專利名稱：一種鑒定紙張制成時(shí)間的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鑒定紙張制成時(shí)間的方法。
背景技術(shù)：
在法庭科學(xué)中，紙張常作為各種信件、證書、契約等文件字跡和印章的載體。在各類案件中，作案人或當(dāng)事人常常在事后偽造文件來冒充原文，謊稱該文件的制成時(shí)間。因此要求對(duì)可疑文件紙張的生產(chǎn)年代進(jìn)行鑒定，它是文件真?zhèn)蔚闹匾罁?jù)。紙張的主要成分是纖維素、半纖維索和木質(zhì)素，均具有易氧化變質(zhì)的性質(zhì)；造紙過程中使用松香、明礬上膠， 使紙張帶酸性，也會(huì)造成紙張的老化。表現(xiàn)出隨著時(shí)間的推移出現(xiàn)發(fā)黃、變脆邊緣部分被降解、紙張中間出現(xiàn)色斑等情況，致使紙張無法使用、記載文字丟失等，并且隨時(shí)間的增長更加嚴(yán)重，因而通常通過檢驗(yàn)紙張的老化程度來鑒定紙張的形成年代。目前用于紙張纖維老化的方法主要有PH測定法、紅外光譜法、電鏡法及毛細(xì)管電泳法等物理和化學(xué)方法，用生物分析的方法未見相關(guān)報(bào)道。并且已有的分析方法用于測定紙張的制成時(shí)間上，精確度不高，例如間隔半年以上的紙張的相對(duì)制成時(shí)間就不是很準(zhǔn)確，所以急需一種可靠并且清確度高的生物學(xué)鑒定方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種測定紙張制成時(shí)間準(zhǔn)確的方法，其技術(shù)方案如下一種鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其包含以下步驟(1)將待測的紙張樣品經(jīng)處理后制成絕干紙漿；(2)制備各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，并測定各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的吸光值，繪制出葡萄糖濃度與吸光度之間的曲線關(guān)系；(3)將待測紙張制成的絕干紙漿與纖維素酶進(jìn)行反應(yīng)，將反應(yīng)液過濾得到的清液進(jìn)行吸光度測定，然后對(duì)照葡萄糖和吸光度的曲線讀出它的含糖量，根據(jù)含糖量計(jì)算出絕干紙漿的還原糖量；(4)按照上述(1) (3)步驟測定已知的紙張的還原糖量和紙張制成時(shí)間的曲線圖；(5)將待測紙張樣品經(jīng)過(1) ( 步驟后的含糖量在含糖量和紙張制成時(shí)間曲線圖上找出對(duì)應(yīng)的紙張制成時(shí)間。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中在步驟(1)中的取待測紙樣，在去離子水中浸泡后打漿成懸濁液，抽濾后的濾餅置于沸水浴中，抽濾將熱水洗滌后的紙漿樣品冷卻，置于封閉的容器中，放入冰箱中平衡水分，取紙漿試樣在烘箱中烘干至恒重，測紙漿質(zhì)量。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中在步驟O)中用分光光度計(jì)在540nm 處測得葡萄糖溶液的吸光值，以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。
如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中在步驟(3)中，取絕干紙漿樣品放人已預(yù)熱的含40 60mL纖維素酶液的三角瓶中；另取上述紙樣分別放入已預(yù)熱IOmin的含40 60mL緩沖溶液的三角瓶中，攪拌至懸濁狀，用保鮮膜封口，在30°C 70°C下反應(yīng) 30 240分鐘，將達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)的反應(yīng)懸濁液過濾，分別取澄清濾液加入比色管中，沸水浴滅活，迅速冷卻；另取一比色管加去離子水，然后與含有絕干紙漿樣品的比色管均加入DNS 試劑搖勻，沸水浴顯色，迅速冷卻，定容后，在540nm處測吸光值，根據(jù)還原糖質(zhì)量=含糖質(zhì)量X樣品稀釋倍數(shù)算出還原糖質(zhì)量；其中含糖質(zhì)量，由葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線直接讀出。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中所用的紙張樣品為不含油墨的普通紙張。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中所述的待測紙張樣品在三角瓶中的反應(yīng)溫度為50°C。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中所述的待測紙張樣品的反應(yīng)液中PH =4. 8。如上所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其中所述的的待測張張樣品反應(yīng)時(shí)間為60 分鐘。本發(fā)明與現(xiàn)在技術(shù)相比提供了一種新的生物學(xué)鑒定紙張制成時(shí)間或者制成時(shí)間的方法，該方法更加科學(xué)合理，對(duì)制成相對(duì)時(shí)間間隔較小的紙張也能輕易根據(jù)本發(fā)明的方法做出準(zhǔn)確的鑒定。


圖1為酶解溫度對(duì)相對(duì)酶活力的影響。圖2為PH值對(duì)相對(duì)酶活力的影響。圖3為酶解反應(yīng)時(shí)間曲線。圖4為用酶量對(duì)酶解反應(yīng)的影響。圖5為紙張還原糖量與纖維制成時(shí)間的關(guān)系曲線圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)的解釋本具體實(shí)施例中所采用的試劑、儀器的名稱和來源為纖維素酶，肇東市日成酶制劑有限公司；酒石酸鉀鈉，國營煙臺(tái)葡萄釀酒公司；3， 5-二硝基水楊酸，北京化工廠；冰乙酸、葡萄糖，天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心；重蒸酚， 沈陽試劑一廠；HH恒溫水浴鍋，余桃市檢測儀表廠；Unic-72k可見光分光光度計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；打漿機(jī)，博朗電子。鑒定紙張制成時(shí)間的方法具體實(shí)施例— .樣品處理步驟(1)樣品來源隨機(jī)選取8張制成時(shí)間不同(制成時(shí)間分別為 5月、7月、17月、19月、25月、31月、33月、41月)的凸版印刷紙，按制成時(shí)間由短至長分別編號(hào)Al A8作為樣品進(jìn)行測定。(2)樣品預(yù)處理取待測紙樣20g，在500mL去離子水中浸泡10h，加去離子水 IOOOmL,打漿5min成懸濁液。抽濾，濾餅置于沸水浴中30min，抽濾將熱水洗滌后的紙漿樣品冷卻，置于封閉的容器中，放入4°C冰箱中平衡水分10h。取紙漿試樣lg，在105°C烘箱中烘干至恒重生成絕干紙漿，測紙漿質(zhì)量。(3)分析紙樣樣品的制備制備含Ig絕干漿的待測紙樣稱取待測濾餅質(zhì)量，密封，放人4°C冰箱保存。應(yīng)稱取的待測濾餅質(zhì)量=l/10m。m為絕干紙漿質(zhì)量，單位g。二 .葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定配制羧甲基纖維素鈉(CMC)溶液、DNS溶液和標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，用分光光度計(jì)在540nm處測得吸光值。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到曲線方程為y = 0. 5066X-0. 0102。三.纖維素酶活力的測定纖維素酶液配制以HAc-NaAc緩沖溶液為體系，準(zhǔn)確稱取所取得纖維素酶固體粉末，溶于緩沖溶液，定容至刻度。纖維素酶活力測定取0. 9mL CMC溶液加入比色管，在所需反應(yīng)溫度下預(yù)熱5min， 加入0. ImL酶液，反應(yīng)20min。沸水浴滅活15min，迅速冷卻，加入lmLDNS，沸水浴顯色5min， 迅速冷卻，蒸餾水定容至10mL，540nm下測吸光值。參比以蒸餾水代替酶液，空白以ImL蒸餾水加ImLDNS代替，酶活力定義為在50°C、pH4. 8條件下，ImL酶液水解羧甲基纖維素溶液 20min，產(chǎn)生Ig還原糖的用酶量為一個(gè)酶活力單位。酶活力=ΔOD · Α/Κ · V · t相對(duì)酶活力一待測酶活力/標(biāo)準(zhǔn)條件下的酶活力X 100式中，Δ 0D，待測樣OD值與參比樣OD值之差；K，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；Α，酶液體積與纖維素固體酶質(zhì)量之比(mL/ g) ；V，酶液添加量，mL ;t，反應(yīng)時(shí)間，min。四.纖維素酶酶解紙張分析方法(1)分別取含Ig絕干紙漿老化程度不同的兩種樣品分別放人已預(yù)熱IOmin的含40mL酶液的三角瓶中；另取上述紙樣分別放人已預(yù)熱 IOmin的含40mL緩沖溶液的三角瓶中，攪拌至懸濁狀，用保鮮膜封口，在一定溫度下反應(yīng)。①反應(yīng)溫度對(duì)酶解反應(yīng)有一定影響，選擇的溫度梯度為30、40、50、60、70°C，在 PH4. 8條件下分別按“步驟三”中的方法測定相對(duì)酶活，定義pH = 4. 8、50°C條件下相對(duì)酶活力為100，橫坐標(biāo)為反應(yīng)溫度，縱坐標(biāo)為相對(duì)酶活力，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1。由圖可見，當(dāng)溫度為40 50°C時(shí)，纖維素酶相對(duì)酶活力接近100 ；小于30°C和大于60°C處顯著下降。因此實(shí)施例選用50°C作為反應(yīng)溫度。②因?yàn)閜H值影響酶解反應(yīng)的反應(yīng)程度，設(shè)定pH梯度為2. 6,3. 8,4. 4,4. 8,5. 2和 5.6。分別按“步驟三”中的方法測定相對(duì)酶活。選擇50°C、pH = 4.8時(shí)相對(duì)酶活力為100， 結(jié)果見圖2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，纖維素酶在pH= 5.0左右保持較高的酶活力。因此本實(shí)施例中選用pH為4. 8作為最佳反應(yīng)pH。③反應(yīng)時(shí)間纖維素酶應(yīng)用在紡織行業(yè)的建議時(shí)間為40 80min，因而選擇30、 60、90、120、150、240min作為反應(yīng)時(shí)間梯度，在50°C、pH = 4. 8下反應(yīng)，酶液體積為40mL, 加酶量為10kU/mL。按“步驟三”中的方法測量還原糖生成量，結(jié)果如圖3所示。由圖3可見，在0 90min還原糖生成速度隨時(shí)間增加而快速增長，90min以后增長變緩慢。選擇還原糖生成速度較快的點(diǎn)，即60min作為反應(yīng)最佳反應(yīng)時(shí)間。④反應(yīng)用酶量分別取固體纖維素酶0. 03,0. 05,0. 08,0. 10,0. 15g，用pH 4.8緩沖溶液稀釋定容到200mL。取40mL酶液在50°C、pH4.8下反應(yīng)。按“步驟三”中的方法測定還原糖生成量，計(jì)算酶活力。結(jié)果如圖4所示。用酶量在0 15個(gè)單位時(shí)，還原糖生成量迅速增加；20個(gè)單位以上變化較小，說明酶過量，因而選擇還原糖生成量增長較快、用酶量較小的點(diǎn)，給老化程度不同的紙張相同的、較小的分解力，從差別中分析老化的程度。選取用酶量為10kU/mL，即取固體酶制劑0. 05g，稀釋到200mL，稀釋倍數(shù)為4000。⑤反應(yīng)溶液量在50°C、pH4. 8，用酶量10kU/mL條件下分別用40、60、80mL酶液與紙樣反應(yīng)，緩沖溶液代替酶液作參比。反應(yīng)60min，按“步驟三”的方法測量還原糖生成量。 結(jié)果如表1所示。表一反應(yīng)液容量
權(quán)利要求
1.一種鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其包含以下步驟(1)將待測的紙張樣品經(jīng)處理后制成絕干紙漿；(2)制備各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，并測定各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的吸光值，繪制出葡萄糖濃度與吸光度之間的曲線關(guān)系；(3)將待測紙張制成的絕干紙漿與纖維素酶進(jìn)行反應(yīng)，將反應(yīng)液過濾得到的清液進(jìn)行吸光度測定，然后對(duì)照葡萄糖和吸光度的曲線讀出它的含糖量，根據(jù)含糖量計(jì)算出絕干紙漿的還原糖量；(4)按照上述⑴ (3)步驟測定已知的紙張的還原糖量和紙張制成時(shí)間的曲線圖；(5)將未知制成時(shí)間的待測紙張樣品經(jīng)過(1) ( 步驟后的含糖量在含糖量和紙張制成時(shí)間曲線圖上找出對(duì)應(yīng)的紙張制成時(shí)間。
2.如權(quán)利要求1所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于在步驟(1)中的取待測紙樣，在去離子水中浸泡后打漿成懸濁液，抽濾后的濾餅置于沸水浴中，抽濾將熱水洗滌后的紙漿樣品冷卻，置于封閉的容器中，放入冰箱中平衡水分，取紙漿試樣在烘箱中烘干至恒重，測紙漿質(zhì)量。
3.如權(quán)利要求1所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于在步驟O)中用分光光度計(jì)在540nm處測得葡萄糖溶液的吸光值，以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4.如權(quán)利要求1所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于在步驟(3)中，取絕干紙漿樣品放人已預(yù)熱的含40 60mL纖維素酶液的三角瓶中；另取上述紙樣分別放入已預(yù)熱IOmin的含40 60mL緩沖溶液的三角瓶中，攪拌至懸濁狀，用保鮮膜封口，在30°C 70°C下反應(yīng)30 240分鐘，將達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)的反應(yīng)懸濁液過濾，分別取澄清濾液加入比色管中，沸水浴滅活，迅速冷卻；另取一比色管加去離子水，然后與含有絕干紙漿樣品的比色管均加入DNS試劑搖勻，沸水浴顯色，迅速冷卻，定容后，在MOnm處測吸光值，根據(jù)還原糖質(zhì)量=含糖質(zhì)量X樣品稀釋倍數(shù)算出還原糖質(zhì)量；其中含糖質(zhì)量，由葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線直接讀出。
5.如權(quán)利要求1所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于其中所用的紙張樣品為不含油墨的普通紙張。
6.如權(quán)利要求4所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于所述的待測紙張樣品在三角瓶中的反應(yīng)溫度為50°C。
7.如權(quán)利要求4所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于所述的待測紙張樣品的反應(yīng)液中PH為4. 8。
8.如權(quán)利要求4所述的鑒定紙張制成時(shí)間的方法，其特征在于所述的的待測張張樣品反應(yīng)時(shí)間為60分鐘。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鑒定紙張制成時(shí)間的方法，本發(fā)明構(gòu)思是紙張中的成份主要是纖維素，當(dāng)纖維素和纖維素酶發(fā)生反應(yīng)時(shí)，能夠反應(yīng)得到葡萄糖，所以根據(jù)反應(yīng)液中葡萄糖的含量來進(jìn)行紙張制成時(shí)間的測定。本發(fā)明與現(xiàn)在技術(shù)相比提供了一種新的生物學(xué)鑒定紙張制成時(shí)間或者制成時(shí)間的方法，該方法更加科學(xué)合理，對(duì)制成相對(duì)時(shí)間間隔較小的紙張也能輕易根據(jù)本發(fā)明的方法做出準(zhǔn)確的鑒定。
文檔編號(hào)G01N21/77GK102401795SQ20101027736
公開日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月9日
發(fā)明者丁國才 申請(qǐng)人:上海海帝園藝有限公司