專利名稱：鑒別呼吸短促的心臟和肺部起因的工具和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及診斷方法和工具。具體地，涉及一種鑒別患有慢性呼吸短促(呼吸困難)個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的方法，包括步驟測(cè)定個(gè)體樣品中肺部表面活性劑蛋白的量，測(cè)定所述個(gè)體樣品中利鈉肽(natriuretic peptide)的量，通過(guò)在a)和b)中測(cè)定的量與參照量比較來(lái)鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。此外，本發(fā)明涉及進(jìn)行所述方法的設(shè)備和工具箱。
心血管并發(fā)癥，特別是急性心血管事件大多數(shù)經(jīng)常是威脅生命的醫(yī)學(xué)情況，需要立即的行動(dòng)。然而，通常不能明確地診斷這些情況。具體地，伴隨不同類(lèi)型心臟病的大部分常見(jiàn)癥狀中的一些，包括急性心血管事件以及慢性心臟功能紊亂如慢性心臟衰竭是其它(非心血管)疾病特征性的癥狀。因此，鑒別所觀察癥狀的心血管或其它起因經(jīng)常是困難、麻煩和費(fèi)時(shí)的。所述鑒別也可能需要專家如心臟病專家的幫助。
心血管并發(fā)癥，特別是急性心血管事件或更嚴(yán)重的慢性心臟衰竭的典型癥狀是呼吸短促(呼吸困難)。至于其它癥狀，呼吸困難可以有不同的起因，包括心血管并發(fā)癥和非心血管肺部疾病。根據(jù)癥狀的潛在心血管起因，正確診斷給定病人如急診病人的病因是非?？扇〉摹?br> WO2004/077056公開(kāi)了表面活性劑蛋白的系統(tǒng)水平可以用作心臟衰竭的標(biāo)志。然而，該公開(kāi)的技術(shù)沒(méi)有考慮表面活性劑蛋白上升水平起因的鑒別診斷。特別是知道肺部疾病或損傷也可以導(dǎo)致所述蛋白體系水平的上升(Doyle 1997，Am J Respir Crit Care Med Vol.1561217-1229)。因此，公開(kāi)的方法將不可避免地產(chǎn)生錯(cuò)誤的陽(yáng)性診斷結(jié)果其依次導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)闹委?Svendstrup Nielsen，2004，The EuropeanJournal of Heart Failure 663-70)。
因此，允許鑒別診斷個(gè)體的例如呼吸困難和特別是慢性呼吸困難癥狀的起因的工具和方法是明顯長(zhǎng)期存在的需要。所述的工具和方法將允許可靠有效的診斷并避免當(dāng)前技術(shù)的缺點(diǎn)。
因而，本發(fā)明潛在的技術(shù)問(wèn)題必須被看作順應(yīng)前述需要的工具和方法的準(zhǔn)備。
通過(guò)權(quán)利要求表征的實(shí)施方案和以下內(nèi)容來(lái)解決技術(shù)問(wèn)題。
因此，本發(fā)明涉及一種鑒別患有慢性呼吸短促(呼吸困難)個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的方法，所述方法包括以下步驟a)測(cè)定個(gè)體樣品中肺部表面活性劑蛋白的量；b)測(cè)定所述個(gè)體樣品中利鈉肽的量；和c)通過(guò)將a)和b)中測(cè)定的量與參照量比較來(lái)鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
本發(fā)明的方法優(yōu)選是體外方法。此外，方法可以包括除上述明確提及之外的步驟例如進(jìn)一步的樣品預(yù)處理步驟或評(píng)價(jià)步驟。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“鑒別”意指在患有所述疾病的個(gè)體基本顯示同樣癥狀即慢性呼吸短促的情況下區(qū)別患有(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的個(gè)體。此處所用的術(shù)語(yǔ)優(yōu)選包括鑒別診斷肺部疾病、顯示肺部癥狀的心血管并發(fā)癥、伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
此處所用的診斷指的是根據(jù)個(gè)體患有本說(shuō)明書(shū)提及的疾病來(lái)評(píng)定可能性。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解，這種評(píng)定通常不被要求100％地校正被診斷的個(gè)體。然而，術(shù)語(yǔ)需要個(gè)體統(tǒng)計(jì)上有意義的部分能被診斷出患有所述疾病(例如，隊(duì)列研究中的隊(duì)列)。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用不同的已知統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)手段不需進(jìn)一步費(fèi)力就能測(cè)定部分是否統(tǒng)計(jì)上有意義，例如，置信區(qū)間的測(cè)定、p值測(cè)定、Student’s t-檢驗(yàn)，Mann-Whitney檢驗(yàn)等。詳情見(jiàn)Dowdy和Wearden，Statistics for Research，John Wiley & Sons，紐約1983。優(yōu)選的置信區(qū)間是至少90％，至少95％，至少97％，至少98％或至少99％。p值優(yōu)選0.1，0.05，0.01，0.005或0.0001。
根據(jù)本發(fā)明的診斷也包括有關(guān)疾病、癥狀或因此的風(fēng)險(xiǎn)的監(jiān)控、確定、細(xì)分類(lèi)和預(yù)測(cè)。監(jiān)控涉及追蹤已診斷的疾病或并發(fā)癥，例如是分析疾病的進(jìn)行或疾病或并發(fā)癥進(jìn)行中特殊治療的影響。確定涉及使用其他指示劑或標(biāo)記物加強(qiáng)或證實(shí)已進(jìn)行的診斷。細(xì)分類(lèi)涉及根據(jù)診斷疾病不同的細(xì)分類(lèi)進(jìn)一步定義診斷，例如根據(jù)疾病的緩和和嚴(yán)重類(lèi)型定義。預(yù)測(cè)涉及在其它癥狀或標(biāo)志變明顯或較大改變前預(yù)測(cè)疾病或并發(fā)癥。
表述“慢性呼吸短促”或“慢性呼吸困難”指的是損傷的呼吸其導(dǎo)致呼吸頻率加快和/或呼吸容量加大。因而，呼吸短促可優(yōu)選導(dǎo)致?lián)Q氣過(guò)度。呼吸短促通常發(fā)生在至少95％正常氧氣飽和水平以下的氧氣飽和水平。此處所用的慢性呼吸困難指的是持久或永久發(fā)生的呼吸短促(也就是在同樣情況下反復(fù)發(fā)生的呼吸短促)。
術(shù)語(yǔ)“肺部疾病”指的是任何引起呼吸短促的疾病。此外，注意根據(jù)本發(fā)明所指的肺部疾病將導(dǎo)致?lián)p傷的肺泡毛細(xì)血管膜屏障對(duì)表面活性劑蛋白具有增加的通透性，特別是此處特指的肺部表面活性劑蛋白。所述疾病優(yōu)選是急性和慢性呼吸衰竭、肺部纖維變性、肺部蛋白沉積、肺部水腫、肺部炎癥、肺氣腫肥胖癥、甲狀腺疾病，或更優(yōu)選肺部栓塞。
此處所用術(shù)語(yǔ)“心血管并發(fā)癥”指的是心血管系統(tǒng)的任何急性或慢性病癥。心血管系統(tǒng)的急性病癥包括急性心血管事件。因而，更優(yōu)選包括穩(wěn)定心絞痛(SAP)或急性冠狀麻痹性眩暈綜合癥(ACS)。ACS病人能顯示不穩(wěn)定的心絞痛(UAP)或這些個(gè)體已患有心肌梗塞(MI)。MI可以是ST-上升MI或非ST-上升MI。MI的發(fā)生可以跟隨左心室功能失調(diào)(LVD)。術(shù)語(yǔ)也包括慢性病癥，優(yōu)選心臟衰竭。術(shù)語(yǔ)也理解為包括除前述急性心血管事件之外的引起心臟衰竭的醫(yī)學(xué)情況或疾病，例如先天或后天性瓣膜疾病或病癥、心肌炎、心肌病、類(lèi)淀粉癥或血色病。進(jìn)一步優(yōu)選的心血管疾病是血栓癥、優(yōu)選動(dòng)脈血栓癥，或引起血管鈣化的疾病、優(yōu)選動(dòng)脈硬化癥和中風(fēng)。
患有心血管并發(fā)癥的個(gè)體可以顯示臨床癥狀(例如，呼吸困難、胸絞痛，也參見(jiàn)下面的NYHA分類(lèi))。特別地，心血管疾病癥狀根據(jù)紐約心臟協(xié)會(huì)(NYHA)歸類(lèi)入功能分類(lèi)體系。類(lèi)I的病人沒(méi)有心血管疾病的明顯癥狀。身體活動(dòng)性不受限制，及普通身體活動(dòng)不引起過(guò)度疲憊、心悸、或呼吸困難。類(lèi)II的病人身體活動(dòng)性輕微受限制。他們休息時(shí)是舒適的，但普通身體活動(dòng)導(dǎo)致疲憊、心悸、或呼吸困難。類(lèi)III的病人顯示身體活動(dòng)性顯著受限制。他們休息時(shí)是舒適的，但小于普通的活動(dòng)引起疲憊、心悸、或呼吸困難。類(lèi)IV的病人不能舒適地進(jìn)行任何身體活動(dòng)。他們?cè)谛菹r(shí)顯示心臟機(jī)能不全的癥狀。若采取任何身體活動(dòng)會(huì)增加不適。心血管并發(fā)癥的另一特征可以是“左心室排出部分”(LVEF)其也稱作“排出部分”。具有健康心臟的人通常有未受損傷的LVEF，其一般記作大于50％。大部分有收縮心臟疾病癥狀的人LVEF一般為40％或更小。
根據(jù)本發(fā)明患有心血管并發(fā)癥和顯示慢性呼吸困難的個(gè)體優(yōu)選可以是分配入中間的NYHA類(lèi)，優(yōu)選NYHA類(lèi)I、II或III，和更優(yōu)選NYHA類(lèi)II。
“伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥”指?jìng)€(gè)體將患有心血管并發(fā)癥和肺部疾病。理解為這兩種疾病或病癥可以獨(dú)立出現(xiàn)，也就是沒(méi)有一個(gè)引起另一個(gè)。然而，此處所指的初期心血管并發(fā)癥引起繼發(fā)性肺部疾病和反之亦然的病例也優(yōu)選包括在上述表達(dá)式中。
此外，無(wú)論如何，慢性呼吸困難可以在既不患心血管并發(fā)癥也不患肺部疾病的病人上觀察到。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，術(shù)語(yǔ)“沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難”將包括這種病例。優(yōu)選的非心血管和非肺部起因的呼吸短促優(yōu)選是肥胖、高體重、個(gè)體未經(jīng)訓(xùn)練或極少訓(xùn)練的身體情況、例如焦慮狀態(tài)的心理情況。
此處所用術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”涉及動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，及更優(yōu)選人。然而，注意本發(fā)明中個(gè)體將優(yōu)選顯示慢性呼吸短促。
根據(jù)本發(fā)明測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的量涉及測(cè)量數(shù)量或濃度，優(yōu)選半定量或定量?？芍苯訙y(cè)量或間接測(cè)量。直接測(cè)量涉及基于從利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白本身獲得及其強(qiáng)度直接與樣品中存在肽的分子數(shù)有關(guān)的信號(hào)測(cè)量利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的數(shù)量或濃度。這種信號(hào)-有時(shí)此處指信號(hào)強(qiáng)度-可以通過(guò)如測(cè)量利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的特有物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度值來(lái)獲得。間接測(cè)量包括測(cè)量從次級(jí)組分獲得的信號(hào)(也就是本身不是利鈉肽的組分)或生物讀出體系，例如可測(cè)的細(xì)胞響應(yīng)、配位體、標(biāo)記物、或酶反應(yīng)產(chǎn)物。
根據(jù)本發(fā)明，測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的量能通過(guò)所有已知測(cè)定樣品中肽量的手段來(lái)完成。所述手段包括可以不同的復(fù)合、競(jìng)爭(zhēng)或其它化驗(yàn)形式利用標(biāo)記分子的免疫測(cè)定設(shè)備和方法。所述化驗(yàn)將擴(kuò)大指示利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白存在或缺乏的信號(hào)。此外，信號(hào)強(qiáng)度可優(yōu)選與樣品中存在肽的量直接或間接有關(guān)(例如，反比例)。進(jìn)一步適合的方法包括測(cè)量利鈉肽特有的物理或化學(xué)性質(zhì)例如它的精確分子量或NMR光譜。所述方法優(yōu)選包括生物傳感器、結(jié)合免疫測(cè)定的光學(xué)設(shè)備、生物芯片、例如質(zhì)譜儀的分析設(shè)備、NMR-分析器、或色譜設(shè)備。此外，方法包括小平板ELISA基方法、全自動(dòng)或機(jī)器人免疫測(cè)定法(可用例ElecsysTM分析器)、CBA(酶的鈷結(jié)合鑒定法，可用例Roche-HitachiTM分析器)、和乳膠凝集化驗(yàn)法(可用例Roche-HitachiTM分析器)。
一優(yōu)選實(shí)施方案中，測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白量的方法包括步驟(a)將能引出細(xì)胞響應(yīng)其強(qiáng)度指示肽量的細(xì)胞與肽接觸充分長(zhǎng)時(shí)間，(b)測(cè)量細(xì)胞響應(yīng)。
為了測(cè)量細(xì)胞響應(yīng)，優(yōu)選將樣品或處理過(guò)的樣品加入細(xì)胞培養(yǎng)物中并測(cè)量細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的響應(yīng)。細(xì)胞響應(yīng)可以包括報(bào)告基因的可測(cè)表達(dá)或物質(zhì)的分泌，例如肽、多肽、或小分子。表達(dá)或物質(zhì)將產(chǎn)生與肽量有關(guān)的強(qiáng)度信號(hào)。
另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白量的方法包括測(cè)量從樣品中利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白獲得的特有強(qiáng)度信號(hào)的步驟。
如上所述，這種信號(hào)可以是在利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白特定質(zhì)譜儀或NMR光譜中觀察到的利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白特定m/z變量下觀察到的信號(hào)強(qiáng)度。
另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白量的方法包括步驟(a)將肽與特異配位體接觸，(b)(可選)除去未結(jié)合的配位體，(c)測(cè)量結(jié)合配位體的量。結(jié)合配位體將產(chǎn)生強(qiáng)度信號(hào)。根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合包括共價(jià)和非共價(jià)結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的配位體可以是任何結(jié)合此處所述利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的化合物，例如肽、多肽、核酸、或小分子。優(yōu)選配位體包括抗體、核酸、肽或多肽例如利鈉肽的受體或肺部表面活性劑蛋白結(jié)合配偶體和其包括肽結(jié)合功能區(qū)的片段，和適應(yīng)配體如核酸或肽適應(yīng)配體。制備這種配位體的方法是現(xiàn)有技術(shù)已知的。例如，合適的抗體或適應(yīng)配體的鑒別和生產(chǎn)也可由商業(yè)供給者提供。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉提高這種配位體衍生物親和力和特異性的方法。例如，隨機(jī)突變可被引進(jìn)核酸、肽或多肽內(nèi)。這些衍生物能再根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)已知的篩選過(guò)程如噬菌體顯示來(lái)被檢驗(yàn)結(jié)合。此處所指的抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體，及其片段如能結(jié)合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。本發(fā)明也包括人化雜交抗體其中顯示所要抗原特異性的非人供體抗體的氨基酸序列與人受體抗體序列結(jié)合。供體序列通常包括至少結(jié)合抗原的供體氨基酸殘基但也可包括其它結(jié)構(gòu)和/或功能相關(guān)的供體抗體氨基酸殘基。這種雜交能通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)已知的一些方法來(lái)制備。優(yōu)選配位體或劑特異結(jié)合利鈉肽。根據(jù)本發(fā)明的特異結(jié)合意指配位體或劑不應(yīng)充分結(jié)合(與之“交叉反應(yīng)”)被分析樣品中存在的另一肽、多肽或物質(zhì)。優(yōu)選特異結(jié)合的利鈉肽結(jié)合親和力應(yīng)比其它任何有關(guān)肽或多肽高至少3倍，更優(yōu)選至少10倍和甚至更優(yōu)選至少50倍。非特異結(jié)合如果仍能被明確區(qū)別和測(cè)量如根據(jù)蛋白質(zhì)印跡上它的大小或通過(guò)樣品中它相對(duì)更高的多度，可容許。配位體的結(jié)合能通過(guò)任何現(xiàn)有技術(shù)已知的方法來(lái)測(cè)量，所述方法是半定量或定量。適合的方法如下所述。
首先，配位體的結(jié)合可直接被測(cè)量，例如通過(guò)NMR、質(zhì)譜儀或等離振子表面共振。
第二，如果配位體也作為所關(guān)心的肽或多肽酶活動(dòng)的底物，可測(cè)量酶反應(yīng)產(chǎn)物(例如，蛋白酶的量能通過(guò)測(cè)量所分解底物的量來(lái)測(cè)量，如在蛋白質(zhì)印跡上)。換句話說(shuō)，配位體可顯示本身的酶性質(zhì)，并且配位體/利鈉肽復(fù)合體或配位體/肺部表面活性劑蛋白復(fù)合體或結(jié)合利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的配位體可各自與適合底物接觸從而通過(guò)強(qiáng)度信號(hào)的產(chǎn)生來(lái)被檢測(cè)。為了測(cè)量酶反應(yīng)產(chǎn)物，優(yōu)選底物量飽和。底物也可以在反應(yīng)前用可檢測(cè)標(biāo)記物標(biāo)記。優(yōu)選樣品與底物接觸充分長(zhǎng)時(shí)間。充分長(zhǎng)時(shí)間指產(chǎn)生可檢測(cè)優(yōu)選可測(cè)量的量的產(chǎn)物需要的時(shí)間。產(chǎn)物所要(例如可檢測(cè))量出現(xiàn)的時(shí)間能替代產(chǎn)物量的測(cè)量被測(cè)量。
第三，配位體可與標(biāo)記物共價(jià)或非共價(jià)結(jié)合從而檢測(cè)和測(cè)量配位體。可通過(guò)直接或間接方法進(jìn)行標(biāo)記。直接標(biāo)記包括標(biāo)記物直接結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià))配位體。間接標(biāo)記包括第二配位體結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià))第一配位體。第二配位體應(yīng)特異結(jié)合第一配位體。所述第二配位體可與適合標(biāo)記物結(jié)合和/或是結(jié)合第二配位體的第三配位體的靶(受體)。第二、第三或甚至更高次序的配位體的使用經(jīng)常用于增強(qiáng)信號(hào)。適合的第二配位體和更高次序配位體可以包括抗體、次級(jí)抗體、和眾所周知的抗生物素蛋白鏈菌素-生物素體系(Vector實(shí)驗(yàn)室，有限公司)。配位體或底物也可用現(xiàn)有技術(shù)已知的一個(gè)或多個(gè)標(biāo)記物“標(biāo)記”。這種標(biāo)記物再可作為更高次序配位體的靶。適合的標(biāo)記物包括生物素、digoxygenin、His-Tag、谷胱甘肽-S-移轉(zhuǎn)酶、FLAG、GFP、真菌標(biāo)記物、流感A病毒血球凝集素(HA)、麥芽糖結(jié)合蛋白、和類(lèi)似物。在肽或多肽的情況中，標(biāo)記物優(yōu)選在N-末端和/或C-末端。適合的標(biāo)記物是任何可通過(guò)適當(dāng)檢測(cè)方法檢測(cè)到的標(biāo)記物。典型的標(biāo)記物包括金粒子、乳膠小珠、9，10-二氫化吖啶酯、氨基苯二酰肼、釕、酶活標(biāo)記物、放射性標(biāo)記物、磁性標(biāo)記物(“例如磁性小珠”，包括順磁性和超順磁性標(biāo)記物)、和熒光標(biāo)記物。酶活標(biāo)記物包括如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、螢光酶、和其衍生物。適合檢測(cè)的底物包括二-氨基-聯(lián)苯胺(DAB)、3，3’-5，5’-四甲基聯(lián)苯胺、NBT-BCIP(4-硝基藍(lán)四唑氯化物和5-溴基-4-氯基-3-吲哚基-磷酸鹽，可用如來(lái)自Roche Diagnostics現(xiàn)成的原料溶液)、CDP-StarTM(Amersham Biosciences)、ECFTM(AmershamBiosciences)。適合的酶-底物組合可導(dǎo)致著色的反應(yīng)產(chǎn)物、熒光或化學(xué)發(fā)光，其能根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)已知的方法(例如，使用光敏感膠片或適合的照相系統(tǒng))被測(cè)量。至于測(cè)量酶反應(yīng)，前面所給的標(biāo)準(zhǔn)類(lèi)似適用。典型的熒光標(biāo)記物包括熒光蛋白(例如GFP和它的衍生物)、Cy3、Cy5、德州紅、熒光素、和Alexa染料(例如Alexa568)。更多的熒光標(biāo)記物可利用如來(lái)自Molcular脯氨酸bes(Oregon)的。量子點(diǎn)作為熒光標(biāo)記物的使用也被考慮。典型的放射性標(biāo)記物包括35S、125I、32P、33P和類(lèi)似物。放射性標(biāo)記物能通過(guò)任何已知的適當(dāng)方法檢測(cè)，例如光敏感膠片或磷光體顯像。根據(jù)本發(fā)明適合的測(cè)量方法也包括沉淀(特別是免疫沉淀反應(yīng))、電化學(xué)發(fā)光(產(chǎn)生電的化學(xué)發(fā)光)、RIA(放射免疫測(cè)定法)、ELISA(酶耦合的免疫吸收劑化驗(yàn))、夾層酶免疫檢驗(yàn)、電化學(xué)發(fā)光夾層免疫測(cè)定法(ECLIA)、分解增強(qiáng)的氟代鑭系元素免疫測(cè)定法(DELFIA)、閃爍近似化驗(yàn)(SPA)、比濁法、散射測(cè)濁法、乳膠增強(qiáng)的比濁法或散射測(cè)濁法、或固相免疫檢驗(yàn)。更多的現(xiàn)有技術(shù)已知的方法(例如凝膠電泳、2D凝膠電泳、SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、蛋白質(zhì)印跡、和質(zhì)譜儀)能被單獨(dú)使用或與前述的標(biāo)記或其它檢測(cè)方法聯(lián)合使用。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，測(cè)定利鈉肽量的方法包括(a)將包括如前所述的利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白配位體的固體載體與包括利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的樣品接觸和(b)測(cè)量結(jié)合在載體上的利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的量。
優(yōu)選選自核酸、肽、多肽、抗體和適應(yīng)配體的配位體優(yōu)選存在于固體載體上的形式。用于制固體載體的材料是現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的，其中包括商用柱材料、聚苯乙烯小珠、乳膠小珠、磁性小珠、膠體金屬粒子、玻璃和/或硅芯片和表面、硝化纖維帶、膜、薄板、包硬鋁的銅板、穴和反應(yīng)盤(pán)的壁、塑料管等。配位體或劑可結(jié)合許多不同的載體。眾所周知的載體的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龍、直鏈淀粉、天然和改進(jìn)的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、和磁鐵礦。對(duì)發(fā)明來(lái)說(shuō)，載體的特性可以是可溶的或不溶的。適合的安裝/固定所述配位體的方法是眾所周知的，包括但不局限于離子的、疏水的、共價(jià)的相互作用及類(lèi)似作用。根據(jù)本發(fā)明也考慮使用“懸浮隊(duì)列”作為隊(duì)列(Nolan日本，SklarLA.(2002).Suspension array technologyevolution of the flat-arrayparadigm.Trends Biotechnol.20(1)9-12)。在這種懸浮隊(duì)列中，載體如微珠或微球體懸浮存在。隊(duì)列由可標(biāo)記的不同的微珠或微球體組成運(yùn)載不同的配位體。生產(chǎn)這種隊(duì)列的方法，例如基于固相化學(xué)和光變保護(hù)基團(tuán)，通常已知(US5,744,305)。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“量”包括利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的絕對(duì)量、利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的相對(duì)量或濃度及此外相關(guān)的任何值或參數(shù)。這種值或參數(shù)包括直接測(cè)量到的利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的所有特定物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度信號(hào)值，例如質(zhì)譜或NMR光譜中的強(qiáng)度值。此外包括別處所述的間接測(cè)量得到的所有值或參數(shù)，例如，響應(yīng)利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的生物讀出系統(tǒng)測(cè)到的表達(dá)水平或從特異結(jié)合配位體得到的強(qiáng)度信號(hào)。與前述量或參數(shù)相關(guān)的值也理解為可通過(guò)所有的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)運(yùn)算得到。
肺部表面活性劑蛋白是在生理?xiàng)l件下在個(gè)體肺部表面活性劑中發(fā)現(xiàn)的蛋白。這些肺部表面活性劑蛋白是表面活性劑蛋白A(SP-A)、表面活性劑蛋白B(SP-B)和/或表面活性劑蛋白D(SP-D)。此處所用術(shù)語(yǔ)“肺部表面活性劑蛋白”優(yōu)選指SP-B。該術(shù)語(yǔ)優(yōu)選包括人蛋白及其變體，優(yōu)選等位基因變體或種特定同系物、paralog或ortholog。人表面活性劑蛋白在現(xiàn)有技術(shù)中已被充分表征和公開(kāi)，例如在Hawgood，1989，Am J Physiol-Lung細(xì)胞和分子生理學(xué)，卷257，2期l3-L22(對(duì)于所有表面活性劑蛋白)，Takahashi 2006，Curr PharmDes，12(5)589-598(對(duì)于SP-A和SP-D)，和Kurutz 2002，生化，41(30)9627-9636，Guttentag 1998，Am J Physiol-Lung細(xì)胞和分子生理學(xué)，卷275，3期L559-L566(對(duì)于SP-B)中。
也特別設(shè)想肺部表面活性劑蛋白的變體氨基酸水平與人肺部表面活性劑蛋白至少60％相同，更優(yōu)選至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％相同。蛋白水解作用的降解產(chǎn)物其仍通過(guò)診斷手段或直接相對(duì)于各自全長(zhǎng)肽的配位體來(lái)辨認(rèn)是實(shí)質(zhì)相似并也被想到的。也包括相對(duì)人肺部表面活性劑蛋白的氨基酸序列具有氨基酸缺失、替代、和/或增加的變體多肽只要所述多肽具有肺部表面活性劑蛋白的性質(zhì)。此處所指的肺部表面活性劑蛋白性質(zhì)是免疫和/或生物性質(zhì)。優(yōu)選肺部表面活性劑蛋白的變體相對(duì)此處特指肺部表面活性劑蛋白的那些具有免疫性質(zhì)(也就是抗原決定部位組成)。因而，變體將可通過(guò)前述手段或測(cè)定肺部表面活性劑蛋白所用的配位體來(lái)辨認(rèn)。變體也包括遺傳轉(zhuǎn)譯改進(jìn)的肺部表面活性劑蛋白例如糖基化蛋白。
此外，術(shù)語(yǔ)理解為也包括前述特定肺部表面活性劑蛋白或其變體的任意組合。例如，SP-B可與SP-D或SP-A或其兩者結(jié)合測(cè)定。
術(shù)語(yǔ)“利鈉肽”包括心鈉肽(ANP)類(lèi)型和腦利鈉肽(BNP)類(lèi)型和其具有相同預(yù)兆勢(shì)能的變體。根據(jù)本發(fā)明利鈉肽包括ANP-類(lèi)型肽和BNP-類(lèi)型肽和其變體(參見(jiàn)如Bonow，R.O.(1996).心臟利鈉肽的新理解.Circulation 931946-1950)。
ANP-類(lèi)型肽包括前脯氨酸ANP、脯氨酸ANP、NT-proANP、和ANP。
BNP-類(lèi)型肽包括前脯氨酸BNP、脯氨酸BNP、NT-proBNP、和BNP。
前脯氨酸肽(前脯氨酸BNP例中的134個(gè)氨基酸)包括短信號(hào)肽，其酶解釋放出脯氨酸肽(脯氨酸BNP例中的108個(gè)氨基酸)。脯氨酸肽進(jìn)一步分裂成N-末端前肽(N末端-脯氨酸肽，NT-proBNP例中的76個(gè)氨基酸)和活性荷爾蒙(BNP例中的32個(gè)氨基酸，ANP例中的28個(gè)氨基酸)。
根據(jù)本發(fā)明，優(yōu)選的利鈉肽是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP、和其變體。ANP和BNP是活性荷爾蒙并且半衰期短于它們各自的非活性對(duì)應(yīng)物，NT-proANP和NT-proBNP。BNP在血液中被物質(zhì)替換，但是NT-proBNP作為完整分子在血液中循環(huán)并同樣地在腎臟中被除去。N末端脯氨酸BNP不活潑的半衰期比BNP的20分鐘半衰期長(zhǎng)120分鐘(Smith MW，Espiner EA，Yandle TG，Charles CJ，RichardsAM.Delayed metabolism of human brain natriuretic peptide reflectsresistance to neutral endopeptidase.J Endocrinol.2000；167239-46)。
預(yù)分析更加強(qiáng)NT-proBNP從而便于樣品運(yùn)輸?shù)街行膶?shí)驗(yàn)室(Mueller T，Gegenhuber A，Dieplinger B，Poelz W，Haltmayer M.Long-term stability of endogenous B-type natriuretic peptide(BNP)and aminoterminal脯氨酸BNP(NT-proBNP)in frozen plasma samples，ClinChem Lab Med 2004；42942-4)。血液樣品能在室溫下貯藏幾天或可在沒(méi)有回收損失的情況下郵寄或船運(yùn)。相反，BNP室溫下或4攝氏度下貯藏48小時(shí)導(dǎo)致濃度損失至少20％(Mueller T，Gegenhuber A，etal.，Clin Chem Lab Med 2004；42942-4，supra；Wu AH，Packer M，SmithA，Biiou R，F(xiàn)ink D，Mair J，Wallentin L，Johnston N，F(xiàn)eldcampCS，Haverstick DM，Ahnadi CE，Grant A，Despres N，Bluestein B，Ghani F.心臟衰竭病人的Bayer ADVIA Centaur自動(dòng)化的B型利鈉肽化驗(yàn)的分析和臨床價(jià)值多位點(diǎn)研究.Clin Chem 2004；50867-73.)。因此，依賴時(shí)間推進(jìn)或興趣的性質(zhì)，利鈉肽活性形式或非活性形式的測(cè)量能是便利的。
根據(jù)本發(fā)明最優(yōu)選的利鈉肽是NT-proBNP或其變體。如前面簡(jiǎn)單討論的，根據(jù)本發(fā)明所指的人NT-proBNP是優(yōu)選包括相應(yīng)于人NT-proBNP分子N-末端部分的76個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽。人BNP和NT-proBNP的結(jié)構(gòu)已在現(xiàn)有技術(shù)中被詳細(xì)描述了，例如，WO02/089657，WO02/08913，Bonow1996，心臟利鈉肽的新理解。Circulation931946-1950。優(yōu)選此處所用的人NT-proBNP是EP0648228B1公開(kāi)的人NT-proBNP。關(guān)于那里公開(kāi)的NT-proBNP和其變體的特定序列，這些現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)由此結(jié)合參考。
根據(jù)本發(fā)明所指的NT-proBNP進(jìn)一步包括前面討論的人NT-proBNP所述特定序列的等位基因變體和其它變體。特別設(shè)想變體多肽的氨基酸水平與人NT-proBNP至少60％相同，更優(yōu)選至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％相同。蛋白水解作用的降解產(chǎn)物其仍通過(guò)診斷手段或直接相對(duì)于各自全長(zhǎng)肽的配位體來(lái)辨認(rèn)是實(shí)質(zhì)相似并也被想到的。也包括相對(duì)人NT-proBNP的氨基酸序列具有氨基酸缺失、替代、和/或增加的變體多肽只要所述多肽具有NT-proBNP的性質(zhì)。此處所指的NT-proBNP性質(zhì)是免疫和/或生物性質(zhì)。優(yōu)選NT-proBNP的變體相對(duì)NT-proBNP的那些具有免疫性質(zhì)(也就是抗原決定部位組成)。因而，變體將可通過(guò)前述手段或測(cè)定利鈉肽量所用的配位體來(lái)辨認(rèn)。生物和/或免疫的NT-proBNP性質(zhì)能通過(guò)Karl et al.(Karl 1999.低檢測(cè)限制下新N末端-脯氨酸BNP(NT-proBNP)化驗(yàn)的進(jìn)展。Scand J Clin Invest 59177-181)、Yeo et al.(Yeo2003。Roche NT-proBNP化驗(yàn)的多中心性價(jià)值及與Biosite Triage化驗(yàn)的比較。Clinica Chimica Acta 338107-115)、和下面實(shí)施例1中所述的化驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。變體也包括遺傳轉(zhuǎn)譯改進(jìn)的利鈉肽例如糖基化肽。
根據(jù)本發(fā)明的變體也是樣品收集后改進(jìn)的肽或多肽，例如與肽通過(guò)標(biāo)記物共價(jià)或非共價(jià)的附著，特別是放射性或熒光標(biāo)記物。
此外，術(shù)語(yǔ)理解為也涉及前述特定利鈉肽的任意組合。
術(shù)語(yǔ)“樣品”指身體液體的樣品，分離細(xì)胞的樣品或來(lái)自組織或器官的樣品。身體液體的樣品能通過(guò)眾所周知的技術(shù)得到并優(yōu)選包括血液、血漿、血清或尿的樣品。組織或器官的樣品可通過(guò)如活組織檢查從任何組織或器官中得到。分離細(xì)胞可通過(guò)分離技術(shù)例如離心或細(xì)胞分選從身體液體或組織或器官中得到。
此處所用的比較包括將被分析樣品所含利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的量與下面內(nèi)容所說(shuō)明的適合的參考源的量。此處所用的比較理解為指相應(yīng)參數(shù)或值的比較，例如，當(dāng)濃度與參考濃度比較或檢驗(yàn)樣品得到的強(qiáng)度信號(hào)與參考樣品同類(lèi)型的強(qiáng)度信號(hào)比較時(shí)絕對(duì)量與絕對(duì)參照量比較。本發(fā)明方法的步驟(b)中所指的比較可以人工完成或計(jì)算機(jī)協(xié)助。至于計(jì)算機(jī)協(xié)助的比較，所測(cè)定量的值可通過(guò)計(jì)算機(jī)程序與數(shù)據(jù)庫(kù)所存的適合參考對(duì)應(yīng)的值比較。計(jì)算機(jī)程序可進(jìn)一步評(píng)價(jià)比較的結(jié)果，也就是以適合的輸出格式自動(dòng)提供此處所指疾病的鑒別診斷。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“參照量”指允許通過(guò)前面所指的比較來(lái)評(píng)定個(gè)體是否患有前述疾病或病癥中的任意一種的量。因此，參考也可以來(lái)自患有(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難即相對(duì)于心血管并發(fā)癥和肺部疾病健康的個(gè)體。理解為如果使用來(lái)自患有疾病或疾病組合的個(gè)體的參考，本質(zhì)同于所述參照量的檢驗(yàn)個(gè)體樣品中的肽或蛋白量將指示相應(yīng)疾病或疾病組合。如果使用來(lái)自健康個(gè)體的參考，顯著區(qū)別于參考(也就是此處所指的表面活性劑蛋白和利鈉肽的正常值)的檢驗(yàn)個(gè)體樣品中的肽或蛋白量將指示疾病。應(yīng)用于個(gè)體的參照量可依據(jù)不同的生理參數(shù)如年齡、性別或亞種群變化。因而，適合的參照量可通過(guò)本發(fā)明方法從與檢驗(yàn)樣品一起即同時(shí)或隨后分析的參考樣品中被測(cè)定。已發(fā)現(xiàn)利鈉肽的量大于正常范圍(80至150pg/ml，并優(yōu)選125pg/ml)并且血液肺部表面活性劑蛋白的量大于正常范圍(12,000至20,000ng/ml，并優(yōu)選20,000ng/ml)指示伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥而不是肺部疾病或顯示肺部癥狀引起呼吸困難的心血管并發(fā)癥。理解為前述量可由于統(tǒng)計(jì)學(xué)和測(cè)量誤差而變化。因而，如果測(cè)到肺部表面活性劑蛋白的量提高而未測(cè)到利鈉肽的量提高，個(gè)體將僅患有肺部疾病。如果利鈉肽和表面活性劑蛋白的測(cè)得量相對(duì)正常范圍都提高，個(gè)體將患有伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥。如果利鈉肽的量單獨(dú)提高，個(gè)體將患有心血管并發(fā)癥。最后，如果測(cè)得的量相對(duì)參考均未提高，個(gè)體將顯示別處所說(shuō)明的非心血管、非肺部起因的慢性呼吸困難。
有利地，已發(fā)現(xiàn)顯示肺部癥狀特別是呼吸短促的個(gè)體的樣品中存在的肺部表面活性劑蛋白量及NT-proBNP量顧及關(guān)于所述癥狀起因的鑒別診斷。由于本發(fā)明，個(gè)體及特別是急診病人能根據(jù)所述鑒別診斷的結(jié)果被更容易更可靠地診斷及接著治療。
上文及這里以下的術(shù)語(yǔ)的解釋和定義因而適用于說(shuō)明書(shū)所表征的所有實(shí)施方案和權(quán)利要求書(shū)。
以下實(shí)施方案是本發(fā)明方法的特別優(yōu)選實(shí)施方案。
本發(fā)明方法的一優(yōu)選實(shí)施方案中，伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥中的肺部疾病(參見(jiàn)(iii)，上文)由心血管并發(fā)癥引起。
在發(fā)明方法的一個(gè)選實(shí)施方案中，(iii)中的心血管并發(fā)癥由肺部疾病引起。
本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，(iii)中的肺部疾病不依賴于心血管并發(fā)癥。
本發(fā)明方法進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，少于125pg/ml的利鈉肽參照量和大于20,000ng/ml的肺部表面活性劑蛋白參照量表示(i)肺部疾病。
本發(fā)明方法進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，大于125pg/ml的利鈉肽參照量和少于20,000ng/ml的肺部表面活性劑蛋白參照量表示(ii)心血管并發(fā)癥。
本發(fā)明方法進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，大于125pg/ml的利鈉肽參照量和大于20,000ng/ml的肺部表面活性劑蛋白參照量表示(iii)伴隨心血管并發(fā)癥的肺部疾病。
本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，少于125pg/ml的利鈉肽參照量和少于20,000ng/ml的肺部表面活性劑蛋白參照量表示(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難。
并且，本發(fā)明方法的一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述樣品是血液、血漿、血清或尿。
本發(fā)明方法的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述利鈉肽是NT-proBNP。
此外，本發(fā)明方法的一優(yōu)選實(shí)施方案中，所述個(gè)體是人。
此外，本發(fā)明涉及一種鑒別顯示慢性呼吸困難個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)顯示肺部癥狀的心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的設(shè)備，包括a)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中肺部表面活性劑蛋白濃度的工具；b)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中利鈉肽或其變體的量的工具；和c)用來(lái)將所測(cè)定的量與合適的參照進(jìn)行比較的工具，借此鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“設(shè)備”涉及至少包括前述的允許預(yù)測(cè)的操作上互相鏈接的工具的系統(tǒng)。優(yōu)選測(cè)定利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白量的工具和進(jìn)行比較的工具是前面與發(fā)明方法有關(guān)的內(nèi)容所公開(kāi)的。如何以操作方式鏈接工具將依賴于設(shè)備所包括的工具的類(lèi)型。例如，在應(yīng)用自動(dòng)測(cè)定肽量的工具的情況下，通過(guò)所述自動(dòng)操作工具得到的數(shù)據(jù)就能通過(guò)如計(jì)算機(jī)程序處理從而在此處所指的疾病之間診斷或區(qū)別。優(yōu)選這種情形下簡(jiǎn)單設(shè)備包括這些工具。因而所述設(shè)備可以包括測(cè)量樣品中肽的量的分析構(gòu)件和為了鑒別診斷處理結(jié)果數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)構(gòu)件。作為選擇，在使用例如檢驗(yàn)帶的工具測(cè)定肽量的情況下，診斷工具可以包括給已知的對(duì)應(yīng)(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難或健康對(duì)照個(gè)體的量分配測(cè)得量的對(duì)照帶或臺(tái)。優(yōu)選檢驗(yàn)帶結(jié)合特異結(jié)合利鈉肽或肺部表面活性劑蛋白的配位體。帶或設(shè)備優(yōu)選包括檢測(cè)所述肽與所述配位體結(jié)合的工具。優(yōu)選的檢測(cè)工具在前面涉及發(fā)明方法的實(shí)施方案中公開(kāi)了。這種情形下，工具操作上鏈接因?yàn)橄到y(tǒng)的使用者根據(jù)手冊(cè)所給的指示和解釋將量的測(cè)定結(jié)果和其診斷值集合。這種實(shí)施方案中工具可作為獨(dú)立設(shè)備出現(xiàn)并優(yōu)選包裝起來(lái)作為工具箱。本領(lǐng)域技術(shù)人員將不難知道如何鏈接工具。優(yōu)選的設(shè)備是在沒(méi)有專門(mén)臨床醫(yī)師的特別知識(shí)的情況下能被應(yīng)用的那些設(shè)備，例如僅需裝載樣品的檢驗(yàn)帶或電子設(shè)備。結(jié)果可作為診斷的原始數(shù)據(jù)輸出被給出，其需要臨床醫(yī)師解釋。然而，設(shè)備的輸出優(yōu)選是處理過(guò)的診斷的原始數(shù)據(jù)其解釋不需要專門(mén)的臨床醫(yī)師。根據(jù)發(fā)明的方法，進(jìn)一步優(yōu)選的設(shè)備包括上文所指的分析構(gòu)件/設(shè)備(例如，生物傳感器，陣，結(jié)合特異識(shí)別利鈉肽的配位體的固體載體，等離振子表面共振設(shè)備，NMR分光計(jì)，質(zhì)譜儀等)或評(píng)價(jià)構(gòu)件/設(shè)備。
此外，本發(fā)明涉及進(jìn)行本發(fā)明方法的工具箱，其中所述工具箱包括a)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中肺部表面活性劑蛋白濃度的工具；b)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中利鈉肽或其變體的量的工具；和c)用來(lái)將所測(cè)定的量與合適的參考比較的工具，借此能鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
此處所用的術(shù)語(yǔ)“工具箱”指前述工具的集合，優(yōu)選分別被提供或在一個(gè)容器中被提供。容器也優(yōu)選包括進(jìn)行本發(fā)明方法的說(shuō)明書(shū)。
通過(guò)參照全部公開(kāi)的內(nèi)容和本說(shuō)明書(shū)特別提及的公開(kāi)內(nèi)容來(lái)引入本說(shuō)明書(shū)中引用的所有參考文獻(xiàn)作為參考。
附圖顯示

圖1附圖顯示為有心臟衰竭(HF)、肺部疾病(LD)或兩者(HF+LD)均有的病人群測(cè)量的NT-proBNP濃度的箱線圖。N表示病人的數(shù)目。此外，所示的是中值和第75、95、5及25的百分點(diǎn)。
圖2附圖顯示為有心臟衰竭(HF)、肺部疾病(LD)或兩者(HF+LD)均有的病人群測(cè)量的SP-B濃度的箱線圖。N表示病人的數(shù)目。此外，所示的是中值和第75、95、5及25的百分點(diǎn)。
以下的實(shí)施例只是說(shuō)明了本發(fā)明。無(wú)論如何，不解釋為限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例慢性呼吸困難病人的遠(yuǎn)景研究214位患有慢性呼吸困難的病人的群組被臨床研究心臟衰竭、肺部疾病或兩病結(jié)合的存在。將病人分配進(jìn)三個(gè)疾病組已通過(guò)臨床檢查、ECG和超聲波心動(dòng)描記法確認(rèn)。為了SP-B量病人的血液樣品已通過(guò)原型SP-B ELISA(Flinders化驗(yàn)法)被分析并且為了NT-proBNP濃度病人的血液樣品通過(guò)Elecsys NT-proBNPTM化驗(yàn)(Roche診斷學(xué))被分析。
NT-proBNP濃度的測(cè)定結(jié)果在圖1中所示。兩病均患的病人(心臟衰竭和肺部疾病)顯示NT-proBNP水平升高，心臟衰竭患者也顯示強(qiáng)烈升高的NT-proBNP水平。然而，肺部疾病患者僅顯示正常的NT-proBNP水平。
圖2顯示不同病人組的SP-B量的測(cè)定結(jié)果。心臟衰竭患者與肺部病癥(肺部疾病)患者或肺部病癥和心臟衰竭均患的病人相比僅具有更低的SP-B水平(正常SP-B水平)。
權(quán)利要求
1.一種鑒別患有慢性呼吸短促(呼吸困難)個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的方法，所述方法包括以下步驟a)測(cè)定個(gè)體的樣品中SP-B的量；b)測(cè)定所述個(gè)體的樣品中利鈉肽的量；和c)通過(guò)將a)和b)中測(cè)定的量與參照量比較來(lái)鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
2.權(quán)利要求1的方法，其中(iii)中的肺部疾病由心血管并發(fā)癥引起。
3.權(quán)利要求1的方法，其中(iii)中的心血管并發(fā)癥由肺部疾病引起。
4.權(quán)利要求1的方法，其中(iii)中的肺部疾病不依賴于心血管并發(fā)癥。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中少于125pg/ml的利鈉肽參照量和大于20,000ng/ml的SP-B參照量表示(i)肺部疾病。
6.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中大于125pg/ml的利鈉肽參照量和少于20,000ng/ml的SP-B參照量表示(ii)心血管并發(fā)癥。
7.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中大于125pg/ml的利鈉肽參照量和大于20,000ng/ml的SP-B參照量表示(iii)伴隨心血管并發(fā)癥的肺部疾病。
8.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中少于125pg/ml的利鈉肽參照量和少于20,000ng/ml的SP-B參照量表示(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難。
9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的方法，其中所述樣品是血液、血漿、血清或尿。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的方法，其中所述利鈉肽是NT-proBNP。
11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的方法，其中所述個(gè)體是人。
12.一種鑒別患有慢性呼吸困難個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的設(shè)備，所述設(shè)備包括a)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中SP-B濃度的工具；b)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中利鈉肽或其變體的量的工具；和c)用來(lái)將所測(cè)定的量與合適的參照進(jìn)行比較的工具，借此鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)顯示肺部癥狀的沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
13.進(jìn)行權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)方法的工具箱，其中所述工具箱包括進(jìn)行所述方法的說(shuō)明書(shū)和a)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中SP-B濃度的工具；b)用來(lái)測(cè)定個(gè)體樣品中利鈉肽的量的工具；和c)用來(lái)將所測(cè)定的量與合適的參照進(jìn)行比較的工具，借此可以相互鑒別(i)肺部疾病、(ii)顯示肺部癥狀的心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鑒別患有慢性喘氣(呼吸困難)個(gè)體的(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的呼吸困難的方法，包括步驟測(cè)定個(gè)體樣品中肺部表面活性劑蛋白的量，測(cè)定所述個(gè)體樣品中利鈉肽的量，和通過(guò)將a)和b)中測(cè)定的量與參照量比較來(lái)鑒別(i)肺部疾病、(ii)心血管并發(fā)癥、(iii)伴隨肺部疾病的心血管并發(fā)癥或(iv)沒(méi)有心血管或肺部起因的慢性呼吸困難。此外，本發(fā)明涉及進(jìn)行所述方法的設(shè)備和工具箱。
文檔編號(hào)G01N33/68GK101055275SQ20071009614
公開(kāi)日2007年10月17日 申請(qǐng)日期2007年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日
發(fā)明者G·赫斯, A·霍斯奇 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司