專利名稱：癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的診斷方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及對(duì)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的可疑患者，通過測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，而診斷該病和監(jiān)測(cè)該病進(jìn)展的方法。
背景技術(shù)：
阿爾茨海默氏病及其它癡呆性疾病患者數(shù)量的增長(zhǎng)，部分是由于人口整體老齡化引起的，這種增長(zhǎng)對(duì)于患病個(gè)體、護(hù)理人員和公共衛(wèi)生系統(tǒng)都是一個(gè)重要的健康難題。目前這些疾病是由有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)生診斷和治療的，但是對(duì)于它們的發(fā)病和嚴(yán)重程度，幾乎沒有死前的生化測(cè)量。顯然，了解這些疾病更客觀的工具將會(huì)是很重要的。細(xì)胞粘附和識(shí)別分子對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)正常發(fā)育和行使機(jī)能是很重要的。在所有脊椎動(dòng)物中均可發(fā)現(xiàn)它們，而且它們是高度保守的。這些分子中的兩種，L1和NCAM是在許多類型神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞表面糖蛋白。這兩種分子均包括多種同種型，它們例如在細(xì)胞表面附著方式、細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)和信使RNA可變剪接所致特定氨基酸序列的存在與否方面是不同的。另外，這兩種分子在共價(jià)結(jié)合碳水化合物的數(shù)量上可發(fā)生變化，這些碳水化合物反過來可影響這些分子的結(jié)合活性和與細(xì)胞表面上其它分子的相互作用。例如，一些NCAM分子含有高水平的一種罕見碳水化合物-聚唾液酸(polysialic acid)，它們被稱為PSA NCAM。除了介導(dǎo)細(xì)胞結(jié)合外，L1和NCAM均可將外部影響的信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑中。由于它們具有生物學(xué)重要性，L1和NCAM的數(shù)量和類型尤其可能與人類神經(jīng)疾病有關(guān)。例如，L1中的突變與一種常見類型的發(fā)育缺陷和精神發(fā)育遲緩(稱為MASA綜合征，它是一種與L1中突變相關(guān)的遺傳性疾病，標(biāo)志是精神發(fā)育遲緩、拇指內(nèi)收、suffling步態(tài)和失語癥)相關(guān)，而且可能是收容入院患者中“特發(fā)性”精神發(fā)育遲緩最普遍的原因。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)L1、NCAM和NCAM的可變剪接的VASE(可變剪接外顯子)同種型的水平在精神分裂癥患者個(gè)體中是不同的。在腦脊液(CSF)和尸檢組織中這些水平均可不同。由于存在這些發(fā)現(xiàn)，我們已經(jīng)研發(fā)了測(cè)定CSF中L1和NCAM的敏感、特異和定量的分析方法，并測(cè)定了多種神經(jīng)疾病中它們的濃度。阿爾茨海默氏病和某些類型癡呆中這兩種分子的水平是升高的，而在多發(fā)性硬化癥患者中它們是降低的。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了在表現(xiàn)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀并懷疑患有此病的患者中診斷該病和/或監(jiān)測(cè)該病進(jìn)展的方法。所述方法包括獲得患者的標(biāo)本；測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，所述分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)；與正?；颊呦啾龋鶕?jù)這些測(cè)定的水平作出診斷。
附圖簡(jiǎn)要說明附

圖1A的圖表舉例說明被診斷患有不同類型癡呆患者個(gè)體中測(cè)定的L1濃度的范圍，測(cè)定方法是采用此處所述的方法。具體而言，這些值(圓圈)代表下列患者腦脊液(CSF)中的L1濃度阿爾茨海默氏病(AD)、血管性癡呆(VD)、混合型癡呆(MT)、多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)、帕金森氏病(PD)、彌漫性雷維小體癡呆(DLBD)、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、多神經(jīng)病(PNP)、多發(fā)性硬化癥(MS)和正常對(duì)照(NC)。每條水平線代表L1濃度的均值。附圖1B為L(zhǎng)1濃度的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖2A的圖表舉例說明被診斷患有不同類型癡呆患者個(gè)體中測(cè)定的NCAM濃度的范圍，測(cè)定方法是采用此處所述的方法。具體而言，這些值(圓圈)代表下列患者腦脊液(CSF)中的NCAM濃度阿爾茨海默氏病(AD)、血管性癡呆(VD)、混合型癡呆(MT)、多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)、帕金森氏病(PD)、彌漫性雷維小體癡呆(DLBD)、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、多神經(jīng)病(PNP)、多發(fā)性硬化癥(MS)和正常對(duì)照(NC)。每條水平線代表NCAM濃度的均值。附圖2B為NCAM濃度的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖3A的圖表舉例說明被診斷患有不同類型癡呆患者個(gè)體中測(cè)定的PSA-NCAM濃度的范圍，測(cè)定方法是采用此處所述的方法。具體而言，這些值(圓圈)代表下列患者腦脊液(CSF)中的PSA-NCAM濃度阿爾茨海默氏病(AD)、血管性癡呆(VD)、混合型癡呆(MT)、多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)、帕金森氏病(PD)、彌漫性雷維小體癡呆(DLBD)、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、多神經(jīng)病(PNP)、多發(fā)性硬化癥(MS)和正常對(duì)照(NC)。每條水平線代表PSA-NCAM濃度的均值。附圖3B為PSA-NCAM濃度的均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖4A描述癡呆和非癡呆組的L1濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖4B描述癡呆和非癡呆組的NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖4C描述癡呆和非癡呆組的PSA-NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖5A描述神經(jīng)變性疾病和非變性疾病患者的L1濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖5B描述神經(jīng)變性疾病和非變性疾病患者的NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。附圖5C描述有或無神經(jīng)變性的患者中PSA-NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。
發(fā)明的詳細(xì)描述本發(fā)明提供了在表現(xiàn)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀并懷疑患有此病的患者中診斷該病的方法。所述方法包括獲得患者的標(biāo)本；測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，所述分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)；與正?；颊呦啾?，根據(jù)這些測(cè)定水平作出診斷。在此應(yīng)用時(shí)，癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病是特征在于存在癡呆的疾病。在此應(yīng)用時(shí)，“癡呆”是使用標(biāo)準(zhǔn)臨床規(guī)程確定的，并通過簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查(MMSE)評(píng)分確定癡呆的程度，此評(píng)分法詳見Folstein M.F.、Folstein S.E.和McHugh P.R.，J Psychiatry Res.，12189-198(1975)。在此應(yīng)用時(shí)，癡呆包括所有程度的臨床癡呆，從輕度至中度再至嚴(yán)重癡呆。例如，MMSE評(píng)分為30至27被判定為無癡呆，評(píng)分為26至20被判定為輕度癡呆，評(píng)分為19至10被判定為中度癡呆，評(píng)分為9至0被判定為重度癡呆。在此應(yīng)用時(shí)，癡呆包括所有范圍的MMSE評(píng)分，當(dāng)然除外被判定為無癡呆的那些評(píng)分。但是，在此應(yīng)用時(shí)，“癡呆”并不限于有無MMSE評(píng)分。被診斷或監(jiān)測(cè)的癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病為任何累及中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)或被其累及的疾病或病癥。此神經(jīng)疾病可為變性或非變性疾病。變性神經(jīng)疾病用于指中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的任何細(xì)胞的變性。中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞類型包括但不限于神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)元類型包括但不限于背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、兩極神經(jīng)細(xì)胞、錐體細(xì)胞、脊髓運(yùn)動(dòng)細(xì)胞和浦肯野細(xì)胞。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的類型包括但不限于少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、許旺氏細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞。另外，神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的變性包括細(xì)胞代謝活動(dòng)的完全停止(細(xì)胞死亡)或部分停止。這種停止在本質(zhì)上可為凋亡，即編程性細(xì)胞死亡，或者變性在本質(zhì)上可為壞死，諸如對(duì)細(xì)胞的毒性或生物學(xué)損害引起的。神經(jīng)變性疾病的實(shí)例包括但不限于阿爾茨海默氏病、混合型癡呆、帕金森氏病、彌漫性雷維小體癡呆、多系統(tǒng)萎縮癥、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、進(jìn)行性核上性麻痹和皮克病。非變性神經(jīng)疾病的實(shí)例包括但不限于血管性癡呆、多發(fā)性硬化癥、癲癇、多神經(jīng)病、正常壓力性腦積水、精神病、酒精中毒、嚴(yán)重抑郁癥、副腫瘤性腦病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)病、硬膜外血腫、水痘帶狀皰疹性神經(jīng)炎和脊肌萎縮癥。在此應(yīng)用時(shí)，術(shù)語“對(duì)象”或者“患者”可以互換使用，是要指一種動(dòng)物，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，包括人。另外，“患者”還要包括一種對(duì)象，其表現(xiàn)出癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的癥狀。可在遺傳上、表型上和/或行為上表達(dá)這些癥狀。例如，懷疑有癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的對(duì)象可具有基因突變或紊亂，它在遺傳學(xué)上與癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病相關(guān)。類似地，患者可具有異常水平的特定蛋白或其它化合物，所述蛋白或化合物是神經(jīng)疾病的指標(biāo)，或者經(jīng)常用于此病的診斷。同樣，患者可表現(xiàn)出確定的行為癥狀，這些癥狀是神經(jīng)疾病的指標(biāo)，或者經(jīng)常用于此病的診斷。本發(fā)明的方法包括獲得患者的標(biāo)本。此標(biāo)本應(yīng)當(dāng)包括腦脊液(CSF)。因此，此標(biāo)本可包括附加的成分或者添加物，它們是自然存在的或是合成的，或者此標(biāo)本可為純CSF。在獲得CSF后，可對(duì)其進(jìn)行處理。這類處理的實(shí)例包括但不限于濃縮、稀釋、提純或混和所獲得的CSF。在此使用時(shí)，“獲得”可為擁有標(biāo)本的任何方法。因此，獲得用于指從患者采集和/或取出標(biāo)本。獲得患者標(biāo)本的實(shí)例是很明顯的，包括但不限于腰穿術(shù)(腰椎穿刺)。另外，“獲得”還用于指從先前擁有標(biāo)本的另一個(gè)人處接收該標(biāo)本。本發(fā)明包括測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平。在此應(yīng)用時(shí)，細(xì)胞粘附分子是影響細(xì)胞與其它細(xì)胞之間粘附性的分子，即細(xì)胞-細(xì)胞粘附分子(CAM)，或者是影響細(xì)胞與底物或表面之間粘附性的分子，即細(xì)胞-底物粘附分子(SAM)。主要的細(xì)胞粘附分子種類包括整聯(lián)蛋白、選擇蛋白、鈣粘著蛋白和免疫球蛋白(Ig)超家族的成員。每類細(xì)胞粘附分子包括幾個(gè)本領(lǐng)域已廣泛公認(rèn)熟知的成員。另外，可通過幾種方法中的一種來鑒定新的細(xì)胞粘附分子，這幾種方法包括但不限于，與已知可破壞細(xì)胞粘附的抗體的相互作用、免疫沉淀、從表達(dá)文庫(kù)克隆推定的CAM或SAM、結(jié)合或競(jìng)爭(zhēng)分析方法、推定細(xì)胞粘附分子與微球體的綴合、附著分析、離心力測(cè)定和轉(zhuǎn)染試驗(yàn)。已知的細(xì)胞粘附分子的實(shí)例包括但不限于E-鈣粘著蛋白、P-鈣粘著蛋白、N-鈣粘著蛋白、B-鈣粘著蛋白、R-鈣粘著蛋白、EP-鈣粘著蛋白、OB-鈣粘著蛋白、M-鈣粘著蛋白、鈣粘著蛋白-5、鈣粘著蛋白-12、原鈣粘著蛋白4 3、橋粒膠粘蛋白1、橋粒芯糖蛋白1、α1β1整聯(lián)蛋白、α2β1整聯(lián)蛋白、α3β1整聯(lián)蛋白、α4β1整聯(lián)蛋白、α5β1整聯(lián)蛋白、αvβ1整聯(lián)蛋白、αlβ2整聯(lián)蛋白、αMβ2整聯(lián)蛋白、αVβ3整聯(lián)蛋白、P-選擇蛋白、E-選擇蛋白、細(xì)胞間粘附分子1(ICAM1)、ICAM 2、神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)、血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子(PECAM)、血管粘附分子(VCAM)、癌胚粘附分子和L1。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，測(cè)定L1的水平，以診斷癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病。在另一個(gè)實(shí)施方式中，測(cè)定神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)的水平，以診斷癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病。本發(fā)明包括測(cè)定所有NCAM同種型，這些NCAM同種型包括但不限于NCAM 105-115、NCAM-120、NCAM-140和NCAM-180。在再一個(gè)實(shí)施方式中，測(cè)定L1和NCAM兩者的水平，以診斷癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病。在本發(fā)明的方法中測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平。在此應(yīng)用時(shí)，“測(cè)定水平”用于指進(jìn)行定量檢測(cè)，以顯示被測(cè)定的特定細(xì)胞粘附分子的量。這種量可為原始數(shù)字，絕對(duì)量或相對(duì)量，細(xì)胞粘附分子的測(cè)定量和另一測(cè)定值之間的比率，這種測(cè)定值諸如內(nèi)標(biāo)或者另一種細(xì)胞粘附分子或該檢測(cè)標(biāo)本中的其它成分。另外，原始數(shù)據(jù)可用于更復(fù)雜的算法，以得出“測(cè)定水平”。而且，測(cè)定水平可為數(shù)據(jù)點(diǎn)的平均數(shù)(算術(shù)平均、中位數(shù)、眾數(shù))或者測(cè)定水平可得自n＝1。本發(fā)明的方法需要對(duì)測(cè)定水平與另一組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。這一另外的數(shù)據(jù)組通常來自至少一名“正?！眰€(gè)體，其不表現(xiàn)出此處所述的癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病任何方面的癥狀或者懷疑有其任何方面。這種另外的數(shù)據(jù)組可來自現(xiàn)在懷疑有癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的相同個(gè)體，或者所述另外的數(shù)據(jù)可來自不同的正常個(gè)體。這種另外的數(shù)據(jù)可代表一名正常個(gè)體或者兩名或多名正常個(gè)體的群體測(cè)定水平的平均數(shù)(算術(shù)平均、中位數(shù)、眾數(shù))。為了應(yīng)用此處所述方法對(duì)懷疑有癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的對(duì)象進(jìn)行診斷，細(xì)胞粘附分子的測(cè)定水平必須大于正常個(gè)體中所見的水平。本發(fā)明還提供了監(jiān)測(cè)患者癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病進(jìn)展的方法，此患者表現(xiàn)出這種疾病的癥狀，或者懷疑有這種疾病。此方法包括獲得癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病疑似患者的至少兩份標(biāo)本，測(cè)定所述至少兩份標(biāo)本中每一份中的至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，該細(xì)胞粘附分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)。這些測(cè)定水平彼此相互比較，至少兩個(gè)測(cè)定水平之間的任何差異將提示癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的進(jìn)展。在此應(yīng)用時(shí)，“進(jìn)展”用于指癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀的惡化，或者它可指癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀的減輕。換句話說，“進(jìn)展”是暫時(shí)性的，因此與患者癥狀的改善以及患者癥狀的惡化或維持結(jié)合使用。因此，這里所述監(jiān)測(cè)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病進(jìn)展的方法可用于監(jiān)測(cè)特定治療方案的效果，所設(shè)計(jì)的這種方案是用于對(duì)抗癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的癥狀或原因，或者所述監(jiān)測(cè)方法也可用于監(jiān)測(cè)未接受治療的患者的進(jìn)展。監(jiān)測(cè)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的進(jìn)展包括比較至少兩份獲得的標(biāo)本中細(xì)胞粘附分子的測(cè)定水平。細(xì)胞粘附分子測(cè)定水平間沒有差異，這提示患者的情況或癥狀自上次測(cè)定以來可能沒有惡化。但是，細(xì)胞粘附分子測(cè)定水平隨時(shí)間增長(zhǎng)提示患者的情況或癥狀可能隨時(shí)間而惡化?；蛘?，細(xì)胞粘附分子測(cè)定水平隨時(shí)間下降提示患者的情況或癥狀可能隨時(shí)間而改善?？赏ㄟ^各種方法進(jìn)行測(cè)定水平的比較，這些方法包括但不限于算術(shù)減法、產(chǎn)生測(cè)定水平的比率或者將測(cè)定水平用于更復(fù)雜的算法。比較方法僅僅需要突出顯示測(cè)定水平之間存在的任何差異。在至少一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及單克隆抗體NCAM 14.2的應(yīng)用，此抗體是針對(duì)人NCAM的抗體，它可用于本發(fā)明的任何方法。NCAM 14.2抗體可識(shí)別NCAM所有已知的同種型，包括NCAM 105-115、NCAM-120、NCAM-140、NCAM-180，以及含α2，8-聚唾液酸的NCAM(PSA-NCAM)的多肽。在至少一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及單克隆抗體neuro 4.1的應(yīng)用，它是針對(duì)人L1的抗體，可用于本發(fā)明的任何方法。neuro 4.1抗體可識(shí)別L1及其普通蛋白水解切割的片段。NCAM 14.2和/或neuro 4.1抗體可為完整的單克隆抗體或其功能片段?？贵w的功能片段包括該抗體能夠與靶抗原結(jié)合的任意部分。在此應(yīng)用時(shí)，“抗體片段”用于指功能片段?？贵w片段特別包括F(ab′)2、Fab、Fab′和Fv片段。這些片段可產(chǎn)生于任何類型的抗體，但通常由IgG或IgM制得?？赏ㄟ^常規(guī)的重組DNA技術(shù)，或者應(yīng)用經(jīng)典的方法通過用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶進(jìn)行蛋白水解消化，來生產(chǎn)它們。參見Current Protocols In Immunology，Chapter2，Coligan et al.，eds.，(John Wiley & Sons 1991-92)。在此應(yīng)用時(shí)，NCAM 14.2抗體為抗體或其片段，它具有完整單克隆NCAM 14.2抗體的至少一個(gè)VL和至少一個(gè)VH鏈。換句話說，“NCAM 14.2抗體”包括完整抗體及其片段，而且如果多特異性或多價(jià)抗體的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)包括全長(zhǎng)NCAM 14.2抗體的VL和VH鏈，則“NCAM14.2抗體”還包括這些多特異性和多價(jià)抗體。在此應(yīng)用時(shí)，neuro 4.1抗體為抗體或其片段，它具有完整單克隆neuro 4.1抗體的至少一個(gè)VL和至少一個(gè)VH鏈。換句話說，“neuro 4.1抗體”包括完整抗體及其片段，而且如果多特異性或多價(jià)抗體的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)包括全長(zhǎng)neuro 4.1抗體的VL和VH鏈，則“neuro 4.1抗體”還包括這些多特異性和多價(jià)抗體?！岸嗵禺愋浴笔侵缚贵w或其片段可同時(shí)與至少兩個(gè)不同的靶結(jié)合，這些靶具有兩種不同的結(jié)構(gòu)。 “多價(jià)”是指抗體或其片段可同時(shí)與一個(gè)以上的靶結(jié)合，這些靶可具有相同或不同的結(jié)構(gòu)。因此，例如本發(fā)明的抗體包括可同時(shí)結(jié)合NCAM和L1的抗體或其片段。F(ab′)2片段典型約為110kDa(IgG)或約為150kDa(IgM)，而且含有兩個(gè)抗原結(jié)合區(qū)，它們?cè)诮g鏈區(qū)通過二硫鍵結(jié)合。幾乎(如果不是所有)所有Fc片段不具有這些抗原結(jié)合位點(diǎn)。Fab′片段典型約為55kDa(IgG)或約為75kDa(IgM)，而且例如可通過還原F(ab′)2片段的二硫鍵而形成。所得游離巰基可用于使Fab′片段與其它分子結(jié)合，諸如檢測(cè)試劑(例如酶)，其它Fab′或Fab片段。Fab片段是單價(jià)的，通常約為50kDa(任何來源)。Fab片段包括輕鏈(L)和重鏈(H)，抗體的抗原結(jié)合部分的可變區(qū)(分別為VL和VH)和恒定區(qū)(分別為CL和CH)。分子內(nèi)二硫鍵聯(lián)接H和L部分。FV片段典型約為25kDa(不管來源如何)，而且含有輕鏈和重鏈的可變區(qū)(分別為VL和VH)。通常僅僅通過非共價(jià)相互作用將VL和VH鏈保持在一起，因此它們?nèi)菀追蛛x。但是VL和VH鏈具有小尺寸的優(yōu)勢(shì)，并且它們能夠保持與較大的Fab片段相似(如果不是相同的)的結(jié)合特性。因此，已經(jīng)開發(fā)了交聯(lián)VL和VH鏈的方法，例如使用戊二醛(或其它化學(xué)交聯(lián)劑)、分子間二硫鍵(通過引入半胱氨酸)和肽接頭。所得FV現(xiàn)為單鏈FV片段(即SCFV)?；蛘撸赏ㄟ^重組方法產(chǎn)生SCFV，通過混合和配對(duì)不同抗體來源的可變鏈而產(chǎn)生具有新特異性的FV。在典型方法中，將提供重組載體，它包括適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)元件，驅(qū)動(dòng)盒式區(qū)的表達(dá)。盒式區(qū)將含有編碼肽接頭的DNA，在接頭的5’和3’末端均具有便利的位點(diǎn)供產(chǎn)生融合蛋白?？稍谳d體中克隆編碼感興趣可變區(qū)的DNA，以與接頭形成融合蛋白，這樣產(chǎn)生SCFV。在一個(gè)實(shí)施方式中，可將編碼兩個(gè)FV的DNA與編碼接頭的DNA進(jìn)行連接，而且可將所得三聯(lián)融合體直接連接到常規(guī)表達(dá)載體中。根據(jù)所選擇的載體，可在原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中表達(dá)通過這些方法中任何一種而產(chǎn)生的SCFVDNA。這里提出的實(shí)施例是要舉例說明本發(fā)明的一些實(shí)施方式，而不是要對(duì)權(quán)利要求的范圍進(jìn)行任何限制。
實(shí)施例實(shí)施例1-患者和腦脊液的采集本研究中對(duì)不同神經(jīng)疾病的218患者進(jìn)行檢查，這些疾病包括阿爾茨海默氏病(AD)、血管性癡呆(VD)、混合型癡呆(MT)、彌漫性雷維小體癡呆(DLBD)、多系統(tǒng)萎縮癥(MSA)、帕金森氏病(PD)、重度和輕度抑郁癥、多發(fā)性硬化癥(MS)、癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(ALS)、多神經(jīng)病(PNP)、進(jìn)行性核上性麻痹(PSP)、皮克病、腦積水、精神分裂癥、偏執(zhí)狂、硬膜外血腫、頸骨軟骨病、帶狀皰疹感染、脊肌萎縮癥和副腫瘤性腦病。另外，還對(duì)沒有任何經(jīng)證實(shí)的神經(jīng)疾病或神經(jīng)精神疾病的正常對(duì)照進(jìn)行研究。按照已公布的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床診斷阿爾茨海默氏病和混合型癡呆1、血管性癡呆16、多發(fā)性硬化癥17、多系統(tǒng)萎縮癥18、帕金森氏病19、彌漫性雷維小體癡呆20，或者按照一般神經(jīng)病學(xué)醫(yī)療實(shí)踐進(jìn)行診斷，例如癲癇、肌萎縮性側(cè)索硬化癥或多神經(jīng)病。通過標(biāo)準(zhǔn)臨床規(guī)程診斷癡呆并通過簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查(MMSE)21評(píng)分確定其程度。評(píng)分30至27被判定為無癡呆，評(píng)分26至20被判定為輕度癡呆，評(píng)分為19至10被判定為中度癡呆，評(píng)分為9至0被判定為重度癡呆。對(duì)正常對(duì)照進(jìn)行腰穿術(shù)采集腦脊液(CSF)用于診斷，例如排除蛛網(wǎng)膜下腔出血，并且表明沒有中樞神經(jīng)系統(tǒng)或周圍神經(jīng)系統(tǒng)任何疾病的征象，同時(shí)蛋白水平、白蛋白商、細(xì)胞計(jì)數(shù)、寡克隆帶、免疫球蛋白、葡萄糖、乳酸、溶菌酶、神經(jīng)元特異性烯醇化酶和銅無異常。在L4和L5之間通過腰穿采集CSF。在穿刺前患者仰臥2小時(shí)。將1ml CSF采集在聚丙烯管中，立即冷凍，并且在進(jìn)行生化分析之前將其保存在-80℃下。按照赫爾辛基宣言，在腰穿前獲得患者的知情同意，而且該研究得到漢堡市倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。實(shí)施例2-測(cè)定L1和NCAM水平按照下面所述我們研發(fā)并優(yōu)化了一種靈敏的捕捉ELISA分別將針對(duì)L1、NCAM或PSA的純化單克隆“捕捉”抗體(10μg/ml)neuro4.1.1.3.3、14.2或735移液至96孔微量滴定板(NUNC Immuno MaxisorpFB，Roskilde，丹麥)的每個(gè)孔中，并在4℃下孵育過夜。然后用pH7.4含0.05％Tween 20的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)將滴定板沖洗5遍，并于37℃下用在pH7.4的PBS中的5％脫脂奶粉溶液(Fluka，Deisenhofen，德國(guó))封閉1.5小時(shí)。蛋白標(biāo)準(zhǔn)為人L1-Fc(2至64ng/ml)、人NCAM-Fc(9至300ng/ml)和小鼠PSA-NCAM(1至50ng/ml)，并以連續(xù)2倍稀釋由冷凍原液新鮮制備用于每個(gè)試驗(yàn)。然后在每個(gè)孔中裝填標(biāo)準(zhǔn)或CSF試驗(yàn)樣品(對(duì)于L1、NCAM或PSA分別為未稀釋、1∶8稀釋或者1∶15稀釋)，并在室溫下孵育1.5小時(shí)。在每個(gè)孔中裝填“檢測(cè)”抗體(1.5μg/ml)(如果為L(zhǎng)1，則為多克隆抗人L1；或者為多克隆抗人NCAM 3731，以檢測(cè)NCAM和PSA-NCAM)，并在室溫下孵育20小時(shí)。沖洗后，將過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體(0.16μg/ml)加入每個(gè)孔中，在室溫下孵育1.5小時(shí)。加入ABTS(Roche Diagnostics，Mannheim，德國(guó))，以進(jìn)行比色檢測(cè)。用1.25％氟化鈉停止酶反應(yīng)，并在405nm下測(cè)定吸光度的值。采用盲法對(duì)每份CSF標(biāo)本檢測(cè)三次。每個(gè)微量滴定板上都包括對(duì)照系列的標(biāo)準(zhǔn)蛋白(L1-Fc、NCAM-Fc和PSA-NCAM)。所有CSF標(biāo)本均檢測(cè)每種抗原。此ELISA中所用的捕捉抗體為單克隆抗人L1抗體neuro4.1.1.3、單克隆抗人NCAM抗體NCAM 14.2，以及多克隆抗人NCAM抗體3731，它們是由BD Technologies，Research Triangle Park，NorthCarolina，USA提供的。在兔中針對(duì)人L1-Fc制備多克隆抗人L1抗體(Lab As Ltd，Tartu，愛沙尼亞)。通過在人IgG瓊脂糖柱上吸收，從兔血清中分離抗Fc抗體22。按照先前所述23，24制備人L1-Fc蛋白和人NCAM-Fc蛋白。Dr.Rita Gerardy-Schahn(Medizinische Hochschule，Hannover，德國(guó))贈(zèng)予了抗α2，8-聚唾液酸(PSA)的小鼠單克隆抗體73525。應(yīng)用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的TE671細(xì)胞系制備鼠的PSA-NCAM-Fc26，此細(xì)胞系由Dr.G.Rougon提供(Laboratoire de Genetique et Physiologiedu Developement，CNRS，Marseille，法國(guó))。過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG抗體來自Dianova(漢堡，德國(guó))。實(shí)施例3-統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，在不同組間進(jìn)行比較。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的水平設(shè)定為p＜0.05。應(yīng)用Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)確認(rèn)癡呆/非癡呆和神經(jīng)變性/非神經(jīng)變性組CSF參數(shù)的正態(tài)分布。通過Student’s t檢驗(yàn)分析獨(dú)立組的非連續(xù)變量的組間差異。通過Pearson積矩相關(guān)分析相關(guān)性。應(yīng)用以年齡作為共變量的ANOVA探究值受到年齡特異性影響的程度。應(yīng)用Scheff é檢驗(yàn)進(jìn)行此后的分析。另外，我們通過多重回歸分析估計(jì)癡呆的存在、神經(jīng)變性、性別和年齡對(duì)L1、NCAM和聚唾液酸的影響，此分析包括測(cè)定自變量的偏相關(guān)。結(jié)果表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。
結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與正常對(duì)照組(12.2±0.6ng/ml，n＝46)比較，阿爾茨海默氏病(AD)患者腦脊液(CSF)中L1的平均水平(18.2±0.7ng/ml，n＝76)升高(p＜0.0001)(附圖1)。在附圖1A中，每條水平線代表L1濃度的平均值。附圖1B描述L1濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(含年齡相關(guān))顯示，與正常對(duì)照組水平比較，AD患者CSF中的L1水平較高(***p＜0.0001)。與正常對(duì)照組比較，血管性癡呆(VD)(19.6±2.7ng/ml，n＝9)和混合型癡呆(MT)(17.8±1.8ng/ml，n＝8)患者的L1水平也升高(分別為p＜0.01和p＜0.05)。發(fā)現(xiàn)這些組CSF中L1水平的升高與年齡和性別無關(guān)。其它組多系統(tǒng)萎縮癥(n＝4)、帕金森氏病(n＝6)、彌漫性雷維小體癡呆(n＝4)、癲癇(n＝15)、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(n＝7)、多神經(jīng)病(n＝10)、多發(fā)性硬化癥(n＝9)，它們與正常對(duì)照組比較沒有顯示出任何差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與正常對(duì)照組(551.3±33.3ng/ml，n＝46)比較，AD患者CSF中NCAM平均水平(845.4±39.7ng/ml，n＝76)升高(p＜0.0001)。而且，與正常對(duì)照組比較，血管性癡呆(852.1±146.2，n＝9)和混合型癡呆(937.5±177.4，n＝8)患者的NCAM水平較高(p＜0.05)(附圖2)。在附圖2A中，每條水平線代表NCAM濃度的均值。附圖2B描述NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。NCAM濃度與性別無關(guān)，但與年齡相關(guān)。當(dāng)對(duì)年齡作為共變量進(jìn)行校正時(shí)，AD患者中較高的NCAM濃度的關(guān)聯(lián)性仍是顯著的(p＜0.05)。但是，對(duì)年齡進(jìn)行校正，血管性癡呆(VD)和混合型癡呆(MT)患者與正常對(duì)照組比較時(shí)，差異不再顯著。與正常對(duì)照組比較，多發(fā)性硬化癥患者CSF中的NCAM水平(342.2±16.7ng/ml，n＝9)下降(p＜0.05)，而且進(jìn)行年齡校正后，差異仍然顯著。CSF中PSA-NCAM水平在各組間沒有差異(附圖3)。在附圖3A中，每條水平線代表PSA-NCAM濃度的均值。附圖3B描述PSA-NCAM濃度均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。正常對(duì)照組中PSA-NCAM的平均濃度為56.9±2.8ng/ml(n＝46)。為了研究粘附分子水平是否與所有類型癡呆都相關(guān)，在將患者分為癡呆和非癡呆組后，我們進(jìn)一步分析了其L1、NCAM和PSA-NCAM的濃度。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，與非癡呆組(13.2±0.5ng/ml，n＝101)比較，癡呆患者CSF中的L1平均水平(17.2±0.5ng/ml，n＝117)升高(p＜0.000001)(附圖4A)。這些組中的L1濃度與性別無關(guān)，但與年齡相關(guān)(r＝0.28；p＜0.05)。然而，當(dāng)對(duì)年齡作為共變量進(jìn)行校正時(shí)，所有類型癡呆患者中較高L1濃度保持關(guān)聯(lián)性(p＜0.00001)。在癡呆患者組內(nèi)對(duì)年齡進(jìn)行校正時(shí)，簡(jiǎn)易智能狀態(tài)檢查(MMSE)定義的癡呆嚴(yán)重性作為不連續(xù)變量(逐步回歸)，或者將患者分為輕度癡呆患者組(n＝68)、中度癡呆患者組(n＝42)和重度癡呆患者組(n＝7)，所述嚴(yán)重性或分組與L1濃度不相關(guān)(數(shù)據(jù)未給出)。但是，與非癡呆組(603.5±26.0ng/ml，n＝101)比較，NCAM濃度在癡呆患者CSF中(830.3±33.3ng/ml，n＝117)較高(p＜0.00001)(附圖4B)。NCAM濃度與性別無關(guān)，但與年齡相關(guān)(r＝0.37；p＜0.05)。當(dāng)對(duì)年齡作為共變量進(jìn)行校正時(shí)，較高的NCAM濃度與癡呆的關(guān)聯(lián)仍然存在(p＜0.05)。在癡呆患者組內(nèi)對(duì)年齡進(jìn)行校正時(shí)，MMSE定義的癡呆程度作為不連續(xù)變量(逐步回歸)，或者將患者分為輕度癡呆組(n＝71)、中度癡呆組(n＝42)和重度癡呆組(n＝7)，所述程度或分組與NCAM濃度不相關(guān)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析未發(fā)現(xiàn)癡呆患者和非癡呆患者CSF中PSA-NCAM濃度存在任何差異(附圖4C)。無癡呆患者的PSA-NCAM的平均濃度為57.3±1.9ng/ml(n＝102)，而癡呆患者的PSA-NCAM的平均濃度為55.7±1.3ng/ml(n＝116)。PSA-NCAM濃度與性別無關(guān)，而且與年齡不相關(guān)。在大多數(shù)患者中，癡呆與神經(jīng)變性關(guān)聯(lián)。因此，我們探究了中樞神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)變性過程是否可與L1和NCAM濃度的升高相關(guān)。在這個(gè)研究中歸入神經(jīng)變性的疾病組包括AD(n＝76)、混合型癡呆(n＝8)、帕金森氏病(n＝6)、彌漫性雷維小體癡呆(n＝4)、多系統(tǒng)萎縮癥(n＝4)、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(n＝7)、進(jìn)行性核上性麻痹(n＝1)和皮克病(n＝2)。在這個(gè)研究中歸入非神經(jīng)變性的疾病組包括血管性癡呆(n＝9)、多發(fā)性硬化癥(n＝9)、癲癇(n＝15)、多神經(jīng)病(n＝10)、正常壓力腦積水(n＝2)、精神病(n＝3)、酒精中毒(n＝3)、重度抑郁癥(n＝6)、副腫瘤性腦病(n＝1)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)病(n＝1)、硬膜外血腫(n＝2)、水痘帶狀皰疹性神經(jīng)炎(n＝2)、脊肌萎縮癥(n＝1)和正常對(duì)照(n＝46)。與非變性疾病患者組(13.5±0.5ng/ml，n＝110)比較，神經(jīng)變性疾病患者CSF中L1濃度(17.3±0.5ng/ml，n＝108)顯著較高(p＜0.000001)(附圖5A)。當(dāng)對(duì)年齡進(jìn)行校正時(shí)，這種差異仍然顯著(p＜0.001)。但是，當(dāng)僅是神經(jīng)變性疾病患者與無癡呆的非變性疾病患者的組比較時(shí)，此差異不再顯著(數(shù)據(jù)未給出)。與包括正常對(duì)照的非變性疾病患者(606.9±26.3ng/ml，n＝110)比較，神經(jīng)變性疾病患者CSF中NCAM水平(837.8±33.1ng/ml，n＝108)較高(p＜0.000001)(附圖5B)。當(dāng)對(duì)年齡進(jìn)行校正時(shí)，這種差異仍然顯著(p＜0.05)。如對(duì)L1所示，患有神經(jīng)變性疾病的非癡呆患者和患有非變性疾病的非癡呆患者之間的NCAM值沒有差異(數(shù)據(jù)未給出)。神經(jīng)變性疾病患者PSA-NCAM的平均濃度(57.3±1.4ng/ml)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上與包括對(duì)照的非變性疾病患者(55.8±1.9ng/ml)沒有差異(附圖5C)。另外，我們還進(jìn)行了逐步多元回歸分析，以L1作為因變量，年齡、性別、癡呆和神經(jīng)變性病因作為自變量。此逐步分析證實(shí)癡呆(β0.175，相關(guān)0.30)和神經(jīng)變性(β0.165，相關(guān)0.29)對(duì)L1水平具有顯著影響(數(shù)據(jù)未給出)。但是，此分析也表明年齡(β0.085，相關(guān)0.26)和性別(β-0.01，相關(guān)0.05)對(duì)L1水平?jīng)]有顯著影響(數(shù)據(jù)未給出)。偏相關(guān)顯示癡呆(β0.14，p＝0.049)和神經(jīng)變性(β0.14，p＝0.047)對(duì)L1的影響幾乎相等，而年齡(β0.07，p＝0.34)和性別(β-0.01，相關(guān)0.05，p＝0.9)對(duì)其無影響(數(shù)據(jù)未給出)。對(duì)NCAM的逐步多元回歸分析證實(shí)年齡(β0.23，相關(guān)0.35)和神經(jīng)變性(β0.18，相關(guān)0.33)對(duì)其具有顯著影響(數(shù)據(jù)未給出)。但是，這種逐步分析揭示癡呆(β0.112，相關(guān)0.30)和性別(β-0.07，相關(guān)0.01)對(duì)NCAM水平無影響(數(shù)據(jù)未給出)。偏相關(guān)表明年齡(β0.21，p＝0.004)和神經(jīng)變性(β0.17，p＝0.02)對(duì)NCAM的影響比癡呆(β0.10，p＝0.18)和性別(β-0.07，p＝0.32)的影響更大(數(shù)據(jù)未給出)。逐步多元回歸分析未發(fā)現(xiàn)年齡、性別、癡呆或神經(jīng)變性對(duì)PSA-NCAM水平具有任何影響(數(shù)據(jù)未給出)。實(shí)施例4-NCAM 14.2抗體的制備Leu19為一種抗NCAM單克隆抗體(Becton DickinsonAdvanced Cellular Biology，San Jose，Calif.)，應(yīng)用它制備免疫親和柱。通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，應(yīng)用這種Leul9親和柱純化來自成人腦的NCAM。應(yīng)用制備單克隆抗體的常規(guī)技術(shù)，用這種免疫親和純化的NCAM對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，然后純化其脾細(xì)胞并與鼠骨髓瘤細(xì)胞融合。在ELISA法中篩選所得雜交瘤與NCAM的反應(yīng)性，并用代表NCAM的各種不同免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的合成肽進(jìn)行再篩選。根據(jù)其與免疫原的強(qiáng)烈反應(yīng)性，選擇產(chǎn)生NCAM 14.2的雜交瘤，以進(jìn)一步表征。NCAM 14.2抗體描述于Lanier，L.L.，et al.，J.Immunology，1464421-4426(1991)，此文獻(xiàn)在此收錄為參考文獻(xiàn)。實(shí)施例5-neuro 41抗體的制備應(yīng)用制備單克隆抗體的常規(guī)技術(shù)，用粗制人腦提取物對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，然后純化其脾細(xì)胞并與鼠骨髓瘤細(xì)胞融合。在ELISA法中篩選所得雜交瘤與L1的反應(yīng)性，并用代表L1的各種不同免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的合成肽進(jìn)行再篩選。根據(jù)其與免疫原的強(qiáng)烈反應(yīng)性，選擇產(chǎn)生neuro 4.1的雜交瘤，以進(jìn)一步表征。neuro 4.1抗體描述于Poltorak，M.，et al.，Experimental Neurology，131266-272(1995)，此文獻(xiàn)在此收錄為參考文獻(xiàn)。
權(quán)利要求
1.在表現(xiàn)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀并懷疑患有所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的患者中診斷癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的方法，包括a)獲得該患者的標(biāo)本；b)測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，所述分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)；和c)在表現(xiàn)所述癥狀的所述患者中診斷所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病，其中該診斷的根據(jù)是在b)中所述至少一種細(xì)胞粘附分子的測(cè)定水平大于不表現(xiàn)所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病癥狀并且不懷疑有所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的患者中所述至少一種細(xì)胞粘附分子的水平。
2.權(quán)利要求1的方法，其中測(cè)定L1的水平。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自血管性癡呆和混合型癡呆。
4.權(quán)利要求1的方法，其中測(cè)定NCAM的水平。
5.權(quán)利要求4的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自阿爾茨海默氏病(AD)和多發(fā)性硬化癥(MS)。
6.權(quán)利要求1的方法，其中測(cè)定L1和NCAM兩者的水平。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自阿爾茨海默氏病(AD)和多發(fā)性硬化癥(MS)。
8.權(quán)利要求1、4或6的方法，其中所述測(cè)定所述NCAM水平包括NCAM 14.2抗體。
9.權(quán)利要求1、2或6的方法，其中所述測(cè)定L1水平包括neuro 4.1抗體。
10.在診斷患有癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的患者中監(jiān)測(cè)所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的進(jìn)展的方法，包括a)獲得該患者的第一份標(biāo)本；b)測(cè)定所述第一份標(biāo)本中至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，所述分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)；c)獲得該患者的第二份標(biāo)本；和d)測(cè)定所述第二份標(biāo)本中至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，所述分子選自L1和神經(jīng)細(xì)胞粘附分子(NCAM)；和e)將b)中的測(cè)定水平與d)中的測(cè)定水平進(jìn)行比較，顯示所述測(cè)定水平的差異；其中所述差異表明該患者所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的進(jìn)展。
11.權(quán)利要求10的方法，其中測(cè)定L1的水平。
12.權(quán)利要求11的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自血管性癡呆和混合型癡呆。
13.權(quán)利要求10的方法，其中測(cè)定NCAM的水平。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自阿爾茨海默氏病(AD)和多發(fā)性硬化癥(MS)。
15.權(quán)利要求10的方法，其中測(cè)定L1和NCAM兩者的水平。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病選自阿爾茨海默氏病(AD)和多發(fā)性硬化癥(MS)。
17.權(quán)利要求10、13或15的方法，其中所述測(cè)定NCAM水平包括NCAM 14.2抗體。
18.權(quán)利要求10、11或15的方法，其中所述測(cè)定L1水平包括neuro4.1抗體。
全文摘要
本發(fā)明涉及對(duì)癡呆相關(guān)神經(jīng)疾病的可疑患者，通過測(cè)定至少一種細(xì)胞粘附分子的水平，而診斷該病和監(jiān)測(cè)該病進(jìn)展的方法。本發(fā)明還涉及針對(duì)神經(jīng)細(xì)胞粘附分子的抗體。
文檔編號(hào)G01N33/567GK1688248SQ03824558
公開日2005年10月26日 申請(qǐng)日期2003年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月22日
發(fā)明者H·斯特里卡羅瓦, R·克里尼, J·亨佩里, C·布曼, T·穆勒－湯姆森, M·沙奇納 申請(qǐng)人:貝克頓·迪金森公司