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降鈣素原(pct)在急性冠脈綜合征的預(yù)后中的應(yīng)用的制作方法

文檔序號:5863559閱讀:401來源:國知局
專利名稱:降鈣素原(pct)在急性冠脈綜合征的預(yù)后中的應(yīng)用的制作方法
降鈣素原(PCT)在急性冠脈綜合征的預(yù)后中的應(yīng)用本發(fā)明的主題是用于確定患有急性冠脈綜合征的患者的預(yù)后的分析方法和體外 方法,由此測量從所述患者獲得的樣品中的降鈣素原或其片段的水平。然后可以將降鈣素 原或其片段的水平與所述急性冠脈綜合征的不利后果的傾向性相關(guān)聯(lián)。術(shù)語急性冠脈綜合征(ACS)已被應(yīng)用于一組由心臟的缺血性損傷(insult)弓丨起 的冠脈疾病?;加蠥CS的患者形成混雜的組,在病理生理學(xué)、臨床表象和不利事件的風(fēng)險方 面有差別。這樣的患者呈現(xiàn)給醫(yī)生的病癥跨越了包括不穩(wěn)定心絞痛、非ST抬高非Q波心肌 梗塞(NST-MI)、ST抬高非Q波MI和透壁性(Q波)MI的連續(xù)帶(continuum)。據(jù)信,ACS主 要源自于一個或多個冠狀動脈中血栓的沉積和生長,導(dǎo)致動脈的部分或完全阻塞,并通常 包括血小板的破裂,導(dǎo)致缺血性損傷。ACS也可以由冠狀血管痙攣或心肌需求量增加所促 成。對于綜述參見例如 Davies,Clin. Cardiol. 20 (Supp. I) :I2_I7 (1997)。缺血性損傷后的發(fā)病率和死亡率突出強(qiáng)調(diào)了 ACS的嚴(yán)重性。例如,據(jù)估計,在表 現(xiàn)出ACS后4到6周內(nèi),死亡或繼發(fā)MI的風(fēng)險是8-14 %,死亡、MI或頑固性缺血的比率 是 15-25% (Theroux 和 Fuster, Circulation97 1195-1206 (1998))。由于在美國,由急性 MI引起的死亡總數(shù)是約600,000,因此可以理解,過去對與ACS的診斷、預(yù)后和管理有關(guān)的 信息已進(jìn)行了廣泛的搜索。已經(jīng)鑒定到幾種可能在某些患者群體中提供這種信息的潛在 標(biāo)志物,包括血液循環(huán)中的心肌肌鈣蛋白的水平(參見例如Antman等,N. Eng. J. Med. 335 ; 1342-9(1996);也參見美國專利 Nos. 6,147,688,6, 156,521,5, 947,124 和 5,795,725)、 ST段壓低(參見例如Savonitto等,JAMA 281 :707_13 (1999))、血液循環(huán)中的肌酸激酶水 平(參見例如Alexander等,Circulation (Suppl.) 1629 (1998))、血液循環(huán)中的C反應(yīng)蛋 白水平(參見例如Morrow等,J. Am. Coll. Cardiol. 31 1460-5 (1998))、血液循環(huán)中源自 pre-proBNP 的多月太的水平(參見例如 Wiviott SD, de Lemos JA, Morrow DA. Clin Chim Acta. 2004Aug 16 ;346 (2) 119—28)。降鈣素原(PCT)已變成用于膿毒癥診斷的已被廣泛接受的生物標(biāo)志物;PCT反映 了細(xì)菌感染的嚴(yán)重性,特別是被用于監(jiān)測感染發(fā)展成膿毒癥、重癥膿毒癥或膿毒性休克的 進(jìn)程。有可能使用PCT測量系統(tǒng)性炎性反應(yīng)的活性、控制療法的成功和估計預(yù)后(Assicot M等,患有膿毒癥和感染的患者中的高血清降鈣素原濃度(High serum procalcitonin concentrations in patients with sepsis and infection), Lancetl993,341 :515_8 ; Clec' h C等,在患有膿毒性休克的患者中降鈣素原的診斷和預(yù)后價值(Diagnostic and prognostic value of procalcitonin in patients with septic shock), Crit Care Med 2004 ;32 1166-9 ;Lee YJ等,在系統(tǒng)性炎性反應(yīng)綜合征(SIRS)中降鈣素原 (PCT)水平、動脈酮體比例(AKBR)、APACHE III分值和多器官機(jī)能障礙分值(MODS)的預(yù) 則個生比較(Predictive comparisons of procalcitonin(PCT) level, arterial ketone body ratio (AKBR), APACHE III score and multiple organ dysfunction score (MOD S) in systemic infammatory response syndrome (SIRS)), Yonsei Med J 2004,45, 29-37 ;Meisner Μ.,膿毒癥的生物標(biāo)志物在臨床上有用嗎 (Biomarkers of sepsis clinically useful ? ), Curr Opin Crit Care 2005,11,473-480 ;Wunder C 等,IL-6、IL-10和PCT血漿濃度對于重癥膿毒癥中的后果預(yù)測可靠嗎?與APACHE III和SAPS II 的比較(Are IL-6, IL-IOand PCT plasma concentrations reliable for outcome prediction in severe sepsis ? A comparison with APACHE III and SAPS II), Inflamm Res 2004,53,158-163)。在患有膿毒癥的患者中PCT水平的增加與死亡率有關(guān) 聯(lián)(Oberhoffer M等,通過傳統(tǒng)和新的炎癥標(biāo)志物在患有膿毒癥的患者中進(jìn)行后果預(yù)測 (Outcome prediction by traditional and new markers of inflammation in patients with sepsis), Clin Chem Lab Med 1999 ;37 :363_368)。在患有不穩(wěn)定心絞痛和心肌梗塞的患者中,已經(jīng)使用PCT分析方法定量測定了 PCT水平,該P(yáng)CT分析方法的功能性靈敏度為0.3 μ g/L(Benamer H等,J Am Coll Card 1997,31 (2)suppl,451A)。在冠狀動脈外科手術(shù)后的患者中基于PCT血液水平診斷非感染性SIRS,已由 Kerbaul 等描述(Brit J Anaesthesia 2004,93 (5),639-644)。US 2004/0253637A1描述了通過測定用于心肌梗塞損傷的標(biāo)志物的水平并結(jié)合與 血壓調(diào)節(jié)有關(guān)的標(biāo)志物的水平,在對象中進(jìn)行多種冠脈疾病的鑒別診斷的方法。越來越多的研究討論了 PCT在其他感染性疾病例如肺炎、細(xì)菌性腦膜炎和瘧疾 中的潛在作用(Bugden SA, Coles C, Mills⑶,在持續(xù)腦膜炎球菌流行期間降鈣素原在 發(fā)熱年輕成人的急診室管理中的潛在作用(The potential role of procalcitonin in the emergency department management of febrile young adults during a sustained meningococcal epidemic), Emerg Med Australas 2004,16,114-119 ;Chiwakata CB 等,降鈣素原在患有惡性瘧原蟲瘧疾的患者中作為疾病嚴(yán)重性和死亡風(fēng)險的參數(shù) (Procalcitonin as a parameter of disease severity and risk of mortality in patients with Plasmodium falciparum malaria), J Infect Dis2001,183,1161-1164 ; Schwarz S等,細(xì)菌和非細(xì)菌腦膜炎中的血清降鈣素原水平(Serum procalcitonin levels in bacterial and abacterial meningitis), Crit Care Med 2000,28,1828-1832)。體外研究顯示,PCT在單核細(xì)胞黏附和遷移過程中發(fā)揮了重要作用,并進(jìn)一步對 誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)基因的表達(dá)具有影響(Linscheid P等,黏附性單核細(xì)胞和巨 噬細(xì)胞活化的脂肪細(xì)胞對降鈣素原和降鈣素基因相關(guān)肽的表達(dá)和分泌(Expression and secretion of procalcitonin and calcitonin gene-related peptide by adherent monocytes and by macrophage-activated adipocytes), Crit Care Med 2004,32, 1715-1721 ;Wiedermann FJ等,人類單核細(xì)胞對降鈣素原做出響應(yīng)的迀移(Migration of human monocytes in response to procalcitonin),Crit Care Med,2002,30,1112-1117 ; Hoffmann G等,在血管平滑肌細(xì)胞中降鈣素原放大了誘導(dǎo)性一氧化氮合酶基因表達(dá)和一 氧化氣白勺產(chǎn)生(Procalcitonin amplifies inducible nitric oxide synthase gene expression and nitric oxide production in vascular smooth muscle cells), Crit Care Med,2002,30,2091-2095)。動脈粥樣硬化中PCT水平與動脈壁的低等級炎癥之間的關(guān)聯(lián)性最近才被分析。專 利申請EP 07015271. 5公開了在患有穩(wěn)定冠狀動脈疾病(CAD)的患者的風(fēng)險分層中使用 PCT0但是,到目前為止還不知道PCT在急性冠脈綜合征(ACS)中是否具有預(yù)后能力。B-型尿鈉肽(BNP)和NT-proBNP在患有急性冠脈綜合征患者的預(yù)后中的應(yīng)用,已經(jīng)在各種不同研究中得到證實(Mazzone M, Forte P, Portale G, Mancini F, Ursella S, La SaIa M, Testa A, Covino M, Pignataro G, Gentiloni Silveri N. ,Hj^^li^il t生Mlft胃^ftE (Brain natriuretic peptide and acute coronary syndrome),Minerva Med. 2005Feb ;96(1) :11_8 ;Arakawa N,Nakamura Μ,Aoki H,Hiramori K.,血漿腦尿鈉肽濃 iSfjillJilii^^ililSip(Plasma brain natriuretic peptide concentrations
predict survival after acute myocardial infarction), J Am Coll Cardiol. 1996 ; 27 1656-1661 ;de Lemos JA, Morrow DA, Bentley JH 等,B-型尿鈉肽在患有急性冠脈 綜合征白勺,患者中白勺預(yù)后價值(The prognostic value of B~type natriuretic peptide in patients with acute coronary syndromes), N Engl J Med. 2001 ;345 :1014_1021 ; Omland T,Persson A, Ng L等,急性冠脈綜合征中的N-端前B-型尿鈉肽原和長期死亡 率(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide and long-term mortality in acute coronary syndromes), Circulation. 2002 ; 106 ;2913-2918)。B-型尿鈉肽(BNP或BNP-32)是32個氨基酸的神經(jīng)激素,它在心室心肌中合成, 并對心室擴(kuò)張和血壓過載做出響應(yīng)釋放到血液循環(huán)中。BNP的功能,與動脈尿鈉肽類似, 包括尿鈉排泄、血管舒張、抑制腎素-血管緊張肽-醛留酮系統(tǒng)(axis)和抑制交感神經(jīng)活 性。BNP的前體被合成為108個氨基酸的分子,被稱為前BNP原(pre-proBNP),它被蛋白水 解加工成被稱為NT-proBNP的76個氨基酸的N-端肽(1_76位氨基酸)和被稱為BNP或 BNP-32的32個氨基酸的成熟激素(77-108位氨基酸)。已經(jīng)建議,這些物質(zhì)NT-proBNP、 BNP-32和pre-proBNP中的每種都可以在人類血漿中循環(huán)(參見例如Tateyama等, Biochem. Res. Commun. 185 :760_767 (1992) ;Hunt 等,Biochem. Biophys. Res. Commun. 214 ; 1175-1183 (1995))。Pre-proBNP 和 NT-proBNP,以及從 BNP、pre-proBNP 和 NT-proBNP 衍生 的、作為BNP、NT-proBNP和pre-proBNP的蛋白水解作用的結(jié)果存在于血液中的肽,在本文 中合稱源自于pre-proBNP的多肽。對于用于急性冠脈綜合征患者預(yù)后的高度可靠的標(biāo)志物和方法,存在著需求。附圖簡述

圖1 出院后血漿PCT水平的對數(shù)。結(jié)果0 =無事件存活者,1 =血管再造患者 (冠狀動脈旁路術(shù)或經(jīng)皮介入術(shù)),2 =重新患有心力衰竭的患者,3 =死亡患者。通過ANOVA 分析,PCT水平的對數(shù)顯著不同(P < 0. 001),在2和3組中PCT水平的對數(shù)與O組相比明 顯較高(P < 0. 001,對于多重比較使用了 Bonferonni校正)。圖2 =Kaplan Meier曲線,顯示了由低于或高于PCT中值進(jìn)行分層的患者的無事件 存活(終點(diǎn)為死亡和心力衰竭)。中值PCT值是0. 045 μ g/L。圖3 受試者工作特征曲線,顯示了使用PCT (ROC AUC 0. 69)和NTproBNP (ROC AUC 0. 76)對死亡或心力衰竭的基本終點(diǎn)的預(yù)測。圖4a/4b =Kaplan Meier曲線,顯示了由低于(圖4a)或高于(圖4b) PCT中值和 低于或高于NTproBNP中值進(jìn)行分層的患者的無事件存活(終點(diǎn)為死亡和心力衰竭)。中值 PCT 值是 0. 045 μ g/L,中值 NTproBNP 值是 914pmol/L。圖5a/5b =Kaplan Meier曲線,顯示了由低于(圖5a)或高于(圖5b) PCT中值和 低于或高于NTproBNP中值進(jìn)行分層的患者的無事件存活(終點(diǎn)為死亡)。中值PCT值是 0. 045 μ g/L,中值 NTproBNP 值是 914pmol/L。
發(fā)明詳述本發(fā)明的主題是用于對患有急性冠脈綜合征的患者進(jìn)行預(yù)后的體外方法,所述方 法包括在從所述患者獲得的樣品中測定降鈣素原或其長度為至少12個氨基酸、優(yōu)選長度 超過50個氨基酸、更優(yōu)選長度超過110個氨基酸的片段的水平;以及將所述降鈣素原或其 片段的水平與所述急性冠脈綜合征不利后果的傾向性相關(guān)聯(lián)。急性冠脈綜合征是一個包羅眾多的術(shù)語,用于覆蓋與急性心肌缺血相容的任何類 型的臨床癥狀。急性心肌缺血是由于冠狀動脈疾病(也稱為冠心病)導(dǎo)致的心肌供血不足 所引起的胸痛。急性冠脈綜合征(ACS)是一組征兆和癥狀,通常是胸痛和其他特點(diǎn)的組合,被解 釋為是流向心臟的血液突然減少(心臟缺血)的結(jié)果;其最常見的病因是心外膜冠狀動脈 中動脈粥樣斑塊的破裂。急性冠脈綜合征的亞型包括不穩(wěn)定心絞痛(UA,與心肌損傷無關(guān)) 以及其中心肌受損的兩種形式的心肌梗塞(心臟病發(fā)作)。這些類型按照心電圖(ECG/EKG) 的表象被命名為非ST段抬高心肌梗塞(NSTEMI)和ST段抬高心肌梗塞(STEMI)。ACS必須與冠狀動脈疾病(也稱為冠心病)區(qū)分開,后者是冠狀動脈的動脈粥樣硬 化,是動脈變得阻塞和狹窄、限制了血液流向心臟的病癥,但是與ACS相反,向心肌的供血 沒有被阻斷。冠狀動脈疾病可以引起穩(wěn)定心絞痛。ACS應(yīng)該與穩(wěn)定心絞痛區(qū)分開,后者在用力時發(fā)生并在靜息時消解。與穩(wěn)定心絞痛 相反。不穩(wěn)定心絞痛通常在靜息或用力極小或以比個體以前的心絞痛更小程度用力(“漸 進(jìn)性心絞痛”)時突然發(fā)生。新發(fā)作的心絞痛有時也被當(dāng)作不穩(wěn)定心絞痛,因為它表明冠狀 動脈出現(xiàn)新問題。術(shù)語“急性冠脈綜合征”包含了許多血栓性冠狀動脈疾病,包括不穩(wěn)定心絞痛和ST 段抬高和非ST段抬高兩種心肌梗塞。診斷需要心電圖和對心臟缺血的征兆和癥狀的仔細(xì) 檢查。在優(yōu)選實施方案中,所述不利后果選自死亡、心力衰竭和心肌梗塞。在另一個優(yōu)選實施方案中,所述關(guān)聯(lián)步驟包括將所述降鈣素原或其片段的水平與 閾值水平進(jìn)行比較,由此,當(dāng)所述降鈣素原或其片段的水平超過所述閾值水平時,所述患者 傾向于所述不利后果。在更優(yōu)選實施方案中,所述閾值是約0. 045 (+/"O. 01) μ g/L。該閾值的定義來自 于本文獻(xiàn)的臨床研究,所述臨床研究顯示了在被調(diào)查患者群體的中值PCT濃度(0. 045 μ g/ L)處,能夠獲得具有不利后果的患者與沒有不利后果的患者的顯著區(qū)分(參見圖2的 Kaplan-Meier 作圖)。按照本文下面的實施例中的描述,以PCT和NT-proBNP為例確定了標(biāo)記物的上述 閾值水平和水平。據(jù)此,一般來說,可以同樣的方式評估降鈣素原,單獨(dú)的或其與其他預(yù)后 標(biāo)志物的組合的水平。在另一個優(yōu)選實施方案中,所述樣品選自血液樣品、血清樣品和血漿樣品。在另一個實施方案中,用于對患有急性冠脈綜合征的患者進(jìn)行預(yù)后的體外方法還 包括將所述降鈣素原或其片段的水平與一種或多種附加預(yù)后標(biāo)志物的水平進(jìn)行數(shù)學(xué)組合, 由此所述降鈣素原或其片段的水平與所述附加預(yù)后標(biāo)志物的水平的組合,增加了所述降鈣 素原或其片段的水平或所述相關(guān)標(biāo)志物的水平對所述不利后果的預(yù)測值。數(shù)學(xué)組合可以
6是例如按照患者的降鈣素原水平是高于還是低于某個閾值,以及患者的標(biāo)志物χ(以及Y、 Z-)水平是高于還是低于某個閾值,對患者進(jìn)行算法分類。在另一個優(yōu)選實施方案中,所述附加預(yù)后標(biāo)志物之一是從所述患者獲得的樣品中 的pre-proBNP或其片段(如上所述,它們可以是proBNP或其衍生物,即BNP或NT-proBNP)??梢杂米鞲郊宇A(yù)后標(biāo)志物的其他標(biāo)志物可以選自肌鈣蛋白、髓過氧化物酶、CRP、 新蝶呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C,以及下列肽的成熟肽、前體、激素原和相關(guān) 激素原片段形式動脈尿鈉肽、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮素、血管加壓素。在另一個更優(yōu)選實施方案中,所述pre-proBNP片段是NTpro-BNP。在另一個更優(yōu)選實施方案中,所述pre-proBNP片段是BNP。另一個更優(yōu)選實施方案是本發(fā)明的方法,進(jìn)一步包括在從所述患者獲得的樣品中 測定一種或多種附加預(yù)后標(biāo)志物的水平,并將所述降鈣素原或其片段的水平和所述一種或 多種附加預(yù)后標(biāo)志物的水平二者與所述不利后果的傾向性相結(jié)合,由此所述降鈣素原或其 片段的水平與所述一種或多種附加預(yù)后標(biāo)志物的水平的結(jié)合,增加了所述降鈣素原或其片 段的水平對所述不利后果的預(yù)測值。在另一個更優(yōu)選實施方案中,所述降鈣素原或其片段水平與所述一種或多種附加 預(yù)后標(biāo)志物水平之間的組合使用數(shù)學(xué)算法進(jìn)行。數(shù)學(xué)組合可以是例如按照患者的降鈣素原 水平是高于還是低于某個閾值,以及患者的標(biāo)志物x(以及γ、ζ···)水平是高于還是低于某 個閾值,對患者進(jìn)行算法分類。本發(fā)明的另一個主題是使用檢測下限< 0. 045 (+/"O. 010) μ g/L的超靈敏性降鈣 素原分析方法,在患者中確定急性冠脈綜合征不利后果的傾向性。在超靈敏性降鈣素原分析方法的另一個優(yōu)選實施方案中,分析方法是包含針對降 鈣素原不同組成部分的兩種抗體的夾心分析法。在超靈敏性降鈣素原分析方法的另一個優(yōu)選實施方案中,一種抗體針對降鈣素原 的降鈣素部分,另一種抗體是針對降鈣素原的鈣抑肽部分的單克隆抗體。
實施例本研究中包括了 Leicester皇家醫(yī)院冠脈護(hù)理科(Coronary Care Unit of the Leicester Royal Infirmary)連續(xù)收治的974位急性冠脈綜合征(ACS)患者。研究遵照 赫爾辛基宣言(Declaration of Helsinki),并得到當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會的批準(zhǔn);從患者獲得了 書面知會同意書。如果患者胸痛持續(xù)超過20分鐘,診斷性系列心電圖(ECG)變化由新的病 理性Q波或ST段和T波變化組成,并且血漿肌酸激酶-MB升高到高于正常兩倍,或心臟肌 鈣蛋白 I 水平> 0. lng/ml,則被診斷為 ACS (Alpert JS 等,J Am Coll Cardiol. 2000 ;36 959-969)。ACS被細(xì)分成ST段抬高心肌梗塞(STEMI)或非ST段心肌梗塞(NSTEMI)。排 除標(biāo)準(zhǔn)是在研究前一個月已知患有惡性腫瘤或動過手術(shù)。這些對象的估計GFR(eGFR)通過 從腎病的飲食改變(Modification of Diet in Renal Disease (MDRD))研究中推導(dǎo)出來 的、最近在患有HF的患者中得到驗證的簡化公式(Smilde TD等,Circulation. 2006 ;114 1572-80)進(jìn)行計算。在胸痛發(fā)作后第3到5天抽取血液樣品,用于測定血漿降鈣素原(PCT)和 NT-proBNP水平。臥床靜息15分鐘后,將20mL血液收集在含有EDTA和抑蛋白酶肽的試管中。所有血漿儲存在-70°C下,直到以盲方式在一批中進(jìn)行測定。使用Sonos 5500 儀器(Philips Medical Systems, Reigate, UK)在患者中進(jìn)行 經(jīng)胸壁超聲心動圖。通過對每個LV段打分,根據(jù)美國超聲心動術(shù)學(xué)會(American Society of Echocardiography)的方式推導(dǎo)出16段左心室壁運(yùn)動指數(shù)(LVWMI) (1 =正常,2 =運(yùn)動 功能減退,3 =運(yùn)動不能,4 =運(yùn)動障礙(反常運(yùn)動)),并用總數(shù)除以打分的段數(shù)。左心室射 血分?jǐn)?shù)(LVEF)使用圓盤雙面法公式計算(Schiller NB等,J Am Soc Echocardiogr. 1989 ; 2 358-367)。LV收縮功能受損被定義為EF < 40%或LVWMI > 1. 8。NT-proBNP分析方法是基于以前發(fā)表的非競爭性分析法(Omland T等, Circulation. 2002 ; 106 =2913-2918)。綿羊抗體由人類NT-proBNP的N-端引發(fā),單克隆小 鼠抗體由C-端引發(fā)。將樣品或NT-proBNP標(biāo)準(zhǔn)品與生物素酰化的N-端抗體在C-端IgG 包被的孔中,在4°C下溫育24小時。使用甲基吖啶酯(MAE)標(biāo)記的鏈親和素在MLX板發(fā)光 計(Dynex Technologies Ltd. ,Worthing,UK)上進(jìn)行檢測。檢測下限是 0. 3pmol/l。與動 脈尿鈉肽、BNP或C-型尿鈉肽沒有交叉反應(yīng)性。降鈣素原(PCT)按照描述測量(Morgenthaler NG 等,Clin Chem, 2002May, 48 (5), 788-790)。綿羊抗體針對PCT的降鈣素部分引發(fā),小鼠單克隆抗體針對PCT的鈣抑肽部分引 發(fā)。試管用抗鈣抑肽抗體包被??光}抑肽抗體用MACN吖啶酯(InVent GmbH,Hennigsdorf, 德國)標(biāo)記并用作示蹤劑。重組PCT在正常馬血清中的稀釋液用作標(biāo)準(zhǔn)品。將ΙΟΟμ 1樣 品或標(biāo)準(zhǔn)品在包被試管中溫育30分鐘,加入200 μ 1示蹤劑。在溫育2小時后,將試管用 Iml LIA清洗溶液(BRAHMS AG)洗滌4次并綁定(bound)。化學(xué)發(fā)光使用LB952T發(fā)光計 (BerthoId,德國)測量。估算了降鈣素原(PCT)和NTproBNP 二者的水平,用于預(yù)測主要終點(diǎn)(死亡或心力 衰竭(HF))。死亡也作為單獨(dú)的次級終點(diǎn)進(jìn)行研究。由于HF住院治療被定義為HF作為主 要原因重新入院。終點(diǎn)通過國家統(tǒng)計登記局(Office of National Statistics Registry) 回顧性檢查和通過接觸每位患者來獲得。對所有存活患者進(jìn)行了最少6個月的跟蹤。統(tǒng)計學(xué)分析在SPSS 第 14 版(SPSS Inc, Chicago, Illinois)上進(jìn)行。使用 Mann Whitney U檢驗比較了兩個獨(dú)立組中的連續(xù)變量。進(jìn)行了 Spearman' s關(guān)聯(lián)。為了測試肽 水平對死亡或HF的獨(dú)立預(yù)測能力,使用Cox比例風(fēng)險模型和Kaplan Meier模型進(jìn)行了存 活率分析。NT-proBNP和PCT水平通過對數(shù)變換進(jìn)行了歸一化。因此,風(fēng)險率是指這些標(biāo)志 物水平的十倍升高??偸鞘褂猛瑫r輸入的相同變量(包括在? < 0. 10的單變量分析中統(tǒng) 計學(xué)顯著的變量)構(gòu)建Cox模型。為了比較NT-proBNP和PCT作為標(biāo)志物的準(zhǔn)確性,產(chǎn)生了受試者工作特性(ROC) 曲線并計算了曲線下面積(AUC)。雙尾P值低于0. 05被視為統(tǒng)計學(xué)顯著的。患者群體的人口統(tǒng)計學(xué)特點(diǎn)顯示在表1中。跟蹤的中值長度是660天,范圍為 0-2837天。沒有患者失去跟蹤,對于存活者來說最短的跟蹤是187天(約6個月)。在跟蹤期間,200位(20. 5% )患者死亡,82位(8. 4% )患有心力衰竭重新入院。 有779位STEMI患者,其中68%接受了溶血栓治療。表1:研究中的患者特征。值是中值[范圍]或數(shù)字(百分?jǐn)?shù))。
權(quán)利要求
1.一種用于患有急性冠脈綜合征患者的預(yù)后的體外方法,所述方法包括在從所述患 者獲得的樣品中測定降鈣素原或其長度為至少12個氨基酸的片段的水平;以及將所述降 鈣素原或其片段的水平與所述急性冠脈綜合征不利后果的傾向性相關(guān)聯(lián)。
2.權(quán)利要求1的方法,其中所述不利后果選自死亡、心力衰竭和心肌梗塞。
3.權(quán)利要求1或2的方法,其中所述關(guān)聯(lián)步驟包括將所述降鈣素原或其片段的水平與 閾值水平進(jìn)行比較,由此,當(dāng)所述降鈣素原或其片段的水平超過所述閾值水平時,所述患者 傾向于所述不利后果。
4.權(quán)利要求3的方法,其中所述閾值水平是約0.045 (+/-0. 010) μ g/L。
5.前述權(quán)利要求任一項的方法,其中所述樣品選自血液樣品、血清樣品和血漿樣品。
6.前述權(quán)利要求任一項的方法,還包括將所述降鈣素原或其片段的水平與一種或多種 附加預(yù)后標(biāo)志物的水平相關(guān)聯(lián),由此所述降鈣素原或其片段的水平與所述附加預(yù)后標(biāo)志物 的水平的組合,增加了所述降鈣素原或其片段的水平或所述相關(guān)標(biāo)志物的水平對所述不利 后果的預(yù)測值。
7.權(quán)利要求6的方法,其中所述預(yù)后標(biāo)志物之一是從所述患者獲得的樣品中的 pre-proBNP或其片段。
8.權(quán)利要求6或7的方法,其中所述pre-proBNP片段是NTpro-BNP或BNP。
9.權(quán)利要求6到8任一項的方法,還包含在從所述患者獲得的樣品中測定一種或多種 附加預(yù)后標(biāo)志物的水平,并將所述降鈣素原或其片段的水平和所述一種或多種附加預(yù)后標(biāo) 志物的水平二者與所述不利后果的傾向性相關(guān)聯(lián),由此所述降鈣素原或其片段的水平與所 述一種或多種附加預(yù)后標(biāo)志物的水平的組合,增加了所述降鈣素原或其片段的水平對所述 不利后果的預(yù)測值。
10.權(quán)利要求6到9任一項的方法,其中附加預(yù)后標(biāo)志物選自肌鈣蛋白、髓過氧化物酶、 CRP、新蝶呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制劑-C,以及下列肽的成熟肽、前體、激素原和 相關(guān)激素原片段的形式尿鈉肽、腎上腺髓質(zhì)素、內(nèi)皮素、血管加壓素。
11.權(quán)利要求6到10任一項的方法,其中所述降鈣素原或其片段水平與所述一種或多 種附加預(yù)后標(biāo)志物水平之間的關(guān)聯(lián)使用數(shù)學(xué)算法進(jìn)行。
12.超靈敏性降鈣素原分析方法在確定患者的急性冠脈綜合征不利后果的傾向性中的 應(yīng)用,所述分析方法的檢測下限< 0. 045 (+/-0. 010) μ g/L。
13.權(quán)利要求12的超靈敏性降鈣素原分析方法的應(yīng)用,其中分析方法是包含了針對降 鈣素原的不同部分的兩種抗體的夾心分析法。
14.權(quán)利要求12或13的超靈敏性降鈣素原分析方法的應(yīng)用,其中一種抗體針對降鈣素 原的降鈣素部分,另一種抗體是針對降鈣素原的鈣抑肽部分的單克隆抗體。
全文摘要
本發(fā)明的主題是用于確定患有急性冠脈綜合征的患者的預(yù)后的分析方法和體外方法,由此測量從所述患者獲得的樣品中的降鈣素原或其片段的水平。然后可以將降鈣素原或其片段的水平與所述急性冠脈綜合征的不利后果的傾向性相關(guān)聯(lián)。
文檔編號G01N33/68GK102007415SQ200980108835
公開日2011年4月6日 申請日期2009年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月12日
發(fā)明者安德烈亞斯·貝格曼, 梁·洛克·恩格, 約阿希姆·斯特魯克 申請人:B.R.A.H.M.S有限公司
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