專利名稱：鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡及其檢測樣品的處理方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種檢測P-受體激動劑的器具，特別是涉及一種鹽酸克倫特羅、 沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡及其檢測樣品的處理方法。屬于P-受體激動 劑檢測技術領域。
背景技術：
卩-受體激動劑是一類人工合成腎上腺受體激動劑，包括鹽酸克倫特羅
(clenbuterol)、沙丁胺醇(Salbutamol)和萊克多巴胺(ractopamine),俗稱"痩肉 精"，利用它具有促進畜禽脂肪分解、增加肌肉生長作用，作為營養(yǎng)重分配劑，以 提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進動物生長，被一些畜牧養(yǎng)殖者作為養(yǎng)殖促進 劑非法使用。在家畜飼料中非法使用P-受體激動劑而造成消費者食物中毒事件 時有發(fā)生。瘦肉精作為促進動物生長、提高瘦肉率的飼料添加劑，曾在我國大 面積推廣使用，但長期使用會使該類藥物在動物食品中蓄積，人食用了飼喂含卩-受體激動劑作為添加劑飼料的畜產品后，就會出現(xiàn)中毒癥狀，通常會出現(xiàn)肌肉 震顫、心悸、精神緊張、頭疼、肌肉疼痛、暈眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、戰(zhàn)栗等 癥狀，甚至死亡。因此，世界許多國家禁止在飼料中使用克倫特羅等P-受體激 動劑來增加動物的瘦肉率。我國政府己明令禁止在畜牧生產中使用鹽酸克倫特 羅等卩-受體激動劑。
目前，現(xiàn)有技術對于鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多巴胺的檢測主要依 賴化學儀器分析、酶免疫檢測試劑盒，也有單獨檢測鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇 及萊克多巴胺的檢測試紙條，但到目前為止，沒有同時檢測這三種物質的檢測 器具。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種能同時檢測鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多 巴胺的檢測器具，克服現(xiàn)有技術只能逐一單項檢測的缺陷。
本發(fā)明的技術方案 一種鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測 卡，它在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼中設置測試條，檢測卡外殼表面有檢測
窗孔和加樣孔，測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼 樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承 背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另 一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜 搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜(7);膠體金膜為含抗鹽酸克倫特羅抗體、抗沙丁胺醇抗體與抗萊克多巴胺抗體 膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有三條檢測帶和一條質控帶，依 次是含酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物檢測帶(10)，含沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物檢測
帶(11)，含萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物檢測帶(12)，質控帶(13)，質控帶為抗 兔抗體或抗鼠抗體，測試條置入檢測卡外殼(1)內，樣品墊正對加樣孔(4)， 硝酸纖維素膜正對檢測窗孔(3)。
鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡檢測樣品的處理方法， 檢測樣品為尿液樣品、飼料樣品或動物組織、肉、肝臟樣品，對于各種不同的 檢測樣品有不同的處理方法。
針對尿液樣品的處理方法是尿液直接用作檢測樣品，若尿樣呈渾濁狀，
需先經濾紙濾過，取上清液作測試樣品。
針對飼料樣品的處理方法是稱取0.5克飼料樣品，加入lmL樣品抽提液 (pH7.0 50mmol/LTris-HCL)，在試管中攪拌1分鐘，靜置10分鐘后，取清亮上 清液作測試樣品。
針對動物組織、肉、肝臟樣品的處理方法是取lg剪碎或勻漿過的動物組 織、肉、肝臟樣品，置于含lmL樣品抽提液(pH7.0 50mmol/LTris-HCL)的試管
中，扭緊管蓋，振搖樣品一分鐘后，經10(TC水浴5分鐘，冷卻至室溫，取清亮 的中間部分作測試樣品。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的三聯(lián)檢測卡能同時檢測出尿液或飼料、動物 組織、肉、肝臟中含有的鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多巴胺，本三聯(lián)檢測 卡易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便快速，結果準確。
圖1鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡的外殼及測試條在 外殼內的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。
圖2鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡的測試條結構示意 圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、膠體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
圖3鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡的硝酸玻璃纖維膜 上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、含鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物檢測 帶，11、含沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物檢測帶，12、含萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物檢 測帶，13、質控帶。
具體實施例方式
本發(fā)明結合具體實施例參見附圖進一步說明如下
實施例h鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡
它是在檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼1的結構及測試條2的設 置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長7cm，寬2cm，厚0.5cm，薄殼壁厚0.1cm，由工程塑料制成。檢測卡外殼l由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構成， 在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1 的殼座內。
測試條2是多層結構的窄條薄片，片長約6.0cm，片寬約0.4cm，厚度小于 2.5mm。測試條2是多層結構底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約 0.5mm，長6.0cm，寬0.4cm;支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸 纖維素膜厚0.5mm，長2-2.5cm,寬0.4cm。硝酸纖維素膜6上有三條間隔開的 橫向顯示印跡帶，參見附圖3，三條顯示印跡中，第一條是檢測帶10，含鹽酸 克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物，第二條檢測帶11,含沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物，第三條 是檢測帶12，含萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物，第四條是質控帶13，含抗兔抗體或 抗鼠抗體。調節(jié)蛋白質偶聯(lián)物濃度大約為lmg/mL，抗兔抗體或抗鼠抗體濃度大 約為0.1mg/mL時噴膜。支承背板5—端上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一 端上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內端與樣品墊8內端各自分別與硝酸纖維素膜 6—端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠 體金膜7，膠體金膜7為含抗鹽酸克倫特羅抗體、抗沙丁胺醇抗體與抗萊克多巴 胺抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0.5-0.8mm,長0.5-0.6cm，寬 0.4cm。樣品墊8厚0.5-0.8mm，長2cm，寬0.4cm。吸水膜9厚0.5-0.8mm，長 1.6-2cm，寬0.4cm。膠體金膜是將抗體與膠體金顆粒標記后，調節(jié)濃度大約為 1D (光密度單位)涂布膠體于玻璃纖維膜上，烘干后備用。膠體金膜7、樣品 墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜6搭接長度為0.1-0.2cm。吸水膜9材料是吸水 紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。
實施例2檢測樣品的處理方法
技術領域：
本發(fā)明鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡用于檢測畜牧飼 料或動物尿樣或動物組織、肉、肝臟中是否含有鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊 克多巴胺，據(jù)此鑒別畜牧食品的安全性。
對于不同的檢測樣品，有不同的處理方法
針對尿液樣品的處理方法是尿液直接用作檢測樣品，若尿樣呈渾濁狀， 需先經濾紙濾過，取上清液作測試樣品。
針對詞料樣品的處理方法是稱取0.5克詞料樣品，加入lmL樣品抽提液 (pH7.0 50mmol/LTris-HCL)，在試管中攪拌1分鐘，靜置10分鐘后，取清亮上 清液作測試樣品。
針對動物組織、肉、肝臟樣品的處理方法是取1克剪碎或勻漿過的動物 組織、肉、肝臟樣品，置于含lmL樣品抽提液(pH7.0 50mmol/LTris-HCL)的試 管中，扭緊管蓋，振搖樣品l分鐘后，經100。C水浴5分鐘，冷卻至室溫，取清 亮的中間部分作測試樣品。使用鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡進行檢測時，先將 待檢測的樣品液從加樣孔中滴注入鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)
檢測卡的樣品墊8，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜7所含 的抗鹽酸克倫特羅抗體、抗沙丁胺醇抗體和抗萊克多巴胺抗體膠體金標記物一 起向硝酸纖維素膜6擴散，5-10分鐘內觀察結果。
檢測卡的主要反應是免疫學的抗原和抗體反應，在硝酸纖維素膜上遷移的 膠體金標記的抗體，在測試帶上分別與含鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物、含沙丁 胺醇蛋白質偶聯(lián)物、含萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物，以及質控帶抗兔抗體或抗鼠 抗體反應，形成棕紅色條帶。當樣品中有相應的待檢鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇 及萊克多巴胺存在，則樣品加入后即與相應的抗體發(fā)生反應，而不會與相應的 檢測帶所含的鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物、含沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物、含萊克 多巴胺蛋白質偶聯(lián)物反應，從而不顯色。主要反應的結果有以下9種情況
1、 如果顯示檢測帶IO、 11、 12和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示 檢測結果為陰性，說明被檢測樣品中鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺含 量沒有超過允許值。
2、 如果檢測帶IO、 11、 12不顯示顏色，只有質控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡， 檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺含 量同時超過允許值(5ppb)。
3、 如果檢測帶10、 11不顯示顏色，檢測帶12和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中鹽酸克倫特羅和沙丁胺醇含量超 過允許值(5ppb)，而萊克多巴胺含量沒有超過允許值(5ppb)。
4、 如果檢測帶10、 12不顯示顏色，檢測帶11和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺含量 超過允許值(5ppb)，而沙丁胺醇含量沒有超過允許值(5ppb)。
5、 如果檢測帶11、 12不顯示顏色，檢測帶10和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中沙丁胺醇和萊克多巴胺含量超過 允許值(5ppb)，而鹽酸克倫特羅含量沒有超過允許值。
6、 如果檢測帶10不顯示顏色，檢測帶11、 12和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中鹽酸克倫特羅含量超過允許值 (5ppb)，而沙丁胺醇、萊克多巴胺含量沒有超過允許值(5ppb)。
7、 如果檢測帶11不顯示顏色，檢測帶10、 12和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中沙丁胺醇含量超過允許值(5ppb)， 而鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺含量沒有超過允許值(5ppb)。
8、 如果檢測帶12不顯示顏色，檢測帶10、 11和質控帶13同時顯現(xiàn)棕紅 色印跡，檢測結果為陽性，表明被檢測樣品中萊克多巴胺含量超過允許值 (5ppb)，而鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇含量沒有超過允許值(5ppb)。
9、 如果檢測帶IO、 11、 12和質控帶13均不顯色，則表明測試條失效。
權利要求
1、一種鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡，它在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼中設置測試條，檢測卡外殼表面有檢測窗孔和加樣孔，其特征在于測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜(7)；膠體金膜為含抗鹽酸克倫特羅抗體、抗沙丁胺醇抗體與抗萊克多巴胺抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有三條檢測帶和一條質控帶，依次是含鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物檢測帶(10)，含沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物檢測帶(11)，含萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物檢測帶(12)，質控帶(13)，質控帶為抗兔抗體或抗鼠抗體，測試條置入檢測卡外殼(1)內，樣品墊正對加樣孔(4)，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔(3)。
2、 用權利要求l所述的鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡 檢測樣品的處理方法，其特征在于檢測樣品為尿液樣品、飼料樣品或動物組織、 肉、肝臟樣品，對于各種不同的檢測樣品有不同的處理方法；針對尿液樣品的處理方法是尿液直接用作檢測樣品，若尿樣呈渾濁狀， 需先經濾紙濾過，取上清液作測試樣品；針對飼料樣品的處理方法是稱取0.5克飼料樣品，加入lmL樣品抽提液 pH7.0、 50mmol/LTris-HCL，在試管中攪拌1分鐘，靜置10分鐘后，取清亮上 清液作測試樣品；針對動物組織、肉、肝臟樣品的處理方法是取lg剪碎或勻漿過的動物組 織、肉、肝臟樣品，置于含lmL樣品抽提液pH 7.0、 50mmol/L Tris-HCL的試 管中，扭緊管蓋，振搖樣品l分鐘后，經10(TC水浴5分鐘，冷卻至室溫，取清 亮的中間部分作測試樣品。
全文摘要
鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺三聯(lián)檢測卡及其檢測樣品的處理方法，屬于β-受體激動劑檢測技術領域。本發(fā)明三聯(lián)檢測卡外殼內有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗鹽酸克倫特羅抗體、抗沙丁胺醇抗體和抗萊克多巴胺抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有3條檢測帶，分別含鹽酸克倫特羅蛋白質偶聯(lián)物、沙丁胺醇蛋白質偶聯(lián)物、萊克多巴胺蛋白質偶聯(lián)物，另有1條含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶。本發(fā)明優(yōu)點是能同時檢測出尿液或飼料、動物組織、肉、肝臟中含有的鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇及萊克多巴胺。檢測卡易于制備且節(jié)省檢測費用，使用方便快速，結果準確。
文檔編號G01N33/52GK101566629SQ20091002700
公開日2009年10月28日 申請日期2009年5月22日 優(yōu)先權日2009年5月22日
發(fā)明者堅 周 申請人:無錫安迪生物工程有限公司