏差為2. 398%、丹皮酚的相對(duì)平均偏差為2. 109%、苦杏仁苷的相對(duì)平均偏差為I. 089%，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、精密度良好。為了進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法進(jìn)行詳細(xì)描述。實(shí)施例I·以江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中心提供的59個(gè)桂枝茯苓膠囊成品為樣品，隨機(jī)分為53個(gè)校正集和6個(gè)驗(yàn)證集，分別記為校正樣品I 53，驗(yàn)證樣品I 6 ;采用美國(guó)BRMR0SE公司生產(chǎn)的Luminar5030便攜式AOTF近紅外光譜儀進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)器為InGaAs ;光譜采集處理軟件為Snap !;定量分析軟件為T(mén)heUnscrambler ;檢測(cè)條件如下波長(zhǎng)范圍IlOOnm 2300nm ;波長(zhǎng)增量2. Onm ;比率模式Ratio Mode。I. I高效液相色譜法測(cè)定桂枝茯苓膠囊樣品分別按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D中規(guī)定的高效液相色譜條件對(duì)所述桂枝茯苓膠囊樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量進(jìn)行檢測(cè)，分別得到其化驗(yàn)值；其中，沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛和丹皮酚的檢測(cè)條件如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(色譜柱Waters Symmetry C18,4. 6 X 250mm, 5 u m);以含0. 02%三氟乙酸水溶液為流動(dòng)相A,以乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫程序如表I所示表I梯度洗脫程序
時(shí)間(min)流動(dòng)相八％流動(dòng)相6%
0—5 955
5—20 95—835—1720—30 83—8117—19
30—40 81—7419—26
40—60 74—1226—88
_60—70_12_88流速lmL/min;沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷和丹皮酚的檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm ；桂皮醛的檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm ;
理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000?；旌蠈?duì)照品溶液的制備精密稱定沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛和丹皮酚對(duì)照品，加50%甲醇分別制成每ImL含IOOii g、250ii g、15ii g、10ii g、30ii g、20 u g、150 u g的溶液，即得混合對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取約0. 25g桂枝茯苓膠囊粉末，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，密塞。稱定重量，超聲(功率為250W，頻率為40KHz)處理30min,放冷，稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取混合對(duì)照品液與供試品液各IOy L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即可得到?jīng)]食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛和丹皮酚的含量。苦杏仁苷的檢測(cè)條件如下
色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(20 80)為流動(dòng)相；流速lmL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)218nm;理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備取苦杏仁苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%乙醇制成每ImL含90 u g的溶液，即得對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取約0. 2g桂枝茯苓膠囊粉末，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50 %乙醇25mL，稱定重量，超聲(功率為250W，頻率為40KHz)處理30min，放冷，稱重，以50%乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各IOy L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即可得到苦杏仁苷的含量。I. 2采集樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)將所述樣品裝于樣品杯中，利用近紅外光譜儀，在比率模式下，采用漫反射方式采集樣品的近紅外光譜，每個(gè)樣品重復(fù)裝樣掃描三次取平均值，采集樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)。I. 2. I樣品厚度的確定使樣品厚度分別為0. 5cm、lcm、I. 5cm和2. 0cm，掃描600次，分別得到原始光譜，并對(duì)所述原始光譜進(jìn)行一階導(dǎo)數(shù)處理，結(jié)果表明，樣品厚度為0. 5cm時(shí)，原始光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜的重復(fù)性不好；樣品厚度為Imm以上時(shí)，原始光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜的重復(fù)性較好，且其一階導(dǎo)數(shù)光譜的移動(dòng)塊標(biāo)準(zhǔn)偏差值(MBSD值)差異性不大。1.2. 2掃描次數(shù)的確定使樣品厚度為1cm，分別掃描300次和600次，分別得到原始光譜，并對(duì)所述原始光譜進(jìn)行一階導(dǎo)數(shù)處理，結(jié)果表明，掃描次數(shù)為300次和600次時(shí)得到的光譜的重復(fù)性均較好，但是，掃描次數(shù)為600次時(shí)，一階導(dǎo)數(shù)光譜的MBSD值差異性更小。本實(shí)施例中，使樣品厚度為lcm、掃描600次的情況下對(duì)所述樣品進(jìn)行分析，得到各樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)。I. 3定量校正模型的建立I. 3. I沒(méi)食子酸定量校正模型的建立使用TheUnscrambler定量分析軟件，對(duì)I. 2中得到的樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)該預(yù)處理得到的結(jié)果和1.1中得到的沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，使用TheUnscrambler定量分析軟件用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸定量校正模型。I. 3. I. I預(yù)處理方法的確定使用TheUnscrambler定量分析軟件,分別采用多元散射校正法、標(biāo)準(zhǔn)歸一化法和一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)I. 2中得到的校正樣品和驗(yàn)證樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，以內(nèi)部交叉決定系數(shù)(R2)、內(nèi)部交叉驗(yàn)證均方差(RMSEC)和驗(yàn)證均方根偏差(RMSEP)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定最佳預(yù)處理方法，結(jié)果參見(jiàn)表2，表2為預(yù)處理方法對(duì)建立沒(méi)食子酸定量校正模型的影響結(jié)果。表2預(yù)處理方法對(duì)建立沒(méi)食子酸定量校正模型的影響結(jié)果

權(quán)利要求
1.一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法，包括以下步驟 以桂枝茯苓膠囊中的固體粉末為待測(cè)樣品，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣品，獲取所述待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； 根據(jù)沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近紅外光譜數(shù)據(jù)，得到所述待測(cè)樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣品時(shí)，所述待測(cè)樣品的厚度為1_ 3_，掃描次數(shù)為500次 700次。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述沒(méi)食子酸的校正模型按照以下方法建立 all)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； al2)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中沒(méi)食子酸的含量，得到所述樣品中沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值； al3)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； al4)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述沒(méi)食子酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立沒(méi)食子酸的定量校正模型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟al4)中，所述預(yù)處理的波段為 1300nm 2300nm。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述芍藥苷的校正模型按照以下方法建立 a21)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a22)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中芍藥苷的含量，得到所述樣品中芍藥苷的化驗(yàn)值； a23)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a24)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立芍藥苷的定量校正模型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a24)中，所述預(yù)處理的波段為 IlOOnm 2100nm。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述苯甲酸的校正模型按照以下方法建立 a31)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a32)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酸的含量，得到所述樣品中苯甲酸的化驗(yàn)值； a33)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a34)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酸的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酸的定量校正模型。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a34)中，所述預(yù)處理的波段為 IlOOnm 2300nm。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述苯甲酰芍藥苷的校正模型按照以下方法建立 a41)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a42)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苯甲酰芍藥苷的含量，得到所述樣品中苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值； a43)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a44)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苯甲酰芍藥苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苯甲酰芍藥苷的定量校正模型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a44)中，所述預(yù)處理的波段為 IlOOnm 1900nm。
11.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述桂皮醛的校正模型按照以下方法建立 a51)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a52)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中桂皮醛的含量，得到所述樣品中桂皮醛的化驗(yàn)值； a53)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a54)采用一階微分9點(diǎn)平滑法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述桂皮醛的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立桂皮醛的定量校正模型。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a54)中，所述預(yù)處理的波段為 IlOOnm 1900nm。
13.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述丹皮酚的校正模型按照以下方法建立 a61)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a62)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中丹皮酚的含量，得到所述樣品中丹皮酚的化驗(yàn)值； a63)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a64)采用多元散射校正法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述丹皮酚的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立丹皮酚的定量校正模型。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a64)中，所述預(yù)處理的波段為 1300nm 2300nm。
15.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述苦杏仁苷的校正模型按照以下方法建立 a71)提供桂枝茯苓膠囊固體粉末樣品； a72)利用高效液相色譜儀檢測(cè)所述樣品中苦杏仁苷的含量，得到所述樣品中苦杏仁苷的化驗(yàn)值； a73)采用漫反射方式采集所述樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)； a74)采用標(biāo)準(zhǔn)歸一化法對(duì)所述近紅外光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理，根據(jù)所述預(yù)處理獲得的結(jié)果和所述苦杏仁苷的化驗(yàn)值，采用偏最小二乘法和交叉驗(yàn)證法建立苦杏仁苷的定量校正模型。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的檢測(cè)方法，其特征在于，所述步驟a74)中，所述預(yù)處理的波段為 IlOOnm 2300nm。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種桂枝茯苓膠囊的檢測(cè)方法，包括以下步驟以桂枝茯苓膠囊中的固體粉末為待測(cè)樣品，利用近紅外光譜儀檢測(cè)所述待測(cè)樣品，獲取所述待測(cè)樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)；根據(jù)沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的校正模型和所述近紅外光譜數(shù)據(jù)，得到所述待測(cè)樣品中沒(méi)食子酸、芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷、桂皮醛、丹皮酚和苦杏仁苷的含量。本發(fā)明提供的檢測(cè)方法無(wú)需對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行分離、提取等復(fù)雜的前處理，縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，減少了工作量。此外，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法對(duì)大批量樣品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102759509SQ201110104100
公開(kāi)日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2011年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月25日
發(fā)明者宮凱敏, 朱克近, 李家春, 畢宇安, 王振中, 王正寬, 章晨峰, 蕭偉, 鄭偉然 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司