專利名稱：：檢測器官系統(tǒng)干擾的離體方法檢測器官系統(tǒng)干擾的離體方法
背景技術(shù)：
：本發(fā)明涉及使用來自人的經(jīng)灌注器官和/或組織，例如腺器官和/或組織，來評價由物質(zhì)對激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)造成的干擾(disruption)。本發(fā)明的方法可以使用人器官和/或組織，特別是不適合用于移植的器官，在器官或組織的基礎(chǔ)上評估此類物質(zhì)?？捎糜谠u估物質(zhì)在人體內(nèi)的性質(zhì)、結(jié)局(fate)和作用的方法跨越了從體內(nèi)研究到對分離器官或組織、組織切片、培養(yǎng)細(xì)胞類型、亞細(xì)胞顆粒、多酶復(fù)合體和分子相互作用研究的多個哺乳動物組織水平。在實(shí)際中，這些復(fù)雜的方法常導(dǎo)致在很多領(lǐng)域中相當(dāng)多的時間、精力和資源的浪費(fèi)，其中在這些領(lǐng)域中對物質(zhì)可能進(jìn)行多輪試驗(yàn)，但卻僅在后面的試驗(yàn)中或憑市場體驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其在人體內(nèi)具有不良影響，從而常常造成慘痛的結(jié)局。此前，旨在去除效益/風(fēng)險(xiǎn)比不能被接受的物質(zhì)的嘗試依賴于使用如嚙齒動物的幾種物種進(jìn)行的非人動物的體內(nèi)研究。在非人物種中進(jìn)行毒性研究的局限性早已得到廣泛公認(rèn)，且目前仍舊如此，但由于體內(nèi)對人進(jìn)行毒性研究的缺乏，使其沒有可行的替代方案。曾嘗試使用包括亞細(xì)胞顆粒(例如微粒體)、初代細(xì)胞和培養(yǎng)細(xì)胞(如肝細(xì)胞)和組織切片在內(nèi)的組織制備物來填補(bǔ)非人試驗(yàn)和人體作用之間的差距。盡管這些體外組織制備物產(chǎn)生了許多有用的數(shù)據(jù)，但組織制備物與完整生物體間的差距越大，產(chǎn)生假陽性和假陰性的風(fēng)險(xiǎn)就越大。例如，在評估測試物質(zhì)單獨(dú)施用或與其他物質(zhì)共同施用時是否具有毒性的時候，可能出現(xiàn)假陽性或假陰性。此外，不能保證在體外正常人組織中測定的藥代動力學(xué)/毒性關(guān)系與體內(nèi)正常人組織或患病人組織中的關(guān)系相同。由于使用人進(jìn)行探索性毒性試驗(yàn)是不人道的，選擇使用多種非人動物物種進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)和/或使用人的生物樣品進(jìn)行體外試驗(yàn)。例如，在本申請的受讓人已公開的PCT申請第W02005/074681號和美國專利申請第10/768，167號(其全文通過引用整體并入本文)中公開了使用離體人器官的藥物試驗(yàn)，其中指出可將不適于移植的器官用于此類試驗(yàn)。研究表明人的生殖健康可能與具有雌激素潛能、雄激素潛能或相關(guān)潛能的環(huán)境物質(zhì)相關(guān)?，F(xiàn)已從人流行病學(xué)研究得到大量觀察結(jié)果，包括可能由環(huán)境物質(zhì)造成的男性精子數(shù)量減少、受精能力下降、睪丸癌發(fā)病率增加和先天性新生兒缺陷，以及女性乳腺癌發(fā)病率增加?，F(xiàn)已報(bào)道在多種野生物種中出現(xiàn)大體先天畸形(grossbirthdeformities)、行為異常以及雌性化/雄性化。顯然，存在此類物質(zhì)可能對人生殖健康和人健康其他方面產(chǎn)生不利影響的多種擔(dān)憂。參見，例如DraftDetailedReviewP即er:AppraisalofTestMethodsforSex-HormoneDisruptingChemicals,來自theSeriesonTestingandAssessment，0ECDEnvironmentalHealthandSafetyPublications,EnvironmentDirectorate，OrganisationforEconomicCo—operationandDevelopment,Paris,France(1997)。
發(fā)明內(nèi)容如上所述，目前的試驗(yàn)方法雖然有利，但尚不能完全勝任于鑒定在人體內(nèi)具有毒性或其他不利影響的化合物。本發(fā)明提供了用于評價物質(zhì)對人的作用的改進(jìn)方法，以彌補(bǔ)由非人動物體內(nèi)試驗(yàn)獲得的作用與人體內(nèi)實(shí)際作用之間的差距。本發(fā)明還提供了低成本的標(biāo)準(zhǔn)篩選試驗(yàn)，以評估物質(zhì)對人體激素的干擾和對其他身體化學(xué)物質(zhì)的干擾潛能，例如激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)水平的提高、降低或者其它改變，或者影響激素的產(chǎn)生或攝取。本發(fā)明還提供了對包括藥物和候選藥物在內(nèi)的物質(zhì)進(jìn)行比此類測試的已知"模式"更為直接的測試。例如，與使用可以經(jīng)修飾或處理的健康器官來提供患病或損傷"模型"不同，本發(fā)明提供了使用捐獻(xiàn)前患有疾病(pre-donationdisease)或損傷的真實(shí)器官和組織來檢測物質(zhì)的作用(包括與此類器官或組織相關(guān)的物質(zhì)的功效和/或安全性)的方法。本文公開的方法降低了與特定物質(zhì)相關(guān)的意外的人發(fā)病率和死亡率的機(jī)率。與來自缺少供血和整體細(xì)胞類型的完整補(bǔ)充的體外系統(tǒng)或來自非人動物體內(nèi)模型的數(shù)據(jù)相比，顯示物質(zhì)在經(jīng)灌注的人器官和/或組織中的結(jié)局和作用的所得數(shù)據(jù)更加可靠且臨床相關(guān)度更高。本發(fā)明的實(shí)施方式包括使用包含至少一種待評估物質(zhì)的灌注液離體灌注人器官和/或組織，更優(yōu)選人器官，最優(yōu)選不適于移植的人器官，包括患病或損傷的器官或者由于特別是長期熱缺血、疾病、損傷和/或長期貯存等而使具有低于成功移植可接受的可能性的器官(可在捐獻(xiàn)和/或貯存前后進(jìn)行測定)，本發(fā)明的實(shí)施方式還包括用于鑒定所述物質(zhì)生理作用的方法。優(yōu)選所述器官或組織是人器官或組織，包括腺器官或組織，例如肝臟、肺、腎臟、腸、心臟、胰臟、脾臟、睪丸、胎盤、胸腺、動脈、靜脈、淋巴結(jié)、骨或骨骼肌、男性或女性生殖器官，或內(nèi)分泌腺/外分泌腺，包括例如腎上腺。所述器官或組織可以是已經(jīng)從其來源永久取出的具有代謝活性的人器官或組織，或者是源自分離和/或培養(yǎng)的人細(xì)胞的工程化器官或組織，其中所述分離和/或培養(yǎng)的人細(xì)胞可包括干細(xì)胞(除非另有說明，本文將其統(tǒng)稱為"人器官或組織")。本發(fā)明的實(shí)施方式提供了在來自人的經(jīng)離體灌注器官和/或組織中測定物質(zhì)(如化合物)的結(jié)局和作用的方法，例如測定所述物質(zhì)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、消除、功效和/或毒性，且更具體地測定物質(zhì)吸收的速率和程度、提取、代謝物的鑒定、器官對血漿中所述物質(zhì)和/或代謝物濃度的控制、組織結(jié)合和積累，以及組織的清除和消除。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可使用經(jīng)灌注的人器官或組織，特別是腺器官或組織將方法用于檢測物質(zhì)，以評估該物質(zhì)對激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)造成的干擾。所述物質(zhì)包括，但不限于候選藥物、藥品(pharmaceuticals)，以及與藥物或藥品無關(guān)的物質(zhì)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中提供了用于確定測試物質(zhì)在至少一種人器官或組織中的結(jié)局和作用的方法，該方法包括a)使用醫(yī)用液體灌注至少一種人器官或組織，以在至少一種測試物質(zhì)存在和不存在下保存所述器官或組織；禾口b)分析所述器官、組織、灌注液和/或下游器官和/或組織，從而檢測該測試物質(zhì)在所述器官或組織中的結(jié)局和作用。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述分析包括在所述測試物質(zhì)存在和不存在下對所述器官或組織進(jìn)行比較。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可以通過分析活檢(biopsy)樣品并檢測其中的變化或損傷從而在形態(tài)學(xué)或組織化學(xué)(優(yōu)選在免疫組織化學(xué))上檢測該測試物質(zhì)的結(jié)局和作用。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可以通過檢測作為所述測試物質(zhì)作用(尤其是毒性)指標(biāo)的毒性代謝物或終產(chǎn)物或釋放到灌注液中的細(xì)胞內(nèi)分子(例如酶，如乳酸脫氫酶)，從而在生物化學(xué)上檢測所述測試物質(zhì)的結(jié)局和作用。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可根據(jù)包含在所述灌注器官或組織中的細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)變化檢測所述測試物質(zhì)的結(jié)局和作用，例如通過使用與所述器官或組織表達(dá)的至少一種mRNA編碼基因特異雜交的探針進(jìn)行原位雜交?？梢赃M(jìn)行細(xì)胞死亡分析，特別是進(jìn)行代表將來毒性作用的凋亡和壞死分析。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，可以通過分析來自灌注器官或組織的流出物檢測所測試物質(zhì)的結(jié)局和作用。優(yōu)選所述灌注流出物是依賴于所述器官或組織的功能性流出物，例如來自腎臟的尿液、來自肝臟的膽汁或來自肺的粘液，或者是包含胰腺的外分泌消化酶的流出物?？煞治龇置诋a(chǎn)物(例如釋放到灌注流出物中的激素)和/或其作用或下游目標(biāo)組織或細(xì)胞。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述流出物可在其離開所述器官或組織通過靜脈回收后對其進(jìn)行分析，所述流出物為，例如來自胰腺的胰島素和胰高血糖素、來自肝臟的白蛋白和葡萄糖、來自肺的氧和二氧化碳或來自腎臟的肌酸酐?？梢酝ㄟ^運(yùn)動反應(yīng)(motorresponse)例如心跳和蠕動來檢測測試物質(zhì)在心臟和腸中的作用，特別是毒性作用。此外，可以通過血管阻力變化檢測在任何器官或組織中的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、消除、功效和/或毒性，特別是通過呼吸系統(tǒng)順應(yīng)性的變化檢測在肺中的毒性?；蛘?，所述分析也可以(或可選地)包括電生理學(xué)檢測、醫(yī)學(xué)診斷成像、光譜檢測、微透析、固態(tài)組織探針檢測(solidstatetissueprobetesting)或其組合。優(yōu)選在生理的溫度、壓力、氧合作用、滲透壓、電解質(zhì)平衡和pH下灌注所述器官或組織。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，灌注液包含于生理可接受的醫(yī)用液體中的匹配人紅細(xì)胞。有利地，所述醫(yī)用液體進(jìn)一步包含約2%-約6%的人血清白蛋白、N-乙酰半胱氨酸、腺苷單磷酸(AMP)和/或超氧化物岐化酶。在如心臟和肝臟的某些器官中，還可在灌注時提供神經(jīng)剌激。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，當(dāng)所述器官為肝臟時，所述醫(yī)用液體可包含胰泌素或膽汁酸。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，當(dāng)所述器官為腎臟時，所述醫(yī)用液體可包含必需氨基酸和非必需氨基酸的混合物。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，當(dāng)所述器官為腸時，所述醫(yī)用液體可包含地塞米松或去甲腎上腺素。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，首先使用不包含測試物質(zhì)的第一醫(yī)用液體灌注所述器官或組織，隨后使用包含測試物質(zhì)的第二醫(yī)用液體進(jìn)行灌注。所述醫(yī)用液體可相同(除了是否存在測試物質(zhì)之外)或不同，或者經(jīng)過改進(jìn)以適合鑒定測試物質(zhì)的結(jié)局和作用。本發(fā)明提供的方法有利地避免了在使用非人動物模型模擬人體內(nèi)活性和行為時出現(xiàn)的測試物質(zhì)的固有物種差別。此外，可在生理?xiàng)l件下且以與器官或組織中所有細(xì)胞類型相關(guān)的濃度使經(jīng)灌注的所述人器官或組織接觸所述物質(zhì)，或者甚至在整個或部分器官體系中使經(jīng)灌注的所述人器官或組織接觸所述物質(zhì)，從而提供更為可信、準(zhǔn)確和一致的結(jié)果。在離體測試中，血液和組織的所有細(xì)胞類型均處于其正常的比例和定位中。因此，測試物質(zhì)可按照其在體內(nèi)那樣被遞送，其中所有細(xì)胞類型均保持其在完整器官或組織中的表型。這樣，因?yàn)樾畔⒌米杂谑褂脕碜匀说墓嘧⑵鞴倩蚪M織的離體試驗(yàn)而非得自于體外試驗(yàn)或非人動物的體內(nèi)研究，本發(fā)明的方法提供了獲取信息與物質(zhì)/作用相互關(guān)系的改進(jìn)方法。此外，如在同時提交共同在審的美國專利申請第11/802，064號(巻號130016，其全文通過引用并入本文)中所述，可以通過評估所述器官或組織對物質(zhì)測試的適宜性進(jìn)一步驗(yàn)證所得信息。本發(fā)明的實(shí)施方式包括用于評價物質(zhì)的方法，所述方法包括使待評價的物質(zhì)通過具有代謝活性的離體人器官或組織，收集來自所述器官或組織、灌注液和/或流出物、和/或下游器官和/或組織的數(shù)據(jù)，和使用所收集的數(shù)據(jù)評估所述物質(zhì)在所述器官或組織中的結(jié)局和作用。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述評價方法包括使第二物質(zhì)在所述第一物質(zhì)之前、同時或之后通過所述器官或組織，和收集有關(guān)所述第一物質(zhì)和第二物質(zhì)相互作用的數(shù)據(jù)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述評價方法包括先使用不含所述物質(zhì)的第一液體，隨后使用包含所述物質(zhì)的第二液體灌注所述器官或組織。優(yōu)選所述第二液體在其他方面與第一液體相同。本發(fā)明的實(shí)施方式包括收集作為政府監(jiān)管批準(zhǔn)程序一部分的數(shù)據(jù)的方法，所述方法包括提供具有代謝活性的分離的離體人器官或組織，使包含待評估的測試物質(zhì)的灌注液灌注通過所述器官或組織，收集來自所述灌注液、流出物和/或器官或組織的數(shù)據(jù)，和使用所收集的數(shù)據(jù)作為呈遞書的一部分提交給政府監(jiān)管組織。本發(fā)明的實(shí)施方式包括產(chǎn)生收益的方法，所述方法包括向第三方收取進(jìn)行用于評估物質(zhì)的結(jié)局和作用的試驗(yàn)的費(fèi)用，和在按本文所述收集到數(shù)據(jù)后，將所述數(shù)據(jù)提供給第三方。在所述產(chǎn)生收益的方法中，可以提供原始形式的數(shù)據(jù)，或者對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析然后提供給第三方。所述數(shù)據(jù)可被用作政府和/或監(jiān)管呈遞書的一部分。所述數(shù)據(jù)可由進(jìn)行該測試并任選地進(jìn)行分析的一方占有，或者由要求進(jìn)行該評估的一方占有。所述費(fèi)用可一次付清或者以其他方式交付。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，收集數(shù)據(jù)的方法可包括使用所述數(shù)據(jù)作為程序的一部分以解析物種之間相矛盾的數(shù)據(jù)，評估物質(zhì)的毒性，確定代謝物的存在，評價物質(zhì)的生物利用度、吸收、治療作用和/或藥物或其他化學(xué)物質(zhì)相互作用，和/或評價物質(zhì)對人激素的干擾和/或?qū)ζ渌眢w化學(xué)物質(zhì)的干擾潛能，例如使激素和/或其他身體化學(xué)物質(zhì)的水平發(fā)生提高、降低或者其它改變。本發(fā)明的實(shí)施方案提供了信息產(chǎn)品。此類信息產(chǎn)品可包含與至少部分通過使物質(zhì)灌注通過具有代謝活性的離體人器官或組織而產(chǎn)生的數(shù)據(jù)相關(guān)的數(shù)據(jù)。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，以計(jì)算機(jī)可讀形式提供所述信息產(chǎn)品。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)描述并體現(xiàn)于下文對實(shí)施方式的詳細(xì)描述中。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的實(shí)施方式包括使用器官和/或組織確定物質(zhì)在所述器官和/或組織的結(jié)局和作用的方法，其中優(yōu)選使用來自人的器官和/或組織，更優(yōu)選人器官。優(yōu)選所述器官或組織是人的器官或組織，例如肝臟、肺、腎臟、腸、心臟、胰臟、脾臟、睪丸、胎盤、胸腺、動脈、靜脈、淋巴結(jié)、骨或骨骼肌、或腺器官或組織，例如內(nèi)分泌腺/外分泌腺，包括例如腎上腺、胸腺以及男性和女性生殖器官。應(yīng)理解，本文所用術(shù)語"吸收"、"轉(zhuǎn)運(yùn)"、"代謝"和"消除"應(yīng)用于所使用的任何器官或組織，但與基于灌注的測試中所使用的某些組織和器官特別相關(guān)。例如，吸收與腸和肺特別相關(guān)，而轉(zhuǎn)運(yùn)(例如血漿清除)和代謝盡管也與腸和肺相關(guān)，但與肝臟、腎臟和心臟特別相關(guān)。消除與腸、肝臟、腎臟和肺特別相關(guān)。本文所用術(shù)語"毒性"涵蓋對器官或組織的物理、化學(xué)、生化和生物損害，包括細(xì)胞水平的損害。毒性涉及物質(zhì)對組織和器官的毒性作用或其他作用，包括但不限于細(xì)胞死亡、凋亡、基因突變、基因表達(dá)變化、生化抑制、代謝下降、誘導(dǎo)和氧化損傷，以及因藥物相互作用而導(dǎo)致的毒性作用。所述術(shù)語"毒性"包括但不限于對激素的干擾或?qū)ζ渌眢w化學(xué)物質(zhì)的干擾。術(shù)語"干擾"包括但不限于使血液或其他體液中的激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)或分泌出的激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)的水平提高、降低或其它改變，和/或改變靶組織或細(xì)胞對激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)的響應(yīng)能力。例如，改變受體介導(dǎo)的相互作用或其他潛在相互作用也包含在該術(shù)語描述的范圍之內(nèi)。術(shù)語"功效"涵蓋測量測試物質(zhì)對器官或組織的積極、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定或健康促進(jìn)的作用。此類測量包括，但不限于檢測疾病特異性生物標(biāo)記物的減少或消除，優(yōu)選使用患病的器官或受病原體感染的器官。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括檢測組織或器官特異性生物標(biāo)記物以獲得由測試物質(zhì)誘導(dǎo)的急性或慢性毒性。所述生物標(biāo)記物可以是，例如病原體或細(xì)胞來源的與病原相關(guān)的標(biāo)記物或代謝分解產(chǎn)物。在捐獻(xiàn)前受損或患病的器官或組織對本發(fā)明的方法特別有用。例如，來自患有期望使用候選藥物治療的疾病的供體的器官對藥物研發(fā)特別有用。該類型的器官和組織包括受細(xì)菌和/或病毒感染、發(fā)炎和/或患有癌癥的器官和組織，患有糖尿病的器官或組織，以及在捐獻(xiàn)前具有撞擊傷(pre-donationimpacttrauma)的器官。對于肺或肺組織，此類捐獻(xiàn)前疾病可包括哮喘、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化；對于心臟或心臟組織，其可包括心律失常；對于肝臟和肝臟組織，其可包括膽汁郁積、黃疸、門靜脈高血壓、壞死和肝硬化；對于腎臟或腎臟組織，其可包括急性腎衰竭；對于胰腺或胰腺組織，其包括胰腺炎。本文所提供的用于確定物質(zhì)在器官或組織中的結(jié)局和作用的方法包括通過使用包含所述物質(zhì)的醫(yī)用液體灌注所述器官或組織，從而使所述器官或組織接觸所述物質(zhì)。除非另有指明，術(shù)語"物質(zhì)"、"測試物質(zhì)"、"測試化合物"和"化合物"可相互替代使用，并且包括但不限于藥物或藥品相關(guān)的物質(zhì)，例如候選藥物和藥品，以及與藥物或藥品無關(guān)的物質(zhì)，例如環(huán)境物質(zhì)，如煙塵和其他工業(yè)排出物；農(nóng)業(yè)產(chǎn)品和副產(chǎn)品；建筑材料；工業(yè)制品和副產(chǎn)品；食品，例如加工食品和副產(chǎn)品、食物和食品添加劑；煙草制品，例如香煙、雪茄或巻煙，或嚼煙提取物及其組分；清潔產(chǎn)品，例如洗滌劑、漂白劑、肥皂、洗發(fā)劑和調(diào)理劑(conditioner);化妝品，例如用于皮膚、頭發(fā)和指甲的化妝品；等等。通常對用于臨床移植的器官進(jìn)行灌注保存，其中在低溫停循環(huán)(hypothermicarrest)(約4°C-約8°C)下進(jìn)行灌注是優(yōu)選的保存方法。與此相反，盡管得到充分研究，但是在臨床上還沒有在包括正常體溫(常溫(normothermia))在內(nèi)的生理?xiàng)l件下保存用于移植的器官，這是因?yàn)樵趯?shí)際應(yīng)用中難以將器官維持在正常體溫。對移植器官的高要求，具體而言為要求移植器官的功能最大化且炎癥最小化，使常溫的應(yīng)用受到某種程度的限制。因?yàn)楸景l(fā)明的離體方法降低或消除了對移植的要求，克服了常溫的很多限制。例如，可以通過血型匹配的血細(xì)胞向常溫的離體器官供氧而無需考慮免疫原性問題，并且在常溫灌注期間常溫的離體器官出現(xiàn)功能性下降也是可以接受的，所述功能性下降例如由于在正常情況下由其他器官清除的毒素的累積，以及由于在正常情況下由其他器官產(chǎn)生的底物和因子的耗盡所導(dǎo)致。本文所用"常溫條件"是指37士3t:范圍內(nèi)的溫度。本發(fā)明的實(shí)施方式包括使用本發(fā)明特征以提供獲取物質(zhì)信息(例如物質(zhì)/作用的相互作用)的改進(jìn)方式的商業(yè)方法和模型。因此，本發(fā)明的實(shí)施方式可以包括使第三方獲得服務(wù)，包括檢測物質(zhì)在人器官或組織中的結(jié)局和作用。具體實(shí)施方式包括使第三方以信息產(chǎn)品的形式獲得由所述測試產(chǎn)生的所得數(shù)據(jù)和/或信息。第三方可通過繳費(fèi)獲得所述服務(wù)和產(chǎn)品。應(yīng)理解，所述費(fèi)用可包括定額或一次付清基于變量的總額，或者任何其他適合形式的報(bào)酬、補(bǔ)償或償付形式。因此，按照本文公開的方法進(jìn)行測試并由該公開方法產(chǎn)生數(shù)據(jù)和信息的實(shí)體(在本文中稱為提供商)可以通過交易并向第三方銷售本文所述的服務(wù)和產(chǎn)品而產(chǎn)生收益。其他實(shí)施方式包括在低溫條件下保存來自目標(biāo)物種(例如人)的一個或多個器官或組織的保存階段，從而使所述器官或組織保持在回復(fù)生理溫度后復(fù)蘇并維持基本正常的代謝活性和功能的能力。本文所用術(shù)語"代謝活性"是指存活生物體特征性的生化活性水平。在功能階段，可使用常溫的血液或基于血液的灌注液來灌注器官或組織以穩(wěn)定所述器官或組織的生理特性。優(yōu)選使所述器官或組織的生理特性和生化特性與體內(nèi)器官或組織的生理特性和生化特性保持基本一致，這樣由所述測試產(chǎn)生的數(shù)據(jù)基本上是明確、可重復(fù)和相關(guān)的。例如，在完整器官中，細(xì)胞保持其表型、血液和組織中的細(xì)胞類型處于其正常比例和定位，物質(zhì)具有其在體內(nèi)應(yīng)具有的作用?？梢酝ㄟ^包括陽性和陰性對照來量化受試器官或組織的功能狀態(tài)?？稍谒鑫镔|(zhì)之前或與所述物質(zhì)同時添加對照，或者在收集到分析所述物質(zhì)結(jié)局和作用所需的幾乎所有必須樣品后添加對照?？稍谑褂冒鑫镔|(zhì)的第二液體灌注所述器官或組織之前和/或之后使不包含所述物質(zhì)的液體或灌注液通過所述器官。這樣，所述器官可充當(dāng)其本身的對照。所使用的陽性和/或陰性對照取決于具體試驗(yàn)的主要目的?？梢栽?正常"、"患病"或受損的器官和組織中實(shí)施本發(fā)明方法的實(shí)施方式，其中盡量使每種器官或組織的生理特性和生化特性與特定疾病或病癥的體內(nèi)特征和性質(zhì)保持相近。本發(fā)明方法的實(shí)施方式可包括使用多種醫(yī)用裝置、溶液和方案，包括溯源、獲取、保存和評估所研究的器官和/或組織。—方面，本文公開的方法可產(chǎn)生有關(guān)物質(zhì)及其在人器官和/或組織中的結(jié)局和作用的數(shù)據(jù)和信息。關(guān)于此物質(zhì)的數(shù)據(jù)或信息可包括此物質(zhì)本身、其衍生物、代謝物和/或相關(guān)物質(zhì)的特征。關(guān)于此物質(zhì)的所得數(shù)據(jù)或信息可包括該物質(zhì)對離體器官或組織的作用、離體器官或組織對該物質(zhì)的作用，以及該物質(zhì)對與該離體器官或組織接觸或相關(guān)的其他物質(zhì)或其產(chǎn)物的作用。有關(guān)所述物質(zhì)及其結(jié)局和作用的信息可包括但不限于所述物質(zhì)的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、消除、功效和/或毒性，更具體而言，其包括物質(zhì)吸收的速率和程度、提取、代謝物的鑒定、器官對血漿中所述物質(zhì)和/或代謝物濃度的控制、組織結(jié)合和積累，以及組織的清除和消除。所述信息可進(jìn)一步包含對物質(zhì)干擾人激素和/或干擾其他身體化學(xué)物質(zhì)的潛能的評價，例如使激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)水平發(fā)生提高、降低或其它改變。另一方面，本文公開的方法可產(chǎn)生有關(guān)接觸所述物質(zhì)的離體器官或組織的數(shù)據(jù)和信息。應(yīng)用本文公開的方法時，其檢測結(jié)果可提供有關(guān)物質(zhì)類型、細(xì)胞受體、生化途徑、生理9和病理機(jī)制、生物標(biāo)記物和與存活生物體相關(guān)的其他現(xiàn)象的數(shù)據(jù)和信息。通過積累實(shí)施本文公開方法產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和信息，可創(chuàng)建出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性和科學(xué)有效性的信息庫。各種形式的數(shù)據(jù)和信息均可構(gòu)成可傳輸?shù)男畔a(chǎn)品。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，向第三方提供的信息產(chǎn)品可包括由實(shí)施本文公開方法產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)。此外，向第三方提供的信息產(chǎn)品也可以(可選擇地)包含對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行的可用和/或可信形式的多個水平的解釋或評估。提供商可保留原始數(shù)據(jù)的所有權(quán)，而作為信息產(chǎn)品，第三方僅能獲得來自所述原始數(shù)據(jù)的信息。因此，除了按照本文公開的方法進(jìn)行測試并產(chǎn)生原始數(shù)據(jù)的服務(wù)之外，提供商還可以為第三方進(jìn)行數(shù)據(jù)解釋。信息產(chǎn)品可以是第三方通過付費(fèi)獲得訪問該信息遠(yuǎn)的形式。此類信息可以用于，例如比較在各種組織和器官中的作用，從而形成預(yù)測這些作用的模式和模型。信息產(chǎn)品可用于比較有關(guān)所述物質(zhì)及其在不同組織和器官中、在不同物種中以及在不同的組織和器官條件下(例如正常、異常、患病或損傷或其它損害的組織和器官)的結(jié)局和作用的信息。實(shí)施例優(yōu)選調(diào)整灌注液的性質(zhì)適應(yīng)具體的待測組織、器官或其組合，或適應(yīng)測試化合物的化學(xué)或其他特征。對低溫條件下的灌注，灌注液優(yōu)選包含氯化鈣、氫氧化鈉、HEPES或其他有機(jī)酸、磷酸酯(無機(jī)酯或有機(jī)酯)、甘露醇、葡萄糖、葡萄糖酸鈉、葡萄糖酸鎂、核糖、淀粉、谷胱甘肽、腺嘌呤和水。在低溫條件下使用的優(yōu)選灌注液，例如KPS-1⑧(OrganRecoverySystems，Inc.，DesPlaines，EL)的pH約為7.4，重量克分子滲透濃度約為330m0sm，并且包含以下組分<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>對常溫條件下的灌注，灌注液優(yōu)選包含水、鈉、鉀、鈣、鎂、氯、緩沖成分(例如包含碳酸氫根離子和TES、MOPS或BES)、葡萄糖、甘油、膽堿、氨基酸成分(例如，谷氨酸(glutamate)、天冬氨酸(aspartate)和/或谷氨酰胺)，輔酶(例如硫胺脫羧輔酶)、維生素樣組分(例如肉堿)和蛋白質(zhì)(例如胰島素)。或者，也可以使用人血漿。在常溫條件下使用的優(yōu)選灌注液，例如11(:八(^乂@，英國倫敦)或OPB-I或OPB-2(OrganRecoverySystems,Inc.，DesPlaines，IL)，pH范圍為約7.13至約7.41，重量克分子滲透濃度為約286m0sm，并且包含以下組分<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>此外，如下表中的示例性描述所述，可改良灌注液以用于某些器官。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>驗(yàn)石開舒艮吿如果將灌注研究結(jié)果報(bào)告提供給第三方或僅將其保留，那么所述報(bào)告可以為草稿或終稿形式，并且包含但不限于以下研究信息和數(shù)據(jù)試驗(yàn)過程的描述，包括例如灌注方法和制備物(制備)的細(xì)節(jié)；在灌注研究開始和結(jié)束時器官或組織的重量；質(zhì)量平衡數(shù)據(jù)，例如灌注液、血漿、流出物、器官或組織中，和/或適合使用的體液(例如膽汁)中的放射性同位素；血漿和/或器官或組織對標(biāo)準(zhǔn)品(也稱作"對照")的清除，對照方法學(xué)和物質(zhì)；結(jié)合或未結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)品或任何適合的結(jié)合物的消除；標(biāo)準(zhǔn)品的代謝物的形成速率以及標(biāo)準(zhǔn)品的代謝譜的其他方面；對標(biāo)準(zhǔn)品的描述，包括例如代謝譜；如果適用，在各個收集時間點(diǎn)的生理流速，例如膽汁、動脈等；器官供體的詳細(xì)情況和就醫(yī)記錄(按照許可)；測試物質(zhì)的數(shù)據(jù)表或其他可得信息；測試物質(zhì)的收到和使用記錄；給藥記錄；樣品收集記錄；樣品重量記錄；樣品貯存和運(yùn)輸記錄；研究部位的定位；在研究期間進(jìn)行的或與研究相關(guān)的任何其他測量和/或分析；和/或由合同實(shí)驗(yàn)方(contractfacility)提供的任何報(bào)告和/或數(shù)據(jù)。鍾誠雄#靴對勿薩科允在評估物質(zhì)對激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)的毒性或其它作用時，有用的信息包括但不限于確定物質(zhì)如何影響外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺產(chǎn)生和/或響應(yīng)血液和其他體液中效應(yīng)物激素(effectorhormone)的能力，以及例如在何種濃度下使激素或其他化學(xué)物質(zhì)的水平保持不變、下降、增加或其它改變，或者在何種濃度下使外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺的分泌能力不變或發(fā)生變化。此外或可選擇地，測定物質(zhì)如何影響靶細(xì)胞或組織對內(nèi)分泌腺/外分泌腺或其他腺產(chǎn)生的激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)的響應(yīng)能力，例如受體介導(dǎo)的反應(yīng)或其他潛在反應(yīng)，也可能是有用的。用于測試激素和其他身體化學(xué)物質(zhì)干擾的優(yōu)選測試系統(tǒng)是這樣的測試系統(tǒng)，其中血液供給外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺并由外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺所提供且靶組織是完整的。優(yōu)選在受控條件下將測試物質(zhì)遞送到外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺，從而可以評估外分泌腺/內(nèi)分泌腺或其他腺在響應(yīng)激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)時通常釋放到血液或其他體液中的分泌產(chǎn)物。優(yōu)選的器官模型包括但不限于胰腺、胸腺、男性和女性生殖器官、甲狀腺和腎上腺。疑似影響內(nèi)分泌功能(包括但不限于生殖、腎上腺和甲狀腺功能)的一個或多個方面的物質(zhì)的作用機(jī)理可涉及多個作用部位以及對內(nèi)平衡過程的復(fù)雜干擾，例如干擾內(nèi)分泌或其他系統(tǒng)、分泌、結(jié)合、反饋調(diào)控和/或靶標(biāo)活性。間接作用包括但不限于由誘導(dǎo)或抑制代謝酶并引起內(nèi)源激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)的產(chǎn)生或分解發(fā)生變化，或引起血液或其他體液中載體蛋白質(zhì)水平變化的物質(zhì)所導(dǎo)致的作用。例如，性激素干擾物及其代謝物如果與內(nèi)源配體結(jié)構(gòu)類似，則可能與性腺細(xì)胞或附性器官細(xì)胞中的生理配體的受體發(fā)生直接相互作用，由此模仿激素的作用而導(dǎo)致受體激動或其他激動作用，或者致使天然存在的激素的結(jié)合和生物活性被阻斷或降低，或其他拮抗作用。下文是用以說明本發(fā)明方法的試驗(yàn)和器官或組織。本文公開了本發(fā)明的一般性質(zhì)，下文的非限定性方法僅提供了充分公開的具體實(shí)施方式。灌灃腸的方法實(shí)施例在臨床試驗(yàn)前產(chǎn)生關(guān)于物質(zhì)在人腸中被吸收的明確數(shù)據(jù)的能力對于決定使用可能被吸收的物質(zhì)非常重要。可使用分離的腸段產(chǎn)生這些數(shù)據(jù)，這是因?yàn)?a)所述物質(zhì)如同在體內(nèi)一樣通過腸腔呈遞；(b)存在完整的腸腔和血液之間的屏障；和(C)灌注液的組成和流動特征模仿其在體內(nèi)的情況。灌注條件每次分析使用約3L灌注液。所述灌注液優(yōu)選包含懸浮在包含4-6%人血清白蛋白且pH優(yōu)選為約7.4的緩沖液中的匹配人紅細(xì)胞(優(yōu)選預(yù)先清洗過)(約15%-約20%，v/v)。優(yōu)選使所述灌注液通過輸血過濾器，隨后通過白細(xì)胞清除過濾器，添加肝素并調(diào)節(jié)pH，如果必要優(yōu)選將pH調(diào)至約7.4。在添加到灌注裝置前，優(yōu)選室溫貯存所述灌注液?？蓪⑹Ｓ嗟墓嘧⒁阂环菰嚇?aliquot)離心(在約fC下以約1，500g離心約10分鐘)以分離血漿。隨后，可將血漿在約-201:或更低的溫度冷凍以在分析中作為空白對照使用。腸樣品和灌注優(yōu)選取出低溫貯存的分離人腸段(約30cm-約45cm)，例如緊鄰膽管入口下方的腸段，以用于各個分析。將完整的腸樣品稱重并在約4_8°C，pH約7.4和壓力約60-80mmHg下，用冷緩沖液通過腸系膜動脈(或其分支)沖洗約10-約15分鐘。此動脈緩沖液沖洗通常涉及約0.5L的緩沖液。在動脈緩沖液沖洗之后是平衡階段，其中使約0.5L的氧飽和室溫灌注液以約20mL/分鐘的速率通過腸?？蓪⒓s0.5L的灌注流出物廢棄，隨后將灌注切換到使用0.75L氧飽和灌注液的重循環(huán)模式。優(yōu)選隨時間將灌注速率提高到約90mL/分鐘-約100mL/分鐘的目標(biāo)，但不超過最大壓力限。使灌注液重循環(huán)直至腸核心溫度為約35t:并可觀察到腸蠕動。首次通過和首次重循環(huán)通常總計(jì)持續(xù)長達(dá)約60分鐘。在平衡階段的結(jié)束時，將灌注液從所述裝置排出，并在重循環(huán)模式下替換成約1L的約37t:新鮮氧飽和灌注液。此階段為穩(wěn)定階段，其持續(xù)約10-約15分鐘。隨后，在滿足灌注和生理參數(shù)(例如耗氧量、核心溫度高于約35tV流速約90mL/分鐘，壓力為約60-約80mmHg)的條件下，取出灌注液試樣。施用和樣品收集在施用測試物質(zhì)前對人腸進(jìn)行常溫灌注的優(yōu)選接受標(biāo)準(zhǔn)為灌注&生理參數(shù)動脈壓(mmHg)100動脈流速(ml/分鐘/克)0.2-1.0靜脈P02>26動脈P02>120pH7.3士0.2溫度("c)37.4±2PCV(細(xì)胞％)20-45%在同一制劑(最大體積約15ml)中向分離腸的腸腔中施用(優(yōu)選以脈沖劑量)優(yōu)選標(biāo)記(例如放射標(biāo)記)的測試物質(zhì)(約10mg，約100iiCi)和優(yōu)選3-5個標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)，所述測試物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)以不同的速率通過被動擴(kuò)散而被吸收。將此時記為"計(jì)時起點(diǎn)"。隨后，以重模式灌注腸，優(yōu)選灌注約2小時，并且優(yōu)選在至少兩個下列優(yōu)選時間點(diǎn)取出灌注液試樣(約3-約5mL):給藥前以及給藥后5、10、15、30、45、60、90、105和120分鐘。將每份樣品約一半在約-7(TC冷凍，并將每份樣品的剩余部分離心，除去血漿并在約-7(TC冷凍?；蛘?，在5毫升的樣品中，例如，將約1毫升作為完整灌注液保留，將剩余的約4毫升離心，并將上層血漿分成大致相等的4份試樣以進(jìn)行單獨(dú)分析。在灌注結(jié)束時，將腸段稱重，收集腸腔內(nèi)容物并稱重，使用約100毫升水沖洗腸腔并加入到腸內(nèi)容物中，記錄總質(zhì)量。將此混合物在最少量的水中均漿并且，如果需要以大致相等的4份試樣(例如約40毫升的試樣)冷凍。此外，優(yōu)選使用鹽水、水和/或醇清洗灌注裝置?？蓪⒏飨匆簶悠繁４嬉杂糜诤罄m(xù)分析(例如，質(zhì)量平衡)。灌注方法的實(shí)施方式允許向同一腸的連續(xù)腸段進(jìn)行多個(單次或組合)施用。在此類實(shí)施方式中，整個腸段的灌注如上所述，但在平衡后，將腸(腸系膜和腸腔)分成3段，優(yōu)選其長度大致相等，這樣盡管灌注液仍循環(huán)通過每段且隨后混合，但所述3段腸腔彼此完全分離。隨后，向一段施用測試物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品，并在施用后以達(dá)約1小時至約2小時的時間間隔取出灌注液試樣。隨后，通過例如燒灼術(shù)(cauterization)將此段從接近腸系膜處去除，保持腸系膜完整且密封。隨后，使1L新鮮灌注液沖洗通過剩余兩段，并收集首次通過的洗脫液。隨后，加入新鮮灌注液(約1L-約1.5L)，并以比用于3段的流速小1/3的流速重循環(huán)。隨后，向第二段施用，并重復(fù)整個過程直至所有3段均被施用，針對每個計(jì)時起點(diǎn)以在給藥后達(dá)約1小時_約2小時的時間間隔收集灌注液試樣?；顧z優(yōu)選在施用前和灌注結(jié)束時進(jìn)行活檢，并在勻漿之前的收集點(diǎn)將其快速冷凍在液氮中。可對活組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢測，并對標(biāo)記酶和其他蛋白質(zhì)進(jìn)行表型檢測。對照優(yōu)選的對照包括但不限于灌注液試樣和施用前收集的血漿，并且如果可能，可以是從單個器官收集的腸勻漿物。對照優(yōu)選在約-S(TC貯存。分析通過分析測試物質(zhì)從腸腔到重循環(huán)灌注液中隨時間的吸收速率，并將該速率與內(nèi)標(biāo)的吸收速率進(jìn)行比較來測定所述測試物質(zhì)的吸收。原始數(shù)據(jù)通常以皮摩爾/ml、總皮摩爾和/或百分劑量表示，并且包括所有吸收的化合物的百分?jǐn)?shù)比例，以及標(biāo)記的測試物質(zhì)在灌注液、血漿、腸內(nèi)容物和腸壁中的質(zhì)量平衡。如果使用放射標(biāo)記的化合物和標(biāo)準(zhǔn)品，則可以測量總放射性，并且如果需要，可以對標(biāo)記的測試物進(jìn)行HPLC圖譜分析。在灌注期間監(jiān)測生理參數(shù)，例如動脈壓和動脈流速、器官核心溫度、血液pH、積極蠕動以及動脈和靜脈的p02和P(A;血液生化參數(shù)，例如電解質(zhì)平衡，包括但不限于鉀(mM)、鈉(mM)、氯(mM)、鈣(mM)、白蛋白(g/dl)、ALP(堿性磷酸酶)(U/1)、ALT(丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶)(U/1)、淀粉酶(U/1)、AST(天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶)(U/1)、GGT(y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶)(U/1)、Cal(mg/dl)和BUN(血尿素氮)(mg/dl)的濃度；生物標(biāo)記物，例如葡萄糖(mg/dl)的利用和乳酸(lactate)(mM)的生成；內(nèi)標(biāo)的吸收，例如3H_甘露醇(目標(biāo)濃度約100yCi;目標(biāo)劑量約20M);安替比林(目標(biāo)劑量約20M);特布他林(目標(biāo)劑量約20M);葡聚糖(約10-約70kD)和/或其他標(biāo)記或未標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品；以及測試化合物和/或代謝物的存在和特征。遭灃肝flff的方法目前使用來自體外制備物(即組織切片、分離的肝細(xì)胞、S9部分或微粒體)的數(shù)據(jù)嘗試對人肝臟代謝進(jìn)行預(yù)測。盡管這些研究很重要，但是它們有時(a)不能模擬完整肝臟中的代謝；(b)鑒定的是可能的代謝而非實(shí)際的代謝；和(c)沒有測量代謝物在血液和膽汁之間的后續(xù)分配，并由此沒有測量肝外器官和組織與肝臟代謝的副產(chǎn)物的接觸。在分離的血管灌注人肝臟研究中，可以避免這些缺陷。作為代替，可以通過基于匹配血液的灌注液以生理流速向具有正常膽汁分泌機(jī)制的穩(wěn)定存活肝器官或組織遞送測試物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品。因此，此模型非常適合用于測定人肝臟中物質(zhì)攝取的性質(zhì)和程度、代謝和清除率，以及膽汁排除、質(zhì)量平衡以及代謝物在血液和膽汁之間后續(xù)分配的測量。此外，可在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)中表征具體的代謝物。示例性灌注條件每次分析使用約5-6L灌注液。新鮮灌注液包含人紅細(xì)胞(預(yù)先清洗并離心)，其懸浮在包含6%人血清白蛋白的緩沖液中(在約室溫，v/v為約15%-約20^，pH約7.4)。如果已知此測試物質(zhì)與a-l糖蛋白結(jié)合，則使用4%人血清白蛋白+2%的a-l糖蛋白代替6%人血清白蛋白。隨后，使灌注液通過Pall40微米的輸血過濾器，隨后通過白細(xì)胞清除過濾器，添加約15N.I.H.單位/mL的肝素并調(diào)節(jié)pH，如果必要，將pH調(diào)至約7.4。在添加到灌注裝置前，優(yōu)選室溫貯存所述灌注液。可將例如約50mL的剩余灌注液試樣離心(在約4t:下以約i，500g離心約io分鐘)以分離血槳和血細(xì)胞?？蓪⒀獦诩s-201:或更低的溫度冷凍以在分析中作為空白對照使用。在灌注過程中記錄門靜脈和肝動脈中的流速、壓力和溫度。以約15分鐘的間隔測量通過肝動脈和門靜脈的入口以及通過腔靜脈的出口的P02/PC02。各肝臟的平衡階段可以為約45分鐘-約60分鐘，并將膽汁收集到預(yù)先稱重的容器中。只向在灌注液流速和壓力以及膽汁流速方面符合要求的制備物施用測試物質(zhì)。開始向灌注液中補(bǔ)充添加膽汁鹽，隨后在整個灌注階段進(jìn)行添加。膽汁鹽包括但不限于溶于25%羥丙基-|3-環(huán)糊精(HPeCD)的約lg甘氨膽酸鈉水合物(SigmaG7132)、約O.5g甘氨脫氧膽酸鈉(SigmaG9910)和甘氨鵝脫氧膽酸鈉(SigmaG0795)，其中HPPCD溶液中的總膽汁鹽質(zhì)量為20g。優(yōu)選開始時在每升灌注液中添加約lg膽汁鹽HPPCD溶液，隨后在第1、2、3、4和5小時向此灌注液中添加約lg溶液。由此，灌注液將由懸浮在補(bǔ)充有膽汁鹽的人血漿中的經(jīng)清洗的匹配人紅細(xì)胞組成。灌注的肝臟樣品取出低溫貯存的分離人肝臟，并且如果可能，進(jìn)行肝動脈、門靜脈和腔靜脈插管。隨后，在約室溫下使用約1L-約2L冷緩沖液在重力下作用(例如，Krebs-Ringer碳酸氫鹽緩沖液，PH約7.4)沖洗肝臟約10-約15分鐘，以除去轉(zhuǎn)運(yùn)/貯存介質(zhì)。如上所述，將約1.5L包含懸浮于含有4X或6X人血清白蛋白的緩沖液中的人紅細(xì)胞(經(jīng)預(yù)先清洗)(在約室溫下，v/v約15%-約20%，pH約7.4)的新鮮灌注液隨后以約20mL/分鐘泵入到肝動脈和門靜脈中，并在平衡階段重循環(huán)約45-約60分鐘。在將約1L灌注液廢棄后，在灌注裝置中重循環(huán)約2L的新鮮灌注液。在約10-約15分鐘的穩(wěn)定階段，將灌注液的溫度提高到約37t:，并將灌注流速提高到目標(biāo)流速，例如以約200ml/分鐘-約300ml/分鐘通過肝動脈，約400-約800ml/分鐘(優(yōu)選約600ml/分鐘)通過門靜脈。給藥和樣品收集優(yōu)選在如上所述的灌注試驗(yàn)之前確定測試物質(zhì)的溶解性和穩(wěn)定性。一旦灌注制備物的灌注流速和壓力穩(wěn)定，則向重循環(huán)灌注液中添加測試物質(zhì)。施用測試物質(zhì)前對人肝臟進(jìn)行常溫灌注的優(yōu)選接受標(biāo)準(zhǔn)為灌注&生理參數(shù)動脈壓(mmHg)40-60動脈流速(ml/分鐘)200-300門靜脈壓力(mmHg)15-22門靜脈流速(ml/分鐘)600-800靜脈P02>26動脈P02>120pH7.3±0.2溫度rc)36.5±2PCV(細(xì)胞％)15-20施用載體優(yōu)選為含水的，或者在化合物水溶性差的情況下，所述施用載體為在灌注液中終濃度為約0.1%v/v的匿S0。優(yōu)選的施用方案包括在一段時間(Tmax中值=約1小時)內(nèi)向灌注液中添加包含約50mg優(yōu)選標(biāo)記(如放射標(biāo)記)的測試化合物，或未標(biāo)記和標(biāo)記(如放射標(biāo)記)的測試化合物的混合物的DMSO作為輸注物(infusion)。如果使用放射標(biāo)記物，目標(biāo)放射劑量優(yōu)選為約100iiCi/肝臟。優(yōu)選將每份施用溶液放入預(yù)先稱重的連有套管的注射器中，并將此注射器重新稱重。以脈沖劑量將此注射器的內(nèi)容物排至灌注液中。在指定的"計(jì)時起點(diǎn)"添加測試物質(zhì)，并將肝臟灌注約240分鐘。在約240分鐘結(jié)束時添加標(biāo)準(zhǔn)品，例如tetra-BSP(約20yM)，并再將肝臟灌注約120分鐘。在給藥后，將肝臟灌注共計(jì)約6小時。例如，在灌注期間的至少兩個下列時間點(diǎn)收集灌注液樣品(每份樣品約10mL):給藥前以及給藥后5、10、15、30、45、75、105、135、165、195、225和239分鐘。此外，在灌注過程中連續(xù)收集膽汁，例如在至少兩個下列時間點(diǎn)進(jìn)行收集給藥前以及給藥后30、60、90、120、150、180、210和240分鐘。在"計(jì)時起點(diǎn)"后約4小時向肝臟施用至少一種陽性對照，并且在至少兩個下列時間點(diǎn)收集灌注液樣品計(jì)時起點(diǎn)后245、150、255、270、285、300、330和360分鐘。對于每份約10毫升的樣品，將約1毫升作為完整灌注液保留，將剩余的約9毫升離心，并將上層血漿分成大致相等的4份試樣以進(jìn)行單獨(dú)分析。可將上清液和膽汁樣品在約-8(TC貯存直到用于分析所施用的測試物質(zhì)或任何代謝物。在收集每份約10mL試樣樣品后，將約10mL的對照灌注液(不含測試物質(zhì)的灌注液)添加到灌注系統(tǒng)中以保持恒定的體積。如果需要，在灌注結(jié)束時收集所有剩余的灌注液和裝置清洗液以進(jìn)行質(zhì)量平衡分析和/或代謝物譜(灌注液/血漿中)分析。在對測試物質(zhì)進(jìn)行放射標(biāo)記的情況下，如果在灌注前沒有將膽囊從肝臟摘除，則可以將膽囊勻漿并分析總放射性。在收集到組織后，優(yōu)選用鹽水清洗灌注裝置，并且在灌注結(jié)束時用水和醇清洗。優(yōu)選將每份清洗樣品保留以進(jìn)行分析。此外，在施用后將施用注射器和套管重新稱重，并用水和甲醇清洗。如果適當(dāng)，則分析注射器/套管洗液的放射性，或者其他適合的標(biāo)記物。通過從例如加入注射器/套管中的放射性總量減去注射器洗液的放射性計(jì)算所施用的測試物質(zhì)的劑量?；顧z優(yōu)選在給藥前和給藥360分鐘后進(jìn)行活檢，并在收集點(diǎn)將其快速冷凍在液氮中。在灌注結(jié)束時，將剩余的肝臟均漿。可對活組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢測，并對標(biāo)記酶和其他蛋白質(zhì)進(jìn)行表型檢測。對照優(yōu)選的對照包括但不限于給藥前收集的膽汁、灌注液試樣和血漿，并且如果可能，也可以是從單個器官收集的肝臟勻漿物。優(yōu)選將所有樣品在約-S(TC貯存。分析如果使用放射標(biāo)記的物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品，則可以測量總放射性，并且如果需要，可以提取標(biāo)記的測試物和/或代謝物并進(jìn)行HPLC圖譜分析。此外，可對代謝物進(jìn)行可能的結(jié)構(gòu)鑒定，并且可以提取并分析血漿和膽汁中的標(biāo)準(zhǔn)品(例如tetra-BSP)及其谷胱甘肽結(jié)合物?？稍诠嘧⑵陂g監(jiān)測生理參數(shù)，例如動脈壓和流速、器官核心溫度、血液pH、以及動脈和靜脈的P02和PC02;血液生化參數(shù)，例如電解質(zhì)，包括但不限于鉀(mM)、鈉(mM)、氯(mM)、牽丐(mM)、白蛋白(g/dl)、ALP(U/1)、ALT(U/1)、淀粉酶(U/1)、AST(U/1)、GGT(U/1)、Cal(mg/dl)、膽紅素(U/1)和BUN(mg/dl)的濃度；生物標(biāo)記物，例如葡萄糖(mg/dl)的利用和乳酸(lactate)(mM)的生成；標(biāo)準(zhǔn)品的吸收，所述標(biāo)準(zhǔn)品例如3H_甘露醇、安替比林、普蔡洛爾(propanalol)、阿替洛爾(atenolol)、四漠酷駄石黃酸納(bromosulphophthalein，tetra-BSP)U-萘酚J-乙氧基香豆素、特布他林(terbutaline)和/或其他標(biāo)記或未標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)品；以及膽汁、灌注液和肝臟中測試物質(zhì)和/或代謝物的存在和特征。灌注腎臟的方法與評估物質(zhì)在腎臟中的結(jié)局和作用特別相關(guān)的方法包括但不限于(a)腎清除、血漿清除和腎小球?yàn)V過率_尿液是物質(zhì)消除的主要途徑，且腎臟是物質(zhì)相互作用的主要部位；(b)代謝_腎臟具有顯著的代謝活性，例如測定腎小管重吸收或主動分泌的百分比；和(C)分配_腎臟中形成的代謝物在血液和尿液間的分配能夠表明其他器官與藥理活性或毒性代謝物的后續(xù)接觸。與所有人器官一樣，為經(jīng)灌注的分離人腎臟(IPHK)設(shè)計(jì)驗(yàn)證方法，以用于在將腎臟從供體切除后的低溫保存灌注和用于物質(zhì)檢測的常溫生理灌注。任選地，在使用IPHK進(jìn)行測試之前，盡可能多了解用于測試的每個腎臟的歷史記錄，更重要的是將其目前的狀況與成功移植的數(shù)百個腎臟和沒有成功移植的數(shù)百個腎臟的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較。這是接受腎臟進(jìn)行藥物研究的機(jī)制，并記錄每個決定的基本原理。然而，根據(jù)本發(fā)明的公開，腎臟不需要處于移植所需的相同條件下。因此，例如可以使用比適于移植者年長的供體(例如，年長56歲)的器官或來自無心跳供體的器官，以及患病或受傷的器官。灌注條件在收到捐獻(xiàn)的腎臟后將其盡快轉(zhuǎn)入低溫貯存，并在約61:-約81:使用如10>8-1@緩沖液(OrganRecoverySystems,Inc.，DesPlaines，IL)的緩沖液灌注至少約4小時。隨后，使用約IL新鮮灌注液沖洗腎臟，并使灌注流出物的溫度升高到約37°C。當(dāng)腎臟的灌注壓力和流速以及尿液形成穩(wěn)定時，用約1.5L新鮮灌注液替換第一灌注液。施用和樣品收集在施用測試物質(zhì)前對人腎臟進(jìn)行常溫灌注的優(yōu)選接受標(biāo)準(zhǔn)為<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>直接向灌注液中加入測試物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)，并在約2小時內(nèi)每15分鐘采集部分灌注液(約3ml-約5ml)，每15分鐘分批收集尿液。將各灌注液樣品再細(xì)分成大致相等的4份試樣。將2份試樣保留以進(jìn)行分析，將其他2份離心除去血漿并在約_701:冷凍保存以用于可能需要的其他分析。將尿樣收集到油管(tarredtube)中，稱重，并在約_70^冷凍以用于后續(xù)分析，例如分析測試物質(zhì)和代謝物。在向IPHK施用測試物質(zhì)足夠長的時間后，例如約60分鐘后，可向循環(huán)灌注液中添加外源的陽性對照以確認(rèn)這些關(guān)鍵過程沒有被內(nèi)源化合物(即內(nèi)標(biāo))掩蔽(covered)。這些額外(優(yōu)選標(biāo)記的)的對照包括但不限于p-氨基馬尿酸(用于評估腎小管分泌)和谷胱甘肽結(jié)合物(用于評估硫醇尿酸途徑的完整性)。在添加陽性對照后的約2小時內(nèi)，再以約每隔約30分鐘收集灌注液和尿樣，并將其保留以用于分析，所述分析包括但不限于測量生理參數(shù)；測量血液生化參數(shù)，例如鉀(mM)、鈉(mM)、氯(mM)、f丐(mM)、葡萄糖(mg/dl)、乳酸(mM)、白蛋白(g/dl)、ALP(U/l)、ALT(U/1)、淀粉酶(U/l)、VAG(U/1)、AST(U/l)、2-GST(谷光甘肽S_轉(zhuǎn)移酶)(U/l)、肌酸酐(mg/dl)和尿排泄物(urinaryexcretion，U/1);測量尿液、灌注液和腎臟中的測試物質(zhì)和/或代謝物；并測量尿液的生化參數(shù)，例如N-乙酰氨基葡糖苷酶、谷光甘肽S-轉(zhuǎn)移酶以及蛋白質(zhì)和肽。驗(yàn)雄隨去經(jīng)灌注的分離人肺制備物(IPHLimg)是用于研究肺特異性物質(zhì)相關(guān)作用的通用系統(tǒng)，所述肺特異性物質(zhì)相關(guān)作用包括但不限于評估例如定量肺通氣功能，經(jīng)氣管的物質(zhì)吸收，血液中的物質(zhì)攝取，物質(zhì)代謝、清除和保留，水腫程度，物質(zhì)毒性和藥物相互作用，以及通過使用噴霧遞送組胺/舒喘寧或其他標(biāo)準(zhǔn)品誘導(dǎo)支氣管收縮/擴(kuò)張從而評估肺的生理功能。此外，灌注試驗(yàn)克服了體外肺試驗(yàn)的很多問題，包括但不限于可對肺中40種以上的細(xì)胞類型進(jìn)行研究，在這些細(xì)胞類型中，很多不能被分離，還有很多在培養(yǎng)時表型發(fā)生改變。灌注條件優(yōu)選在約6°C-約8t:使用約2L緩沖液(例如Krebs-Ringer緩沖液)以約12ml/分鐘-約18ml/分鐘沖洗成對的呼吸肺，使其不含供體的血液。隨后，在小于約18mmHg的壓力下使用新鮮灌注液通過肺動脈灌注肺，并連續(xù)記錄流速?？蓪碜苑戊o脈的流出物重循環(huán)(除首次通過的情況之外)。灌注試驗(yàn)中使用約2L灌注液。優(yōu)選的生物標(biāo)記物為酶標(biāo)記物，包括但不限于血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶。優(yōu)選的標(biāo)準(zhǔn)品包括，但不限于約lmg/ml舒喘寧或其他支氣管擴(kuò)張劑(劑量約150iig)，約lmg/ml異丙托品(ipatropium)(劑量約150yg)和多胺。施用和樣品收集在施用測試物質(zhì)前對人肺進(jìn)行常溫灌注的優(yōu)選接受標(biāo)準(zhǔn)為灌注&生理參數(shù)灌注壓(mmHg)SI8灌注液流速(ml/分鐘)1000-3000PH7.4±0.3溫度rc)37.0±1氣流(i/分鐘)至少66潮氣量(mL)500-1000肺功能測試@間隔約10-20秒在施用前和其他采樣時間收集灌注液樣品，并在例如pH、pCOy乳酸和無機(jī)離子方面對血液化學(xué)進(jìn)行評估。此外，在相同時間點(diǎn)采集樣品以評估血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶和其他酶的釋放。在以約O.3mg/ml-約1.0mg/ml(劑量約45-約150iig)的濃度使用噴霧器經(jīng)氣管施用測試物質(zhì)或?qū)y試物質(zhì)加入灌注液中施用后(稱作"計(jì)時起點(diǎn)")，在施用前以及例如在吸收試驗(yàn)施用后的至少兩個下列時間點(diǎn)取出灌注液試樣(優(yōu)選約3ml-約5ml):5、10、15、30、45、60、90和120分鐘。每份試樣保留約lml用于血液化學(xué)/生化測量以及血細(xì)胞比容測量。留出部分剩余試樣(約lml的完整灌注液)，并將其他部分離心，將所得的不含細(xì)胞的上清液進(jìn)一步分成等份試樣，將其在收集點(diǎn)時快速冷凍在液氮中。在施用后約120分鐘后，將此灌注液替換成新鮮灌注液，并循環(huán)約30分鐘。例如在新鮮灌注液開始循環(huán)后5、10、15和30分鐘采集灌注液樣品(約3mL-約5mL的試樣)。每份試樣保留約lmL用于血液化學(xué)/生化測量以及血細(xì)胞比容測量。留出部分剩余試樣(約lmL的完整灌注液)，并將其他部分離心，將所得的不含細(xì)胞的上清液進(jìn)一步分成等份試樣，將其在收集點(diǎn)時快速冷凍在液氮中。在30分鐘結(jié)束時，向灌注液中添加代謝標(biāo)記物，并在添加代謝標(biāo)記物后例如5、15、30和60分鐘(如果可行，到灌注結(jié)束時和/或在其他時間點(diǎn))再次采集灌注液樣品，為約3mL-約5mL的試樣，隨后將其冷凍以用于此后對測試化合物和代謝物的分析。還在添加用于多胺攝取測定的代謝標(biāo)記物后的例如5、15、30和60分鐘，采集約lmL的血漿樣品。所述標(biāo)記物包括但不限于添加到灌注液中的探針、劑量為約20yM的乙氧基香豆素(CYP1A)以及劑量為約10iiM的1-萘酚(葡糖醛酸化和硫酸化)。在計(jì)時起點(diǎn)后約3小時30分鐘，以約10—5M_約10—6M的濃度向灌注液中添加組胺或其他支氣管收縮劑或血管擴(kuò)張劑以進(jìn)行藥理評估。約io分鐘后，評估支氣管收縮情況。如果未發(fā)現(xiàn)支氣管收縮，則再添加組胺，但將濃度分別提高到約10—5M-約10—6M。每10分鐘向灌注液中添加濃度提高的組胺直到出現(xiàn)支氣管收縮的癥狀，此時開始吸入來自lmg/ml儲液的劑量為2X150iig的對照，例如舒喘寧。優(yōu)選使用帶有150ii1盤的ProDose設(shè)備進(jìn)行給藥。在約15分鐘內(nèi)檢測是否出現(xiàn)支氣管收縮。隨后，可以以約10—^的濃度向灌注液中添加罌粟堿或其他血管擴(kuò)張劑，并檢測支氣管舒張的程度?；顧z可以使用例如充滿中性緩沖福爾馬林的容器(例如500ml的塑料螺旋蓋容器)對各個肺進(jìn)行組織學(xué)試驗(yàn)。取出帶有全長支氣管的肺葉，避免損傷實(shí)質(zhì)組織。將結(jié)扎線松松地繞過支氣管放置?？墒褂描囎訆A持支氣管，并使用注射器將福爾馬林緩慢地注入整個肺葉。在肺葉膨脹75%后停止注入。將支氣管結(jié)扎并將肺葉放置在福爾馬林中。記錄最初固定的日期和時間。肝毒性肝功能和毒性研究中常用的5種全細(xì)胞制備物為初代肝細(xì)胞、培養(yǎng)肝細(xì)胞、肝切片、灌注肝臟和體內(nèi)肝臟。在設(shè)計(jì)試驗(yàn)以測定物質(zhì)在體內(nèi)的結(jié)局和作用時，應(yīng)考慮這些方法中每一種所具有的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。實(shí)踐證明這是一個難以滿足的標(biāo)準(zhǔn)。例如，藥物研究中使用分離肝細(xì)胞帶來的主要優(yōu)點(diǎn)總是包括"便捷"以及由單個肝臟產(chǎn)生"大量"數(shù)據(jù)。然而，當(dāng)數(shù)據(jù)的"質(zhì)量"極為重要時，例如作出藥物研發(fā)決定時，這種體外模型缺乏肝小葉結(jié)構(gòu)，酶的區(qū)域分布被破壞，細(xì)胞中很多酶活性減小，并且缺失了重要的非實(shí)質(zhì)細(xì)胞。類似地，在培養(yǎng)的肝細(xì)胞中，很多酶系統(tǒng)轉(zhuǎn)化成胎兒狀態(tài)而且細(xì)胞色素P450的含量減少，從而限制了其在毒性和藥物代謝研究中的應(yīng)用。然而，在沒有替代方案的情況下，這些方法仍廣泛使用。與初代或培養(yǎng)肝細(xì)胞相反，肝切片保留了肝小葉結(jié)構(gòu)，然而這種形式的細(xì)胞泄漏鉀，最重要的是其不生產(chǎn)膽汁，而膽汁是從肝臟清除潛在毒素(內(nèi)源和外源性)的主要途徑。灌注肝系統(tǒng)模擬的體內(nèi)條件多于上述任何技術(shù)。正常的肝結(jié)構(gòu)、微循環(huán)和膽汁生產(chǎn)得到保留。游離的化合物和蛋白結(jié)合的化合物以與在體內(nèi)運(yùn)行相同的流速和灌注壓力通過血液(細(xì)胞和血漿)遞送到所有的細(xì)胞類型。此外，在評估物質(zhì)的肝毒性時，由于對灌注肝臟中的多種細(xì)胞類型危害較小，從而獲得較少的假陽性和假陰性結(jié)果，以及更好的藥代動力學(xué)/毒性相關(guān)性。A.灌注條件對來自人的肝臟的灌注如上所述。以(a)脈沖劑量、(b)重復(fù)脈沖劑量、(c)恒定輸注或(d)提高的血漿濃度，將測試物質(zhì)加入到灌注液中。在約4-8小時內(nèi)每隔約15-30分鐘收集灌注液和膽汁樣品，并分析肝臟/膽損傷的標(biāo)記物以及物質(zhì)/代謝物的濃度。在一個實(shí)施方案中，每小時進(jìn)行肝臟活檢，并在如上所述的收集點(diǎn)快速冷凍在液氮中。B.毒性標(biāo)記和陽性對照<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>總之，此組試驗(yàn)記錄了血液中相關(guān)濃度的物質(zhì)和/或代謝物對一些關(guān)鍵肝功能的作用，包括運(yùn)進(jìn)和運(yùn)出肝臟的轉(zhuǎn)運(yùn)過程、轉(zhuǎn)錄_翻譯_翻譯后翻譯修飾和蛋白質(zhì)及結(jié)合蛋白質(zhì)的胞外分泌、細(xì)胞因子產(chǎn)生、凋亡或壞死的剌激、自由基的產(chǎn)生、DNA-加合物的形成以及解毒途徑的誘導(dǎo)或抑制。腎毒件作為至關(guān)重要的器官，腎臟執(zhí)行很多獨(dú)特功能，可以監(jiān)測這些功能以作為接觸某些物質(zhì)時損傷的證據(jù)。這些功能包括體液體積的調(diào)控(控制血壓的主要動力)；與肺合作，通過排泄固定的非揮發(fā)性酸并保留堿來調(diào)整身體pH;排泄廢物并保留重要的身體組分，例如電解質(zhì)、底物等；解除某些物質(zhì)的毒性；合成并釋放激素，例如凝乳酶和促紅細(xì)胞生成素；將維生素D3轉(zhuǎn)化成1，2-二羥基的形式。為了執(zhí)行這些功能，需要整合腎臟的很多生理和生化作用。A.灌注條件如上所述，對來自人的腎臟進(jìn)行低溫灌注，在約37t:用灌注液沖洗和穩(wěn)定，并使用約1L-約1.5L新鮮灌注液進(jìn)行灌注。以(a)脈沖劑量、(b)重復(fù)脈沖劑量、(c)恒定輸注或(d)提高的血漿濃度，將測試物質(zhì)加入到灌注液中。在灌注過程的約2-4小時內(nèi)每隔約15-30分鐘收集灌注液和尿樣，并分析腎臟損傷的標(biāo)記以及物質(zhì)/代謝物的濃度。C.毒性標(biāo)記和陽性對照目標(biāo)癥狀陽性對照診斷方法急性腎衰竭慶大霉素順鉑蛋白質(zhì)組學(xué)因灌注不足導(dǎo)致的腎前性氮質(zhì)血癥ACE抑制劑環(huán)孢霉素腎臟血液動力學(xué)急性間質(zhì)性腎炎別嘌呤醇磺胺類藥物炎癥標(biāo)記梗阻性腎病氨甲蝶呤阿昔洛韋尿流GFR心瞎性A.灌注條件保存后，取出冷藏的分離人心臟，并按照標(biāo)準(zhǔn)Langendorff法在約7.3±2的pH和約37°C的溫度下使用包含清洗的匹配人紅細(xì)胞(約15-約20%，v/v)和人血清白蛋白(約4%，v/v)的緩沖液進(jìn)行灌注。在一個實(shí)施方式中，可將人血清白蛋白替換成人血漿。保持P02(約150-約250mmHg)禾PPC02(約25-約35mmHg)并將電解質(zhì)濃度調(diào)整到血液中的正常值。一旦器官的灌注壓力和流速、心率和左室壓力階差(developedleftventricularpressure,DLVP)(dP/dt)穩(wěn)定，則取出預(yù)施用樣品，以(a)脈沖劑量、(b)重復(fù)脈沖劑量、(c)恒定輸注或(d)增劑量輸注，將測試物質(zhì)加入到灌注液中。測量血液化學(xué)/生化標(biāo)記，包括但不限于電解質(zhì)、葡萄糖、pcyv-v差異、pccyv-v差異、肌f丐蛋白-i和白蛋白結(jié)合物。B.毒性標(biāo)記和陽性對照目標(biāo)癥狀診斷方法Langendorff性質(zhì)壓力流動心率復(fù)蘇介入(Re-animationintervention)纖維顫動起搏同位素工作能力dP/dt心臟舒張心臟舒張末壓/體積比內(nèi)皮功能冠脈血流儲備對細(xì)胞功能的干擾蛋白質(zhì)組學(xué)凋亡Caspase3壞死肌鈣蛋白-i缺血白蛋白加合物迫切需要得到驗(yàn)證的體內(nèi)和體外篩選測定法以檢測制備的化學(xué)物質(zhì)和藥物的激素干擾活性。迄今為止，現(xiàn)有技術(shù)中的很多篩選都使用非哺乳動物的脊椎動物和無脊椎動物，其尚不能代表在包括人在內(nèi)的哺乳動物中發(fā)生的事件。使用具有血液的離體人內(nèi)分泌腺(利用腎上腺、胸腺、胰腺、甲狀腺和生殖腺)的灌注提供了與人相關(guān)的測試體系。示例性的方法包括通過正常脈管系統(tǒng)對內(nèi)分泌腺血液灌注以及通過適合的靜脈插管收集靜脈流出物。在以臨床和/或環(huán)境相關(guān)濃度向灌注液中添加的潛在激素干擾物不存在(對照)和存在(測試)的條件下測量所述腺對天然存在激素的攝取以及所述腺隨后對內(nèi)源產(chǎn)生的激素的釋放。由此可以評估潛在化學(xué)物質(zhì)的激素干擾活性。如共有專利美國專利第6，673，594號和美國公開專利申請第2004/0224298號(均通過引用全文并入本文)所述，在實(shí)施本發(fā)明的方法時，可以使用用于灌注移植器官和組織的設(shè)備和裝置。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到，根據(jù)本發(fā)明的方法使用器官和組織的方式不同于使用用于器官移植的灌注保持器官和組織的方式。如同在本申請中明確記載其全文一樣，本文引用的所有專利、專利申請、科技文獻(xiàn)和其他原始資料和參考文獻(xiàn)均通過引用將其全文并入本文。應(yīng)理解上述公開重點(diǎn)描述了本發(fā)明的某些具體實(shí)施方式，與這些實(shí)施方式相等同的改變或替換也在本發(fā)明的精神和范圍之內(nèi)。權(quán)利要求檢測物質(zhì)毒性的方法，包括使在常溫條件下的包含所述物質(zhì)的灌注液通過至少一種具有代謝活性、在捐獻(xiàn)前受損或患病的捐獻(xiàn)的離體人器官或組織；收集來自灌注器官或組織的數(shù)據(jù)；和分析所述數(shù)據(jù)以評估所述物質(zhì)的毒性。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中利用所述數(shù)據(jù)用于以下至少一種的分析激素水平、靶細(xì)胞_受體介導(dǎo)作用、腺體分泌功能、激素功能、器官功能、及其組合。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中通過電生理學(xué)檢測、醫(yī)學(xué)診斷成像、光譜檢測、微透析、固態(tài)組織探針檢測或其組合收集所述數(shù)據(jù)。4.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述器官或組織選自內(nèi)分泌腺和外分泌腺組成的組。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述器官或組織是選自由胰腺、胸腺、男性生殖器官、女性生殖器官、甲狀腺和腎上腺組成的組中的器官。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的通過包括使用不含所述物質(zhì)的第一灌注液灌注所述器官或組織，隨后使用包含所述物質(zhì)的第二灌注液灌注所述器官或組織。7.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述器官或組織已被機(jī)械性損傷所損傷。8.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述器官或組織是患病的器官或組織。9.如權(quán)利要求1所述的方法，其中分析所述數(shù)據(jù)以評估激素水平是未改變，還是提高了、降低了或是發(fā)生了其它改變。10.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述物質(zhì)是除藥物或候選藥物之外的物質(zhì)。11.如權(quán)利要求l所述的方法，其中所述物質(zhì)選自由農(nóng)產(chǎn)品、工業(yè)產(chǎn)品、建筑材料、食品、煙草制品、清潔產(chǎn)品和化妝品組成的組。12.產(chǎn)生收益的方法，包括向第三方收取用于收集與測試物質(zhì)毒性相關(guān)的數(shù)據(jù)的費(fèi)用；使在常溫條件下的包含所述物質(zhì)的灌注液通過至少一種具有代謝活性、在捐獻(xiàn)前受損或患病的捐獻(xiàn)的離體人器官或組織；收集來自灌注器官或組織的數(shù)據(jù)；禾口將與所述數(shù)據(jù)相關(guān)的信息提供給所述第三方。13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中所述數(shù)據(jù)以原始形式提供給所述第三方。14.如權(quán)利要求12所述的方法，進(jìn)一步包括對所述數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并將所述分析的結(jié)果提供給所述第三方。15.檢測物質(zhì)毒性的方法，包括使在常溫條件下的包含所述物質(zhì)的灌注液通過至少一種具有代謝活性的離體人內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌腺組織；收集來自灌注器官或組織的數(shù)據(jù)；禾口分析所述數(shù)據(jù)以評估所述物質(zhì)對所述器官或組織的激素?cái)z取或產(chǎn)生的作用。16.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織是來自人的捐獻(xiàn)器官或組織。17.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織是工程化器官或組織，所述工程化器官或組織源自分離的和/或培養(yǎng)的人細(xì)胞。18.如權(quán)利要求15所述的方法，其中通過電生理學(xué)檢測、醫(yī)學(xué)診斷成像、光譜檢測、微透析、固態(tài)組織探針檢測、或其組合收集所述數(shù)據(jù)。19.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述內(nèi)分泌腺選自由胰腺、胸腺、男性生殖器官、女性生殖器官、甲狀腺和腎上腺組成的組。20.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織是患病的或受損的器官或組織。21.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織已被長期熱缺血所損傷。22.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織已被長期低溫貯存所損傷。23.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織已被機(jī)械性損傷所損傷。24.權(quán)利要求15所述的方法，其中所述器官或組織是患病的器官或組織。25.如權(quán)利要求15所述的方法，其中分析所述數(shù)據(jù)以評估激素水平是未改變，還是提高了、降低了或是發(fā)生了其它改變。26.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述物質(zhì)是除藥物或候選藥物之外的物質(zhì)。27.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述物質(zhì)是藥物或候選藥物。28.如權(quán)利要求15所述的方法，其中所述物質(zhì)選自由農(nóng)產(chǎn)品、工業(yè)產(chǎn)品、建筑材料、食品、煙草制品、清潔產(chǎn)品和化妝品組成的組。29.產(chǎn)生收益的方法，包括向第三方收取用于收集與測試物質(zhì)毒性相關(guān)的數(shù)據(jù)的費(fèi)用；使在常溫條件下的包含所述物質(zhì)的灌注液通過常溫條件下的至少一種具有代謝活性的離體人內(nèi)分泌腺或內(nèi)分泌腺組織；收集來自灌注器官或組織的與激素?cái)z取或產(chǎn)生相關(guān)的數(shù)據(jù)；禾口將與所述數(shù)據(jù)相關(guān)的信息提供給所述第三方。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述數(shù)據(jù)以原始形式提供給所述第三方。31.如權(quán)利要求29所述的方法，進(jìn)一步包括對所述數(shù)據(jù)進(jìn)行分析并將所述分析結(jié)果提供給所述第三方。全文摘要通過測定在用包含測試物質(zhì)的液體常溫灌注下所述物質(zhì)在具有代謝活性的離體人器官或組織中的性質(zhì)、結(jié)局和作用，可以確定物質(zhì)的性質(zhì)，例如毒性。此數(shù)據(jù)可用作，例如提交給政府監(jiān)管組織的呈遞書的一部分。優(yōu)選的方法使用灌注的內(nèi)分泌腺器官或組織來評估由物質(zhì)導(dǎo)致的激素或其他身體化學(xué)物質(zhì)干擾，和使用在捐獻(xiàn)前患病或受損的器官或組織。文檔編號G01N33/50GK101743472SQ200880024743公開日2010年6月16日申請日期2008年5月19日優(yōu)先權(quán)日2007年5月18日發(fā)明者克里斯多佛·杰拉爾德·柯蒂斯,大衛(wèi)·克拉維茨,約翰·布拉塞爾申請人:生命線科學(xué)公司