專利名稱：輸血相容性檢測室內質控品試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于輸血相容性檢測領域，具體涉及一種輸血相容性檢測室內質控品試劑
品.O
背景技術：
目前國內尚無具有SFDA批準文號的商品化輸血相容性檢測室內質控品，已知的國外同類產(chǎn)品中只有ABO、IihD血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查室內質控品，沒有交叉配血試驗室內質控品。國內只有少數(shù)輸血相容性檢測實驗室開展了部分室內質控工作，使用過的質控品包括西班牙Diagnostic Grifol公司生產(chǎn)的DG Gel Control試劑盒和美國Immucor 公司生產(chǎn)的WB corQC試劑盒(均未在國內注冊)。兩種試劑盒均設計由4支質控品組合可實現(xiàn)ABO、IihD血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查室內質控，但無交叉配血試驗室內質控。DG Gel Control試劑盒限定在其指定的DG Gel凝膠卡上使用，其它方法不適用；WB corQC試劑盒限定在felileo Echo全自動儀器上使用，其質控品中的抗-C在微柱凝膠抗人球法中無法檢測出來。綜上，國內目前尚無生產(chǎn)制備輸血相容性檢測室內質控品的成熟技術，而國外生產(chǎn)的同類產(chǎn)品適用范圍狹窄，多為專用儀器配套設計，不具備其他方法學或檢測體系的兼容性。同時，在輸血相容性檢測試驗過程中，血型鑒定和不規(guī)則抗體篩查試驗不能替代交叉配血試驗，交叉配血試驗是確保輸血安全的最后一道關口，血型鑒定和不規(guī)則抗體的室內質控無法確保交叉配血試驗結果的準確性和可靠性。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種輸血相容性檢測室內質控品試劑盒。該試劑盒一方面是解決質控品的兼容性問題，就是研制出能夠同時在常用的多種方法或檢測體系中使用的輸血相容性檢測質控品，且確保其結果的穩(wěn)定性和可比性；另一方面就是設計開發(fā)出交叉配血試驗質控品配伍方案及質控品，解決交叉配血試驗無質控的問題。為解決上述技術問題，本發(fā)明所采用的技術方案是
一種輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，該試劑盒是由下述8支改良全血質控品組
成
管1 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管2 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管3 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管4 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管5 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管6 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管7 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管8 :0型IihD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品。
其中，所述A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品通過下述方法制備
a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的A型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次制備成壓積紅細胞備用；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品通過下述方法制備
a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；
c)IgG抗-D血清的標化使用1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的 B型MiD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的血漿作為倍比稀釋介質對商品化IgG型抗-D血清進行效價滴定，選擇出現(xiàn)2+凝集的最高稀釋倍數(shù)作為標準；
所述IgG型抗-D血清進行效價滴定采用微柱凝膠抗人球法。d)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，按照上步得到的稀釋倍數(shù)標準添加IgG 型抗-D血清，再添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分裝，離心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品通過下述方法制備
a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次制備成壓積紅細胞備用；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。所述B型IihD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品通過下述方法制備
a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，再添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分裝，離心，密封，4°C保存待用。所述O型IihD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品通過下述方法制備
a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的O型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次制備成壓積紅細胞備用；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。上述質控品的制備方法中，所述紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液 II，所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min。根據(jù)本發(fā)明所述試劑盒的組合方式，通過DCcEe抗原及相應抗體差異至少還可以得到下列質控品組合方案，這些組合方案均可以達到本發(fā)明所要解決的技術問題。方案1管1A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ；管2B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D ；管3A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D管4A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ；管5A型IihD陰性，血漿中包含抗-B ；管6B型IihD陽性，血漿中包含抗A ；管7A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ；管8O型RhD陽性，血漿中包含抗-A, B。
方案2管1A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D管2B型IihD陽性，血漿中包含抗A ；管3A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D管4A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ；管5A型IihD陰性，血漿中包含抗-B ；管6B型IihD陽性，血漿中包含抗A ；管7A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ；管8O型RhD陽性，血漿中包含抗-A, B。
方案3
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D ； 管4:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管5:B型IihD陰性，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案4
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A和IgG抗_c ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案5
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗B和IgG抗_c ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗B ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案6
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗A和IgG抗_c ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案7
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ；管3:A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗B和IgG抗_c ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗B ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案8
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗A和IgG抗-E ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案9
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗B和IgG抗-E ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗B ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案10
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:B型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗A和IgG抗-E ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案11
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:A型RhD+C+c-E-e+,血漿中包含抗B和IgG抗-E ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗B ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗B ；管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案12
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗-C ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案13
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗-C ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案14
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗-C ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案I5
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗-C ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。
方案I6
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗_e ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案17
管1:A型IihD陽性，血漿中包含抗-B； 管2:B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D; 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗_e ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案18
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗_e ； 管4 B型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 B型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。方案19
管1 A型RhD陰性，血漿中包含抗-B和IgG抗-D ； 管2:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管3:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A和IgG抗_e ； 管4:A型RhD+C-c+E+e-，血漿中包含抗A ； 管5 A型RhD+C+c-E-e+，血漿中包含抗A ； 管6:B型RhD陽性，血漿中包含抗A ； 管7:A型RhD陽性，血漿中包含抗-B ； 管8:0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B。本發(fā)明的優(yōu)點在于
1.本發(fā)明設計的由8支質控品組成的試劑盒，其中2支組合用于ABOjhD血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查室內質控，3支組合用于交叉配血試驗IgG類抗體室內質控，另2支組合用于用于交叉配血試驗IgM類抗體室內質控，可以實現(xiàn)常規(guī)輸血相容性檢測全部5項試驗的室內質控，特別是對于交叉配血試驗的室內質控包含兩個組成部分，其中IgG類抗體室內質控是確保交叉配血試驗能夠檢測出有IgG類不規(guī)則抗體，而IgM類抗體室內質控一方面是要能夠確保檢測體系及時發(fā)現(xiàn)37°C條件下有臨床意義的IgM類抗體，特別是要確保ABO 血型差錯能夠被及時、準確地發(fā)現(xiàn)，防止各類不規(guī)則抗體和ABO血型差錯漏檢導致急性溶血性輸血反應。2.本發(fā)明設計的質控品試劑盒適用范圍更為廣泛，其ABOjhD血型鑒定室內質控品適用于試管法、玻片法、微量板法、微柱凝膠法、微柱玻璃珠法等；不規(guī)則抗體篩查室內質控品適用于試管抗人球蛋白法、凝聚胺法、微柱凝膠抗人球蛋白法、CAPTURE捕獲法等 ’交叉配血試驗室內質控品適用于鹽水法、凝聚胺法、酶法、試管抗人球蛋白法、微柱凝膠抗人球蛋白法等。具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。實施例中涉及的主要試劑單克隆抗-A (批號102065A，美國IMMUC0R公司產(chǎn)品)、抗-B (批號204026，美國IMMUC0R公司產(chǎn)品)；IgG抗-D (批號20090729，上海血液生物醫(yī)藥有限公司產(chǎn)品);MAP紅細胞保存液(批號090801-11，上?？档氯R企業(yè)發(fā)展集團藥業(yè)有限公司產(chǎn)品)；血液保存液II (批號85DL17AC004，費森尤斯卡比廣州醫(yī)療用品有限公司)；PBS (0. lmol/L, ρΗ7· 4，自制)硫酸慶大霉素(批號:09020222，天津藥業(yè)焦作有限公司產(chǎn)品)；氯霉素(批號DY00910231，東北制藥集團公司)色原緩沖液(苯酚9. 5g/L、42氨基安替比林 1. Og/L、PBS 0. lmol/L ρΗ7· 4)、FHb 標準工作液(100 mg/L)(本室自制)。實施例1試劑盒的組成
該試劑盒是由8支改良全血質控品組成，規(guī)格6ml/支，保存條件為2-8°C 管1 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管2 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管3 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管4 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管5 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管6 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管7 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管8 :0型IihD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品。實施例2試劑盒的制備
①ABO及IihD血型聯(lián)合不規(guī)則抗體篩查質控品包括管1和管2 管1 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品
a)全血質控品原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的A型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理全血或紅細胞懸液經(jīng)過1500-2000g，離心3-5min棄上清得到壓積紅細胞，將同型壓積紅細胞匯集混勻后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液，洗滌三次，每次洗滌后均進行離心處理，棄去上清，最后制備成壓積紅細胞，所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min ；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝在硬質塑料試管中，1500_2000g，離心 3-5min，用試管塞封口后4°C保存待用，有效期為45天；
d)質控品靶值的確定從制備好的全血質控品中隨機抽取2個標本，使用實驗室指定的比對參照或使用頻率最高的儀器(或反應體系)進行ABO、RhD血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查試驗，重復兩次后確定為A型IihD陽性，血漿中包含抗-B。上述方法中紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。管2 :B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品
a)全血質控品原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理全血或紅細胞懸液經(jīng)過1500-2000g，離心5min棄上清得到壓積紅細胞，將同型壓積紅細胞匯集混勻后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或 PBS緩沖液，洗滌三次，每次洗滌后均進行離心處理，棄去上清，最后制備成壓積紅細胞，所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min ；
c)IgG抗-D血清的標化使用1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的 B型MiD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的血漿作為倍比稀釋介質對商品化IgG型抗-D血清進行效價滴定(采用微柱凝膠抗人球法)，選擇出現(xiàn)2+凝集的最高稀釋倍數(shù)作為標準；
d)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，按照上步得到的稀釋倍數(shù)標準添加IgG型抗-D血清，再添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分裝在硬質塑料試管中，1500-2000g，離心3-5min，用試管塞封口后4°C保存待用， 有效期為45d ；
e)質控品靶值的確定從制備好的全血質控品中隨機抽取2個標本，使用實驗室指定的比對參照或使用頻率最高的儀器(或反應體系)進行ABO、RhD血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查試驗，重復兩次后確定質控品為B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D。 上述方法中紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。②交叉配血IgG類抗體組包括管3、管4和管5。管3 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品 制備方法同管2。管4 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品
a)全血質控品原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理全血或紅細胞懸液經(jīng)過1500-2000g，離心5min棄上清得到壓積紅細胞，將同型壓積紅細胞匯集混勻后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液，洗滌三次，每次洗滌后均進行離心處理，棄去上清，最后制備成壓積紅細胞，所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min ；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同 型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝在硬質塑料試管中，1500_2000g，離心 3-5min，用試管塞封口后4°C保存待用，有效期為45d ；
上述方法中紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。管5 :B型RhD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品
a)全血質控品原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型RhD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理全血或紅細胞懸液經(jīng)過1500-2000g，離心3-5min棄上清得到壓積紅細胞，將同型壓積紅細胞匯集混勻后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液，洗滌三次每次洗滌后均進行離心處理，棄去上清，最后制備成壓積紅細胞， 所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min ；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后同型的新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，再添加終濃度為0.01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分裝在硬質塑料試管中，1500_2000g，離心 5min，用試管塞封口后4°C保存待用，有效期為45d ；
上述方法中紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。交叉配血反應靶值的確定
管3作為受者，管4作為不相合供者(IgG抗體陽性對照)，管5作為相合供者(陰性對照)，進行交叉配血試驗，結果為管3與管4主側不相合，次側相合；結果為管3與管5主次側均相合。③交叉配血IgM類抗體組包括管6、管7和管8。管6 :B型RhD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 制備方法同管4。管7 :A型RhD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 制備方法同管1。管8 :0型RhD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品
a)全血質控品原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的O型RhD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；
b)原料標本的處理全血或紅細胞懸液經(jīng)過1500-2000g，離心3-5min棄上清得到壓積紅細胞，將同型壓積紅細胞匯集混勻后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液，洗滌三次每次洗滌后均進行離心處理，棄去上清，最后制備成壓積紅細胞， 所述離心條件為1500-2000g，離心3-5min ；
c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝在硬質塑料試管中，1500_2000g，離心
3-5min,用試管塞封口后4°C保存待用，有效期為45d。 上述方法中紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。交叉配血反應靶值的確定
管6或管7作為受者，管7或管6作為主側不相合供者(IgM抗體陽性對照)，管8作為主側相合供者(陰性對照)，進行交叉配血試驗，結果為管6與管7之間主次側均不相合，管 6或管7與管8之間主側相合，次側不相合。實施例3試劑盒的使用
①ABO、RhD血型、不規(guī)則抗體篩查單獨或聯(lián)合室內質控
可以選擇管1和管2質控品。其中A抗原、B抗原、D抗原、IgG抗-D互為陰陽性對照。 常規(guī)檢測前將質控品恢復至室溫后使用，所用質控標本類型應與實驗項目要求相一致，檢測操作人員必須具備上崗資質，儀器設備及室內溫度、環(huán)境均應符合要求。②交叉配血IgG類抗體組包括管3、管4和管5。管3作為受者，管4作為不相合供者(IgG抗體陽性對照)，管5作為相合供者(陰性對照)。常規(guī)檢測前將質控品恢復至室溫后使用，所用質控標本類型應與實驗項目要求相一致，檢測操作人員必須具備上崗資質，儀器設備及室內溫度、環(huán)境均應符合要求。③交叉配血IgM類抗體組包括管6、管7和管8。管6或管7作為受者，管7或管6作為主側不相合供者(IgM抗體陽性對照)，管8 作為主側相合供者(陰性對照)。常規(guī)檢測前將質控品恢復至室溫后使用，所用質控標本類型應與實驗項目要求相一致，檢測操作人員必須具備上崗資質，儀器設備及室內溫度、環(huán)境均應符合要求。實施例4試劑盒的性能評價試驗主要性能指標評價
以實施例2中制備的管2質控品為例進行性能評價試驗，抽取10例連續(xù)進行觀察，得到了 0、35、42、49天B抗原強度、IgM抗-A抗體、IgG抗-D抗體、質控品上清游離血紅蛋白 (FHb)含量等指標(結果見表1)，證明使用該制備技術得到質控品，主要性能參數(shù)穩(wěn)定，符合輸血相容性檢測室內質控的相關要求；
權利要求
1.一種輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，該試劑盒是由下述8支改良全血質控品組成管1 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管2 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管3 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品； 管4 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管5 :B型IihD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管6 :B型IihD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品； 管7 :A型IihD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品； 管8 :0型IihD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品。
2.根據(jù)權利要求1所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述A型 RhD陽性，血漿中包含抗-B的全血質控品通過下述方法制備a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的A型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。
3.根據(jù)權利要求1所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述B型 RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D的全血質控品通過下述方法制備a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；c)IgG抗-D血清的標化使用1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的 B型MiD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的血漿作為倍比稀釋介質對商品化IgG型抗-D血清進行效價滴定，選擇出現(xiàn)2+凝集的最高稀釋倍數(shù)作為標準；d)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，按照上步得到的稀釋倍數(shù)標準添加IgG型抗-D血清，再添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后混勻分裝，離心，密封，4°C保存待用。
4.根據(jù)權利要求1所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述B型 RhD陽性，血漿中包含抗A的全血質控品通過下述方法制備a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。
5.根據(jù)權利要求1所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述B型 RhD陰性，血漿中包含抗A的全血質控品通過下述方法制備a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的B型IihD陰性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。
6.根據(jù)權利要求1所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述O型 RhD陽性，血漿中包含抗-A，B的全血質控品通過下述方法制備a)原料的選擇選擇1名或多名健康獻血者捐獻的保存時間在10天以內的O型IihD陽性、不規(guī)則抗體篩查試驗和直接抗人球蛋白試驗均為陰性的全血或紅細胞懸液，及同型新鮮冰凍血漿；b)原料標本的處理所述全血或紅細胞懸液經(jīng)過離心，棄上清得到壓積紅細胞，然后使用其3-6倍體積的0. 9%生理鹽水或紅細胞保存液或PBS緩沖液離心洗滌三次，制備成壓積紅細胞備用；c)質控品的配置將洗滌后壓積紅細胞、紅細胞保存液、解凍后的同型新鮮血漿按 1-10:5-20:10-30的體積比配置成全血質控品，在質控品中添加終濃度為0. 01-0. 10mg/ml 的硫酸慶大霉素和0. 10-0. 50mg/ml的氯霉素后分裝，離心，密封，4°C保存待用。
7.根據(jù)權利要求2-6任一權利要求所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述紅細胞保存液為MAP紅細胞保存液或血液保存液II。
8.根據(jù)權利要求2-6任一權利要求所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述質控品制備方法中離心條件為1500-2000g，離心3-5min。
9.根據(jù)權利要求3所述的輸血相容性檢測室內質控品試劑盒，其特征在于，所述IgG型抗-D血清進行效價滴定采用微柱凝膠抗人球法。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種輸血相容性檢測室內質控品試劑盒。該試劑盒是由8支改良全血質控品組成管1A型RhD陽性，血漿中包含抗-B；管2B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D；管3B型RhD陰性，血漿中包含抗A和IgG抗-D；管4B型RhD陽性，血漿中包含抗A；管5B型RhD陰性，血漿中包含抗A；管6B型RhD陽性，血漿中包含抗A；管7A型RhD陽性，血漿中包含抗-B；管8O型RhD陽性，血漿中包含抗-A,B。該試劑盒中的質控品能夠同時在常用的多種方法或檢測體系中使用，且確保其結果的穩(wěn)定性和可比性；而且可以實現(xiàn)常規(guī)輸血相容性檢測全部5項試驗的室內質控。
文檔編號G01N33/49GK102183631SQ20111004308
公開日2011年9月14日 申請日期2011年2月23日 優(yōu)先權日2011年2月23日
發(fā)明者于洋, 關曉珍, 馮倩, 張曉娟, 汪德清, 陳麟鳳, 馬春婭 申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院