一種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量的遺傳標(biāo)記的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于禽類遺傳標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量的 遺傳標(biāo)記的制備方法及應(yīng)用，具體地說，涉及一種拜城油雞（白羽）腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量 的遺傳標(biāo)記的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們生活水平的提高，對(duì)肉品質(zhì)量和口味也有更嚴(yán)格的要求，雞肉作為餐桌 上的主要肉類，雞肉的品質(zhì)越來越成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。對(duì)于雞肉肉質(zhì)好壞的衡量標(biāo)準(zhǔn)大 多源自于人們的口感，目前還沒有一種統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)過分析，雞肉中的高肌內(nèi)脂肪MF被 認(rèn)為是一種影響雞肉肉質(zhì)性狀和改善肉的鮮嫩度方面的主要指標(biāo)，當(dāng)高肌內(nèi)脂肪含量達(dá)到 3. 5%以上，就能獲得良好的肉質(zhì)風(fēng)味。
[0003] 隨著分子生物的發(fā)展，人們嘗試通過遺傳標(biāo)記能夠在高肌內(nèi)脂肪含量選擇中得到 應(yīng)用，遺傳標(biāo)記GeneticMarker指可追蹤染色體、染色體某一節(jié)段、某個(gè)基因座在家系中傳 遞的任何一種遺傳特性。它具有兩個(gè)基本特征，即可遺傳性和可識(shí)別性，因此生物的任何有 差異表型的基因突變型均可作為遺傳標(biāo)記。
[0004]目前需要一種準(zhǔn)確、可靠地遺傳標(biāo)記用于拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量選擇 中。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，提供一種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi) 脂肪含量的遺傳標(biāo)記的制備方法及應(yīng)用。其具體技術(shù)方案為：
[0006] -種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量的遺傳標(biāo)記制備方法，包括以下步驟：
[0007]I.聚丙烯酰胺凝膠的制備
[0008] 用12%的聚丙烯酰胺凝膠分離待測(cè)片段。根據(jù)玻璃板規(guī)格的不同，分別配制7ml、 l〇ml的膠，配方為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量的遺傳標(biāo)記制備方法，其特征在于，包括以下 步驟： I. 聚丙烯酰胺凝膠的制備 用12%的聚丙烯酰胺凝膠分離待測(cè)片段；根據(jù)玻璃板規(guī)格的不同，分別配制7ml、10ml 的膠，配方為： 7ml IOml 配方 H2O 3.43 4.93 Acr/Bis 2.1 3 40% (Acr29:Bisl) 5χΤΒΕ 1.4 2 54.0gTris+27.5g 硼酸+4.65g EDTA 定容 至 IL，PH 約 8.3 AP 0.070 0.070 10%過硫酸銨：Ig過硫酸銨融入IOml 水中，冷藏 TEMED 0.005 0.005 1 %四甲基乙二胺：聚合加速劑； II. 樣品的制備 1、 設(shè)計(jì)引物，樣品片段長(zhǎng)度一般因在150-300bp之間； 2、 PCR擴(kuò)增目的片段，瓊脂糖凝膠檢測(cè)； 3、 樣品稀釋：根據(jù)瓊脂糖凝膠檢測(cè)結(jié)果，如果PCR產(chǎn)物很濃，則將PCR產(chǎn)物稀釋3倍；若 PCR產(chǎn)物濃度較弱，則不稀釋； 4、 取1 μ 1稀釋好的PCR產(chǎn)物，加入9ul變性緩沖液中，混勻； 5、 變性緩沖液：溴酚藍(lán)5mg，0. 5M EDTA. Na2 pH8. 0 400 μ 1，甲酰胺9. 6ml，混勻； III. 變性 1、 開啟PCR儀，將程序設(shè)置為98°C llmin ; 2、 將混有甲酰胺的樣品放入PCR儀中，開始變性； 3、 準(zhǔn)備冰盒； 4、 當(dāng)變性IOmin時(shí)，打開PCR儀，迅速將樣品插入冰中，保持IOmin ; IV. 上樣電泳 1、 電泳前，所用的膠，電泳緩沖液都要先預(yù)冷； 2、 取樣品3 μ 1，依次點(diǎn)到事先制好并且制冷的聚丙烯酰胺凝膠中；點(diǎn)樣時(shí)注意標(biāo)準(zhǔn)品 不要點(diǎn)到膠的最邊上兩個(gè)孔，以免由于制膠不均勻或其他原因造成的標(biāo)準(zhǔn)品分型不好，起 不到指示作用； 3、 將電泳槽放到4°C冰箱中，連上電泳儀，250V跑10min，50V 16h ; 4、 電泳條件因待分離片段的不同而不同，因此若以上條件不能夠?qū)⒉煌幕蛐头?開，則嘗試其他的條件； V.染色 1) 固定：把膠卸下，做好起始記號(hào)，放入80ml固定液中在搖床上固定IOmin ; 2) 染色：60ml染色液+60 μ 1甲醛，染色6min，蒸餾水洗絳一次； 3) 顯色：60ml顯色液+120 μ 1甲醛，放到搖床上顯色至條帶清晰；倒掉顯色液，加蒸餾 停止顯色。
2.權(quán)利要求1所述遺傳標(biāo)記在拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量選擇中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種拜城油雞腿肌中高肌內(nèi)脂肪含量的遺傳標(biāo)記的制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明選取120日齡拜城油雞白羽60只，公母各半，檢測(cè)H-FABP第二外顯子多態(tài)性和腿肌中肌內(nèi)脂肪IMF的含量，并分析兩者之間的關(guān)系。本發(fā)明經(jīng)過實(shí)驗(yàn)可知，本發(fā)明所述方法制備的遺傳標(biāo)記選擇腿肌中IMF含量高的拜城油雞。
【IPC分類】C12Q1-68, C12N15-10
【公開號(hào)】CN104830838
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510257019
【發(fā)明人】王永, 惠曉紅, 孟煒, 吐爾遜江庫爾班
【申請(qǐng)人】塔里木大學(xué)
【公開日】2015年8月12日
【申請(qǐng)日】2015年5月15日