專利名稱：：一種抗重金屬鉛的放線菌新種及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種放線菌，特別涉及一種抗重金屬鉛的放線菌新種，該菌種屬于鏈霉菌屬，應(yīng)用于重金屬污染環(huán)境的生物修復(fù)。
背景技術(shù)：
：土壤是地球生態(tài)環(huán)境的重要組成部分，是人類賴以生存的重要不可再生資源之一，但是隨著人類經(jīng)濟社會的發(fā)展，尤其是工礦業(yè)對于自然界礦產(chǎn)資源的大量開發(fā)和利用，所形成的礦業(yè)廢棄地高濃度重金屬污染物是重要的環(huán)境污染物之一，加劇了土壤環(huán)境日益惡化。目前用于重金屬治理的方法主要有傳統(tǒng)的物理化學法和生物修復(fù)方法。生物修復(fù)法是利用生物的代謝機制吸收、沉淀、降解或氧化還原一定濃度的有毒有害物，因此生物修復(fù)對低濃度的污染物較為有效，此外生物修復(fù)投資較少，不需要昂貴的設(shè)備，可直接進行原位修復(fù)，且不會造成二次污染。因此生物修復(fù)法越來越受到各國研究者的重視。放線菌發(fā)達的絲狀菌體對重金屬的吸附與真菌尤其是霉菌有著相似的效果。尤其值得一提的是，放線菌能產(chǎn)多種次生代謝產(chǎn)物和多種胞外胞內(nèi)酶。因而放線菌在重金屬的微生物修復(fù)中具有很大的潛在應(yīng)用價值。已有的研究報道表明一些放線菌對重金屬具有一定的抗性。Geoffrey等篩選到CHR3和CHR28兩株抗Hg鏈霉菌，DNA雜交實驗證實它們和已知抗Hg鏈霉菌Sfr印tomyces//W&ra1326同源性很高。Jacques等從銅礦廠等地分離到51株對六價鉻有抗性的放線菌，其中最高抗性達到17mM。但目前還沒有有關(guān)抗鉛鏈霉菌方面的報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明解決的問題在于提供一種放線菌新種，該菌種可應(yīng)用于污染環(huán)境的生物修復(fù)。本發(fā)明采取如下的技術(shù)方案實現(xiàn)一種放線菌新種，該菌種屬于鏈霉菌屬，命名為抗鉛鏈霉菌(5^ep/o附少cas//wmZj/m^fe"ssp.nov.);該菌種保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC);保藏號為CCTCCM209033。所述新種的形態(tài)及生理生化特征a、具有能夠分化為柔曲或螺旋孢子鏈的氣生菌絲、基內(nèi)菌絲；菌絲分枝發(fā)達、無橫隔、不斷裂，孢子表面光滑；b、在無機鹽淀粉瓊脂、甘油天門冬酰胺瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、高氏一號合成瓊脂或貝奈特瓊脂培養(yǎng)基上有可溶性色素產(chǎn)生；c、能利用L-阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、D-山梨糖、D-棉子糖、肌醇或甘油作為唯一碳源，不能利用海藻糖或D-核糖作為唯一碳源；不能利用L-酪氨酸或L-苯丙氨酸作為唯一氮源；能降解黃嘌呤，不能降解纖維素；牛奶固化、牛奶胨化、H2S產(chǎn)生或硝酸鹽還原作用陽性；能在45。C或pH12的條件下生長，不能在含8%NaCl的條件下生長。所述新種的16SrDNA序列如SEQIDNO.l所示。所述新種應(yīng)用于重金屬鉛污染環(huán)境的生物修復(fù)。一種分離或培養(yǎng)所述菌種的培養(yǎng)基，其培養(yǎng)基配方可溶性淀粉20.0g,KNO31.0g，MgS04*7H200.5g，F(xiàn)eS04*7H20O.Olg，K2HP040.5g，復(fù)合維生素B0.5mg，k2Cr2O7100mg，蒸餾水1000ml，pH7.2，121。C滅菌30min。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細胞壁化學組分分析、生理生化特征、16SrDNA全序列分析、DNA-DNA雜交等鑒定方法對具有較高抗鉛特征的CCTCCM209033菌株進行的系統(tǒng)研究，與已知鏈霉菌的16SrDNA相似性小于99.0%，DNA同源性小于50%，結(jié)果表明該菌種屬于鏈霉菌的一個新種，命名為抗lfi鏈霉菌(S/re/to附y(tǒng)cas//wm6/res/stem:sp.nov.)，豐莫式菌株為CCTCCM209033。模式菌株CCTCCM209033能夠耐受高濃度的Pl^+同時具有好的吸附能力，對重金屬Pb(N03)2的最小抑制濃度(MIC)為4.0mM。對于重金屬Pb"的吸附率在ImM時達到94.5%，而在4.0mM時吸附率為26.0%;適用于污染環(huán)境的生物修復(fù)，尤其是Pl^+污染的環(huán)境生物修復(fù)。保藏說明本發(fā)明所述的鏈霉菌的新種抗鉛鏈霉菌(5^/to附y(tǒng)c"p/wwWms&ferasp.nov.)分別進行了下述保藏1、保藏時間2009年2月25日；保藏單位中國典型培養(yǎng)物保藏中心，CCTCC，地址湖北省武漢市武漢大學；保藏號為CCTCCM209033;分類命名為抗鉛鏈霉菌CCNWHX13-160T、5^eptowycasp/w/wWms/Wmssp.nov.CCNWHX13-160T。2、保藏時間2008年1月10日；保藏單位西北農(nóng)林科技大學微生物研究中心，CCNW;保藏號為CCNWHX13-1601;3、保藏時間2008年3月12日；保藏單位中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心，ACCC;保藏號為ACCC412071;4、保藏時間2008年5月14日；保藏單位芬蘭赫爾辛基大學應(yīng)用微生物保藏中心，HAMBI;保藏號為HAMBI2991T。圖1是CCTCCM209033的菌落特征圖2是CCTCCM209033的形態(tài)觀察光學.顯微鏡圖3是CCTCCM209033的掃描電鏡照片圖；圖4是CCTCCM209033的16SrDNA全序列系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖5是CCTCCM209033對鉛的耐受曲線圖，橫坐標為鉛的濃度，縱坐標為菌株相對存活率；圖6是CCTCCM209033對鉛的吸附曲線圖，橫坐標為鉛的濃度，縱坐標鉛的吸附率。具體實施例方式以下對本發(fā)明作進一步詳細描述，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。1、微生物樣本采集本發(fā)明所述的放線菌新種CCTCCM209033分離自重金屬污染的土壤，該重金屬污染的土壤采自甘肅省徽縣柳林鎮(zhèn)鉛鋅礦區(qū)(106a07'44.3"E，33°54'10.3"N，海拔1049米)。采集表土層土壤樣品約500g，分裝入密封塑料袋中，室溫風干，用18號篩(？L徑lmm)篩去其中顆粒較大的石礫和動植物殘體，收集土樣，4"干燥保藏備用。2、在分離和鑒定過程主要利用的培養(yǎng)基配方分別為-分離和培養(yǎng)鏈霉菌培養(yǎng)基改良高氏一號培養(yǎng)基配方可溶性淀粉20.0g，KNO31.0g，MgS04，7H200.5g，F(xiàn)eS04*7H20O.Olg,K2HP040.5g，復(fù)合維生素B0.5mg，k2Cr207lOOmg，蒸餾水1000ml，pH7.2，12lr滅菌30min。&0207用于抑制雜菌生長。形態(tài)及培養(yǎng)特征觀察培養(yǎng)基高氏一號合成培養(yǎng)基配方可溶性淀粉20.0g,KNO31.0g,MgS04*7H200.5g,FeS04*7H20O.Olg，K2HP040.5g，NaCl0.5g,蒸餾水1000ml,pH7.2-7.4,121。C滅菌30min。甘油-天門冬酰胺培養(yǎng)基(ISP5〉L-天門冬酰胺lg，甘油10g，K2HPO4lg，微量鹽lml，瓊脂20g，蒸餾水lOOOml，pH7.2-7.4。麥芽膏-酵母膏培養(yǎng)基(ISP2):麥芽膏4g，葡萄糖4g,酵母膏10g,瓊脂20g，蒸餾水1000ml，pH7.2-7.4。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基蛋白胨10g,牛肉膏5g，NaC15g，瓊脂20g，蒸餾水1000ml,pH7.2-7.4。燕麥片瓊脂培養(yǎng)基(ISP3):燕麥粥20g(煮沸20min，過濾)；微量鹽lmi;瓊脂粉20g;蒸餾水1000ml;pH7.2-7.4。無機鹽淀粉瓊脂培養(yǎng)基(ISP4):可溶性淀粉10g;K2HP04l.Og;MgS04'7H20LOg;NaCll.Og;(NH4)2S042.0g;CaC032,0g;微量鹽lml;瓊脂粉20g;蒸餾水1000ml;pH7.0-7.4。察氏培養(yǎng)基蔗糖30g;NaN032g;K2HP04lg;MgS04'7H200.5g;KC10.5g;FeS04O.Olg;瓊脂20g;蒸餾水i000ml;pH7,2-7.4。葡萄糖-天門冬酰胺培養(yǎng)基葡萄糖10g;天門冬酰胺0.5g;K2HP040.5g;MgS04'7H200.5g;FeS04lOmg;瓊脂粉20g;蒸餾水1000ml;pH7.2-7.4。Bennett's瓊脂培養(yǎng)基葡萄糖10g;酵母粉lg;牛肉膏l(xiāng)g;N-Z-酪蛋白素2g;瓊脂粉20g;蒸餾水1000ml;pH7.2-7.4。所述的微量鹽FeS04'7H20'0.2g;MnCl2'7H20O.lg;ZnS04'7H20O.lg;蒸餾水lOOml。3、抗重金屬鉛放線菌分離篩選及純化3.1平板稀釋法(DilutionPlatingMethod)初篩1)稱取風干土樣5克，65"熱處理2h;2)加入酵母粉6%(w/v)，SDSO.05%(w/v),pH7.0磷酸緩沖液45mi和20顆玻璃珠；3)置120rpm搖床，40°C，30分鐘；4)靜置，取上清hnl轉(zhuǎn)移至裝有9ml無菌水大試管中漩渦混合器混勻；5)依次梯度稀釋至1(T2、l(T3、10、6)取稀釋液O.lml，涂布于重金屬Pl^+濃度為75mg/L的改良高氏一號瓊脂培養(yǎng)基上，28t培養(yǎng)7、14、21天觀察生長情況；平板培養(yǎng)14天后挑取放線菌單菌落，平板劃線法純化兩次，用接種環(huán)刮取孢子或菌絲體于改良高氏一號斜面，28'C培養(yǎng)至菌體生長旺盛，4'C短期保藏。取孢子或菌絲體置于添加有20%甘油的凍存管中，-20°0長期保藏。3.2液體培養(yǎng)基復(fù)篩1)孢子懸液制備將平板培養(yǎng)純化好的菌株在改良高氏一號平板培養(yǎng)基上劃線28"C培養(yǎng)7d后，用無菌竹簽挑取斜面保藏的放線菌菌株的孢子絲于裝有100ml無菌水的三角瓶中，使孢子最終濃度約為1X109CFU/ml(孢子濃度由血球計數(shù)板計得)；2)按1%(v/v)的接種量接入添加有l(wèi)mM5mM梯度濃度Pb(N03)2的100ml復(fù)篩用液體改良高氏一號培養(yǎng)液中，以未加重金屬Pt^的孢子懸液作為陽性對照，以加入重金屬Pb^未接種孢子懸液改良高氏一號培養(yǎng)液作為陰性對照，觀察生長情況；3)置150rpm搖床，28°C，培養(yǎng)4d;4)5000rpm，15min離心收集菌株。通過平板初篩與液體復(fù)篩得到分離到具有抗鉛能力的放線菌，其模式菌株為CCTCCM209033。4、模式菌株CCTCCM209033的鑒定1)形態(tài)特征鑒定如附圖l-3所示，菌株CCTCCM209033具有可分化為柔曲或螺旋孢子鏈的氣生菌絲或基內(nèi)菌絲，且菌絲分枝發(fā)達、無橫隔、不斷裂。從掃描電鏡圖中可以看出菌株CCTCCM209033氣生與基內(nèi)菌絲發(fā)育良好，分支廣泛，孢子表面光滑，它們與鏈霉菌屬形態(tài)特征相似。根據(jù)基絲、氣絲和可溶性色素的特征將菌株CCTCCM209033初步歸屬于白孢類群。2)在不同鑒定培養(yǎng)基上的形態(tài)特征菌株CCTCCM209033在酵母麥芽浸膏瓊脂，高氏一號合成瓊脂，貝奈特瓊脂培養(yǎng)基上生長良好，基內(nèi)菌絲和氣生菌絲發(fā)育良好；在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基生長較差且無氣生菌絲形成；在無機鹽淀粉瓊脂培養(yǎng)基，甘油天門冬酰胺瓊脂，營養(yǎng)瓊脂，高氏一號合成瓊脂，貝奈特瓊脂培養(yǎng)基上有可溶性色素產(chǎn)生。如表1所示。表1菌株CCTCCM209033在不同培養(yǎng)基上的形態(tài)特征培養(yǎng)基生長情況孢子形成菌落顏色可溶性色素氣生菌絲基內(nèi)菌絲酵母麥芽浸膏瓊脂良好一般白色褐色無燕麥粉瓊脂一般一般'灰白紅褐色無無機鹽淀粉瓊脂一般良好灰色紅褐色褐色甘油天門冬酰胺瓊脂一般一般白色紅褐色褐色蛋白胨酵母浸膏瓊脂一般一般白色淡黃色無營養(yǎng)瓊脂弱無白色淡黃色淺褐色察貝克氏瓊脂一般一般白色黃白色無高氏一號合成瓊脂良好良好黃白紅褐色深褐色貝奈特瓊脂良好一般白色紅褐色褐色3)化學分類研究結(jié)果菌株CCTCCM209033細胞壁含L，L-DAP(磷酸二銨)，甘氨酸，細胞壁類型I(cell-walltype1)。全細胞水解液主要糖為Arabinose,Galactose及少量Glucose,全細胞糖類型A。磷酸類脂組分主要是磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)和磷脂酰肌醇甘露糖(phosphatidylinositolmannosides)，即磷酸類脂類型為PII型(phospholipidtype11)。甲基萘醌類型主要是[MK-9(H6，H8andH4)]，符合典型鏈霉菌醌型。脂肪酸主要由異式十四碳飽和脂肪酸iSo-C14:o(8.53%)，十四碳飽和脂肪酸C14:()(2.91%),異式十五碳飽和脂肪酸iso-C15:()(5.12%)，反異式十五碳飽和脂肪酸anteiso-C15:Q(13.25%)，十五碳飽和脂肪酸C15:0(6.69%),異式十六碳飽和脂肪酸iso-d6:。(18.97%)，十六碳飽和脂肪酸C16:0(20.97%),反異式十七碳飽和脂肪酸anteiso-C17:0(3.21%)等直鏈飽和、不飽和及少量甲基分枝脂肪酸等成分組成如表2所示。由分析結(jié)果可以得出，菌株CCTCCM209033脂肪酸主要由14、15、16、17碳的飽和、異式(iso-)、反異式(anteiso-)構(gòu)型脂肪酸構(gòu)成，其種類與含量和大多數(shù)鏈霉菌脂肪酸的構(gòu)成相符合。菌株CCTCCM209033的細胞(壁)化學組分分析、磷酸類脂分析、甲基萘醌分析和脂肪酸分析結(jié)果表明菌株CCTCCM209033化學分類特征與鏈霉菌屬符合，屬于鏈霉菌屬。表2菌株CCTCCM209033脂肪酸構(gòu)成<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>13:00.2417:0CYCLO0,5814:0ISO8.5317:01.0614:02.9116:0ISO30H0.1115:1ISOG0.0617:010methyl0.0915:1ANTEISOA0.3218:1ISOH0.0515:0ISO5.1216:030H0.1215:0ANTEISO13.2518:0ISO,謹15:1w6c0.28SumInFeature50.5015:06.6918:1w9c0.6214:0ISO30H0.0718:00.1316:1ISOH1.584)生理生化特征研究菌株CCTCCM209033能利用L-阿拉伯糖，鼠李糖，半乳糖，木糖，D-山梨糖，D-棉子糖，肌醇，甘油作為唯一碳源，不能利用海藻糖或D-核糖作為唯一碳源；不能利用L-酪氨酸或L-苯M氨酸作為唯一氮源；能降解黃嘌呤，不能降解纖維素。牛奶固化、牛奶胨化、H2S產(chǎn)生、硝酸鹽還原作用陽性；能在45°C或pH12的條件下生長，不能含8%NaCl的條件下生長。菌株CCTCCM209033和與其相似性最高的模式菌株戸e^tow"awe/"eNBRC12904和msistow;;c訴c^NBRC12814生理生化特征研究結(jié)果表明除了體現(xiàn)出鏈霉菌屬所具有的共同特征外更有意義的是它們之間存在著比較普遍而明顯的生理生化差異，如表3所示;說明CCTCCM209033與>S._psew<iovee2:we/a￡和&my/sto附y(tǒng)"yow是不同的禾中。表3菌株CCTCCM209033與S.psewcfovewezwe/ae和S.ms她myc折cus的生理生化特征比較特征CCTCCM209033<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注"+"為陽性；"一"為陰性;5)16SrDNA全序列分析16SrDNA基因序列在某些位點會以不同的幾率發(fā)生突變，在種、屬等水平表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)和功能的保守性，有"細菌化石"之稱，特別是其進化具有良好的時鐘特性，是生物進化史的計時器。應(yīng)用16SrDNA作為分子指標，可以實現(xiàn)快速、微量、準確、簡便的對微生物進行分類鑒定。將菌株CCTCCM209033的16SrDNAPCR擴增產(chǎn)物送上海英俊生物技術(shù)有限公司全自動測序儀(ABI3730XL)測序，16SrDNA的序列如SEQ.ID.NO.1所示。將測得的16SrDNA全序列提交Blast(GenBank/EMBL/DDBJ)進行多重序列比對，找出已有效發(fā)表的模式菌株序列后用ClustalXversion1.8，neighbour-joining法和TREECON軟件包version1.3b構(gòu)建出以16SrDNA全序列為基礎(chǔ)的系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖，然后使用DNAMANversion5.2.9(LynnonBiosoft,Quebec,Canada)計算菌株間16SrDNA序列的相似性。從菌株CCTCCM209033與鏈霉菌屬已有效發(fā)表種的16SrDNA序列構(gòu)建出的系統(tǒng)發(fā)育樹狀圖，如圖4所示。16SrDNA序列分析顯示菌株CCTCCM209033與分枝中所有菌株的16SrDNA序列相似性介于98.2。/。98.9n/o之間，它與S.;wewfifove"ezt/e/aeNBRC12904和&msz'Wowy"ycwsNBRC12814的相似性最高，分別為98.9%和98.8%，但都低于99%,具有較大的差異性，單獨構(gòu)成一個分支；表明以菌株CCTCCM209033為模式菌株的菌種是鏈霉菌屬內(nèi)的一個新種。6)DNA-DNA同源性分析及G+C%測定結(jié)果選取與菌株CCTCCM209033的16SrDNA序列相似性最高的鏈霉菌屬已發(fā)表有效種iS/r取o/wycas/wgMfiove"ezwe/aeNBRC12904禾口jSre/fo附y(tǒng)casm^tomyc訴cwNBRC12814進行DNA-DNA體外分子雜交實驗，結(jié)果表明CCTCCM209033與5Vreptowyces戸ewcfove"d^/aeNBRC12904和S/re/tomK&sms/Wow^c折c^NBRC12814的DNA同源性分別為49.7%和43.2%，都低于50%，顯著低于分類學上70%的種判定臨界值。同時菌株CCTCCM209033的G+Cmol%值為70.9mol%，符合鏈霉菌屬高GC含量的特點。以上通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細胞壁化學組分分析、生理生化特征、16SrDNA全序列分析、DNA-DNA雜交等鑒定方法對具有較高抗鉛特征的菌株CCTCCM209033進行的系統(tǒng)研究，結(jié)果表明該菌株屬于鏈霉菌的一個新種，命名為抗鉛鏈霉菌，S/reptow戸s//ww&Ve由mssp.nov.，模式菌株為CCTCCM209033。現(xiàn)分別保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(保藏號為CCTCCM209033)、西北農(nóng)林科技大學微生物研究中心(保藏號為CCNWHX13-160T)、中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心(保藏號為ACCC41207T)和芬蘭赫爾辛基大學應(yīng)用微生物保藏中心(保藏號為HAMBI2991T)。5、模式菌株CCTCCM209033的抗鉛特性分析5.1供試菌體的培養(yǎng)與收集將菌株CCTCCM209033在改良高氏一號平板培養(yǎng)基上劃線28。C培養(yǎng)7d后，用無菌竹簽挑取孢子絲于裝有100ml無菌水的三角瓶中，使孢子最終濃度約為lX109CFU/ml(孢子濃度由血球計數(shù)板計得)。按1%(v/v)的接種量分別接入加有l(wèi)mM5mM梯度濃度Pb(N03)2的改良高氏一號液體培養(yǎng)基中，置150rpm搖床，28°C，培養(yǎng)4d，離心(5000rpm，15min)收集菌體。5.2菌體生物量隨重金屬Pb^濃度變化的測定將離心收集到的菌體置于105°C烘箱約lh至衡重，分析天平準確稱量；含菌體的離心管全重減去干燥空離心管重量即液體培養(yǎng)后菌體總生物量。液體培養(yǎng)后菌體總生物量的變化反映了隨Pl^濃度變化的菌體的生長情況。5.3重金屬Pb^吸附的測定1)將離心上清液混勻后移入50mL具塞錐形瓶中，力卩5mL硝酸和2ml高氯酸，移入消解爐中于23(TC消解至消化液呈無色或略帶黃色，冷卻后轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中定容，原子分光光度法(fflTACffl180-80)測定樣品中重金屬含量。2)以未加孢子懸液而加入相應(yīng)濃度重金屬PP+的為對照，同樣條件培養(yǎng)后原子吸收法測定對照重金屬離子含量;對照液的重金屬離子含量減去培養(yǎng)液的重金屬離子含量即為菌體吸附的重金屬量。5.4重金屬Pl^+吸附的測定結(jié)果1)隨著培養(yǎng)基中重金屬Pb"濃度的升高，CCTCCM209033菌體總生物量呈下降趨勢，低濃度的鉛對菌體生長影響相對較小，隨著Pb&濃度的升高到2.0mM時孢子萌發(fā)、菌體生長明顯受到抑制，生物量迅速減少，當重金屬Pb&濃度升高到一定值時菌體生物量接近于零且不再有明顯的變化，這時的重金屬Pb&濃度就是其對于CCTCCM209033的最低抑制濃度(MIC)為4.0mM，如圖5所示；與其他微生物相比，菌株CCTCCM209033對于重金屬Pl^+的耐受濃度大大提高。2)菌株CCTCCM209033對于重金屬Pb^+的吸附率如圖6所示，在Pb2+為lmM時達到94.5y。，表明該菌株對于低濃度Pl^+具有非常好的吸附凈化效果，能夠滿足生物凈化的需求，實現(xiàn)土壤凈化。隨著Pl^+濃度升高，菌株生長收到抑制，吸附率逐漸下降，而在最低抑制濃度4.0mM時吸附率任然為26.0%，說明該菌株在耐受高濃度的Pb^同時吸附了相當?shù)腜b2、適用于菌種大批投放的生物治理。以上兩個方面的檢測結(jié)果說明從重金屬污染的土壤分離到的放線菌新種5^印tomyces;/wm6/m^te"ssp.nov.，模式菌株CCTCCM209033能夠耐受高濃度的Pl^+同時具有好的吸附能力，適用于污染環(huán)境的生物修復(fù)，尤其是Pb"污染的環(huán)境生物修復(fù)。核苷酸序列表<110>西北農(nóng)林科技大學<120>—種抗重金屬鉛的放線菌新種及其應(yīng)用<160>1<210>1<211>1429<212>DNA<213>SW/tom_yces//謂6zVesz'他wsp.nov.<400>1gcggcgtgcttacacatgcaagtcgaacgatgaaccacttcggtggggattagtggcgaa60cgggtgagtaacacgtgggcaatctgcccttcactctgggacaagccctggaaacggggt120ctaataccggataacactccctccctcctgggtgggggttgaaagctccggcggtgaagg180atgagcccgcggcctatcagcttgttggtgaggtaatggctcaccaaggcgacgacgggt240agccggcctgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgg300g鄉(xiāng)cagcagtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgcagcgacgccgcgtga360gggatgacggccttcgggttgtaaacctctttcagcagggaagaagcgaaagtgacggta420cctgcagaagaagcgccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtagggcgcaa480gcgttgtccggaattattgggcgtaaagagctcgtaggcggcttgtcacgtcgggtgtga540aagcccggggcttaaccccgggtctgcattcgatacgggctagctagagtgtggtagggg600agatcggaattcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggaggaacaccggtggcg660aaggcggatctctgggccattactgacgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacagga720ttagataccctggtagtccacgccgtaaacggtgggaactaggtgttggcgacattccac780gtcgtcggtgccgcagctaacgcattaagttccccgcctggggagtacggccgcaaggct840aaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcagcggagcatgtggcttaattcgac900gcaacgcgaagaaccttaccaaggcttgacatcgcccggaaagcatcagagatggtgccc960cccttgtggccgggtgacaggtggtgcatggctgtcgtcagctcgtgtcgtg卿tgttg1020ggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgttctgtgttgccagcatgcccttcggggtg1080atggggactcacagg卿ccgccggggtcaactcggaggaaggtggggacgacgtcaagt1140catc3tgccccttatgtcttgggctgcacacgtgctac3atggcsggtacaatgagctgc1200gataccgtgaggtggagcgaatctcaaaaagcctgtctcagttcggattggggtctgcaa1260ctcgaccccatgaagtcggagttgctagtaatcgcagatcagcattgctgcggtgaatac1320gttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacgtcacgaaagtcggtaacacccgaagccg1380gtggccc認ccccttgtggggagggagctgtcgaaggtggactggcgs1，權(quán)利要求1、一種放線菌新種，其特征在于，該菌種屬于鏈霉菌屬，命名為抗鉛鏈霉菌(Streptomycesplumbiresistenssp.nov.)；該菌種保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCCM209033。2、如權(quán)利要求1所述的放線菌新種，其特征在于，該菌種的形態(tài)及生理生化特征a、具有能夠分化為柔曲或螺旋孢子鏈的氣生菌絲、基內(nèi)菌絲；菌絲分枝發(fā)達、無橫隔、不斷裂，孢子表面光滑；b、在無機鹽淀粉瓊脂、甘油天門冬酰胺瓊脂、營養(yǎng)瓊脂、高氏一號合成瓊脂或貝奈特瓊脂培養(yǎng)基上有可溶性色素產(chǎn)生；c、能利用L-阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、D-山梨糖、D-棉子糖、肌醇或甘油作為唯一碳源，不能利用海藻糖或D-核糖作為唯一碳源；不能利用L-酪氨酸或L-苯丙氨酸作為唯一氮源；能降解黃嘌呤，不能降解纖維素；牛奶固化、牛奶胨化、H2S產(chǎn)生或硝酸鹽還原作用陽性；能在45。C或pH12的條件下生長，不能在含8MNaCl的條件下生長。3、如權(quán)利要求1所述的放線菌新種，其特征在于，所述菌種的16SrDNA序列如SEQIDNO.l所示。4、權(quán)利要求l所述的放線菌新種應(yīng)用于重金屬鉛污染環(huán)境的生物修復(fù)。5、一種分離或培養(yǎng)權(quán)利要求1所述菌種的培養(yǎng)基，其特在于，其培養(yǎng)基配方可溶性淀粉20.0g，KNO31.0g，MgS04*7H200.5g，F(xiàn)eS(V7H20O.Olg，K2HP040.5g，復(fù)合維生素B0.5mg，k2Cr207lOOmg，蒸餾水1000ml,pH7.2，121。C滅菌30min。全文摘要本發(fā)明公開了一種抗重金屬鉛的放線菌新種及其應(yīng)用，該菌種屬于鏈霉菌屬，命名為抗鉛鏈霉菌(Streptomycesplumbiresistenssp.nov.)，應(yīng)用于重金屬鉛污染環(huán)境的生物修復(fù)。通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、細胞壁化學組分分析、生理生化特征、16SrDNA全序列分析、DNA-DNA雜交等鑒定方法對具有較高抗鉛特征的菌株CCTCCM209033進行了系統(tǒng)研究，與已知鏈霉菌的16SrDNA相似性小于99.0％，DNA同源性小于50％，結(jié)果表明該菌種屬于鏈霉菌的一個新種。該菌種適用于污染環(huán)境的生物修復(fù)，尤其是Pb²⁺污染的環(huán)境生物修復(fù)。文檔編號B09C1/10GK101597577SQ20091002156公開日2009年12月9日申請日期2009年3月17日優(yōu)先權(quán)日2009年3月17日發(fā)明者楊文權(quán),林雁冰,莉王,郭軍康,韋革宏申請人:西北農(nóng)林科技大學