專利名稱：胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑中柚皮苷含量的測定方法，特別是涉及一種利用高效液相色譜法測定中藥制劑胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法。
背景技術(shù)：
目前，隨著中藥現(xiàn)代化的不斷發(fā)展，中藥制藥工藝及質(zhì)量檢測水平的不斷提高，越來越多的先進檢測儀器及實驗手段被用于中成藥質(zhì)量的檢測中來。同時，隨著人們生活水平的提高，社會對藥品的質(zhì)量要求也越來越高，這就要求各個制藥企業(yè)要有先進、穩(wěn)定、可靠的檢測方法對藥品的質(zhì)量進行有效的控制。因此，提高中成藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是勢在必行的。
此外，國家鼓勵各個制藥企業(yè)及科研單位提高現(xiàn)有的中成藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并通過一些途徑促進質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高，例如1.2005年版《中國藥典》在2000年版的基礎(chǔ)上增加了許多中藥材及中成藥的定性、定量鑒別方法；2.在新品研制及老產(chǎn)品二次開發(fā)等藥品注冊申報的過程中，都要求在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進行提高。
胃腸安丸為中新藥業(yè)天津樂仁堂制藥廠研制開發(fā)的治療胃腸道疾病的純中藥制劑，收載于《中國藥典》2000年版，該處方由木香、沉香、大黃、枳殼等藥味組成，具有芳香化濁、理氣止痛有健胃導(dǎo)滯之功，臨床用于治療消化不良引起的腹瀉、腸炎、菌痢、脘腹?jié)q滿、腹痛及食積乳積等癥。枳殼為處方中主要藥味，起利胸腹之氣、散積消痞、化濕導(dǎo)滯消食的作用。柚皮苷為枳殼中的主要成分之一，因柚皮苷在枳殼藥材中含量較高，且性質(zhì)穩(wěn)定，因此，通過對胃腸安丸中柚皮苷含量的監(jiān)控可有效地控制該產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，本發(fā)明是利用高效液相色譜法測定胃腸安丸中柚皮苷的含量，以提高胃腸安丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，由如下步驟組成(1)對照品溶液的制備取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.0119mg/ml～0.119mg/ml的溶液，優(yōu)選的是0.01mg/ml，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取胃腸安丸研細(xì)，取粉末0.1g精密稱定，置50ml具塞錐形瓶，加甲醇25ml，精密稱定，水浴加熱回流20-90分鐘，最好是30分鐘，放冷至室溫，精密稱定，用甲醇補足減失重量，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液，微孔濾膜孔徑最好是0.45μm；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為Diamonsil色譜柱C18反相色譜柱規(guī)格5μm，250×4.6mm；流動相乙腈與0.1％～1％冰乙酸水溶液的體積比為10～50∶90～50，最佳比為20∶80，所述冰乙酸水溶液的濃度為體積百分比濃度，優(yōu)選的濃度為0.3％；檢測波長217nm；流速0.5ml/min～1.0ml/min，最佳流速為0.8ml/min；柱溫20℃～40℃，以35℃為宜，分別精密取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入所述高效液相色譜儀，測定。
本發(fā)明的優(yōu)點是方便、快速、專屬性及重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于胃腸安丸的質(zhì)量控制。


圖1為對照品柚皮苷的高效液相色譜圖；圖2為胃腸安丸中柚皮苷的高效液相色譜圖；圖3為陰性對照品的高效液相色譜圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
實施例1一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，包括如下步驟(1)對照品溶液的制備取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.01mg/ml的溶液，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取胃腸安丸研細(xì)，取粉末0.1g精密稱定，置50ml具塞錐形瓶，加甲醇25ml，精密稱定，水浴加熱回流30分鐘，放冷至室溫，精密稱定，用甲醇補足減失重量，0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為Diamonsil色譜柱C18反相色譜柱規(guī)格5μm，250×4.6mm；流動相乙腈與0.3％冰乙酸水溶液的體積比為20∶80，所述冰乙酸水溶液的濃度為體積百分比濃度；檢測波長217nm；流速0.8ml/min；柱溫35℃，分別精密取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入所述高效液相色譜儀，測定。
實施例2一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，包括如下步驟(1)對照品溶液的制備取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.0119mg/ml的溶液，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取胃腸安丸研細(xì)，取粉末0.1g精密稱定，置50ml具塞錐形瓶，加甲醇25ml，精密稱定，水浴加熱回流20分鐘，放冷至室溫，精密稱定，用甲醇補足減失重量，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為Diamonsil色譜柱C18反相色譜柱規(guī)格5μm，250×4.6mm；流動相乙腈與0.1％冰乙酸水溶液的體積比為50∶50，所述冰乙酸水溶液的濃度為體積百分比濃度；檢測波長217nm；流速0.5ml/min；柱溫20℃，分別精密取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入所述高效液相色譜儀，測定。
實施例3一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，包括如下步驟(1)對照品溶液的制備取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.119mg/ml的溶液，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取胃腸安丸研細(xì)，取粉末0.1g精密稱定，置50ml具塞錐形瓶，加甲醇25ml，精密稱定，水浴加熱回流90分鐘，放冷至室溫，精密稱定，用甲醇補足減失重量，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為Diamonsil色譜柱C18反相色譜柱規(guī)格5μm，250×4.6mm；流動相乙腈與1％冰乙酸水溶液的體積比為10∶90，所述冰乙酸水溶液的濃度為體積百分比濃度；檢測波長217nm；流速1.0ml/min；柱溫40℃，分別精密取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入所述高效液相色譜儀，測定。
實施例4
線性關(guān)系的考察精密吸取柚皮苷對照品溶液(濃度為0.0119mg/ml)2、4、8、12、16、20μl進樣，按上述色譜條件測定，以柚皮苷對照品的進樣量為橫坐標(biāo)，相應(yīng)峰面積積分值為縱坐標(biāo)，計算回歸方程為Y＝4666857X-15551.9，r＝0.99995(r相關(guān)系數(shù))。柚皮苷對照品溶液在0.0119～0.119mg/ml范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系。
實施例5精密度實驗取同一供試品溶液，連續(xù)6次進樣，測得峰面積積分值，結(jié)果RSD(相對標(biāo)準(zhǔn)偏差)為1.7％。
實施例6重現(xiàn)性實驗取同一批樣品，稱取供試品6份，照供試品溶液制備方法制備，測定含量，平均含量為11.38mg/g，RSD為1.45％，表明本法重現(xiàn)性良好，精密度較高。
實施例7穩(wěn)定性實驗取同一供試品溶液，每隔2小時進樣2μl，共進樣6次，測定峰面積并計算含量，結(jié)果RSD為1.7％(n＝6)。
實施例8回收率實驗采用加樣回收法，取已知含量(11.38mg/g)的樣品6份，分別精密加入一定量的柚皮苷對照品，照含量測定方法測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。
表1.回收率試驗結(jié)果Table 1 Result of recovery test

實施例9空白對照液的制備與測定除枳殼外按處方量稱取其他藥味，按處方工藝制成不含枳殼的制劑，按供試品溶液制備法制成空白對照液，測定結(jié)果見圖1，圖2和圖3，說明其他藥材與輔料均不干擾柚皮苷的測定。
實施例10樣品測定取十批胃腸安樣品，按供試品溶液制備項下方法制備供試品溶液，每批制備兩份供試品溶液。精密吸取供試品溶液、對照品溶液各2μl，注入高效液相色譜儀，進行測定，十批樣品結(jié)果見表2。
表2胃腸安丸中柚皮苷的測定結(jié)果Table2 Determination of Naringin in Weichang’an Pill

通過對十批胃腸安丸中柚皮苷含量進行檢測，得到平均值為4.98mg/g，建議胃腸安丸增加柚皮苷含量測定的標(biāo)準(zhǔn)定為胃腸安丸中柚皮苷含量不得少于4.38mg/g。
本測定方法方便、快速、專屬性及重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于胃腸安丸的質(zhì)量控制。
討論提取方法考察文獻報道，柚皮苷易溶于有機溶劑，提取方法主要有超聲和回流提取，通過采用甲醇超聲提取和甲醇回流提取進行比較，結(jié)果以甲醇回流提取效果最好，故采用此提取方法。
流動相的選擇先后試驗甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.3冰乙酸、乙腈-0.3％冰乙酸等為流動相，進行實驗，比較HPLC譜圖，結(jié)果顯示以乙腈-0.3％冰乙酸(20∶80)為流動相進行檢測，樣品峰分離最好，故優(yōu)選乙腈-0.3％冰乙酸(20∶80)為流動相。
權(quán)利要求
1.一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是由如下步驟組成(1)對照品溶液的制備 取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.0119mg/ml～0.119mg/ml的溶液，作為對照品溶液；(2)供試品溶液的制備 取胃腸安丸研細(xì)，取粉末0.1g精密稱定，置50ml具塞錐形瓶，加甲醇25ml，精密稱定，水浴加熱回流20～90分鐘，放冷至室溫，精密稱定，用甲醇補足減失重量，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，色譜條件為Diamonsil色譜柱C18反相色譜柱規(guī)格5μm，250×4.6mm；流動相乙腈與0.1％～1％冰乙酸水溶液的體積比為10～50∶90～50，所述冰乙酸水溶液的濃度為體積百分比濃度；檢測波長217nm；流速0.5ml/min～1.0ml/min；柱溫20℃～40℃，分別精密取對照品溶液與供試品溶液各5ul，注入所述高效液相色譜儀，測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述對照品溶液的濃度為0.01mg/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述水浴加熱回流時間為30分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述微孔濾膜孔徑為0.45μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述冰乙酸水溶液的濃度為0.3％。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述乙腈與冰乙酸的體積比為20∶80，所述冰乙酸水溶液的濃度為0.3％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述流速為0.8ml/min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，其特征是所述柱溫為35℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法，由如下步驟組成(1)對照品溶液的制備取柚皮苷對照品適量，加甲醇制成對照品溶液；(2)供試品溶液的制備取胃腸安丸研細(xì)，取粉末置具塞錐形瓶，加甲醇，水浴加熱回流，放冷，精密稱定，微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；(3)采用高效液相色譜儀進行測定，本發(fā)明的一種胃腸安丸中柚皮苷含量的測定方法具有方便、快速、專屬性及重現(xiàn)性好的特點，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于胃腸安丸的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/88GK1758058SQ200510014880
公開日2006年4月12日 申請日期2005年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月26日
發(fā)明者凌寧生, 楊瑾, 律兆榮, 劉志宏 申請人:天津中新藥業(yè)集團股份有限公司樂仁堂制藥廠