專利名稱：轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證技術(shù)領(lǐng)域，特別是能力驗(yàn)證樣品，以及其制備方法。
背景技術(shù)：
實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)是評(píng)價(jià)參試實(shí)驗(yàn)室測(cè)試能力的重要手段之一，而組織者提供給各參試實(shí)驗(yàn)室的測(cè)試樣品則是保證能力驗(yàn)證計(jì)劃順利實(shí)施的前提條件。能力驗(yàn)證計(jì)劃通常分為單樣本和分割樣本測(cè)試方案，在分割樣本測(cè)試方案中，組織者提供給參試實(shí)驗(yàn)室的樣本可能是由多個(gè)含量水平不同的測(cè)試樣品組成，這些樣品一方面應(yīng)保證具備均勻和穩(wěn)定的特征，同時(shí)還應(yīng)滿足能力驗(yàn)證方案的統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)程序的要求。能力驗(yàn)證樣品不同于實(shí)驗(yàn)室日常測(cè)試的樣品和一般工業(yè)化的產(chǎn)品，它是用于實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部測(cè)試質(zhì)量控制活動(dòng)的特殊樣品。因此，其設(shè)計(jì)、制備方法有其獨(dú)特之處，目前在能力驗(yàn)證樣品及其制備領(lǐng)域仍是較難以實(shí)現(xiàn)的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有能力驗(yàn)證樣品缺乏，制法不完善的問題，提供一組均勻、穩(wěn)定地含有不同含量的轉(zhuǎn)基因大豆成分的轉(zhuǎn)基因大豆能力驗(yàn)證樣品，另外還提供該轉(zhuǎn)基因大豆能力驗(yàn)證樣品的制備方法，制備樣品的成功率很高。
本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采用的技術(shù)方案是轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品，含有轉(zhuǎn)基因大豆粉0.01～20％重量百分比。
所述樣品為A樣和B樣，A樣為大豆粉樣品中含有2.8％的轉(zhuǎn)基因大豆粉，B樣為大豆粉樣品中含有3.2％的轉(zhuǎn)基因大豆粉。
所述轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品的制備方法(1)首先根據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆的偏倚實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和重復(fù)性、再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，設(shè)計(jì)樣品水平差；(2)分別選取完整、無破損、無害蟲危害的轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆樣品，于-80℃或低于-80℃預(yù)冷凍20min～1h，進(jìn)行低溫冷凍干燥，然后進(jìn)行研磨，過80～100目篩后，在-80℃或低于-80℃低溫冷凍真空脫水24～48h，使其成不粘連的干燥粉末狀；(3)在恒溫恒濕、無菌操作間中，按設(shè)計(jì)量的重量百分比稱取轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉，混勻24～30h轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉；(4)再次在-80℃或低于-80℃低溫冷凍真空干燥12～24h；(5)將上述轉(zhuǎn)基因大豆粉樣品分裝于棕色玻璃瓶中封蓋密封；(6)最后經(jīng)60CO 4kGy輻照30min～1h；(7)復(fù)核、登記，隨機(jī)抽取一定數(shù)量的樣品進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性測(cè)試，符合有關(guān)能力驗(yàn)證方案和標(biāo)準(zhǔn)要求后，即可制得所需的含有轉(zhuǎn)基因大豆成分的大豆粉能力驗(yàn)證樣品。
本發(fā)明所述能力驗(yàn)證樣品，能保證含有轉(zhuǎn)基因大豆成分的轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品中均勻、穩(wěn)定地含有轉(zhuǎn)基因大豆成分，尤其是保證了轉(zhuǎn)基因大豆成分的穩(wěn)定性，符合實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證要求，且利于統(tǒng)計(jì)分析，本發(fā)明制法科學(xué)合理，該方法既符合能力驗(yàn)證分割水平樣品的設(shè)計(jì)要求，同時(shí)其均勻性、穩(wěn)定性等各項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)均可滿足實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)的需要。采用分割水平設(shè)計(jì)方法設(shè)計(jì)了A、B樣品中轉(zhuǎn)基因大豆成分，可以有效地防止能力驗(yàn)證活動(dòng)中各參試實(shí)驗(yàn)室間的串通行為。用于轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)能更加全面、準(zhǔn)確地反映出各參試實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果的的重現(xiàn)性和再現(xiàn)性，該組樣品不僅可以用于轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)，同時(shí)，也可以做為質(zhì)控樣品用于食品實(shí)驗(yàn)室的日常檢驗(yàn)工作。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)首先根據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆的偏倚實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和重復(fù)性、再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，設(shè)計(jì)樣品水平差。
(2)分別選取完整、無破損、無害蟲危害的GTS 40-3-2轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆樣品，置于-80℃預(yù)冷凍至少1h進(jìn)行低溫冷凍干燥，之后進(jìn)行組織研磨、預(yù)粉碎。
(3)再進(jìn)行高鋁瓷球磨機(jī)細(xì)磨，過100目篩(通過部分占99％)。之后進(jìn)行低溫冷凍真空脫水(-80℃，48h)，使其成不粘連的干燥粉末狀。
(4)在恒溫恒濕、無菌操作間中，分別按2.8％和3.2％的重量百分比稱取轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉，各自混勻(30h)該轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉。
(5)再次低溫真空冷凍干燥(-80℃，24h)(6)將按上述方式獲得的轉(zhuǎn)基因大豆粉樣品分裝于經(jīng)160℃干熱處理2h的潔凈的7mL棕色玻璃瓶中封蓋密封，每瓶內(nèi)裝大豆粉1g。
(7)最后經(jīng)60Co 4kGy輻照1h。
(8)兩批含有分割水平的轉(zhuǎn)基因大豆樣品，經(jīng)雙人復(fù)核、登記，并加以唯一性標(biāo)識(shí)。
(9)隨機(jī)抽取一定數(shù)量的樣品進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性測(cè)試。
(10)評(píng)價(jià)測(cè)試數(shù)據(jù)，符合有關(guān)能力驗(yàn)證方案和標(biāo)準(zhǔn)要求后，即可制得所需的含有轉(zhuǎn)基因大豆成分的大豆粉能力驗(yàn)證樣品組。
均勻性、穩(wěn)定性測(cè)試1均勻性測(cè)試從每個(gè)大樣中分別隨機(jī)選取19個(gè)樣品進(jìn)行均勻性檢查。每個(gè)樣品分成兩份試料，所有試料以隨機(jī)次序在重復(fù)性條件下測(cè)試，即在同一實(shí)驗(yàn)室中由相同的人員使用相同的測(cè)試方法和儀器在較短時(shí)間內(nèi)測(cè)試。測(cè)試結(jié)果見表1。
對(duì)于每種組分，樣品平均值為xt＝(xt1+xt2)/2；試料間極差為wt＝|xt1-xt2|；總平均值為x==Σx‾t/g;]]>總平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差為sx=Σ(x‾t-x=)2/(g-1);]]>樣品內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)偏差為sw=Σwt2/2g;]]>樣品間標(biāo)準(zhǔn)偏差為ss=ss2-sw2/2.]]>與用于每種組分的能力評(píng)價(jià)用穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)偏差(Robust SD)相比較，上述兩個(gè)樣品間標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于0.3Robust SD，這表明采用本方法所制備的樣品是足夠均勻的。
2穩(wěn)定性測(cè)試分別從每個(gè)大樣中選取用于穩(wěn)定性測(cè)試的包裝好的樣品，分別歷經(jīng)了溫度變化和輻照。對(duì)每個(gè)大樣，隨機(jī)選取的一組12個(gè)樣品被放置在室溫下(18～25℃)18天，然后放置在50℃保溫箱中4天，再放置再室溫下28天，從均勻性測(cè)試開始計(jì)算，在第10，20，30，40和50天，每天選取3個(gè)樣品測(cè)試。另一組3個(gè)樣品在測(cè)試前通過機(jī)場(chǎng)安全檢查的X-光儀6次。
在全部穩(wěn)定性測(cè)試中，所用人員、儀器、測(cè)試方法和實(shí)驗(yàn)室均與均勻性測(cè)試相同。樣品的測(cè)試結(jié)果見表2，穩(wěn)定性測(cè)試中樣品的測(cè)試結(jié)果與均勻性測(cè)試中的總平均值的絕對(duì)差值由下式計(jì)算對(duì)每個(gè)組分，樣品均值yt＝(yt1+yt2)/2；總平均值y==Σy‾t/g;]]>均勻性和穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果之間的絕對(duì)差值|d|=|y=-x=|]]>與能力評(píng)價(jià)用穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)偏差相比較，3個(gè)樣品的每個(gè)組分的穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果分別與該組分均勻性測(cè)試結(jié)果之間的兩個(gè)最大絕對(duì)差值均遠(yuǎn)小于相應(yīng)的穩(wěn)健標(biāo)準(zhǔn)偏差的0.3倍，這表明采用本方法所制備的樣品可以忽略樣品在上述條件下的變化所帶來的影響。所有樣品是足夠穩(wěn)定的。
均勻性、穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果見表1、表2。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1所述方法制備轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品，含有轉(zhuǎn)基因大豆重量百分比為20％以內(nèi)的任意值，如10％，5.6％，2.5％，0.05％等。
表1轉(zhuǎn)基因大豆粉樣品的均勻性測(cè)試結(jié)果
表2轉(zhuǎn)基因大豆粉樣品的穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果
權(quán)利要求
1.轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品，其特征是含有轉(zhuǎn)基因大豆粉0.01～20％重量百分比。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品，其特征是樣品為A樣和B樣，A樣為大豆粉樣品中含有2.8％的轉(zhuǎn)基因大豆粉，B樣為大豆粉樣品中含有3.2％的轉(zhuǎn)基因大豆粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品的制備方法，其特征是(1)首先根據(jù)轉(zhuǎn)基因大豆的偏倚實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和重復(fù)性、再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差，設(shè)計(jì)樣品水平差；(2)分別選取完整、無破損、無害蟲危害的轉(zhuǎn)基因大豆和非轉(zhuǎn)基因大豆樣品，于-80℃或低于-80℃預(yù)冷凍20min～1h，進(jìn)行低溫冷凍干燥，然后進(jìn)行研磨，過80～100目篩后，在-80℃或低于-80℃低溫冷凍真空脫水24～48h，使其成不粘連的干燥粉末狀；(3)在恒溫恒濕、無菌操作間中，按設(shè)計(jì)量的重量百分比稱取轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉，混勻轉(zhuǎn)基因大豆粉和非轉(zhuǎn)基因大豆粉；(4)再次在-80℃或低于-80℃低溫冷凍真空干燥12～24h；(5)將上述轉(zhuǎn)基因大豆粉樣品分裝于棕色玻璃瓶中封蓋密封；(6)最后經(jīng)60CO 4kGy輻照30min～1h；(7)復(fù)核、登記，隨機(jī)抽取一定數(shù)量的樣品進(jìn)行均勻性、穩(wěn)定性測(cè)試，符合有關(guān)能力驗(yàn)證方案和標(biāo)準(zhǔn)要求后，即可制得所需的含有轉(zhuǎn)基因大豆成分的大豆粉能力驗(yàn)證樣品。
全文摘要
轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)能力驗(yàn)證樣品及制備方法，含有轉(zhuǎn)基因大豆粉0.01～20％重量百分比，樣品可以是A、B兩個(gè)樣品組成，2個(gè)樣品中都均勻、穩(wěn)定地含有2.8％、3.2％含量的轉(zhuǎn)基因大豆。本項(xiàng)發(fā)明采用分割水平設(shè)計(jì)方法設(shè)計(jì)了樣品中轉(zhuǎn)基因大豆含量，可以有效地防止能力驗(yàn)證活動(dòng)中各參試實(shí)驗(yàn)室間的串通行為，制法科學(xué)合理，成功率高，保證了實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性。本發(fā)明更加全面、準(zhǔn)確地反映出各參試實(shí)驗(yàn)室測(cè)試結(jié)果的的重現(xiàn)性和再現(xiàn)性，該組樣品不僅可以用于轉(zhuǎn)基因大豆檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室間能力驗(yàn)證活動(dòng)，同時(shí)，也可以做為質(zhì)控樣品用于食品實(shí)驗(yàn)室的日常檢驗(yàn)工作。
文檔編號(hào)G01N1/28GK1715912SQ20051004680
公開日2006年1月4日 申請(qǐng)日期2005年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月30日
發(fā)明者曹際娟, 鄭江, 趙昕, 邱馳, 劉善斌, 張華一 申請(qǐng)人:曹際娟, 鄭江, 趙昕