一種稀堿濃鹽法提取豬鼻骨中的硫酸軟骨素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的屬于從豬鼻骨中提取硫酸軟骨素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 硫酸軟骨素 (Chondroitin sulfate)是一種酸性粘多糖，廣泛存在于哺乳動(dòng)物的 軟骨、喉骨、鼻骨和氣管中。硫酸軟骨素是由葡萄糖醛酸和氨基己糖交替連結(jié)而成的雙糖聚 合物，它含有50~70個(gè)雙糖基本結(jié)構(gòu)，分子量為10000~50000。按其化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，可分 為05六、(：、04^、!1等多種同分異構(gòu)體，藥用硫酸軟骨素是從動(dòng)物軟骨中提取的，主要是八、〇 及各種硫酸軟骨素的混合物。CSA和CSC均由D2氨基葡萄糖醛和N2乙酰2D2氨基半乳糖組 成，只是硫酸基團(tuán)位置不同。
[0003] 硫酸軟骨素通常與蛋白質(zhì)結(jié)合成糖蛋白的形式存在，當(dāng)其水解時(shí)發(fā)生消去反應(yīng)， 連接硫酸軟骨素與蛋白質(zhì)中絲氨酸羥基的苷鍵斷裂，可以得到游離態(tài)的硫酸軟骨素。硫酸 軟骨素為白色或微黃色粉末，具有吸濕性，易溶于水而成粘度較大的溶液，難溶于甲醇、乙 醇、乙醚、丙醇、丙酮和冰醋酸等有機(jī)溶劑，并且遇熱不穩(wěn)定，乙?；装l(fā)生水解脫落，在酸 性條件下更易水解成不同聚合度的低聚糖。硫酸軟骨素具有降血脂、抗凝血、抗炎癥及抗腫 瘤等生理活性，臨床上可用于預(yù)防動(dòng)脈粥狀硬化、提高機(jī)體免疫力、治療風(fēng)濕病和腎炎及由 鏈霉素引起的聽(tīng)覺(jué)障礙。硫酸軟骨素與銅等金屬離子結(jié)合可用于治療皮膚病，與硝酸鉍或 氫氧化鋁反應(yīng)得到的絡(luò)合物可用于治療消化性潰瘍，與苯甲酸酯、利多卡因或布比卡因作 用生成的衍生物可用作麻醉劑。作為食品添加劑，硫酸軟骨素可用于食品的乳化、保濕和祛 除異味。在化妝品中添加硫酸軟骨素，可調(diào)節(jié)皮膚的細(xì)胞代謝，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)的吸收，保持皮膚 的水分和改善發(fā)質(zhì)。
[0004] 隨著硫酸軟骨素生物活性不斷被揭示和其應(yīng)用領(lǐng)域的不斷擴(kuò)展，有關(guān)硫酸軟骨素 的提取、純化和分離技術(shù)已取得了一定的研究成果，但應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)際還有許多需要改進(jìn) 和完善之處。目前，硫酸軟骨素生產(chǎn)廠家主要采用的方法成本高，產(chǎn)率和純度低。所以，本公 司開(kāi)發(fā)了稀堿濃鹽法從豬鼻骨中提取硫酸軟骨素，以降低成本，提高效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種全新的方法(稀堿濃鹽法)從豬鼻骨中提取硫酸軟骨素，能夠有 效地降低成本，并提高產(chǎn)品的產(chǎn)率和純度。
[0006 ]為此，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)： 1.鹽解 將豬鼻骨粉碎，放入80°C水中浸泡4~6小時(shí)，然后加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化鈉和 20%的氯化鈉混合溶液(pH為13)，于40°C下提取3小時(shí)，然后用鹽酸調(diào)pH到6.5~7.5，雙層紗 布過(guò)濾；留下濾液，再向?yàn)V渣中加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化鈉和20%的氯化鈉混合溶液(pH 為13)，于40°C下提取2小時(shí)，再用雙層濾布過(guò)濾;棄濾渣，取濾液。合并2次濾液。用0.4%的氫 氧化鈉溶液將濾液調(diào)節(jié)pH到8.0~9.0，升溫到80~90°C，加入少量滑石粉，用鹽酸將鹽解液 調(diào)節(jié)pH到2~3，再用雙層濾布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入1.5倍體積的水進(jìn)行稀釋，同時(shí)用Ο . 4%的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH到6.5。
[0007] 2.吸附 過(guò)濾后加入高嶺土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取濾液，留水層。
[0008] 3.沉淀 調(diào)節(jié)水層pH至6.8~7.2，再加入2.5倍體積的95%以上乙醇，充分?jǐn)嚢韬?，靜置12小時(shí)以 上，虹吸上層乙醇，即得硫酸軟骨索。
[0009] 4.純化 將硫酸軟骨素溶于濃度為3%(m/v)的氯化鈉溶液中，加入少量乙醇，于低溫下靜置后離 心，將其上清液中再加入少量乙醇，重復(fù)以上步驟，可依次得到較高純度的硫酸軟骨素。
[0010] 5.脫水 最后，用95%以上的丙酮對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行脫水，再真空干燥，即可。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是：用稀堿濃鹽法分離豬鼻骨中的硫酸軟骨素，并且增加了純 化過(guò)程，有效地降低了生產(chǎn)成本，并且提高了產(chǎn)品的產(chǎn)率和純度。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0013] 1 鹽解 稱取100千克豬鼻骨粉碎，放入80°C水中浸泡5小時(shí)，然后加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化 鈉和20%的氯化鈉混合溶液(pH為13)，于40°C下提取3小時(shí)，然后用鹽酸調(diào)pH到7.3,雙層紗 布過(guò)濾；留下濾液，再向?yàn)V渣中加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化鈉和20%的氯化鈉混合溶液(pH 為13)，于40°C下提取2小時(shí)，再用雙層濾布過(guò)濾;棄濾渣，取濾液。合并2次濾液。用0.4%的氫 氧化鈉溶液將濾液調(diào)節(jié)pH到8.6，升溫到84°C，加入少量滑石粉，用鹽酸將鹽解液調(diào)節(jié)pH到 2.7，再用雙層濾布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入953升水進(jìn)行稀釋，同時(shí)用0.4%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH到6.5。
[0014] 2.吸附 過(guò)濾后加入高嶺土和活性炭吸附。用氯仿反萃取法萃取濾液，留水層。
[0015] 3.沉淀 調(diào)節(jié)水層pH至6.8~7.2，再加入2.5倍體積的95%以上乙醇，充分?jǐn)嚢韬螅o置12小時(shí)以 上，虹吸上層乙醇，即得硫酸軟骨索。
[0016] 4.純化 將硫酸軟骨素溶于濃度為3%(m/v)的氯化鈉溶液中，加入少量乙醇，于低溫下靜置后離 心，將其上清液中再加入少量乙醇，重復(fù)以上步驟，可依次得到較高純度的硫酸軟骨素。
[0017] 5.脫水 最后，用95%以上的丙酮對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行脫水，再真空干燥，即可。
[0018] 6 ·對(duì)照 稱取100千克同一批次的豬鼻骨，采用傳統(tǒng)工藝提取其中的硫酸軟骨素。通過(guò)對(duì)照發(fā) 現(xiàn):傳統(tǒng)工藝明顯地成本高，效益低。
[0019] 表1兩種工藝產(chǎn)出效果對(duì)照表 以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟 悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí) 施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的 任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種稀堿濃鹽法提取豬鼻骨中的硫酸軟骨素的方法，其特征在于步驟如下： (1) 鹽解 將豬鼻骨粉碎，放入80°c水中浸泡4~6小時(shí)，然后加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化鈉和 20%的氯化鈉混合溶液(pH為13)，于40°C下提取3小時(shí)，然后用鹽酸調(diào)pH到6.5~7.5，雙層紗 布過(guò)濾；留下濾液，再向?yàn)V渣中加入骨質(zhì)量5倍的0.4%氫氧化鈉和20%的氯化鈉混合溶液(pH 為13)，于40°C下提取2小時(shí)，再用雙層濾布過(guò)濾;棄濾渣，取濾液;合并2次濾液；用0.4%的氫 氧化鈉溶液將濾液調(diào)節(jié)pH到8.0~9.0，升溫到80~90°C，加入少量滑石粉，用鹽酸將鹽解液 調(diào)節(jié)pH到2~3，再用雙層濾布過(guò)濾，向?yàn)V液中加入1.5倍體積的水進(jìn)行稀釋，同時(shí)用0.4%的 氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH到6.5; (2) 吸附 過(guò)濾后加入高嶺土和活性炭吸附，用氯仿反萃取法萃取濾液，留水層； (3) 沉淀 調(diào)節(jié)水層pH至6.8~7.2，再加入2.5倍體積的95%以上乙醇，充分?jǐn)嚢韬螅o置12小時(shí)以 上，虹吸上層乙醇，即得硫酸軟骨索； (4) 純化 將硫酸軟骨素溶于濃度為3%(m/v)的氯化鈉溶液中，加入少量乙醇，于低溫下靜置后離 心，將其上清液中再加入少量乙醇，重復(fù)以上步驟，可依次得到較高純度的硫酸軟骨素； (5) 脫水 最后，用95%以上的丙酮對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行脫水，再真空干燥，即可。
【專利摘要】一種能夠從豬鼻骨中提取硫酸軟骨素的方法，它采用稀堿濃鹽法，經(jīng)過(guò)鹽解、吸附、沉淀、純化、脫水五個(gè)步驟從豬鼻骨中提取硫酸軟骨素。結(jié)果稀堿濃鹽法與傳統(tǒng)提取方法相比較，乙醇用量減少86%左右，純度提高19％左右，產(chǎn)率提高32%左右。
【IPC分類(lèi)】C08B37/08
【公開(kāi)號(hào)】CN105440158
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510880068
【發(fā)明人】劉冠男, 姜德志, 遲培升
【申請(qǐng)人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月6日