專利名稱：一種安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物的質(zhì)量檢測方法，特別涉及安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法。
背景技術：
安兒寧顆粒記載于國家藥品標準，標準編號WS-10640(ZD-0640)-2002。具有清熱祛風，化痰止咳的作用。用于小兒風熱感冒，咳嗽有痰，發(fā)熱咽痛，上呼吸道感染見上述證候
者ο小兒上呼吸道感染、感冒、咳喘是臨床上的常見病、多發(fā)病，治療方法頗多，但效果不一。安兒寧顆粒是藏醫(yī)傳統(tǒng)古驗方，經(jīng)藏醫(yī)長期臨床應用，該藥具有清熱解毒祛風化痰的作用，用于小兒傷風感冒、肺炎、支氣管炎及其引起的咳嗽和發(fā)熱等癥。安兒寧顆粒劑由于效果良好，且綜合考慮了小兒的生理、病理特點，經(jīng)臨床驗證，療效顯著，無毒副作用，在臨床上備受患者青睞。然而，現(xiàn)行安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測標準包括膽酸的鑒別、膽紅素的含量測定這兩部分，該質(zhì)量檢測方法不能保證安兒寧顆粒的質(zhì)量，為臨床使用埋下了隱患。亟需研究一套關于安兒寧顆粒的更準確、嚴密的質(zhì)量檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于公開一種安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明目的是通過如下方案實現(xiàn)的。本發(fā)明安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.取安兒寧顆粒l_3g，研細，加丙酮5-15ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，加丙酮制成每Iml各含0. 1-0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸(1-3 1-3 0.5-1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在IOO0C -110°C加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。B.安兒寧顆粒研細后，取粉末5-15g，加甲醇15-25ml，超聲提取20-40min，取出，放冷，過濾，取續(xù)濾液蒸干后，殘留物用水10-30ml全部轉移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3-5次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；殘渣加甲醇使溶解，轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作供試品溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇溶解并稀釋成每Iml甲醇溶液含0. 1-0. 3mg對照品溶液，搖勻，作對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠GF2M薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(3-7 2-6 1-4)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈254nm下檢視；供試品色譜中在于對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定A.膽紅素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液(70-90 5-15 5-15)為流動相；檢測波長為450nm ；理論板數(shù)按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取膽紅素對照品，加氯仿制成每Iml含5_15μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末3_7g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷20-30ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含膽紅素(C33H36N4O6)計，不得少于0. 04mg ；B.甘草酸照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(30-40 60-70)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數(shù)按甘草酸胺峰計算應不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸銨/1.0207)；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末5_8g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含甘草酸(C42H61O16NH4)計，不得少于0. 33mg ；C.巖白菜素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(10-30 70-90)為流動相；檢測波長為275nm;理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品，加甲醇制成每Iml含40-60 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末2_4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于0. 67mg。
本發(fā)明安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.取安兒寧顆粒2g，研細，加丙酮10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，加丙酮制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸O 2 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。B.安兒寧顆粒研細后，取粉末10g，加甲醇20ml，超聲提取30min，取出，放冷，過濾，取續(xù)濾液蒸干后，殘留物用水20ml全部轉移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；殘渣加甲醇使溶解，轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作供試品溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇溶解并稀釋成每Iml甲醇溶液含0. 2mg對照品溶液，搖勻，作對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠GF2M薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5 4 2.5)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈254nm下檢視；供試品色譜中在于對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點。含量測定A.膽紅素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液(80 10 10)為流動相；檢測波長為450nm;理論板數(shù)按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取膽紅素對照品，加氯仿制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含膽紅素(C33H36N4O6)計，不得少于0. 04mgoB.甘草酸照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(37 63)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數(shù)按甘草酸胺峰計算應不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每Iml含0. 2mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸銨/1.0207)；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末6. 5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測 定，即得；安兒寧顆粒每克含甘草酸(C42H61016NH4)計，不得少于0. 33mg。C.巖白菜素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (20 80)為流動相；檢測波長為275nm;理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1ml含50y g的溶 液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶 中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻， 濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液相色譜儀，測 定，即得；安兒寧顆粒每克含巖白菜素(C14H1609)計，不得少于0. 67mg。其中，上述安兒寧顆粒的原料藥組成為紅花30-70重量份 白檀香 40-70重量份甘草30-70重量份 高山辣根菜30-70重量份巖白菜 30-70重量份 天竺黃 40-70重量份短管兔兒草40-70重量份 唐古特烏頭40-70重量份人工牛黃 2-8重量份 蔗糖600-1200重量份。其中，上述安兒寧顆粒的原料藥組成優(yōu)選為紅花53. 3重量份 白檀香 66. 7重量份甘草53. 3重量份 高山辣根菜53. 3重量份巖白菜 53. 3重量份 天竺黃 66. 7重量份短管兔耳草66. 7重量份 唐古特烏頭66. 7重量份人工牛黃 5. 3重量份 蔗糖930重量份。其中，上述安兒寧顆粒由如下方法制備而成取紅花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸餾法提取2-4小時，收集揮發(fā)油，濾 過，藥渣與甘草、高山辣根菜、巖白菜、天竺黃、短管兔兒草和唐古特烏頭合并，加6-12重量 倍的的水，煎煮1-4次，時間為1-4小時，濾過，合并濾液，濃縮至P = 1. 02 1. 04(溫度 50°C測定)的清膏，清膏至冷藏罐中進行冷藏12-36小時，取上清液用高速管式離心機離 心，離心液繼續(xù)濃縮至稠膏P = 1.07 1.09 (溫度50°C測定)，噴霧干燥，即得安兒寧提 取物；取環(huán)糊精5-20重量份，溶于100體積份的40°C水中，超聲1-3小時，在強力磁 力攪拌下加入1-3體積份的揮發(fā)油乙醇溶液，其中每體積份溶液中含0. 3-0. 8體積份的揮 發(fā)油，強力攪拌1-6小時，冷藏12-36小時，濾過，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得揮發(fā)油 的環(huán)糊精包合物；取安兒寧提取物、^ -環(huán)糊精揮發(fā)油包合物和人工牛黃，混合加入蔗糖，混合均勻， 用50%乙醇溶液做潤濕劑，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
其中，上述安兒寧顆粒優(yōu)選由如下方法制備而成取紅花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸餾法提取3小時，收集揮發(fā)油，濾過，藥渣與甘草、高山辣根菜、巖白菜、天竺黃、短管兔兒草和唐古特烏頭合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小時，第二次加8重量倍的水煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至P = 1.02 1.04(溫度50°C測定)的清膏，清膏至冷藏罐中進行冷藏M小時，取上清液用高速管式離心機離心，離心液繼續(xù)濃縮至稠膏P = 1.07 1.09(溫度50°C測定)，噴霧干燥，即得安兒寧提取物；取β-環(huán)糊精10重量份，溶于100體積份的40°C水中，超聲2小時，在強力磁力攪拌下加入2體積份的揮發(fā)油乙醇溶液，其中每體積份溶液中含0. 5體積份的揮發(fā)油，強力攪拌2小時，冷藏M小時，濾過，40°C真空干燥沉淀，粉碎，即得揮發(fā)油的β -環(huán)糊精包合物；取安兒寧提取物、β -環(huán)糊精揮發(fā)油包合物和人工牛黃，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做潤濕劑，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。本發(fā)明所述重量份與體積份的關系為g/ml的關系。本發(fā)明公開了一種關于安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法，該方法包括膽酸和巖白菜素的鑒別方法，還包括甘草酸、巖白菜素和膽紅素的含量測定方法。經(jīng)過實驗研究，本發(fā)明質(zhì)量檢測方法中的鑒別方法在樣品的供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。用本發(fā)明所述的含量測定方法測定安兒寧顆粒中的甘草酸和巖白菜素的含量，結果表明，該方法線性關系良好，回收率試驗準確度較高，具有極好的重復性和穩(wěn)定性，可以準確、嚴密地控制安兒寧顆粒的質(zhì)量。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例1對各種原料藥鑒別方法的研究實驗按照記載于國家藥品標準，標準編號為WS-10640(ZD-0640)-2002，按照安兒寧顆粒的標準制備三批安兒寧顆粒，分別對其中的各種原料藥的鑒別方法進行試驗，實驗依據(jù)及結果如下1、參考《中國藥典》2010年版一部紅花質(zhì)量標準紅花試驗，結果表明三批樣品和陰性對照色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，無明顯斑點。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。2、參考《復方巖白菜素片的薄層色譜鑒別法》對巖白菜試驗，結果表明三批樣品和陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。3、參考《薄層掃描法測定清肺消炎丸中巖白菜素的含量》對巖白菜試驗，結果表明三批供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。故作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。4、參考《兔耳草藥材薄層色譜鑒別與含量測定》對短管兔耳草試驗，結果表明三批樣品和陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。5、參考七味肝膽清膠囊質(zhì)量標準WS_106^ ^)-06 )-2002對短管兔耳草試驗，結果表明展開劑極性太小，各斑點幾乎沒有展開。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。
6、參考《地黃飲料中所含成分梓醇的鑒別》對短管兔耳草試驗，結果表明三批樣品和陰性對照色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。7、參考《中國藥典》2010年版一部天竺黃質(zhì)量標準對天竺黃試驗，結果表明陰性有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。8、參考《中國藥典》2010年版一部甘草質(zhì)量標準對甘草試驗，結果表明未見甘草酸銨有明顯斑點，甘草對照藥材所顯斑點，供試品和陰性對照相應位置處也有相同的斑點，故陰性有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。9、參考《復方甘草合劑中甘草的薄層鑒別》對甘草試驗，結果表明供試品和陰性對照在甘草酸銨相應位置處也有相同的斑點，故陰性有干擾。故不作為本發(fā)明安兒寧顆粒質(zhì)量檢測方法中的一部分。實驗例2 HPLC法測定安兒寧顆粒中甘草酸的含量1.儀器、試藥和供試樣品儀器高效液相色譜儀日立L-7110泵，L-7420紫外檢測器；島津LC-20AT泵，SPD-20A檢測器；島津AUW220D電子天平 對照品甘草酸銨對照品樣品安兒寧顆粒(按照記載于中成藥地方標準上升國家藥品標準部分中的安兒寧顆粒的標準制備)2.流動相的選擇參考甘草含量測定項，擬選用乙腈-0. 5%磷酸溶液(37 63)為流動相，在此條件下，甘草酸銨與其它相鄰峰分離度較大，峰形較好。3.檢測波長的選擇取甘草酸銨對照品溶液，于200-400nm波長范圍內(nèi)進行掃描，根據(jù)紫外吸收圖譜，選定250nm為檢測波長。4.對照品溶液的制備參考甘草含量測定方法，確定對照品溶液的制備方法為精密稱取甘草酸銨對照品適量，加70%乙醇制成每Iml含0. 2mg的溶液即得。(甘草酸重量=甘草酸銨重量/1. 0207)5.供試品溶液的制備取安兒寧顆粒研細后粉末4. 0g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，稱定重量，超聲處理30min，放冷后，用70 %乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，即得。6.系統(tǒng)適用性試驗及陰性干擾的考察在上述色譜條件下，分別精密吸取空白溶劑、對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，結果表明，供試品色譜中甘草酸銨與其相鄰色譜峰的分離度大于1. 5，且陰性對照無干擾。7.標準曲線的制備和線性關系的考察精密量取甘草酸銨對照品貯備液溶液(0. 3614mg/ml) Iml、2ml、3ml、5ml、8ml、10ml，分別置IOml容量瓶中，70 %乙醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進樣10μ 1，以峰面積㈧對對照品濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程=A = 7175. 9C+43512，相關系數(shù):R = 0. 9993。結果表明在36. 14ug/ml 361. 40ug/ml范圍內(nèi)，甘草酸銨的峰面積(A)與濃度(C)線性關系良好。8.精密度試驗分別精密吸取甘草酸銨對照品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，各連續(xù)測定6次，記錄峰面積并計算相對標準偏差，RSD = 0. 80%。結果表明，儀器精密度良好。9.穩(wěn)定性試驗供試品溶液制備完成后，精密吸取10μ 1，注入液相色譜儀，記錄峰面積，以后每隔2小時測定一次，考察8小時，計算峰面積的相對標準偏差，RSD = 0. 90%。結果表明供試品中膽紅素在8小時內(nèi)測定結果穩(wěn)定。10.重復性試驗取安兒寧顆粒，重復測定6次，計算樣品中甘草酸的含量。結果甘草酸平均含量為0. 43mg/g, RSD = 0. 99%。表明分析方法重復性良好。11.回收率試驗精密稱取同一批安兒寧顆粒樣品6份，精密加入甘草酸銨對照品，測定其含量，計算回收率，結果如下。甘草酸平均回收率為99.2%，RSD = 1.07%。表明該測定方法測定結果準確。表1回收率試驗結果
權利要求
1. 一種安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.取安兒寧顆粒l_3g，研細，加丙酮5-15ml，超聲處理10-30分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，加丙酮制成每Iml各含0. 1-0. 3mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸(1-3 1-3 0.5-1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在100°C-11(TC加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；B.安兒寧顆粒研細后，取粉末5-15g，加甲醇15-25ml，超聲提取20-40min，取出，放冷，過濾，取續(xù)濾液蒸干后，殘留物用水10-30ml全部轉移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取3-5次，每次10-30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；殘渣加甲醇使溶解，轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作供試品溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇溶解并稀釋成每Iml甲醇溶液含0. 1-0. 3mg對照品溶液，搖勻，作對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μ1，分別點于同一硅膠GF2M薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(3-7 2-6 1-4)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈2Mnm下檢視；供試品色譜中在于對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.膽紅素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液(70-90 5-15 5-15)為流動相；檢測波長為450nm ；理論板數(shù)按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取膽紅素對照品，加氯仿制成每Iml含5-15 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末3-7g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷20-30ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含膽紅素(C33H36N4O6)計，不得少于0. (Mmg ；B.甘草酸照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0. 5%磷酸溶液(30-40 60-70)為流動相；檢測波長為250nm;理論板數(shù)按甘草酸胺峰計算應不低于5000 ；對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每Iml含0. 1-0. 3mg的溶液，即得(甘草酸重量=甘草酸銨/1.0207)；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末5-8g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇20-30ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含甘草酸(C42H61O16NH4)計，不得少于0. 33mg ；C.巖白菜素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(10-30 70-90)為流動相；檢測波長為275nm;理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品，加甲醇制成每Iml含40-60μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末2-4g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，密塞，稱定重量，超聲20-40min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；安兒寧顆粒每克含巖白菜素(C14H16O9)計，不得少于0.67mg。
2.如權利要求1所述的安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.取安兒寧顆粒2g，研細，加丙酮10ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至lml，作為供試品溶液；另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，加丙酮制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各ΙΟμΙ，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-氯仿-冰醋酸O 2 1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；B.安兒寧顆粒研細后，取粉末10g，加甲醇20ml，超聲提取30min，取出，放冷，過濾，取續(xù)濾液蒸干后，殘留物用水20ml全部轉移至分液漏斗，水溶液用乙酸乙酯提取4次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干；殘渣加甲醇使溶解，轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作供試品溶液；另取巖白菜素對照品，加甲醇溶解并稀釋成每Iml甲醇溶液含0. 2mg對照品溶液，搖勻，作對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各10μ 1，分別點于同一硅膠GF2M薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇(5 4 2.5)為展開劑，展開，取出晾干，置紫外光燈254nm下檢視；供試品色譜中在于對照品相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.膽紅素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸溶液(80 10 10)為流動相；檢測波長為450nm;理論板數(shù)按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備精密稱取膽紅素對照品，加氯仿制成每Iml含10μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精 密加入二氯甲烷25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用二氯甲烷補足減失的重量，搖 勻，濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 yl，注入液相色譜儀，測定，即得;安兒寧顆粒每克含膽紅素(C33H36N406)計，不得少于0. 04mg ；B.甘草酸照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0. 5%磷酸 溶液(37 63)為流動相；檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸胺峰計算應不低于5000 ； 對照品溶液的制備精密稱取甘草酸銨對照品，加甲醇制成每1ml含0. 2mg的溶液，即 得(甘草酸重量=甘草酸銨/I. 0207)；供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末6. 5g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中， 精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾 過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10U1，注入液相色譜儀，測定，即得;安兒寧顆粒每克含甘草酸(C42H61016NH4)計，不得少于0. 33mg ；C.巖白菜素照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VID)測定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷其硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水 (20 80)為流動相；檢測波長為275nm;理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備精密稱取巖白菜素對照品，加甲醇制成每1ml含50y g的溶液，即得;供試品溶液的制備安兒寧顆粒研細后，取粉末3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精 密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過， 即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOul，注入液相色譜儀，測定，即得;安兒寧顆粒每克含巖白菜素(C14H1609)計，不得少于0. 67mg。
3.如權利要求1或2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于其中所述的安兒寧顆粒的原料 藥組成為紅花30-70重量份 白檀香 40-70重量份甘草30-70重量份 高山辣根菜30-70重量份巖白菜 30-70重量份 天竺黃 40-70重量份 短管兔兒草40-70重量份 唐古特烏頭40-70重量份 人工牛黃 2-8重量份 蔗糖600-1200重量份。
4.如權利要求3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于其中所述的安兒寧顆粒的原料藥組 成為紅花53. 3重量份 白檀香 66. 7重量份甘草53. 3重量份 高山辣根菜53. 3重量份巖白菜 53. 3重量份天竺黃 66. 7重量份短管兔耳草66. 7重量份唐古特烏頭66. 7重量份人工牛黃 5. 3重量份蔗糖930重量份。
5.如權利要求3所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于其中所述的安兒寧顆粒由如下方法制備而成取紅花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸餾法提取2-4小時，收集揮發(fā)油，濾過，藥渣與甘草、高山辣根菜、巖白菜、天竺黃、短管兔兒草和唐古特烏頭合并，加6-12重量倍的的水，煎煮1-4次，時間為1-4小時，濾過，合并濾液，濃縮至50°C下測定P =1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中進行冷藏12-36小時，取上清液用高速管式離心機離心，離心液繼續(xù)濃縮至50°C下測定P = 1. 07 1. 09的稠膏，噴霧干燥，即得安兒寧提取物；取β-環(huán)糊精5-20重量份，溶于100體積份的40°C水中，超聲1-3小時，在強力磁力攪拌下加入1-3體積份的揮發(fā)油乙醇溶液，其中每體積份溶液中含0. 3-0. 8體積份的揮發(fā)油，強力攪拌1-6小時，冷藏12-36小時，濾過，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物；取安兒寧提取物、β -環(huán)糊精揮發(fā)油包合物和人工牛黃，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做潤濕劑，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
6.如權利要求4所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于其中所述的安兒寧顆粒由如下方法制備而成取紅花、白檀香加3-7重量倍的水用水蒸汽蒸餾法提取2-4小時，收集揮發(fā)油，濾過，藥渣與甘草、高山辣根菜、巖白菜、天竺黃、短管兔兒草和唐古特烏頭合并，加6-12重量倍的的水，煎煮1-4次，時間為1-4小時，濾過，合并濾液，濃縮至50°C下測定P = 1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中進行冷藏12-36小時，取上清液用高速管式離心機離心，離心液繼續(xù)濃縮至50°C下測定P = 1. 07 1. 09的稠膏，噴霧干燥，即得安兒寧提取物；取β-環(huán)糊精5-20重量份，溶于100體積份的40°C水中，超聲1-3小時，在強力磁力攪拌下加入1-3體積份的揮發(fā)油乙醇溶液，其中每體積份溶液中含0. 3-0. 8體積份的揮發(fā)油，強力攪拌1-6小時，冷藏12-36小時，濾過，30-50°C真空干燥沉淀，粉碎，即得揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物；取安兒寧提取物、β -環(huán)糊精揮發(fā)油包合物和人工牛黃，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做潤濕劑，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
7.如權利要求5或6所述的質(zhì)量檢測方法，其特征在于其中所述的安兒寧顆粒由如下方法制備而成取紅花、白檀香加5重量倍的水用水蒸汽蒸餾法提取3小時，收集揮發(fā)油，濾過，藥渣與甘草、高山辣根菜、巖白菜、天竺黃、短管兔兒草和唐古特烏頭合并，加水煎煮2次，第一次加10重量倍的水煎煮2小時，第二次加8重量倍的水煎煮2小時，濾過，合并濾液，濃縮至50°C下測定P =1.02 1.04的清膏，清膏至冷藏罐中進行冷藏M小時，取上清液用高速管式離心機離心，離心液繼續(xù)濃縮至50°C下測定P = 1.07 1.09的稠膏，噴霧干燥，即得安兒寧提取物；取β -環(huán)糊精10重量份，溶于100體積份的40°C水中，超聲2小時，在強力磁力攪拌下加入2體積份的揮發(fā)油乙醇溶液，其中每體積份溶液中含0. 5體積份的揮發(fā)油，強力攪拌2小時，冷藏M小時，濾過，40°C真空干燥沉淀，粉碎，即得揮發(fā)油的β-環(huán)糊精包合物；取安兒寧提取物、β -環(huán)糊精揮發(fā)油包合物和人工牛黃，混合加入蔗糖，混合均勻，用50%乙醇溶液做潤濕劑，14目制粒，50°C干燥，14目整粒，即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種關于安兒寧顆粒的質(zhì)量檢測方法，該方法包括膽酸和巖白菜素的鑒別方法，還包括甘草酸、巖白菜素和膽紅素的含量測定方法。經(jīng)過實驗研究，本發(fā)明質(zhì)量檢測方法中的鑒別方法在樣品的供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。用本發(fā)明所述的含量測定方法測定安兒寧顆粒中的甘草酸和巖白菜素的含量，結果表明，該方法線性關系良好，回收率試驗準確度較高，具有極好的重復性和穩(wěn)定性，可以準確、嚴密地控制安兒寧顆粒的質(zhì)量。
文檔編號G01N30/02GK102579861SQ20111000943
公開日2012年7月18日 申請日期2011年1月17日 優(yōu)先權日2011年1月17日
發(fā)明者孫緒丁, 張義智, 李麗, 李懷平, 馬振元 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司