專(zhuān)利名稱(chēng)：血液試樣的品質(zhì)評(píng)估方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法。進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)，是涉及一種血樣的品質(zhì)評(píng)價(jià) 方法、用于此方法的免疫層析試紙條以及包含該免疫層析試紙條的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)用試劑盒。
背景技術(shù)：
血樣用于診斷受檢者的狀態(tài)、并為選擇最佳治療方案作出判斷等。然而，因采血位 置不同，可能得不到充分反映受檢者狀態(tài)和疾病的血樣。在這種情況下，有時(shí)就無(wú)法正確診 斷受檢者的狀態(tài)，選擇最佳治療方案。用血樣診斷疾病狀態(tài)或選擇治療方法的疾病比如有醛留酮增多癥 (aldosteronism)等。醛留酮增多癥是一種使腎上腺皮質(zhì)本身分泌醛固酮過(guò)多的疾病，大致 分為因增生引起的突發(fā)性醛留酮增多癥和糖(腎上)皮質(zhì)激素可控型醛留酮增多癥和因腺 瘤引起的醛固酮分泌腺瘤。對(duì)因增生引起的醛留酮增多癥采用藥劑治療方法，對(duì)醛固酮分 泌腺瘤原則上采用外科摘除術(shù)治療方法。根據(jù)醛留酮增多癥的病型選擇治療方法時(shí)，進(jìn)行腎上腺靜脈取樣檢測(cè)(參照非專(zhuān) 利文獻(xiàn)1、非專(zhuān)利文獻(xiàn)2等)。腎上腺靜脈取樣檢測(cè)是將導(dǎo)管插入左右腎上腺靜脈，采集5mL 左右的血樣，測(cè)定該血樣中的醛留酮含量。然而，在腎上腺靜脈取樣檢測(cè)中，被插入導(dǎo)管的腎上腺靜脈的內(nèi)徑和所用導(dǎo)管的 直徑很小，有時(shí)采血很困難。而且腎上腺靜脈會(huì)有從各種靜脈流入的血液，采血獲得的血樣 中所含醛留酮有時(shí)會(huì)被這些血液稀釋。此時(shí)，可能無(wú)法正確地進(jìn)行1腎上腺靜脈取樣檢測(cè)。腎上腺靜脈取樣檢測(cè)中所用血樣是否合適根據(jù)血樣中的皮質(zhì)醇濃度來(lái)評(píng)價(jià)。測(cè)定 皮質(zhì)醇濃度通常需要大型設(shè)備，無(wú)法在手術(shù)現(xiàn)場(chǎng)等輕易測(cè)定皮質(zhì)醇濃度。因此，一般測(cè)定皮 質(zhì)醇濃度要由檢驗(yàn)公司、檢驗(yàn)部門(mén)等外部機(jī)構(gòu)進(jìn)行，獲得測(cè)定結(jié)果需要數(shù)天到一周左右很 長(zhǎng)時(shí)間。另一方面，檢測(cè)待檢試樣中所含的待檢目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)用免疫層析等進(jìn)行。在免 疫層析中，作為抗體常使用通過(guò)將抗體固定在金屬微粒子而獲得的標(biāo)記抗體的分散液(參 照專(zhuān)利文獻(xiàn)1等)。專(zhuān)利文獻(xiàn)1 專(zhuān)利公開(kāi)2007-169209號(hào)公報(bào)。非專(zhuān)利文獻(xiàn)1 大村昌夫，“特殊型原發(fā)性醛留酮增多癥的診斷一腎上腺靜脈取樣 的意義一”，最新醫(yī)學(xué)，最新醫(yī)學(xué)社，2004年，第59期、第10號(hào)，p. 2286-2291。非專(zhuān)利文獻(xiàn)2 =Giulio Mengozzi等7人，“原發(fā)性醛甾酮增多癥患者腎上腺靜脈
(Rapid Cortisol Assay duringAdrenal Vein Sampling in Patients with Primary Aldosteronism.)，，，臨床化學(xué)(Clinical Chemistry)，2007 年 11 月，第 53 期，第 11 號(hào)，p. 1968-1971。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的課題
本發(fā)明的目的之一在于，提供一種可以用少量血樣便捷地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)的血樣品 質(zhì)評(píng)價(jià)方法。本發(fā)明的另一目的在于，提供一種可以用少量血樣便捷地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)的免 疫層析試紙條和血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)用試劑盒。解決問(wèn)題的方法本發(fā)明涉及(1) 一種包括以下步驟的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法(a)將標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣混合，使該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含 皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，(b)將(a)步驟獲得的混合物在具有固定有皮質(zhì)醇的基材的免疫層析試紙條上展 開(kāi)，使在該混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在上述基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體 反應(yīng)，使之結(jié)合到該皮質(zhì)醇，(c)測(cè)定在(b)步驟結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，以及(d)根據(jù)在(C)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)量評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺 靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)；(2) 一種包括以下步驟的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法(A)使用一種免疫層析試紙條，該試紙條的基材的一端設(shè)置有標(biāo)記抗體相，該標(biāo)記 杭體相上有與待檢血樣接觸而脫離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體、另一端固定有皮質(zhì)醇，從該免疫 層析試紙條的標(biāo)記抗體相一端展開(kāi)一定量待檢血樣，使該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含 皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，此抗原抗體反應(yīng)后游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在該基材上 的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而結(jié)合到固定在該基材上的皮質(zhì)醇，(B)測(cè)定在(A)步驟與固定在基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，及(C)根據(jù)(B)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜 脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)；(3) 一種免疫層析試紙條，它用于上述(1)所述血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，通過(guò)接頭 (linker)固定皮質(zhì)醇；(4) 一種免疫層析試紙條，它用于上述(2)所述血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，該試紙條基材 的一端設(shè)置有標(biāo)記抗體相，該標(biāo)記杭體相上有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，可通過(guò)與待檢血樣接觸 而脫離、另一端通過(guò)接頭固定有皮質(zhì)醇，(5) 一種包含上述免疫層析試紙條的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)用試劑盒。發(fā)明效果本發(fā)明的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法可以用少量血樣便捷地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)。本發(fā)明的免疫 層析試紙條和血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)試劑盒適用于以少量血樣便捷地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例2和3中血樣采集位置的概述圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例2的免疫層析試紙條的照片而非繪圖，顯示在檢測(cè)線上有無(wú) 因膠體金粒子而出現(xiàn)條帶。圖3為試驗(yàn)例2的免疫層析試紙條的照片而非繪圖，顯示在檢測(cè)線上有無(wú)因膠體 金粒子而出現(xiàn)條帶。
圖4為試驗(yàn)例3中免疫層析后的免疫層析試紙條的照片而非繪圖。圖5為試驗(yàn)例4中皮質(zhì)醇濃度和吸光度的關(guān)系顯示圖。圖6為試驗(yàn)例5中膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量與吸光度之差的關(guān)系顯示 圖。圖7為試驗(yàn)例6中膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量與吸光度之差的關(guān)系顯示 圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法包括以下幾個(gè)步驟，下面稱(chēng)此品質(zhì)評(píng)價(jià)方法為“評(píng)價(jià) 方法1”(a)混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣，使該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含皮 質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)；(b)將(a)步驟獲得的混合物在具有固定有皮質(zhì)醇的基材的免疫層析試紙條上展 開(kāi)，使在該混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在該基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反 應(yīng)，從而與該皮質(zhì)醇結(jié)合；(c)測(cè)定在(b)步驟結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體含量；以及(d)根據(jù)在(C)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體含量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上 腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在(a)步驟，混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣，引起該血樣中所含的皮質(zhì)醇與 標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的抗原抗體反應(yīng)。在(a)步驟獲得的混合物中，通過(guò)血樣中所含皮質(zhì)醇與標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的抗原 抗體反應(yīng)形成復(fù)合物，根據(jù)血樣中所含皮質(zhì)醇含量不同會(huì)殘留不同量的游離的標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體。通常血樣中所含皮質(zhì)醇含量越多，未形成復(fù)合物的游離標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量就 會(huì)相應(yīng)減少。作為待檢血樣可以有血漿、血清和全血等。從更有效地使血樣中所含皮質(zhì)醇和標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合形成復(fù)合物的角度出發(fā)，在待檢血樣中以血漿為宜。靜脈距腎上腺的距離越短，該靜脈血中所含的皮質(zhì)醇含量就越高，因此，從腎上腺 靜脈采集的血樣中所含皮質(zhì)醇的量會(huì)比與該血樣同樣體積的末梢血中皮質(zhì)醇含量多。末梢 血中皮質(zhì)醇含量有時(shí)會(huì)因個(gè)體壓力過(guò)大或采血時(shí)間等因素比平常狀態(tài)有所增加，因此，待 檢血樣最好是平常狀態(tài)下的個(gè)體的血樣。標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體是通過(guò)用標(biāo)記物標(biāo)記針對(duì)皮質(zhì)醇的抗體(以下稱(chēng)“抗皮質(zhì)醇抗 體”)而獲得的抗體?？蛊べ|(zhì)醇抗體可以是針對(duì)皮質(zhì)醇的單克隆抗體，也可以是針對(duì)皮質(zhì)醇的多克隆抗 體。針對(duì)皮質(zhì)醇的單克隆抗體和多克隆抗體比如可以參照J(rèn).E.科利根(John Ε. Coligan) 編的《免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室指南(Current Protocols inlmmunology)》[約翰威立國(guó)際出版公司 (John Wiley & Sons, Inc)，1992年發(fā)行]上記載的方法等獲得。具體而言，用皮質(zhì)醇免疫兔子和山羊等動(dòng)物，從免疫后的動(dòng)物身上獲得脾細(xì)胞后， 使脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，制備雜交瘤，培養(yǎng)所獲得的雜交瘤，提純培養(yǎng)上清中 所含的單克隆抗體，即可獲得針對(duì)皮質(zhì)醇的單克隆抗體。用皮質(zhì)醇免疫兔子和山羊等動(dòng)物，從免疫后的動(dòng)物身上采集血清，提純?cè)撗逯兴亩嗫寺】贵w，即可獲得針對(duì)皮質(zhì)醇的 多克隆抗體。作為標(biāo)記物，比如有金屬膠體粒子、酶、熒光物質(zhì)等。其中從檢測(cè)操作簡(jiǎn)便、目測(cè)性 好的角度來(lái)看，以金屬膠體粒子為宜。作為金屬膠體粒子，比如有膠體金粒子、膠體銀粒子、膠體白金粒子、這些復(fù)合金 屬的膠體粒子和膠體硒粒子等。這些可以單獨(dú)或二種以上混合使用。其中，以穩(wěn)定性和目 測(cè)性優(yōu)越來(lái)說(shuō)，膠體金粒子最好。金屬膠體粒子的定量比如可以通過(guò)測(cè)定金屬膠體粒子在波長(zhǎng)520nm的吸光度來(lái) 進(jìn)行。作為酶如有過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、葡糖氧化酶等，它們可以單獨(dú)或二種以上混 合使用。酶可通過(guò)測(cè)定酶的比活性的方法等進(jìn)行定量。作為熒光物質(zhì)如有異硫氰酸熒光素(FITC)、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)等， 它們可單獨(dú)或二種以上混合使用。熒光物質(zhì)可通過(guò)測(cè)定熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度的方法等來(lái)進(jìn)
行定量。標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體也可根據(jù)需要溶解在磷酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷(Tris) 緩沖液等溶液中。一般認(rèn)為，適于腎上腺靜脈取樣的血樣的指標(biāo)是血樣的皮質(zhì)醇濃度是末梢血所含 皮質(zhì)醇濃度的2倍以上。因此，最好使用末梢血中所含皮質(zhì)醇摩爾數(shù)的2倍量的標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體與待檢血樣混合。之所以選擇末梢血，是因?yàn)槟┥已械钠べ|(zhì)醇含量最少，以此為 標(biāo)準(zhǔn)比較可靠。從靜脈到腎上腺的距離越短，靜脈血中的皮質(zhì)醇含量就越多，因此，從腎上腺靜脈 采集的血樣中所含皮質(zhì)醇要比從下大靜脈采集的血樣(以下也稱(chēng)“下大靜脈血”)中所含皮
質(zhì)醇量多。血樣是否是從腎上腺靜脈采集的，可以通過(guò)目測(cè)與固定在免疫層析試紙條基材上 的皮質(zhì)醇相結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所具有的標(biāo)記物所顯示的顏色予以評(píng)價(jià)。因此，在(a) 步驟中使用的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)最好大于下大靜脈血中所含皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)。此 外，考慮到步驟(a)中使用的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本等因素，可以適當(dāng)設(shè)定與待檢血 樣對(duì)應(yīng)的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)上限。在(a)步驟，從縮短操作時(shí)間的觀點(diǎn)出發(fā)，在混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣 時(shí)，也可以事先將血樣與清洗液混合。清洗液可以用于主動(dòng)地沖洗未在免疫層析試紙條上 展開(kāi)而殘留的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。清洗液只要是能防止物質(zhì)非特異地吸附到免疫層析試紙條上的液體即可。作為這 種清洗液比如可列舉出含有牛血清白蛋白、酪蛋白、絲膠、明膠、2-甲基丙烯酰氧基乙基磷 酰膽堿聚合物(MPC聚合物)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等封閉試劑和吐溫(Tween，注冊(cè)商 標(biāo))系列表面活性劑、普盧蘭尼克(Pluronic，注冊(cè)商標(biāo))系列表面活性劑、陶氏(Triton， 注冊(cè)商標(biāo))X系列表面活性劑等表面活性劑的中性緩沖液等。清洗液的量只要足夠在免疫 層析試紙條上展開(kāi)標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣的混合物即可。在(a)步驟，從縮短操作所需時(shí)間、精確檢測(cè)出標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣中所含 皮質(zhì)醇的復(fù)合物的觀點(diǎn)出發(fā)，最好邊照射超聲波邊混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣。邊照射超聲波邊混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣所需的時(shí)間雖因超聲波頻率而各異，無(wú)法一概而 定，但通常選擇標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣分散均勻所需要的時(shí)間。在(a)步驟，可以原樣使用待檢血樣，也可以根據(jù)(b)步驟中使用的免疫層析試紙 條檢測(cè)時(shí)的靈敏度等將血樣用溶劑適當(dāng)稀釋后使用。在(a)步驟，當(dāng)個(gè)體的末梢血中皮質(zhì)醇濃度為一定標(biāo)準(zhǔn)濃度時(shí)，可以不稀釋待檢 血樣，直接使用。當(dāng)混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣時(shí)，平均每10 μ L血樣的標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體數(shù)目，如從提高測(cè)定血樣中皮質(zhì)醇含量的靈敏度的角度來(lái)說(shuō)，最好為3 X IO8個(gè)以上， 從降低(a)步驟所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度來(lái)說(shuō)，最好為9X108個(gè)以下。當(dāng)使 用膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液作為標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體時(shí)，可調(diào)整各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下膠體金 標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為每30 μ L待檢血樣1-15 μ L，其中，所述膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體的溶液在波長(zhǎng)520nm的吸光度為I-IOabs ；上述吸光度和上述膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體溶液的量的積為10-90abs · μ L。在(a)步驟，如果估計(jì)個(gè)體末梢血的皮質(zhì)醇濃度會(huì)變動(dòng)很大，當(dāng)不稀釋待檢血樣 而原樣使用時(shí)，從易于測(cè)定血樣中皮質(zhì)醇含量的角度看，每10 μ L血樣的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體最好至少為二種。每10 μ L血樣的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定血樣中 皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)，最好為3Χ108個(gè)以上，從降低(a)步驟所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所 需成本的角度來(lái)說(shuō)，最好為2. 4X IO9個(gè)以下。為了方便、低成本地測(cè)定皮質(zhì)醇含量，最好用下大靜脈血取代(a)步驟中的血樣， 從上述至少兩種數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體中，選擇標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，且要保證其數(shù)目能 夠確認(rèn)與免疫層析試紙條基材上所固定的皮質(zhì)醇相結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的顯色，在 (a)步驟中將選定數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣混合。出于操作簡(jiǎn)便地測(cè)定血樣中皮質(zhì)醇含量的考慮，在(a)步驟中最好使用第一標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體或數(shù)目多于第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定血樣中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)， 最好為3X108個(gè)以上，從降低(a)步驟所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度來(lái)說(shuō)，最好 為8X IO8個(gè)以下。第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，出于高靈敏度地測(cè)定待檢血樣中皮質(zhì)醇 含量考慮，最好為8X108個(gè)以上，從降低(a)步驟所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度 來(lái)說(shuō)，最好為2. 4X IO9個(gè)以下。此時(shí)，比如可將第一數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與下大靜脈 血混合，使下大靜脈血所含皮質(zhì)醇與標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，在上述免疫層 析試紙條上展開(kāi)所得混合物，使在混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體通過(guò)與固定在免疫層 析試紙條基材的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，與皮質(zhì)醇結(jié)合，確認(rèn)有與該皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體顯色，以此選擇能夠確認(rèn)顯色的數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。在此情況下，當(dāng)能 夠看到顯色時(shí)，在(a)步驟使用該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。另一方面，當(dāng)沒(méi)有看到顯色時(shí)，使用 上述第二數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和下大靜脈血，進(jìn)行與使用上述第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 時(shí)同樣的操作，即可選擇能夠確認(rèn)顯色的數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。另一方面，當(dāng)使用用溶劑稀釋過(guò)的待檢血樣時(shí)，可以根據(jù)檢測(cè)靈敏度適當(dāng)設(shè)定標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目。從精確簡(jiǎn)便地測(cè)定皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)，在(a)步驟最好使 用與待檢血樣同樣體積、濃度為待檢血樣1/2倍的稀釋后的血樣取代待檢血樣，并使用每 10 μ L血樣1. 2Χ 109-4. 8Χ IO9個(gè)標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。此時(shí)，每10 μ L血樣中標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目的下限值只要足夠高靈敏度地測(cè)定待檢血樣中的皮質(zhì)醇的含量即可，每10 μ L血 樣中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目的上限值以降低所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本、低成本測(cè) 定血樣中皮質(zhì)醇含量的數(shù)目即可。在(b)步驟，在具有固定有皮質(zhì)醇的基材的免疫層析試紙條上展開(kāi)(a)步驟所得 混合物，使在該混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在該基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗 體反應(yīng)，從而結(jié)合到皮質(zhì)醇。在(b)步驟使用的免疫層析試紙條具有固定有皮質(zhì)醇的基材。用這種免疫層析試 紙條可以將(a)步驟所得混合物在該免疫層析試紙條上展開(kāi)，使未反應(yīng)的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體結(jié)合到固定在該基材的皮質(zhì)醇。在免疫層析試紙條中，最好使固定在基材上的皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)大于標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體的摩爾數(shù)。此時(shí)，在(a)步驟未與血樣中所含皮質(zhì)醇結(jié)合的剩余標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與 固定在基材的皮質(zhì)醇結(jié)合。因此，與固定在基材的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量等 于(a)步驟所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量減去與血樣中所含皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的量的差。因此，根據(jù)評(píng)價(jià)方法1，可以根據(jù)與固定在免疫層析試紙條基材的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體的量，間接知道血樣中皮質(zhì)醇含量，從而可以簡(jiǎn)便地評(píng)價(jià)待檢血樣是否具 有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。從精確測(cè)定待檢血樣中皮質(zhì)醇含量的觀點(diǎn)出發(fā)，在(b)步驟使用的免疫層析試紙 條最好是通過(guò)接頭固定皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條。作為接頭如有0-羧甲基肟(O-carboxymethyloxime)等。從使皮質(zhì)醇牢固地固定 在基材上以獲得穩(wěn)定的測(cè)定結(jié)果的角度來(lái)看，最好接頭已通過(guò)牛血清蛋白固定在基材上。通過(guò)此接頭固定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條可以適用于血樣評(píng)價(jià)試劑盒。此血樣 評(píng)價(jià)試劑盒除免疫層析試紙條外，還可含有檢查所需的容器等。出于高效地在基材上展開(kāi)血樣考慮，(b)步驟使用的免疫層析試紙條還可以在基 材上的展開(kāi)血樣方向的下游設(shè)置由吸水性材料構(gòu)成的吸水墊。吸水性材料如硝化棉等。(b)步驟使用的免疫層析試紙條很容易制備，將皮質(zhì)醇固定在基材上，封閉該基材 后清洗即可。比如，通過(guò)結(jié)合了牛血清白蛋白的接頭將皮質(zhì)醇固定在基材上，封閉固定有皮 質(zhì)醇的基材，然后清洗，即可制備出免疫層析試紙條?；闹灰怯煽烧归_(kāi)上述混合物的材料制成即可?；淖詈媚苡谐渥愕恼归_(kāi)速 度，以使固定在該基材上的皮質(zhì)醇捕捉到標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。在基材上展開(kāi)純水的展開(kāi)速度可以根據(jù)所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和皮質(zhì)醇的結(jié)合 能力適當(dāng)設(shè)定。從精確定量與固定在免疫層析試紙條基材的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的角度考慮，在基材上展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度以0. 35mm/sec以下為宜，最好在0. 32mm/ sec以下，從縮短評(píng)價(jià)所需時(shí)間的角度來(lái)說(shuō)，以0. 25mm/sec以上為宜，最好在0. 28mm/sec以 上。作為基材如有多孔聚乙烯膜、纖維素制濾紙膜、硝酸纖維素膜等薄膜。其中從更有 效地控制皮質(zhì)醇的固定和展開(kāi)速度等角度考慮，以纖維素制濾紙膜為宜?；旌衔镌诿庖邔游鲈嚰垪l的展開(kāi)可以利用毛細(xì)管現(xiàn)象，即以混合物中所含液體成 分為展開(kāi)溶劑。
在(c)步驟，測(cè)定在(b)步驟結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量。結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，可以根據(jù)標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所擁有的標(biāo) 記物的量來(lái)測(cè)定。比如通過(guò)測(cè)定與免疫層析試紙條上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所 擁有的標(biāo)記物的量，可以測(cè)定出標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量。更具體而言，當(dāng)標(biāo)記物為膠體金粒 子時(shí)，運(yùn)用測(cè)定與免疫層析試紙條上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所擁有的膠體金粒 子吸光度的方法和測(cè)定該膠體金粒子反射濃度的方法，可以定量標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。吸光 度可用吸光度儀來(lái)測(cè)定。反射濃度可以用光密度計(jì)(densitometer)來(lái)測(cè)定。從簡(jiǎn)便評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)的角度來(lái)說(shuō)，在(a)步驟，將標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體同待檢血樣 混合，使該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的量應(yīng)多于與待檢血樣同體積的末梢血中所含皮質(zhì)醇反應(yīng)的抗體，在(b)步驟，可以使 用免疫層析試紙條，該免疫層析試紙條上固定的皮質(zhì)醇量多于能與(a)步驟所用量的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體起反應(yīng)的皮質(zhì)醇。此時(shí)，僅憑肉眼觀察在免疫層析試紙條檢測(cè)線上有無(wú)標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體的標(biāo)記物，即可輕松地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)。在(d)步驟，根據(jù)在(C)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，評(píng)價(jià)待檢血樣是否具 有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在(d)步驟，當(dāng)(b)步驟在免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)，根據(jù)與固定在該免 疫層析試紙條的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的顯色，即可評(píng)價(jià)待檢血樣是否具有適于 腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在(d)步驟，使用(b)步驟中固定在基材上的皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)大于上述標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，測(cè)定在免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)結(jié)合到該 固化皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所產(chǎn)生的顯色強(qiáng)度，根據(jù)所測(cè)顯色強(qiáng)度即可評(píng)價(jià)待檢血樣 是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。作為免疫層析試紙條，要求固定在基材上的皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)大于上述標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體的摩爾數(shù)，當(dāng)在該免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)，結(jié)合到該固化皮質(zhì)醇的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體所產(chǎn)生的顯色與下大靜脈血樣的測(cè)定結(jié)果相比吸光度的值小于四分之一，或 不能目測(cè)時(shí)可以判斷血樣具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在本發(fā)明中，可以用另一種免疫層析試紙條取代具有固定有皮質(zhì)醇的基材的免疫 層析試紙條，這種免疫層析試紙條的基材的一端設(shè)有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與待檢血樣接觸而 脫離的標(biāo)記抗體相，且該基材的另一端固定有皮質(zhì)醇。這種在基材的一端設(shè)有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與待檢血樣接觸而脫離的標(biāo)記抗體相、 且在該基材的另一端固定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條，可以適當(dāng)運(yùn)用到血樣評(píng)價(jià)試劑盒 中。此血樣評(píng)價(jià)試劑盒中，除免疫層析試紙條外，還可以含有檢查所需容器等。當(dāng)使用這種在基材的一端設(shè)有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與待檢血樣接觸而脫離的標(biāo)記 抗體相、且在該基材的另一端固定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條時(shí)，可以以下述步驟評(píng)價(jià)血 樣品質(zhì)(A)從免疫層析試紙條的上述標(biāo)記抗體相一端展開(kāi)一定量待檢血樣，使該標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，再讓該抗原抗體反應(yīng)后游離的標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體與固定在該基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而使之與固定在該基材上的 皮質(zhì)醇結(jié)合；
(B)測(cè)定(A)步驟中與固定在基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量；及(C)根據(jù)(B)步驟測(cè)得的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺 靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。以下稱(chēng)此血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法為“評(píng)價(jià)方法2”。在(A)步驟，從免疫層析試紙條的標(biāo)記抗體相一端展開(kāi)一定量待檢血樣?？梢岳?用以血樣中所含液體成分作為展開(kāi)溶劑的毛細(xì)管現(xiàn)象，在免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血 樣。也可根據(jù)需要適當(dāng)用其他展開(kāi)溶劑。作為這種展開(kāi)溶劑具體而言比如有磷酸緩沖液等。在評(píng)價(jià)方法2中，待檢血樣也是血漿、血清和全血等。在待檢血樣中，從更有效地 使血樣中所含皮質(zhì)醇和標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合形成復(fù)合物的角度來(lái)說(shuō)，最好是血漿。另一 方面，當(dāng)所用免疫層析試紙條還設(shè)有過(guò)濾甄別血細(xì)胞等的加樣墊時(shí)，在上述免疫層析試紙 條上滴入待檢血樣，不用預(yù)先從待檢血樣中分離出血細(xì)胞和血清來(lái)制備試樣，從用簡(jiǎn)便的 步驟進(jìn)行評(píng)價(jià)的角度來(lái)說(shuō)，以全血為宜。(A)步驟所用免疫層析試紙條可以僅憑在基材上展開(kāi)待檢血樣這一簡(jiǎn)單的操作， 即讓數(shù)量足以從視覺(jué)上評(píng)價(jià)是否為采自腎上腺靜脈的血樣的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與該血樣 中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。免疫層析試紙條的標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)最好大于下大靜 脈血所含皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)。標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)的上限，可以根據(jù) 基材中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)量和成本等進(jìn)行適當(dāng)設(shè)定。評(píng)價(jià)方法2使用設(shè)有標(biāo)記抗體相且固定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條，因此，僅在 免疫層析試紙條上展開(kāi)一定量待檢血樣，即可讓標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā) 生抗原抗體反應(yīng)，并使該抗原抗體反應(yīng)后游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在該基材的皮質(zhì) 醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而使之結(jié)合到固定在該基材的皮質(zhì)醇。在(A)步驟所用免疫層析試紙條，最好與評(píng)價(jià)方法1的(b)步驟所用免疫層析試 紙條一樣，通過(guò)接頭固定皮質(zhì)醇。皮質(zhì)醇牢固地固定在基材上可望得到穩(wěn)定的測(cè)定結(jié)果，因 此接頭最好通過(guò)牛血清白蛋白固定在基材上。作為(A)步驟所用免疫層析試紙條的基材，可以采用與(b)步驟免疫層析試紙條 所用基材同樣的基材。標(biāo)記抗體相可以通過(guò)各種方法制備，比如在基材上涂抹含有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的 溶液后在適當(dāng)條件下干燥涂抹后的基材的方法，及在基材上涂抹可將標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體分 散到含有水溶性化合物的溶液中的分散液，再使該基材干燥的方法等。在這些方法當(dāng)中，最 好采用在基材上涂抹可將標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體分散到含有水溶性化合物的溶液中的分散液， 然后再使該基材干燥的方法，因?yàn)椴捎眠@個(gè)方法，當(dāng)待檢血樣與標(biāo)記抗體相接觸時(shí)，標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體易于從基材脫離，而當(dāng)待檢血樣與標(biāo)記抗體相未接觸時(shí)，標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體很 難從基材脫離。作為水溶性化合物如有纖維素醚和糖等。作為纖維素醚如有甲基纖維素、乙基纖 維素、羧甲基纖維素、羧乙基纖維素、羥乙纖維素和氰乙基纖維素等，而本發(fā)明不僅僅限于 上述示例。作為糖如有蔗糖等，但本發(fā)明不僅僅限于上述示例?；纳系臉?biāo)記抗體相與皮質(zhì)醇固化部位之間的距離，只要足夠使待檢血樣中所含 皮質(zhì)醇和標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的復(fù)合物以及未與待檢血樣中所含皮質(zhì)醇結(jié)合而游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體展開(kāi)即可。(A)步驟所用免疫層析試紙條，從當(dāng)待檢血樣為全血時(shí)且可更簡(jiǎn)便地評(píng)價(jià)待檢血 樣的角度出發(fā)，也可以在比基材上的標(biāo)記抗體相更靠近血樣展開(kāi)方向的上游一側(cè)設(shè)置由吸 水性材料構(gòu)成的加樣墊，用于滴加待檢血樣、過(guò)濾鑒別血細(xì)胞等。吸水性材料只要具有從全 血中過(guò)濾、鑒別血細(xì)胞功能即可，比如評(píng)價(jià)方法1所用吸水性材料同樣的材料。出于更有效地在基材上展開(kāi)血樣考慮，(A)步驟中所用免疫層析試紙條中，還可以 在基材血樣展開(kāi)方向的下游一側(cè)設(shè)置由吸水材料構(gòu)成的吸水墊。吸水性材料與評(píng)價(jià)方法1 所用吸水性材料一樣即可。在(A)步驟，當(dāng)個(gè)體的末梢血中皮質(zhì)醇濃度為一定標(biāo)準(zhǔn)濃度時(shí)，可以不稀釋待檢 血樣，直接使用。在使用血漿或血清作為待檢血樣的情況下，使用免疫層析試紙條時(shí)，標(biāo)記 抗體相中所含標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定血漿或血清中皮質(zhì)醇含量的角 度來(lái)看，最好為每10 μ L血漿或血清3 X IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的 角度考慮，最好為9Χ108個(gè)以下。當(dāng)使用全血作為待檢血樣時(shí)，標(biāo)記抗體相中所含標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量的角度來(lái)看，最好為每10 μ L全 血1. 5X IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為5. 4Χ IO8個(gè)以 下。當(dāng)用膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液作為標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體時(shí)，可調(diào)整各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下膠 體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的溶液的量為每30 μ L待檢血樣1-15 μ L，其中，所述膠體金標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體的溶液在波長(zhǎng)520nm的吸光度為I-IOabs ；上述吸光度和上述膠體金標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體溶液量的積為10-90abs · μ L。在(A)步驟，在用血漿或血清作為待檢血樣的情況下，如果預(yù)計(jì)個(gè)體末梢血的皮 質(zhì)醇濃度變動(dòng)大，則當(dāng)對(duì)血漿或血清不加稀釋原樣使用時(shí)，出于更易于測(cè)定血漿或血清中 所含皮質(zhì)醇量考慮，每10 μ L血漿或血清的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體最好至少為二種。此時(shí)，在免 疫層析試紙條上，每10 μ L血漿或血清中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定 血漿或血清中所含皮質(zhì)醇的角度出發(fā)，最好為3Χ IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所 需成本的角度考慮，最好為2. 4Χ IO9個(gè)以下。在此，第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈 敏度地測(cè)定血漿或血清中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)，最好為3Χ IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為8Χ IO8個(gè)以下。第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從 高靈敏度地測(cè)定血漿或血清中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)，最好為8Χ IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為2. 4X IO9個(gè)以下。從更簡(jiǎn)便地測(cè)定血漿或血清 中皮質(zhì)醇含量的角度來(lái)說(shuō)，在(A)步驟中作為標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體最好使用 第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體或數(shù)目多于第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。從以簡(jiǎn)便的操作、低廉的成本測(cè)定皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)，可以用下大靜脈血代 替(A)步驟中的血樣，確認(rèn)與固定在免疫層析試紙條基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體顯出的顏色，最好選擇標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目不同的至少二種數(shù)目 的免疫層析試紙條，在(A)步驟中使用所選免疫層析試紙條。在(A)步驟使用全血作為待檢血樣的情況下，如果預(yù)計(jì)個(gè)體末梢血的皮質(zhì)醇濃 度變動(dòng)大，則當(dāng)對(duì)全血不加稀釋原樣使用時(shí)，出于更易于測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量考慮，每 10 μ L全血的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體最好至少為二種。此時(shí)，在免疫層析試紙條上，每10μ L全 血中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)最好為
1. 5X IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為1. 44X IO9個(gè)以 下。在此，第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā) 最好為1. 5X IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為4X IO8個(gè) 以下。第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目，從高靈敏度地測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量的角度出發(fā)最 好為4X IO8個(gè)以上，從降低標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所需成本的角度考慮，最好為1.44X IO9個(gè)以 下。從更簡(jiǎn)便地測(cè)定全血中皮質(zhì)醇含量的角度來(lái)說(shuō)，在(A)步驟作為標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體最好使用第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體或數(shù)目多于第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的第二 標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。當(dāng)在㈧步驟對(duì)待檢血樣不加稀釋原樣使用時(shí)，免疫層析試紙條的選擇可以如下 方法進(jìn)行，如使用標(biāo)記抗體相中具有上述第一數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的免疫層析試紙條 (以下稱(chēng)“試紙條A”)和下大靜脈血，從試紙條A的標(biāo)記抗體相的一側(cè)端展開(kāi)下大靜脈血， 確認(rèn)與固定在試紙條A基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體顯出的顏色。此時(shí)，當(dāng)確 認(rèn)顯色時(shí)，在(A)步驟使用此試紙條A作為免疫層析試紙條。另一方面，當(dāng)未能確認(rèn)顯色 時(shí)，可以使用標(biāo)記抗體相中有上述第二數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的免疫層析試紙條(以下 稱(chēng)“試紙條B”)和下大靜脈血，通過(guò)與使用試紙條A時(shí)同樣的操作，選擇免疫層析試紙條。另一方面，當(dāng)使用通過(guò)在溶劑里稀釋待檢血樣而配制成的稀釋物時(shí)，標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體的數(shù)目可以根據(jù)檢測(cè)靈敏度適當(dāng)設(shè)定。當(dāng)待檢血樣為血漿或血清時(shí)，從精確、簡(jiǎn)便 測(cè)定皮質(zhì)醇含量的角度來(lái)說(shuō)，在(A)步驟中，最好將待檢血樣代之以使用與該待檢血樣同 體積、且將待檢血樣稀釋到1/2倍濃度的稀釋物，同時(shí)使用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目為每 10 μ L該血樣1. 2 X 109-4. 8 X IO9個(gè)的免疫層析試紙條。在這種情況下，每10 μ L血樣中的標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目的下限值為只要數(shù)量足夠高靈敏度地測(cè)定待檢血樣中皮質(zhì)醇含量即 可，每10 μ L血樣中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目的上限值為只要能降低所用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體所需成本、以低成本測(cè)定血樣中皮質(zhì)醇含量即可。當(dāng)待檢血樣為全血時(shí)，在(A)步驟中， 最好將待檢血樣代之以使用與該待檢血樣同體積、且將待檢血樣稀釋到1/2倍濃度的稀釋 物，同時(shí)使用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)量為每 ο μ L血樣6Χ 108-2. 88 X IO9個(gè)的免疫層析試紙
^^ ο在(B)步驟中，測(cè)定在(A)步驟中與固定在基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體數(shù)量。測(cè)定標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)量采取與評(píng)價(jià)方法1的(c)步驟同樣的操作。另外，在(B)步驟，可以使用固定在基材上的皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)大于上述標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，測(cè)定在免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)與該固化皮 質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體產(chǎn)生的顯色強(qiáng)度，根據(jù)所測(cè)顯色強(qiáng)度評(píng)價(jià)上述待檢血樣是否 具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)?？梢允褂霉潭ㄔ诨纳系钠べ|(zhì)醇的摩爾數(shù)大于上述標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體摩爾數(shù)的 免疫層析試紙條作為免疫層析試紙條，根據(jù)在該免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)與該固 化皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的顯色，評(píng)價(jià)上述待檢血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢 測(cè)。此時(shí)，與下大靜脈的血樣的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，當(dāng)吸光度低于四分之一或無(wú)法用肉眼看 到顯色時(shí)，可以判斷血樣具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在(C)步驟，根據(jù)在(B)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適 于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)可以采取與評(píng)價(jià)方法1的(d)步驟同樣的操作。在本發(fā)明中，可以用固定有抗皮質(zhì)醇抗體的免疫層析試紙條取代固定有皮質(zhì)醇的 免疫層析試紙條。當(dāng)使用上述免疫層析試紙條時(shí)，可以通過(guò)以下步驟評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)( I )在固定有抗皮質(zhì)醇抗體的免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣，讓該血樣中所 含皮質(zhì)醇與固定在該基材上的抗皮質(zhì)醇抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而使之與抗皮質(zhì)醇抗體 結(jié)合；(II) ( I )步驟之后，再將標(biāo)記皮質(zhì)醇在免疫層析試紙條上展開(kāi)，讓該標(biāo)記皮質(zhì)醇 與固定在該基材上的抗皮質(zhì)醇抗體中的、未與血樣中所含皮質(zhì)醇結(jié)合的抗皮質(zhì)醇抗體發(fā)生 抗原抗體反應(yīng)，使之結(jié)合到固定在基材的抗皮質(zhì)醇抗體；(III)定量在(II )步驟中與抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合的標(biāo)記皮質(zhì)醇；(IV )根據(jù)在(III)步驟中定量的標(biāo)記皮質(zhì)醇的量和固定在基材的抗皮質(zhì)醇抗體 的量，算出血樣中皮質(zhì)醇的含量；( V )根據(jù)在(IV)步驟中算出的皮質(zhì)醇含量，評(píng)價(jià)血樣是否具備適于腎上腺靜脈 取樣檢測(cè)的品質(zhì)。以下將此血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法稱(chēng)為“評(píng)價(jià)方法3”。在(I )步驟中，在固定有抗皮質(zhì)醇抗體的免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣，讓該 血樣中所含皮質(zhì)醇與固定在基材的抗皮質(zhì)醇抗體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而與該抗皮質(zhì)醇抗 體結(jié)合。可以利用以血樣中所含液體成分為展開(kāi)溶劑的毛細(xì)管現(xiàn)象，在免疫層析試紙條上 展開(kāi)待檢血樣。( I )步驟使用的免疫層析試紙條的基材的一端固定有抗皮質(zhì)醇抗體。此免疫層 析試紙條可以通過(guò)將抗皮質(zhì)醇抗體固定、封閉在基材后進(jìn)行清洗制備而得?；闹灰怯煽梢哉归_(kāi)血樣的材料制成的即可?；淖詈媚軌蛴凶銐虻恼归_(kāi)速 度，當(dāng)展開(kāi)血樣時(shí)，足以用固定在其基材上的抗皮質(zhì)醇抗體捕捉皮質(zhì)醇。展開(kāi)速度和基材與 評(píng)價(jià)方法1同樣即可。在(II )步驟，進(jìn)一步將標(biāo)記皮質(zhì)醇在(I )步驟后的免疫層析試紙條上展開(kāi)，讓 標(biāo)記皮質(zhì)醇與固定在基材上的抗皮質(zhì)醇抗體中未與血樣中所含皮質(zhì)醇結(jié)合的抗皮質(zhì)醇抗 體發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，以此與固定在該基材上的抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合。可以運(yùn)用適當(dāng)?shù)恼归_(kāi) 溶劑，利用毛細(xì)管現(xiàn)象在免疫層析試紙條上展開(kāi)皮質(zhì)醇。作為展開(kāi)溶劑如有磷酸緩沖液等。標(biāo)記皮質(zhì)醇可以通過(guò)將金屬膠體粒子、熒光物質(zhì)等標(biāo)記物用常用方法結(jié)合到皮質(zhì) 醇而獲得。從更簡(jiǎn)便地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)的角度來(lái)說(shuō)，免疫層析試紙條的基材上固定的抗皮質(zhì)醇 抗體最好比與待檢血樣的同體積的末梢血所含皮質(zhì)醇反應(yīng)的抗體的數(shù)量多，(II )步驟所 用標(biāo)記皮質(zhì)醇的量最好在與固定在該基材上的抗皮質(zhì)醇抗體反應(yīng)的皮質(zhì)醇等量以上。在(III)步驟，定量結(jié)合到抗皮質(zhì)醇抗體上的標(biāo)記皮質(zhì)醇?？梢愿鶕?jù)標(biāo)記皮質(zhì)醇 所含標(biāo)記物的量來(lái)定量此標(biāo)記皮質(zhì)醇。在(IV )步驟，用(III)步驟定量的標(biāo)記皮質(zhì)醇的量和上述固定在基材上的抗皮 質(zhì)醇抗體的量算出血樣中的皮質(zhì)醇的含量。在(V )步驟，根據(jù)(IV)步驟算出的皮質(zhì)醇含量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺 靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。在(V)步驟中評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)采取與評(píng)價(jià)方法1(e)步驟同樣的方法即可。如上所述，運(yùn)用本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法可以便捷地評(píng)價(jià)血樣品質(zhì)，因此，能夠快速、方 便地評(píng)價(jià)血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)。在本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法中，利用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，故可以靈敏地檢測(cè)出少量皮質(zhì) 醇，從而僅用少量血樣即可簡(jiǎn)便地評(píng)價(jià)血樣是否適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)。因此，運(yùn)用本發(fā)明的評(píng)價(jià)方法，可以簡(jiǎn)便地獲得適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的血樣， 有望提高腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的成功率。本發(fā)明還可以確定血樣的供應(yīng)源。血樣的供應(yīng)源可以通過(guò)以下步驟來(lái)確定(i)步驟，混合待檢血樣和標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，引起標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所 含皮質(zhì)醇的抗原抗體反應(yīng)；(ii)步驟，在固定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條上展開(kāi)(i)步驟獲得的混合物，使 上述混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而 與皮質(zhì)醇結(jié)合；(iii)步驟，測(cè)定(ii)步驟中結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量；(iv)步驟，根據(jù)(iii)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，確定血樣的供應(yīng)源。(i)-(iii)步驟分別與評(píng)價(jià)方法1的(a)-(c)步驟同樣操作。在(iv)步驟，根據(jù)(iii)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量確定血樣的供應(yīng)源。在(iv)步驟，可以通過(guò)比較(iii)步驟所測(cè)得的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體量(以下稱(chēng) “抗體量a”)和用與上述血樣同體積的下大靜脈血進(jìn)行(i)-(iii)步驟操作時(shí)的標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體量(以下稱(chēng)“抗體量b”)的方法等確定血樣的供應(yīng)源。在上述方法中，抗體量a比抗體量b越少，待檢血樣中的皮質(zhì)醇含量比下大靜脈血 中的皮質(zhì)醇含量就越多，因此，可以確定待檢血樣的供應(yīng)源是位于更靠近腎上腺附近的靜 脈。如上所述，運(yùn)用血樣供應(yīng)源確定方法，可以便捷地確定血樣供應(yīng)源。因此，運(yùn)用此 確定方法可以迅速、簡(jiǎn)便地確定在進(jìn)行腎上腺靜脈取樣檢測(cè)時(shí)插管采樣的位置。在本確定方法中，利用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，故可以靈敏地檢測(cè)出少量皮質(zhì)醇，從而 僅用少量血樣即可確認(rèn)侵襲性很高的腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的精度。因此，上述血樣供應(yīng)源確定方法，因其可以精確、便捷地確定插管采集血樣的位 置，而有望進(jìn)一步提高腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的成功率。在本發(fā)明中，可以通過(guò)邊照射超聲波邊混合含有待檢物質(zhì)的待檢試樣和針對(duì)該待 檢物質(zhì)的金屬膠體標(biāo)記抗體，在具備固定有該待檢物質(zhì)的基材的免疫層析試紙條上展開(kāi)所 得混合物，來(lái)檢測(cè)待檢物質(zhì)。運(yùn)用此法，因?yàn)槭沁呎丈涑暡ㄟ吇旌虾写龣z物質(zhì)的待檢試樣和針對(duì)該待檢物 質(zhì)的金屬膠體標(biāo)記抗體，故相對(duì)于通常用金屬膠體標(biāo)記抗體的免疫層析試紙條有時(shí)難以檢 出待檢物的缺陷，具有能夠精確檢測(cè)待檢物的優(yōu)點(diǎn)。照射超聲波時(shí)的條件與前述相同即可。實(shí)施例下面根據(jù)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本項(xiàng)發(fā)明，但本發(fā)明不僅限于此實(shí)施例。
實(shí)施例1 (制備免疫層析試紙條) 以作為基材的薄膜(密理博公司制，商品名=Hi-Flow Plus,60mmX4mm) 一端(以下稱(chēng)“上游端”)為加樣區(qū)，在順加樣區(qū)縱長(zhǎng)方向(薄膜的長(zhǎng)邊)的另一端(以下稱(chēng)“下游 端”)沿薄膜短邊平行條狀地涂敷由皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白(BSA)(費(fèi)茲杰羅 (Fitzgerald)公司制)溶于IOmM磷酸緩沖液(pH7. 5)而配制成的濃度為lmg/mL的溶液 (以下稱(chēng)“皮質(zhì)醇溶液”)，室溫干燥。然后用牛血清白蛋白(希格瑪公司制)封閉薄膜。將吸收墊(密理博公司制，20mmX4mm)貼到所得薄膜的皮質(zhì)醇溶液涂敷部分長(zhǎng)邊 方向的下游端，獲得免疫層析試紙條。在上述薄膜上展開(kāi)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，觀察是否出現(xiàn)紅色條帶，以此檢查 免疫層析試紙條的薄膜上是否固定有皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白。檢查結(jié)果薄膜 上出現(xiàn)紅色條帶，故確認(rèn)免疫層析試紙條的薄膜上固定有皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白 蛋白。由此得知，通過(guò)將0-羧甲基肟、BSA(牛血清白蛋白)與皮質(zhì)醇結(jié)合，可以獲得固 定有皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條。以薄膜上的皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白的固化部分為免疫層析試紙條的 檢測(cè)線。比較例1除用皮質(zhì)醇取代皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白外，其他均與實(shí)施例1同樣 操作，獲得試紙條。在免疫層析試紙條的薄膜上展開(kāi)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，看是否出現(xiàn)紅色條帶 來(lái)確認(rèn)其薄膜上是否固定有皮質(zhì)醇。其結(jié)果未出現(xiàn)紅色條帶，故確認(rèn)此試紙條的薄膜上未 固定皮質(zhì)醇。實(shí)施例2(1)制備免疫層析用試樣以靜脈插管法從受檢者采集全血試樣。圖1為全血試樣采集位置的簡(jiǎn)要說(shuō)明圖。 在圖1中，1表示下大靜脈附近，2為右腎上腺旁，3為左腎上腺上游，4為左腎上腺下游，5為 右腎，6為左腎，7為右腎上腺，8為左腎上腺。從采自受檢者下大靜脈附近1抽取500 μ L全血試樣并從中獲取血漿。將獲取的 血漿30 μ L和2. 5 μ L (膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液(在 波長(zhǎng)520nm處的吸光度約4abs)加入反應(yīng)池，用吸液管頭輕攪反應(yīng)池內(nèi)的混合物。另，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液是通過(guò)混合皮質(zhì)醇抗體(EN生物技術(shù)研究有限 公司(EnBioTec Laboratories, EBTL)制，商品名抗皮質(zhì)醇)和膠體金溶液(BBI公司，商 品名膠體金)，靜置獲得的混合物，離心分離，去除其上清，再去除游離的抗皮質(zhì)醇抗體和 游離的膠體金粒子后，將獲得的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體混濁于緩沖液中獲得的溶液。將反應(yīng)池放入超聲波清洗機(jī)(AS ONE公司制)中，發(fā)出1分鐘42kHz、100W超聲波， 攪拌混合物。此混合物作為實(shí)驗(yàn)1號(hào)試樣使用。除將實(shí)驗(yàn)1號(hào)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液量換為5 μ L、7. 5 μ L或10 μ L外，其 余與實(shí)驗(yàn)1號(hào)一樣，分別依次制備實(shí)驗(yàn)2號(hào)試樣、實(shí)驗(yàn)3號(hào)試樣和實(shí)驗(yàn)4號(hào)試樣。(2)免疫層析將實(shí)施例1獲得的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸入上述(1)獲得的反應(yīng)池內(nèi)的混合 物中，靜置4分鐘后，將免疫層析試紙條浸入清洗液中4分鐘，清洗免疫層析試紙條。
然后觀察此免疫層析試紙條的檢測(cè)線有無(wú)來(lái)源于膠體金粒子的條帶。實(shí)施例2中觀察免疫層析試紙條的檢測(cè)線有無(wú)來(lái)源于膠體金粒子的條帶的觀察 結(jié)果見(jiàn)圖2的非繪圖的照片所示。條帶1為實(shí)驗(yàn)1號(hào)試樣，條帶2為實(shí)驗(yàn)2號(hào)試樣，條帶3 為實(shí)驗(yàn)3號(hào)試樣，條帶4為實(shí)驗(yàn)4號(hào)試樣。從圖2所示結(jié)果得知，當(dāng)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液量為5 μ L(實(shí)驗(yàn)2號(hào))以 上時(shí)、即膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量為每10 μ L血樣中6. 7 μ L · abs (3. 8 X IO8個(gè))時(shí)， 在檢測(cè)線可以檢出來(lái)源于膠體金粒子的條帶。因此得知，混合膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和血樣，引起膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 和血樣中的皮質(zhì)醇的抗原抗體反應(yīng)時(shí)，可以設(shè)定膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，當(dāng)待檢血 樣是腎上腺旁的血樣時(shí)，在免疫層析試紙條的檢測(cè)線上不出現(xiàn)條帶，當(dāng)待檢血樣不是腎上 腺旁的血樣時(shí)，在免疫層析試紙條的檢測(cè)線上出現(xiàn)條帶。實(shí)施例3除與在實(shí)施例2使用的血樣不同和膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量不同外，其 余與實(shí)施例2同樣的方法進(jìn)行免疫層析。在實(shí)施例2中使用的血樣為以下圖1中采自受 檢者下大靜脈附近1的下大靜脈血全血試樣中獲得的血漿(以下稱(chēng)“標(biāo)準(zhǔn)試樣”)、從圖1 右腎上腺旁2采得的全血試樣中獲得的血漿(以下稱(chēng)“右腎上腺旁試樣”)、從圖1左腎上 腺下游3采得的全血試樣中獲得的血漿(以下稱(chēng)“左腎上腺下游試樣”)及從采自圖1左腎 上腺上游4的全血試樣獲得的血漿(以下稱(chēng)“左腎上腺上游試樣”)，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體溶液的量設(shè)定為5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量20 μ L *abS (11. 4Χ IO8個(gè))]或 7. 5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量30 μ L · abs (17. 25X IO8個(gè))]。然后用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì)社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置 ICA-1000]測(cè)定各免疫層析試紙條的檢測(cè)線在波長(zhǎng)520nm的吸光度。對(duì)各血樣進(jìn)行三次免疫層析測(cè)定。膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為5 μ L時(shí)， 免疫層析后免疫層析試紙條的檢測(cè)線上的吸光度以及由此吸光度算出的各試樣中所含皮 質(zhì)醇的量如表1所示。[表1] 從表1所示結(jié)果得知，當(dāng)試樣為在腎上腺附近位置采集的試樣、即右腎上腺旁試 樣、左腎上腺上游試樣和左腎上腺下游試樣時(shí)，檢測(cè)線的吸光度為16_39abs，與此相對(duì)，當(dāng) 為在遠(yuǎn)離腎上腺的位置采集的標(biāo)準(zhǔn)試樣時(shí)，檢測(cè)線的吸光度為245abs。當(dāng)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為7. 5 μ L時(shí)，免疫層析后免疫層析試紙條的檢測(cè)線上的吸光度以及由此吸光度算出的各試樣中所含皮質(zhì)醇的量如表2所示。[表2] 從表2所示結(jié)果得知，右腎上腺旁試樣、左腎上腺上游試樣和左腎上腺下游試樣 的吸光度為40-51abs，與此相對(duì)，標(biāo)準(zhǔn)試樣的吸光度為334abs。從表1和表2所示結(jié)果得知，在靠近腎上腺位置采集的試樣中皮質(zhì)醇含量為 277-347ng/mL，而標(biāo)準(zhǔn)試樣中的皮質(zhì)醇含量為148ng/mL，在靠近腎上腺位置采集的試樣皮 質(zhì)醇濃度比作為標(biāo)準(zhǔn)試樣的末梢血中皮質(zhì)醇濃度高出2倍左右。從以上結(jié)果得知，血樣中的皮質(zhì)醇濃度與腎上腺和血樣的采集位置之間的距離等 位置關(guān)系有著相關(guān)關(guān)系，因此，根據(jù)固定在基材的皮質(zhì)醇量和與此皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體的量就可判斷血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。從表1和表2所示結(jié)果得知，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為5μ L時(shí)比為 7. 5μ L時(shí)左腎上腺上游試樣和左腎上腺下游試樣之間的皮質(zhì)醇濃度差表現(xiàn)得更加明顯。由此可知，當(dāng)不加稀釋地原樣使用血漿作為血樣，判斷與腎上腺的距離等位置關(guān) 系的不同時(shí)，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量以較少為宜。從以上結(jié)果可以看出，在表1和表2中各試樣間的吸光度的不同并非起因于免疫 層析操作的不同，而是起因于血樣中所含皮質(zhì)醇濃度和位置關(guān)系之間的相關(guān)關(guān)系。實(shí)驗(yàn)例1將30 μ L血漿和7. 5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量22. 5 μ L · abs (13. 5X IO8 個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為3abs]放入反應(yīng)池，用移液管的 頭攪拌所得混合物，獲得實(shí)驗(yàn)5號(hào)試樣。用ELISA法測(cè)定的血漿中的皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL。在實(shí)驗(yàn)5號(hào)試樣以10μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量30μ L7X IO8 個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液取代7. 5 μ L膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液，除此之外 與上述同樣制備實(shí)驗(yàn)6號(hào)試樣。再在實(shí)驗(yàn)5號(hào)試樣以12. 5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量:37· 5 μ L ·abs (22. 5 X IO8 個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液取代7. 5 μ L膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液，除此之外 與上述同樣制備實(shí)驗(yàn)7號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例2除使用與實(shí)驗(yàn)例1所用血漿不同的血漿外，其他均與實(shí)驗(yàn)例1 一樣，分別制備實(shí)驗(yàn) 8-10號(hào)試樣。用ELISA法測(cè)定的血漿中皮質(zhì)醇濃度為403ng/mL。實(shí)驗(yàn)例3
除使用與實(shí)驗(yàn)例1和2所用血漿不同的血漿外，其他均與實(shí)驗(yàn)例1 一樣，分別制備 實(shí)驗(yàn)11-13號(hào)試樣。用ELISA法測(cè)定的血漿中皮質(zhì)醇濃度為192ng/mL。試驗(yàn)例1將實(shí)施例1獲得的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸到在實(shí)驗(yàn)例1-3獲得的反應(yīng)池內(nèi)的 試樣中，放置4分鐘。然后將免疫層析試紙條在清洗液
中浸4分鐘，以此清洗免疫層析試紙
^^ ο然后，用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì)社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置 ICA-1000]測(cè)定各免疫層析試紙條檢測(cè)線在波長(zhǎng)520nm的吸光度。免疫層析后的免疫層析試紙條在檢測(cè)線上的吸光度見(jiàn)表3。[表 3] 從表3所示結(jié)果得知，當(dāng)血漿中的皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL時(shí)(實(shí)驗(yàn)1號(hào))，免疫層 析試紙條的檢測(cè)線上的吸光度在使用實(shí)驗(yàn)6號(hào)試樣(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量 10 μ L)時(shí)最大。還可以看出，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為10 μ L時(shí)比膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體溶液的量為7. 5 μ L時(shí)免疫層析試紙條的檢測(cè)線上的吸光度大。即使膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量為10 μ L以上，免疫層析試紙條檢測(cè)線上 的吸光度也沒(méi)有增高，因此可以認(rèn)為，固定在免疫層析試紙條基材上的皮質(zhì)醇相對(duì)于膠體 金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體基本飽和。當(dāng)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合到固定在免疫層析試紙條基材上的所有皮質(zhì)醇 時(shí)，免疫層析試紙條檢測(cè)線上的吸光度約為300abs。因此，在實(shí)驗(yàn)例1中，可以認(rèn)為實(shí)驗(yàn)6 號(hào)試樣和實(shí)驗(yàn)7號(hào)試樣(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液量12. 5 μ L)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體與固定在免疫層析試紙條上的幾乎所有皮質(zhì)醇結(jié)合，有游離的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體存在。試驗(yàn)例2
(1)制備免疫層析用試樣將30 μ L皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL的血漿和5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量 20 μ L · abs (11. 5 X IO8個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為4abs] 放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪反應(yīng)池內(nèi)獲得的混合物。以所得混合物作為實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣 使用。實(shí)驗(yàn)15號(hào)試樣的制備除在實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣中用皮質(zhì)醇濃度為192ng/mL的血漿取 代皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL的血漿外，其他與上述相同。將盛有實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣的反應(yīng)池放入超聲波清洗機(jī)(AS ONE公司制)中，發(fā)出1分 鐘42kHz、100W超聲波，攪拌試樣。此攪拌后的試樣作為實(shí)驗(yàn)16號(hào)試樣使用。實(shí)驗(yàn)17號(hào)試樣的制備除在實(shí)驗(yàn)16號(hào)試樣中用皮質(zhì)醇濃度為192ng/mL的血漿取 代皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL的血漿外，其他與上述相同。(2)免疫層析將實(shí)施例1獲得的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸入上述(1)獲得的反應(yīng)池內(nèi)的試樣 中，靜置4分鐘后，觀察各免疫層析試紙條的檢測(cè)線有無(wú)來(lái)源于膠體金粒子的條帶。該免疫 層析試紙條如非繪圖的照片3所示。在圖3中，1表示加實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣的免疫層析試紙條，2為加實(shí)驗(yàn)15號(hào)試樣的免 疫層析試紙條，3為加實(shí)驗(yàn)16號(hào)試樣的免疫層析試紙條，4為加實(shí)驗(yàn)17號(hào)試樣的免疫層析 試紙條。用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì)社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置 ICA-1000]測(cè)定各免疫層析試紙條的檢測(cè)線在波長(zhǎng)520nm上的吸光度。從圖3所示結(jié)果得知，加實(shí)驗(yàn)16號(hào)試樣的免疫層析試紙條檢測(cè)線上的條帶，由于 超聲波照射著血漿和膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的混合物，所以比加實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣的免疫 層析試紙條檢測(cè)線上的條帶顯色強(qiáng)。此外，加實(shí)驗(yàn)14號(hào)試樣的免疫層析試紙條檢測(cè)線上波長(zhǎng)520nm處的吸光度為 167abs，加實(shí)驗(yàn)16號(hào)試樣的免疫層析試紙條檢測(cè)線上波長(zhǎng)520nm處的吸光度為288abs。另一方面得知，加皮質(zhì)醇濃度比實(shí)驗(yàn)14號(hào)和實(shí)驗(yàn)16號(hào)高的實(shí)驗(yàn)15號(hào)和實(shí)驗(yàn)17 號(hào)試樣的免疫層析試紙條的檢測(cè)線上未見(jiàn)條帶。如果抗原抗體反應(yīng)因超聲波照射試樣而受阻的話，使用皮質(zhì)醇濃度高的試樣時(shí)， 免疫層析試紙條的檢測(cè)線上會(huì)出現(xiàn)條帶。然而，沒(méi)有超聲波照射試樣的實(shí)驗(yàn)15號(hào)和超聲波 照射試樣的實(shí)驗(yàn)17號(hào)均未在檢測(cè)線上出現(xiàn)條帶，與此相反，皮質(zhì)醇濃度低的實(shí)驗(yàn)14號(hào)和實(shí) 驗(yàn)16號(hào)在檢測(cè)線上出現(xiàn)了條帶。由此可見(jiàn)，向血漿和膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的混合 物照射超聲波可以更精確地檢測(cè)出游離的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。實(shí)驗(yàn)例4除作為薄膜使用展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度為0.45mm/SeC的薄膜(密理博公司制，商 品名=Hi-Flow Plus,60mmX4mm)外，其他均與實(shí)施例1同樣制備實(shí)驗(yàn)18號(hào)免疫層析試紙
^^ ο實(shí)驗(yàn)例5除使用展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度為0.30mm/SeC的薄膜(密理博公司制，商品名 Hi-Flow Plus,60mmX4mm)取代展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度為0. 45mm/sec的薄膜外，用與實(shí)驗(yàn)例4相同的方法制備實(shí)驗(yàn)19號(hào)免疫層析試紙條。實(shí)驗(yàn)例6除使用展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度為0.22mm/SeC的薄膜(密理博公司制，商品名 Hi-Flow Plus,60mmX4mm)取代展開(kāi)純水時(shí)的展開(kāi)速度為0. 45mm/sec的薄膜外，其他均與 實(shí)驗(yàn)例4同樣制備實(shí)驗(yàn)20號(hào)免疫層析試紙條。試驗(yàn)例3將30 μ L皮質(zhì)醇濃度為59ng/mL的血漿和5 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量 25 μ L -abs (15 X IO8個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為5abs]放 入反應(yīng)池，用移液管的頭攪拌所得混合物。將該反應(yīng)池放入超聲波清洗機(jī)(AS ONE公司制)中，發(fā)出1分鐘42kHz、100W超聲 波，攪拌混合物。獲得試樣。將實(shí)驗(yàn)18號(hào)免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸到反應(yīng)池內(nèi)的試樣中，放置4分鐘后，將 此試紙條的薄膜在清洗液
中浸4分鐘，進(jìn)行清洗。然后，觀察薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶。并用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì) 社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置ICA-1000]測(cè)定薄膜出現(xiàn)的條帶在波長(zhǎng)520nm上的 吸光度。除用實(shí)驗(yàn)19號(hào)免疫層析試紙條取代實(shí)驗(yàn)18號(hào)免疫層析試紙條外，其他與上述一 樣，觀察薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶，并測(cè)定薄膜上出現(xiàn)的條帶在波長(zhǎng)520nm上的吸 光度。除用實(shí)驗(yàn)20號(hào)免疫層析試紙條取代實(shí)驗(yàn)18號(hào)免疫層析試紙條外，其他與上述一 樣，觀察薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶，并測(cè)定薄膜上出現(xiàn)的條帶在波長(zhǎng)520nm上的吸 光度。試驗(yàn)例3中的免疫層析后的薄膜如圖4非繪圖的照片所示。在圖4中，1表示實(shí)驗(yàn) 18號(hào)膜，2為實(shí)驗(yàn)19號(hào)膜，3為實(shí)驗(yàn)20號(hào)膜。各條帶上的吸光度顯示在各膜的下部。從圖4所示結(jié)果得知，實(shí)驗(yàn)19號(hào)膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶的吸光度最高，為 660abs。來(lái)源于膠體金粒子的條帶的寬度實(shí)驗(yàn)18號(hào)膜最寬，實(shí)驗(yàn)20號(hào)最窄。由此得知，使 用展開(kāi)速度0. 22mm/sec以上、0. 45mm/sec以下的薄膜、特別是展開(kāi)速度為0. 30mm/sec的薄 膜可以更便于檢測(cè)薄膜上的來(lái)源于膠體金粒子的條帶。從上述結(jié)果得知，運(yùn)用本發(fā)明的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法可以用少量試樣便捷地評(píng)價(jià)血 樣品質(zhì)。實(shí)驗(yàn)例7將10 μ L 皮質(zhì)醇濃度為 57ng/mL(實(shí)驗(yàn) 21 號(hào))、170ng/mL(實(shí)驗(yàn) 22 號(hào))、231ng/ mL (實(shí)驗(yàn) 23 號(hào))、318ng/mL (實(shí)驗(yàn) 24 號(hào))、384ng/mL (實(shí)驗(yàn) 25 號(hào))、517ng/mL (實(shí)驗(yàn) 26 號(hào))、 586ng/mL (實(shí)驗(yàn)27號(hào))或770ng/mL (實(shí)驗(yàn)28號(hào))的血漿和20 μ L [膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的量100 μ L · abs (6 X IO9個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為 5abs]放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪反應(yīng)池內(nèi)的混合物，得實(shí)驗(yàn)21-28號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例8將10 μ L 皮質(zhì)醇濃度為 57ng/mL(實(shí)驗(yàn) 29 號(hào))、231ng/mL(實(shí)驗(yàn) 30 號(hào))、318ng/mL (實(shí)驗(yàn) 31 號(hào))、384ng/mL (實(shí)驗(yàn) 32 號(hào))、517ng/mL (實(shí)驗(yàn) 33 號(hào))或 586ng/mL (實(shí)驗(yàn) 34 號(hào)) 的血漿和6 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量30 μ L · abs (1. 8X IO9個(gè))]膠體金標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為5abs]放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪反應(yīng)池內(nèi)的 混合物。實(shí)驗(yàn)例9將10 μ L 皮質(zhì)醇濃度為 57ng/mL (實(shí)驗(yàn) 35 號(hào))、77ng/mL (實(shí)驗(yàn) 36 號(hào))、110ng/mL (實(shí) 驗(yàn) 37 號(hào))、137ng/mL (實(shí)驗(yàn) 38 號(hào))、170ng/mL (實(shí)驗(yàn) 39 號(hào))、202ng/mL (實(shí)驗(yàn) 40 號(hào))、218ng/ mL (實(shí)驗(yàn) 41 號(hào))、23 Ing/mL (實(shí)驗(yàn) 42 號(hào))、242ng/mL (實(shí)驗(yàn) 43 號(hào))、318ng/mL (實(shí)驗(yàn) 44 號(hào))、 384ng/mL(實(shí)驗(yàn)45號(hào))或517ng/mL(實(shí)驗(yàn)46號(hào))的血漿和2 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的量=IOyL · abs(6X108個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液[520nm上的吸光度約為 5abs]放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕輕攪動(dòng)混合物，得實(shí)驗(yàn)35-46號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例10將皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL (實(shí)驗(yàn)47號(hào))、77ng/mL (實(shí)驗(yàn)48號(hào))、110ng/mL (實(shí)驗(yàn)49 號(hào))、137ng/mL (實(shí)驗(yàn) 50 號(hào))、170ng/mL (實(shí)驗(yàn) 51 號(hào))、202ng/mL (實(shí)驗(yàn) 52 號(hào))、218ng/mL (實(shí) 驗(yàn) 53 號(hào))、23 Ing/mL (實(shí)驗(yàn) 54 號(hào))、242ng/mL (實(shí)驗(yàn) 55 號(hào))、318ng/mL (實(shí)驗(yàn) 56 號(hào))、384ng/ mL (實(shí)驗(yàn) 57 號(hào))、517ng/mL (實(shí)驗(yàn) 58 號(hào))、586ng/mL (實(shí)驗(yàn) 59 號(hào))、770ng/mL (實(shí)驗(yàn) 60 號(hào))、 862ng/mL(實(shí)驗(yàn)61號(hào))或1630ng/mL(實(shí)驗(yàn)62號(hào))的血漿用稀釋液[成分0· 1質(zhì)量％牛 血清白蛋白、IOmM磷酸緩沖液(pH7.5)]稀釋到1/2皮質(zhì)醇濃度。將IOyL所得稀釋液和 10 μ L[膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量50 μ L · abs (3X IO9個(gè))]膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體溶液[520nm上的吸光度約為5abs]放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪所得混合物，得實(shí)驗(yàn) 47-62號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例11取代在實(shí)驗(yàn)例10中將血漿稀釋到1/2皮質(zhì)醇濃度，將皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL(實(shí) 驗(yàn) 63 號(hào))、77ng/mL (實(shí)驗(yàn) 64 號(hào))、110ng/mL (實(shí)驗(yàn) 65 號(hào))、137ng/mL (實(shí)驗(yàn) 66 號(hào))、I7Ong/ mL (實(shí)驗(yàn) 67 號(hào))、202ng/mL (實(shí)驗(yàn) 68 號(hào))、218ng/mL (實(shí)驗(yàn) 69 號(hào))、23 Ing/mL (實(shí)驗(yàn) 70 號(hào))、 242ng/mL (實(shí)驗(yàn) 71 號(hào))、318ng/mL (實(shí)驗(yàn) 2 號(hào))、384ng/mL (實(shí)驗(yàn) 73 號(hào))、517ng/mL (實(shí)驗(yàn) 了4 號(hào))、586ng/mL(實(shí)驗(yàn) 75 號(hào))、770ng/mL(實(shí)驗(yàn) 76 號(hào))、862ng/mL(實(shí)驗(yàn) 77 號(hào))或 I63Ong/ mL (實(shí)驗(yàn)78號(hào))的血漿稀釋到1/5皮質(zhì)醇濃度，除此之外與實(shí)驗(yàn)例10相同，獲得實(shí)驗(yàn)63-78 號(hào)試樣。試驗(yàn)例4將實(shí)施例1的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸到實(shí)驗(yàn)例7-11獲得的反應(yīng)池內(nèi)實(shí)驗(yàn) 21-78號(hào)試樣中，放置4分鐘后，將免疫層析試紙條的薄膜在清洗液W. 1質(zhì)量％牛血清白蛋 白、0.1質(zhì)量％ Tween (商標(biāo)注冊(cè))20、IOmM磷酸緩沖液(pH7. 5)]中浸4分鐘，進(jìn)行清洗。然后，觀察清洗后的薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶，并用吸光度計(jì)[浜松光子 學(xué)株式會(huì)社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置ICA-1000]測(cè)定薄膜上出現(xiàn)的條帶在波 長(zhǎng)520nm上的吸光度。圖5顯示了此皮質(zhì)醇濃度和吸光度的關(guān)系。在圖5中，黑圓點(diǎn)表示在實(shí)驗(yàn)例7中使用10 μ L血漿和20 μ L膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體溶液的混合物時(shí)的吸光度，黑三角表示在實(shí)驗(yàn)例8中使用10 μ L血漿和6 μ L膠體金 標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的混合物時(shí)的吸光度，黑方塊表示在實(shí)驗(yàn)例9中使用10 μ L血漿和2μ L膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的混合物時(shí)的吸光度，白圓點(diǎn)表示在實(shí)驗(yàn)例10中使用 10μ L將血漿稀釋到1/2濃度的稀釋物和6μ L膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的混合物時(shí)的 吸光度，白方塊表示在實(shí)驗(yàn)例11中使用10 μ L將血漿稀釋到1/5濃度的稀釋物和6 μ L膠 體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的混合物時(shí)的吸光度。從圖5所示結(jié)果可以看出，當(dāng)對(duì)血漿不加稀釋原樣使用時(shí)(圖5中黑圓點(diǎn)、黑三角 和黑方塊)，皮質(zhì)醇濃度低的血漿(皮質(zhì)醇濃度0-200ng/mL)因吸光度隨皮質(zhì)醇濃度不同 變化幅度大，較容易判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。與此相反，皮質(zhì)醇濃度高的血漿(皮質(zhì)醇濃 度200-900ng/mL)因吸光度隨皮質(zhì)醇濃度不同變化很小，很難判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。當(dāng)使用將血漿稀釋到1/5濃度的稀釋物時(shí)(圖5中白方塊)，皮質(zhì)醇濃度高的血漿 (皮質(zhì)醇濃度200-900ng/mL)因吸光度隨皮質(zhì)醇濃度不同變化很大，較容易判斷皮質(zhì)醇濃 度的不同。與此相反，皮質(zhì)醇濃度低的血漿(皮質(zhì)醇濃度0-200ng/mL)因吸光度隨皮質(zhì)醇 濃度不同變化很小，很難判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。另一方面，使用將血漿稀釋到1/2濃度的稀釋物時(shí)(圖5中白圓點(diǎn))，皮質(zhì)醇濃度 低的血漿(皮質(zhì)醇濃度0-200ng/mL)和皮質(zhì)醇濃度高的血漿(皮質(zhì)醇濃度200-900ng/ mL)均因吸光度隨皮質(zhì)醇濃度不同變化很大，較容易判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。由此得知，當(dāng) 將作為血樣的血漿稀釋到1/5-1/2濃度時(shí)，因吸光度隨皮質(zhì)醇濃度不同變化很大，較容易 判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。實(shí)驗(yàn)例12用稀釋液[成分0. 1質(zhì)量％牛血清白蛋白、IOmM磷酸緩沖液(pH7. 5)]將皮質(zhì)醇 濃度為57ng/mL的血漿稀釋到1/2皮質(zhì)醇濃度。將10 μ L所得稀釋液分別和3 μ L (實(shí)驗(yàn)79 號(hào))、6yL(實(shí)驗(yàn)80號(hào))、10yL(實(shí)驗(yàn)81號(hào))、15yL(實(shí)驗(yàn)82號(hào))、20yL(實(shí)驗(yàn)83號(hào))或 30 μ L (實(shí)驗(yàn)84號(hào))膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液(520nm上的吸光度約為5abs，膠體金標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體濃度3X108個(gè)/yL)放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪所得各混合物，得實(shí) 驗(yàn)79-84號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例13不用實(shí)驗(yàn)例12的皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL的血漿，取而代之使用皮質(zhì)醇濃度為 90ng/mL的血漿，除此之外均與實(shí)驗(yàn)例12相同，獲得實(shí)驗(yàn)85號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 溶液的量3yL)試樣、實(shí)驗(yàn)86號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量6 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn) 87號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量10 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)88號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體溶液的量15 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)89號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量20 μ L)試樣 以及實(shí)驗(yàn)90號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量30 μ L)試樣。實(shí)驗(yàn)例14除不用實(shí)驗(yàn)例12的皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL的血漿，取而代之使用皮質(zhì)醇濃度為 128ng/mL的血漿外，其余均與實(shí)驗(yàn)例12相同，獲得實(shí)驗(yàn)91號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶 液的量3yL)試樣、實(shí)驗(yàn)92號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量6 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)93 號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量10 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)94號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體溶液的量15 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)95號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量20 μ L)試樣以 及實(shí)驗(yàn)96號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量30 μ L)試樣。試驗(yàn)例5
將實(shí)施例1的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸到反應(yīng)池內(nèi)實(shí)驗(yàn)79-96號(hào)試樣中，放 置4分鐘后，將免疫層析試紙條的薄膜在清洗液W. 1質(zhì)量％牛血清白蛋白、0. 1質(zhì)量％ Tween (商標(biāo)注冊(cè))20、IOmM磷酸緩沖液(ρΗ7· 5)]中浸4分鐘，進(jìn)行清洗。然后，觀察薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶，并用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì) 社制，商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置ICA-1000]測(cè)定薄膜上出現(xiàn)的條帶在波長(zhǎng)520nm上 的吸光度。根據(jù)測(cè)定的吸光度，算出使用同一體積的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液(同一含 量的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體)時(shí)二個(gè)不同皮質(zhì)醇濃度的試樣產(chǎn)生的各條帶間的吸光度 差。更具體而言，算出使用同一體積膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液時(shí)皮質(zhì)醇濃度為57ng/ mL的試樣(實(shí)驗(yàn)79-84號(hào))產(chǎn)生的條帶的吸光度與皮質(zhì)醇濃度為90ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn) 85-90號(hào))產(chǎn)生的條帶的吸光度之差。與上述同樣，算出使用同一體積的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液(同一含量的膠 體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體)時(shí)皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)79-84號(hào))產(chǎn)生的條帶的 吸光度與皮質(zhì)醇濃度為128ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)91-96號(hào))產(chǎn)生的條帶的吸光度之差。膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量與吸光度之差的關(guān)系見(jiàn)圖6。在圖6中，黑方塊 表示皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL的試樣與皮質(zhì)醇濃度為90ng/mL的試樣的吸光度之差，白圓點(diǎn) 表示皮質(zhì)醇濃度為57ng/mL的試樣與皮質(zhì)醇濃度為128ng/mL的試樣的吸光度之差。從圖6所示結(jié)果可以看出，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量約為5-13 μ L時(shí)，比 膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量超過(guò)15 μ L時(shí)吸光度之差更大，因此，評(píng)價(jià)皮質(zhì)醇濃度 低的試樣(皮質(zhì)醇濃度0-200ng/mL)時(shí)，通過(guò)將膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量調(diào)整為 5-13 μ L，將更容易判斷皮質(zhì)醇濃度的不同。實(shí)驗(yàn)例15用稀釋液[成分0. 1質(zhì)量％牛血清白蛋白、IOmM磷酸緩沖液(ρΗ7. 5)]將皮質(zhì)醇 濃度為242ng/mL的血漿稀釋到1/2皮質(zhì)醇濃度。將10 μ L所得稀釋液分別和2 μ L(實(shí)驗(yàn) 97號(hào))、3 μ L(實(shí)驗(yàn)98號(hào))、4μ L(實(shí)驗(yàn)99號(hào))、6 μ L(實(shí)驗(yàn)100號(hào))、8 μ L(實(shí)驗(yàn)101號(hào))、 10 μ L(實(shí)驗(yàn)102號(hào))、15 μ L(實(shí)驗(yàn)103號(hào))、20 μ L(實(shí)驗(yàn)104號(hào))或30 μ L(實(shí)驗(yàn)105號(hào)) 膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液(520nm上的吸光度約為5abs，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體濃 度3X IO8個(gè)/ μ L)放入反應(yīng)池，用移液管的頭輕攪所得各混合物，得實(shí)驗(yàn)97-105號(hào)試樣。實(shí)驗(yàn)例16除不用實(shí)驗(yàn)例15的皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的血漿，取而代之使用皮質(zhì)醇濃度為 808ng/mL的血漿外，其余均與實(shí)驗(yàn)例12相同，獲得實(shí)驗(yàn)106號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 溶液的量2yL)試樣、實(shí)驗(yàn)107號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量3 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn) 108號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量4 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)109號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體溶液的量6yL)試樣、實(shí)驗(yàn)110號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量8 μ L)試 樣、實(shí)驗(yàn)111號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量10 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)112號(hào)(膠體金標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量15 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)113號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量 20 μ L)試樣以及實(shí)驗(yàn)114號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量30 μ L)試樣。實(shí)驗(yàn)例17除不用實(shí)驗(yàn)例15的皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的血漿，取而代之使用皮質(zhì)醇濃度為2380ng/mL的血漿外，其余均與實(shí)驗(yàn)例12相同，獲得實(shí)驗(yàn)115號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體溶液的量2yL)試樣、實(shí)驗(yàn)116號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量3 μ L)試樣、實(shí) 驗(yàn)117號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量4 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)118號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體溶液的量6 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)119號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量8 μ L)試 樣、實(shí)驗(yàn)120號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量10 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)121號(hào)(膠體金標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量15 μ L)試樣、實(shí)驗(yàn)122號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量 20 μ L)試樣以及實(shí)驗(yàn)123號(hào)(膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量30 μ L)試樣。試驗(yàn)例6將實(shí)施例1的免疫層析試紙條的加樣區(qū)浸到在實(shí)驗(yàn)例15-17獲得的反應(yīng)池內(nèi)實(shí)驗(yàn) 97-123號(hào)試樣中，放置4分鐘后，將免疫層析試紙條的薄膜在清洗液
中浸4分鐘，進(jìn)行清洗。觀察薄膜上來(lái)源于膠體金粒子的條帶，并用吸光度計(jì)[浜松光子學(xué)株式會(huì)社制， 商品名免疫層析試紙條測(cè)定裝置ICA-1000]測(cè)定薄膜上出現(xiàn)的條帶在波長(zhǎng)520nm上的吸 光度。然后與試驗(yàn)例5 —樣根據(jù)測(cè)定的吸光度算出使用同一體積的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體溶液時(shí)、即使用同一含量的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體時(shí)二個(gè)不同皮質(zhì)醇濃度的試樣 產(chǎn)生的各條帶間的吸光度差。更具體而言，算出使用同一體積膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶 液(同一含量的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體)時(shí)皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)97-105 號(hào))產(chǎn)生的條帶的吸光度與皮質(zhì)醇濃度為808ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)106-114號(hào))產(chǎn)生的條 帶的吸光度之差。與上述同樣算出皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)97-105號(hào))的吸光度與皮 質(zhì)醇濃度為2380ng/mL的試樣(實(shí)驗(yàn)115-123號(hào))的吸光度之差。膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量與吸光度之差的關(guān)系見(jiàn)圖7。在圖7中，黑方塊 表示皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的試樣與皮質(zhì)醇濃度為2380ng/mL的試樣的吸光度之差，白圓 點(diǎn)表示皮質(zhì)醇濃度為242ng/mL的試樣與皮質(zhì)醇濃度為808ng/mL的試樣的吸光度之差。從圖7所示結(jié)果可以看出，膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量即膠體金標(biāo)記抗皮 質(zhì)醇抗體含量越多，吸光度之差就越大，但當(dāng)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液的量、即膠體金 標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體含量超過(guò)20 μ L時(shí)吸光度之差幾乎相同。目測(cè)評(píng)價(jià)吸光度之差時(shí)，檢測(cè)線上的吸光度最好在200abs以上，因此，當(dāng)評(píng)價(jià)皮 質(zhì)醇濃度高的試樣(皮質(zhì)醇濃度200-900ng/mL)時(shí)，通過(guò)將膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液 的量調(diào)整為4-15 μ L，將更容易判別皮質(zhì)醇濃度的差。實(shí)施例4(1)制備免疫層析試紙條在薄膜(密理博公司制，商品名=Hi-Flow Plus, 60mmX4mm)上，沿薄膜短邊平行 條狀地涂敷將皮質(zhì)醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白(BSA)(費(fèi)茲杰羅(Fitzgerald)公司制) 溶于IOmM磷酸緩沖液(pH7. 5)調(diào)制的濃度為lmg/mL的溶液(以下稱(chēng)“皮質(zhì)醇溶液”)，室 溫干燥。然后用牛血清白蛋白(希格瑪公司制)封閉薄膜。以薄膜上固定有皮質(zhì)醇-3-羧 甲基肟-牛血清白蛋白的部分為免疫層析試紙條的檢測(cè)線。有該薄膜的一端(以下稱(chēng)“上游端”)頂頭處貼上吸入膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體溶液并干燥的玻璃纖維結(jié)合墊，使二者部分重疊。以此，設(shè)置一個(gè)使膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 與待檢血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)、并將膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與待檢血樣的 混合物釋放在薄膜上的組件(釋放墊)。以釋放墊上有膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的部分為 標(biāo)記抗體相。在此釋放墊貼薄膜端的相反一端貼上用于滴入待檢血樣的組件試樣墊，使其
部分重疊。在所得薄膜上從涂有皮質(zhì)醇溶液部分沿縱長(zhǎng)方向的下游端貼吸收墊(密理博公 司制，20mmX 4mm)，獲得免疫層析試紙條。然后以與實(shí)施例1同樣方法，評(píng)價(jià)免疫層析試紙條的膜上是否固定有皮質(zhì) 醇-3-羧甲基肟-牛血清白蛋白。再在免疫層析試紙條的樣墊上滴入IOmM磷酸緩沖液 (pH7. 5)，靜置數(shù)分鐘后確認(rèn)檢測(cè)線上出現(xiàn)紅色條帶，以此評(píng)價(jià)當(dāng)釋放墊上有膠體金標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體且試樣墊滴入血樣時(shí)膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體是否會(huì)在膜上展開(kāi)。(2)評(píng)價(jià)血樣在實(shí)施例4獲得的免疫層析試紙條的加樣區(qū)滴入待檢血樣，并在免疫層析試紙條 上展開(kāi)。展開(kāi)后，根據(jù)免疫層析試紙條檢測(cè)線上的膠體金標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量(吸光 度)，可以評(píng)價(jià)待檢血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。產(chǎn)業(yè)上使用的可行性本發(fā)明的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法、免疫層析試紙條和血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)用試劑盒可以用于 對(duì)腎上腺靜脈取樣檢測(cè)用血樣進(jìn)行評(píng)價(jià)等，因此，有望應(yīng)用于醫(yī)藥開(kāi)發(fā)、診治疾病、生化研 究等用途。
權(quán)利要求
一種血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟(a)混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣，使所述標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)；(b)將(a)步驟獲得的混合物在具有固定有皮質(zhì)醇的基材的免疫層析試紙條上展開(kāi)，使在所述混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在所述基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，與所述皮質(zhì)醇相結(jié)合；(c)測(cè)定在(b)步驟中結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量；以及(d)根據(jù)在(c)步驟中測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(a)步驟中使用的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體是摩爾數(shù)比下大靜脈血所含皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)多的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用固定在基材上的皮質(zhì) 醇摩爾數(shù)多于標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，將在所述免疫層析試紙條上展 開(kāi)待檢血樣時(shí)與所固定的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體顯出的顏色與下大靜脈血樣的 測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，如果吸光度的值在1/4以下或無(wú)法目測(cè)到，則認(rèn)為所述待檢血樣適于 腎上腺靜脈取樣檢測(cè)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(a)步驟中混合標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣時(shí)，所用的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體為每10 μ L血樣3Χ 108-9X IO8個(gè)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(a)步驟中，使用的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體是從每10 μ L待檢血樣3Χ 108-2. 4 X IO9個(gè)范圍中選出至少兩個(gè)數(shù)目的標(biāo)記 抗皮質(zhì)醇抗體，第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目從3 X IO8-S X IO8個(gè)范圍中選擇，第二標(biāo)記抗 皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目從8Χ 108-2. 4X IO9個(gè)范圍中選擇，且第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目比 第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目多。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于用下大靜脈血代替(a)步 驟中的待檢血樣，從至少二種數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體中選擇標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目， 該數(shù)目要足以確認(rèn)與固定在免疫層析試紙條的基材上的皮質(zhì)醇相結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗 體的顯色，在(a)步驟中，混合選定數(shù)目的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(a)步驟中，將待檢 血樣稀釋到1/2濃度，使用與所述血樣同體積的稀釋物，同時(shí)每IOyL所述血樣使用 1. 2X 109-4. 8X IO9個(gè)標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用固定在基材上的皮質(zhì) 醇的摩爾數(shù)多于標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，測(cè)定在免疫層析試紙條上 展開(kāi)待檢血樣時(shí)與所述固定的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體產(chǎn)生的顯色強(qiáng)度，根據(jù)所測(cè) 顯色強(qiáng)度，評(píng)價(jià)待檢血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。
9.一種血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，包括以下步驟(A)使用一種免疫層析試紙條，所述試紙條的基材的一端設(shè)置有標(biāo)記抗體相，所述標(biāo)記 杭體相上吸附有與待檢血樣接觸而脫離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體、另一端固定有皮質(zhì)醇，從所 述免疫層析試紙條的標(biāo)記抗體相一端展開(kāi)一定量待檢血樣，使所述標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血 樣中所含的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，此抗原抗體反應(yīng)后游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在所述基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而與固定在所述基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合；(B)測(cè)定在(A)步驟中與固定在基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，及(C)根據(jù)(B)步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量，評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜脈 取樣檢測(cè)的品質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于標(biāo)記抗體相的標(biāo)記抗皮質(zhì) 醇抗體的摩爾數(shù)比下大靜脈血中所含皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)多。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用固定在基材上的皮 質(zhì)醇的摩爾數(shù)多于標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，當(dāng)在所述免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)，與所固定的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體顯出顏色，憑此顯色評(píng)價(jià)待檢血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用血漿或血清作為待 檢血樣，所用的免疫層析試紙條是標(biāo)記抗體相上的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目為每10 μ L待檢 血漿或血清3Χ 108-9X IO8個(gè)的免疫層析試紙條。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用血漿或血清作為 待檢血樣，在免疫層析試紙條上使用的標(biāo)記抗體相上的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目為從每 IOyL血漿或血清3 X 108-2. 4 X IO9個(gè)范圍中選擇的至少兩種數(shù)目，第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體 的數(shù)目從3Χ IO8-SX IO8個(gè)范圍中選擇，第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目從8Χ 108-2. 4X IO9 個(gè)范圍中選擇，且第二數(shù)目比第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目多。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于當(dāng)用下大靜脈血代替(A) 步驟中的待檢血樣時(shí)，在(A)步驟使用選擇的免疫層析試紙條，所述免疫層析試紙條為能夠確認(rèn)與固定在 免疫層析試紙條基材上的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體所產(chǎn)生的顯色的至少二種免疫 層析試紙條、且所述免疫層析試紙條的標(biāo)記抗體相上所固定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目不 同。
15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(A)步驟，當(dāng)待檢血樣 為血漿或血清時(shí)，將所述待檢血樣稀釋到1/2倍濃度，使用與所述血樣同體積的所述稀釋 物，同時(shí)使用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目為每10 μ L所述血樣1. 2Χ 109-4. 8Χ IO9個(gè)的免疫層 析試紙條。
16.權(quán)利要求15所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用的免疫層析試紙條是固 定在基材上的皮質(zhì)醇的摩爾數(shù)多于標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的摩爾數(shù)的免疫層析試紙條，當(dāng)在所述免疫層析試紙條上展開(kāi)待檢血樣時(shí)，與所固定的皮質(zhì)醇結(jié)合的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇 抗體顯出顏色，測(cè)定此顯色強(qiáng)度，根據(jù)所測(cè)強(qiáng)度評(píng)價(jià)待檢血樣是否具有適于腎上腺靜脈取 樣檢測(cè)的品質(zhì)。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于待檢血樣為 血漿。
18.根據(jù)權(quán)利要求11所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用全血作為待檢血 樣，使用的免疫層析試紙條是其標(biāo)記抗體相中的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體數(shù)目為每10 μ L全血 1. 5Χ108-5. 4X IO8個(gè)的免疫層析試紙條。
19.根據(jù)權(quán)利要求11所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于使用全血作為待檢血樣，在免疫層析試紙條上使用的標(biāo)記抗體相上的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目為從每IOyL全 血1. 5X IO8-L 44X IO9個(gè)范圍中選擇的至少二種數(shù)目，第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目從 1. 5 X 108-4 X IO8個(gè)范圍中選擇，第二標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目從4 X IO8-L 44 X IO9個(gè)范圍 中選擇，且第二數(shù)目比第一標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目多。
20.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其特征在于在(A)步驟，當(dāng)待檢血樣 為全血時(shí)，將所述待檢血樣稀釋到1/2倍濃度，使用與所述待檢血樣同體積的所述稀釋物， 同時(shí)使用標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的數(shù)目為每10 μ L所述血樣6 X 108-2. 88 X IO9個(gè)的免疫層析試 紙條。
21.一種免疫層析試紙條，它用于權(quán)利要求1所述的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，是一種通過(guò)接 頭固定皮質(zhì)醇的免疫層析試紙條。
22.一種免疫層析試紙條，它是一種用于權(quán)利要求9所述血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法的免疫層 析試紙條，其基材的一端設(shè)置有標(biāo)記抗體相，所述標(biāo)記杭體相上有標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體，該標(biāo) 記抗皮質(zhì)醇抗體可通過(guò)與待檢血樣接觸而脫離，該基材的另一端通過(guò)接頭固定有皮質(zhì)醇。
23.一種包含權(quán)利要求21或者22所述的免疫層析試紙條的血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)用試劑盒。
全文摘要
本發(fā)明提供一種血樣品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，其包括以下步驟混合標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體和待檢血樣，使該標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與血樣中所含皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)；將前一步驟獲得的混合物在具有固定了皮質(zhì)醇的基材的免疫層析試紙條上展開(kāi)，使在該混合物中游離的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體與固定在上述基材上的皮質(zhì)醇發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而結(jié)合到該皮質(zhì)醇；測(cè)定在上一步驟結(jié)合到皮質(zhì)醇的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體的量；根據(jù)在上一步驟測(cè)定的標(biāo)記抗皮質(zhì)醇抗體量評(píng)價(jià)血樣是否具有適于腎上腺靜脈取樣檢測(cè)的品質(zhì)。
文檔編號(hào)G01N33/543GK101918838SQ200880125040
公開(kāi)日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2008年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月22日
發(fā)明者井手上公太郎, 米田隆, 高村禪 申請(qǐng)人:特拉斯醫(yī)藥有限公司