本發(fā)明涉及分子印跡制備領(lǐng)域，尤其涉及一種用于檢測鏈霉素的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物及制備方法。

背景技術(shù)：

氨基糖苷類抗生素便宜、廣譜抗菌，可預(yù)防動物發(fā)病，并具有促進(jìn)動物生長的作用，在我國廣泛用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，最常使用的氨基糖苷類獸藥包括、慶大霉素、鏈霉素、二氫鏈霉素等。其中鏈霉素具有耳毒性、腎毒性、神經(jīng)肌肉阻斷等毒性，大量使用鏈霉素還容易產(chǎn)生耐藥性。歐盟明確規(guī)定禁止使用鏈霉素作為家畜的生長促進(jìn)劑。為保障人群健康，我國、美國、歐盟均確定了對動物源性食品中鏈霉素獸藥最大允許殘留限量。因此，如何快速準(zhǔn)確地測定食品中鏈霉素獸藥的殘留，對保證食品安全、保障人群健康具有重要意義。

目前用于食品中鏈霉素獸藥殘留的方法有微生物法、酶聯(lián)免疫(elisa)法、色譜法、質(zhì)譜法等。微生物法利用抗生素可以抑制細(xì)菌生長的特點，根據(jù)細(xì)菌生長狀況判斷樣品中是否存在抗生素，簡單，無需復(fù)雜的設(shè)備，但是不能區(qū)分具體的抗生素種類。elisa法屬于免疫分析方法，利用特定的抗體測定某種抗生素，操作簡單，快速，特異性強，但鏈霉素為小分子化合物，其抗體制備困難，且抗體穩(wěn)定性差，對熱、ph、鹽濃度等有嚴(yán)格要求，食品樣品需要經(jīng)過預(yù)處理，去除干擾物后，才能保證elisa檢測的靈敏度和特異性，不宜用于現(xiàn)場直接快速檢測。色譜法及質(zhì)譜法均可測定具體鏈霉素的種類和含量，但需要復(fù)雜的樣品前處理過程和昂貴的儀器設(shè)備，無法用于現(xiàn)場檢測。特別是鏈霉素的結(jié)構(gòu)缺少生色基團，在色譜檢測中需要采用蒸發(fā)光散射檢測器，或進(jìn)行衍生后利用熒光進(jìn)行測定。蒸發(fā)光散射檢測器復(fù)雜昂貴，一般實驗室不配備，且檢測靈敏度低。衍生法靈敏度高，但影響因素眾多，準(zhǔn)確性較低?？梢?，目前迫切需要可快速準(zhǔn)確地測定鏈霉素的新方法，以有效監(jiān)測鏈霉素殘留，保障人群健康。

熒光檢測是常用的快速檢測方法，靈敏度高，設(shè)備簡單，但是鏈霉素屬于無熒光基團的化合物，無法使用熒光直接檢測。此外，熒光測定特異性較低，食品中的很多成分會干擾熒光檢測的準(zhǔn)確性。因此，需要一種可特異性結(jié)合靶抗生素，同時有效減少背景熒光干擾，且可以使用熒光測定不含熒光的氨基糖苷類抗生素的新方法。

人工抗體(又稱分子印跡聚合物，mip)是化學(xué)合成的高分子聚合物，通過特定的空間結(jié)構(gòu)和化學(xué)鍵(包括共價鍵、離子鍵、氫鍵等)特異性識別和結(jié)合靶分子，其吸附特異性與天然抗體類似，但耐受有機溶劑、離子、酸堿、高溫和高壓。其中含熒光的mip即熒光mip，不僅可以特異性結(jié)合模板分子，同時模板分子的結(jié)合還可以導(dǎo)致熒光mip發(fā)生熒光信號的改變(如熒光波長改變，或者熒光強度改變)，根據(jù)熒光信號的改變，即可測定與熒光mip特異性結(jié)合的模板分子的含量。可見，熒光mip可以利用熒光信號測定無熒光的化合物，且mip與模板分子的特異性結(jié)合保證了熒光mip檢測的特異性，十分適合用于快速測定非熒光化合物，如參考文獻(xiàn)“y.wu,etal.monitoringbisphenolaanditsbiodegradationinwaterusingafluorescentmolecularlyimprintedchemosensor.chemosphere,2015,119:515-523”。

鏈霉素結(jié)構(gòu)上一般含兩個或兩個以上的氨基，并通過糖苷鍵進(jìn)行連接。苯硼酸及其衍生物能與糖類化合物(包括氨基糖苷類抗生素)的1,2-或1,3-二醇基團以及多醇羥基相互共價鍵，這一反應(yīng)具有較高的特異性。量子點是半導(dǎo)體熒光納米材料，其熒光波譜有激發(fā)光譜寬，發(fā)射光譜窄，熒光強度高，不易發(fā)生熒光漂白等優(yōu)點。已有研究發(fā)現(xiàn)，在量子點表面利用苯硼酸衍生物作為功能單體，合成糖蛋白mip凝膠，可同時利用mip的空間識別力和苯硼酸-糖基親和結(jié)合力，提高mip對靶分子的結(jié)合特異性如文獻(xiàn)“wzhang,etal.afluorescencenanosensorforglycoproteinswithactivitybasedonthemolecularlyimprintedspatialstructureofthetargetandboronateaffinity.angew.chem.int.ed.2014,53,12489–12493”。但是該方法制備的mip只能測定稀釋了100倍的尿液中的靶蛋白質(zhì)，顯示該方法在存在高濃度干擾物的情況下檢測效果不佳，不適合用于復(fù)雜樣品的檢測。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為了解決以上問題，本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測鏈霉素的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物及制備方法，該鏈霉素分子印跡-量子點聚合物能可特異、快速、靈敏、高通量地檢測鏈霉素含量，并提供用于檢測鏈霉素的試劑盒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計技術(shù)方案包括：

用于檢測鏈霉素的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的制備方法，包括以下步驟，首先在量子點表面修飾二氧化硅殼層得到二氧化硅殼層量子點，然后在二氧化硅殼層量子點的表面修飾硅烷化苯硼酸和鏈霉素得到量子點復(fù)合物，最后將量子點復(fù)合物中鏈霉素洗脫下來得到具有鏈霉素空間識別位點和苯硼酸-糖基親和結(jié)合位點的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物。

作為優(yōu)選方案，用于檢測鏈霉素的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的制備方法，具體包括以下步驟：

1)制備二氧化硅殼層量子點：

按質(zhì)量比，cdte-gsh量子點(qds)、水、無水乙醇、四乙氧基硅烷(teos)與氨水為0.1～1.0:4～10:35～45:0.6～1.0:1混合均勻，無氧條件下攪拌16～24h后收集顆粒，經(jīng)洗滌干燥后得到二氧化硅殼層量子點(qds@sio2)；

2)制備量子點復(fù)合物：

按摩爾比，鏈霉素與硅烷化苯硼酸為8～12:1溶于純水中，然后加入qds@sio2、表面活性劑、交聯(lián)劑與氨水，無氧條件下，室溫攪拌20～28h后得到量子點復(fù)合物；

3)洗脫鏈霉素：

利用ph為4.0～5.0的鹽酸溶液洗脫量子點復(fù)合物6～12次，每次洗脫30～50min，洗脫完畢后用純水洗滌，最后離心干燥即得鏈霉素分子印跡-量子點聚合物(鏈霉素mip-量子點)。

作為優(yōu)選方案，所述表面活性劑為十六烷基三甲基溴化銨(ctab)，所述交聯(lián)劑為正硅酸乙酯(teos)。

用于檢測鏈霉素的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物，所述鏈霉素分子印跡-量子點聚合物為根據(jù)以上鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的制備方法制備獲得的。

鏈霉素檢測試劑盒，它包括鏈霉素分子印跡-量子點聚合物、鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液以及硼酸硼砂緩沖液。

鏈霉素檢測試劑盒使用方法為：

步驟一：將鏈霉素分子印跡-量子點聚合物溶解于檢測液中得到鏈霉素mip-量子點溶液(0.025g/l),加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。

步驟二：每孔加入10μl鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品，反應(yīng)3h后在在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i)。

步驟三：以i0/i為縱坐標(biāo)，鏈霉素濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)i0/i與鏈霉素濃度之間的線性關(guān)系，即可確定鏈霉素的濃度。

鏈霉素分子印跡-量子點聚合物在檢測樣品中鏈霉素含量的應(yīng)用。尤其是在檢測食品中鏈霉素含量的應(yīng)用。

本發(fā)明制備鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的原理為：

在量子點表面修飾透明的多孔硅膠殼層，并在其上進(jìn)行分子印跡，得到多孔硅膠形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可起到類似分子篩的功能，不僅可以有效地保護量子點在復(fù)雜體系中的熒光穩(wěn)定性(youngdokimetal.cdsequantumdot-encapsulatedmolecularlyimprintedmesoporoussilicaparticlesforfluorescentsensingofbisphenola.j.mater.chem.,2012,22,24075-24080)，還可以阻止大分子的蛋白質(zhì)等物質(zhì)進(jìn)入。為此，本發(fā)明采用的制備方案為：首先在量子點表面修飾二氧化硅殼層，然后利用硅烷化苯硼酸為功能單體，在二氧化硅殼層表面制備同時具有空間識別位點和苯硼酸-糖基親和結(jié)合位點的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物，該鏈霉素分子印跡-量子點聚合物同時識別鏈霉素的空間結(jié)構(gòu)和其表面的糖苷鍵，并根據(jù)鏈霉素與鏈霉素分子印跡-量子點聚合物結(jié)合前后的熒光改變，準(zhǔn)確測定樣品中的鏈霉素含量。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：

該方法同時利用具有鏈霉素空間識別位點以及苯硼酸-糖基親和結(jié)合位點等多種結(jié)合力來提高熒光檢測的特異性，量子點熒光保證了檢測的靈敏度，并利用二氧化硅殼層的分子篩效應(yīng)，有效減少生物單分子進(jìn)入，從而提高熒光鏈霉素分子印跡-量子點聚合物檢測食品等復(fù)雜基質(zhì)中痕量的鏈霉素的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，有效克服目前鏈霉素檢測靈敏度和穩(wěn)定性低、操作復(fù)雜等缺點，實現(xiàn)快速、靈敏準(zhǔn)確地測定食品中鏈霉素含量，在農(nóng)業(yè)、食品、環(huán)境等學(xué)科中將有很大的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明合成鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的流程圖；

圖2a為量子點(qds)的掃描電鏡圖，圖2b為包被了二氧化硅的量子點(qds@sio2)的掃描電鏡圖，圖2c為鏈霉素mip-量子點的掃描電鏡圖，圖2d為nip-量子點(陰性對照)的掃描電鏡圖；

圖3為鏈霉素mip-量子點的傅里葉變換紅外光譜(ft-ir)圖。其中a線為量子點，b線為qds@sio2，c線為鏈霉素mip-量子點，d線為nip-量子點。其縱坐標(biāo)為透光度，橫坐標(biāo)為波數(shù)(厘米^-1)；

圖4為鏈霉素mip-量子點對不同氨基糖苷類抗生素的吸附特異性圖；縱坐標(biāo)為mip-量子點的熒光變化(i0/i)，橫坐標(biāo)為加入分析物的種類；

圖5為鏈霉素mip-量子點在含空間干擾物時對鏈霉素的檢測特異性；

圖6為鏈霉素mip-量子點在含糖基位點干擾物時對鏈霉素的檢測特異性圖；

圖7為鏈霉素檢測試劑盒檢測標(biāo)準(zhǔn)溶液時得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖8為多種干擾物(慶大霉素、阿米卡星、鏈霉素和d-葡萄糖)同時存在條件下，鏈霉素檢測試劑盒檢測鏈霉素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

具體實施方式

為更好地理解本發(fā)明，以下將結(jié)合附圖和具體實例對發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。

實施例1

結(jié)合圖1所示，鏈霉素分子印跡-量子點聚合物的制備方法是：

首先在量子點表面修飾二氧化硅殼層得到二氧化硅殼層量子點，然后在二氧化硅殼層量子點的表面修飾硅烷化苯硼酸和鏈霉素得到量子點復(fù)合物，最后將量子點復(fù)合物中鏈霉素洗脫下來得到具有鏈霉素空間識別位點和苯硼酸-糖基親和結(jié)合位點的鏈霉素分子印跡-量子點聚合物。具體方法包括以下步驟：

1)制備二氧化硅殼層量子點：

稱取0.4gcdte-gsh量子點(qds)溶于16ml純水中，然后加入80g無水乙醇、1.6g四乙氧基硅烷與2g氨水混合均勻，無氧條件下攪拌20h后收集顆粒，經(jīng)洗滌干燥后得到二氧化硅殼層量子點(qds@sio2)；

2)制備量子點復(fù)合物：

取10mol鏈霉素與1mol硅烷化苯硼酸，溶于純水中混合均勻后，加入20mgqds@sio2、0.2933gctab、20μlteos與300μl氨水，無氧條件下，室溫攪拌24h后得到量子點復(fù)合物；

3)洗脫鏈霉素：

利用ph為4.5的鹽酸溶液洗脫量子點復(fù)合物10次，每次洗脫40min，洗脫完畢后用純水洗滌6次，最后離心干燥即得鏈霉素分子印跡-量子點聚合物(鏈霉素mip-量子點)。

制備對比例：空白印跡聚合物(nip-量子點)的方法與以上鏈霉素mip-量子點的制備方法相同，不同在于步驟2)中不加入鏈霉素。

使用水熱法合成親水性cdte-gsh量子點(qds)：將cdcl2、gsh、na2teo3按摩爾比5:6:1的比例，加入過量nabh4，在ph＝10.5，溫度為110℃的蒸餾水中攪拌1h后，終止反應(yīng)，加入兩倍體積無水乙醇，混合后離心10min(4500rpm)，棄去上清，重復(fù)3次后置于真空干燥箱中干燥，得到粉末即為cdte-gsh量子點(qds)

實施例2

以下鏈霉素分子印跡-量子點聚合物簡寫鏈霉素mip-量子點。

鏈霉素mip-量子點的性能評價

1)形態(tài)評價：如圖2a～2c所示，透射電鏡分析顯示量子點的直徑約為3nm，qds@sio2的直徑約為9nm，鏈霉素mip-量子點的直徑約為25nm，mip層的厚度約為8nm。如圖3中a～d線所示，ft-ir顯示qds@sio2在1068cm^-1，795cm^-1和463cm^-1處有明顯的的吸收峰，分別代表si–o–si的非對稱伸縮振動、對稱拉伸振動和彎曲振動，說明在量子點表面成功合成了sio2殼層。鏈霉素mip-量子點在在1402cm^-1(b-o)和1602cm^-1(c＝c)的吸收峰提示硅烷化苯硼酸功能單體的存在，證明本發(fā)明在qds@sio2的表面成功制備了mip層。

2)鏈霉素mip-量子點吸附容量評價：以scatchard曲線的斜率為平衡解離常數(shù)kd，以公式：[bond]/[free]＝-([bond]/kd)+(bmax/kd)，計算最大吸附容量bmax。

3)鏈霉素mip-量子點結(jié)合特異性評價：采用ipb(imprinting-inducedpromotionofbinding)值評價：ipb＝(cmip-cnip)/cnip×100％。其中，cmip為與鏈霉素mip-量子點結(jié)合的靶抗生素量，cnip為與nip-量子點結(jié)合的靶抗生素量。結(jié)果見下表1:

表1鏈霉素mip-量子點的吸附特性

從表1可見，鏈霉素mip-量子點可以特異性識別鏈霉素，顯示本方法可以用于制備測定鏈霉素的mip-量子點。

實施例3

鏈霉素mip-量子點對鏈霉素的檢測特異性

各種氨基糖苷類抗生素結(jié)構(gòu)類似，有可能會干擾mip與模板分子的結(jié)合特異性。為此，進(jìn)行以下實驗：

鏈霉素mip-量子點對不同抗生素的檢測特異性：首先將190μl鏈霉素mip-量子點溶液(0.025g/l)加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。每孔加入10μl鏈霉素或慶大霉素+阿米卡星+新霉素混合溶液，反應(yīng)3小時后在多功能酶標(biāo)儀上測定在620nm處的熒光強度(i)。計算加樣前后的熒光變化值(i0/i)。如圖4所示，結(jié)果表明鏈霉素對鏈霉素mip-量子點具有最強的熒光猝滅能力，而其它類似物所引起mip-量子點的熒光變化值(i0/i)與nip-量子點無顯著差別，同時，mip-量子點的熒光變化值(i0/i)較nip-量子點大，且小于鏈霉素所導(dǎo)致的熒光變化，說明鏈霉素mip-量子點可特異性鏈霉素，對其他結(jié)構(gòu)類似的抗生素吸附力很低。

實施例4

鏈霉素mip-量子點在含結(jié)構(gòu)類似物時，檢測鏈霉素的特異性

實施例3在分析了鏈霉素mip-量子點單獨對某種抗生素結(jié)合特異性的基礎(chǔ)上，分析鏈霉素mip-量子點在多種結(jié)構(gòu)類似的抗生素(即存在空間結(jié)構(gòu)干擾物時)，mip-量子點與鏈霉素的結(jié)合特異性。

鏈霉素mip-量子點在含空間干擾物時對鏈霉素的檢測特異性：將190μl鏈霉素mip-量子點溶液(0.025g/l)加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。每孔加入不同組合的抗生素混合液10μl(其中鏈霉素100μg/l，慶大霉素分別為0,10,100,500μg/l)，反應(yīng)3小時后在多功能酶標(biāo)儀上測定在620nm處的熒光強度(i)。如圖5所示，結(jié)果表明在不同濃度慶大霉素存在條件下，鏈霉素mip-量子點的熒光改變(i0/i)無明顯差異，說明慶大霉素的存在不影響鏈霉素mip-量子點對鏈霉素的準(zhǔn)確定量。

實施例5

鏈霉素mip-量子點在含不同濃度糖基位點干擾物時，檢測氨基糖苷類抗生素的特異性。

糖類化合物可能會干擾鏈霉素mip上苯硼酸-糖基親和結(jié)合力，為此，分析存在糖基干擾物時，鏈霉素mip-量子點與模板分子的結(jié)合特異性。

鏈霉素mip-量子點在含糖基位點干擾物時對鏈霉素的檢測特異性：將190μl鏈霉素mip-量子點溶液(0.025g/l)加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。然后每孔分別加入10μl含鏈霉素和(100μg/l)和不同濃度的d-葡糖溶液(0,10,100,500μg/l)的混合液，反應(yīng)3小時后在多功能酶標(biāo)儀上測定在620nm處的熒光強度(i)。如圖6所示，比較加入混合液前后的熒光變化值(i0/i)。結(jié)果表明含d-葡萄糖的存在不影響鏈霉素mip-量子點對鏈霉素的特異性結(jié)合。

實施例6

鏈霉素檢測試劑盒的靈敏度分析

(1)鏈霉素檢測試劑盒對鏈霉素檢測的靈敏度

將mip-量子點用硼酸硼砂緩沖液(ph＝9.0,0.02mol/l)稀釋至0.025g/l，取190μlmip-量子點溶液加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。每孔加入10μl鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(0,2,10,50,100,250,500,1000μg/l)，反應(yīng)3h后在在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i)。如圖7所示，i0/i與鏈霉素濃度在2-1000μg/l范圍內(nèi)存線性關(guān)系，檢測靈敏度為0.76μg/l，說明利用本發(fā)明制備的鏈霉素檢測試劑盒檢測線性范圍廣，靈敏度高，有望直接用于食品、環(huán)境和生物等實際樣品中低濃度鏈霉素含量的檢測分析(圖7)。

(2)干擾物對鏈霉素檢測試劑盒檢測靈敏度的影響

將190μlmip-量子點溶液(0.025g/l)加入96孔酶標(biāo)板中，立刻在多功能酶標(biāo)儀上測定620nm處熒光強度(i0)。每孔加入10μl不同濃度鏈霉素(0,2,10,50,100,250,500,1000μg/l)與干擾物(新霉素、阿米卡星和慶大霉素均為100μg/l，d-葡萄糖為25μg/l)的混合液，反應(yīng)3小時后在多功能酶標(biāo)儀上測定在620nm處的熒光強度(i)。如圖8所示，比較加入混合液前后的熒光變化值(i0/i)。結(jié)果表明干擾物不影響鏈霉素mip-量子點對鏈霉素的檢測靈敏度(圖8)。

實施例7

鏈霉素檢測試劑盒的穩(wěn)定性分析

使用鏈霉素mip-量子點法檢測不同濃度鏈霉素霉素標(biāo)準(zhǔn)液，鏈霉素的加標(biāo)回收率在93.6.2-102.9％，日內(nèi)偏差為6.2-7.8％(n＝6)，日間偏差為3.8-7.6％(n＝5)，組間差異為4.8-8.1％。

實施例8

利用鏈霉素檢測試劑盒測定各種樣品中的鏈霉素。

牛奶樣品：

方法1：牛奶樣品中加入10％三氯乙酸(tca)作用3h，離心后，部分上清液氮氣吹干后，用硼酸硼砂緩沖液(ph＝9.0,0.02mol/l)定容后，用鏈霉素mip-量子點法檢測鏈霉素含量。部分上清液利用商品化固相萃取(spe)進(jìn)行固相萃取凈化樣品后，衍生后用hplc-fld測定鏈霉素含量。如表2所示，鏈霉素mip-量子點法可測定20μg/kg-400μg/kg的鏈霉素、而hplc-fld僅能測定100μg/kg-400μg/kg的鏈霉素?？梢姡m然樣品未經(jīng)過固相萃取凈化，鏈霉素mip-量子點法仍然可以測定樣品中低濃度的鏈霉素，其檢測靈敏度高于hplc-fld法。鏈霉素mip-量子點可以快速準(zhǔn)確地測定不同濃度的鏈霉素。(表2)

肌肉類樣品(雞肉、豬肉、魚肉)

肌肉組織中含有肌糖原，可以干擾mip上的苯硼酸-糖基親和位點與氨基糖苷類抗生素含量的結(jié)合。雞肉、豬肉、魚肉勻漿樣品中，分別加入10％三氯乙酸(tca)作用3h，離心后，部分上清液氮氣吹干后，用硼酸硼砂緩沖液(ph＝9.0,0.02mol/l)定容，用mip-量子點法檢測鏈霉素含量。部分上清液，利用商品化固相萃取柱(安捷倫ppl固相萃取柱)凈化樣品后，衍生后用hplc-fld測定鏈霉素含量。如表2所示，鏈霉素mip-量子點法可測定20μg/kg-400μg/kg的鏈霉素，而hplc-fld僅能測定100μg/kg-400μg/kg的鏈霉素?？梢姡m然樣品未經(jīng)過固相萃取凈化，鏈霉素mip-量子點法在多種干擾物存在時仍然可以測定肌肉樣品中低濃度的氨基糖苷類抗生素含量，其檢測靈敏度高于hplc-fld法。mip-量子點可以快速準(zhǔn)確地測定肌肉組織中不同濃度的鏈霉素。(表2)

動物肝臟樣品

動物肝臟中含有大量的肝糖原，可以干擾mip-量子點中的苯硼酸-糖基親和位點與鏈霉素的結(jié)合。為此，在豬肝、魚肝的勻漿樣品中，分別加入10％三氯乙酸(tca)作用3h，離心后，部分上清液氮氣吹干后，用硼酸硼砂緩沖液(ph＝9.0,0.02mol/l)定容，用mip-量子點法檢測氨基糖苷類抗生素含量。部分上清液，利用商品化固相萃取柱(安捷倫ppl固相萃取柱)凈化樣品后，衍生后用hplc-fld測定氨基糖苷類抗生素含量。如表2所示，鏈霉素mip-量子點法可測定20μg/kg-400μg/kg的鏈霉素，而hplc-fld僅能測定100μg/kg-400μg/kg的鏈霉素。可見，雖然樣品未經(jīng)過固相萃取凈化，mip-量子點法仍然可以測定肝臟樣品中低濃度的鏈霉素含量，其檢測靈敏度高于hplc-fld法(表2)

動物腎樣品

在豬腎勻漿樣品中，分別加入10％三氯乙酸(tca)作用3h，離心后，部分上清液氮氣吹干后，用硼酸硼砂緩沖液(ph＝9.0,0.02mol/l)定容，用mip-量子點法檢測氨基糖苷類抗生素含量。部分上清液，利用商品化固相萃取柱(安捷倫ppl固相萃取柱)凈化樣品后，衍生后用hplc-fld測定氨基糖苷類抗生素含量。結(jié)果顯示，mip-量子點法可測定20μg/kg-400μg/kg的鏈霉素含量，而hplc-fld僅能測定100μg/kg-400μg/kg的鏈霉素含量。可見，雖然樣品未經(jīng)過固相萃取凈化，mip-量子點法仍然可以測定腎臟樣品中低濃度的氨基糖苷類抗生素含量，其檢測靈敏度高于hplc-fld法。mip-量子點可以快速準(zhǔn)確地測定豬腎中不同濃度的鏈霉素含量(表2)

具體結(jié)果見下表2。

表2不同方法測定各種樣品中的鏈霉素

本發(fā)明的范圍不受所述具體實施方案的限制，所述實施方案只作為闡明本發(fā)明各個方面的單個例子，本發(fā)明范圍內(nèi)還包括功能等同的方法和組分。實際上，除了本文所述的內(nèi)容外，本領(lǐng)域技術(shù)人員參照上文的描述和附圖可以容易地掌握對本發(fā)明的多種改進(jìn)。所述改進(jìn)也落入所附權(quán)利要求書的范圍之內(nèi)。上文提及的每篇參考文獻(xiàn)皆全文列入本文作為參考。