本發(fā)明屬于生物，具體涉及貝萊斯芽孢桿菌ls77及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、真菌導(dǎo)致的植物常見的灰霉病、炭疽病、白粉病、銹病和黑粉病等，占植物病害總數(shù)的80％。而使用生物農(nóng)藥，其具有許多優(yōu)點，諸如：（1）對人、畜及生態(tài)環(huán)境幾乎沒有影響；（2）對農(nóng)產(chǎn)品無污染；（3）對靶標(biāo)菌與害蟲針對性極強；（4）可保護害蟲天敵；（5）害蟲及病原菌不易產(chǎn)生抗性。生物農(nóng)藥是防治植物病害最有效的途徑之一，也是綠色農(nóng)業(yè)最為理想的選擇。因此，研究開發(fā)低毒、環(huán)境友好的綠色生物農(nóng)藥已經(jīng)成為農(nóng)藥學(xué)領(lǐng)域必然的發(fā)展趨勢。

2、魷魚是軟體動物頭足綱的海洋經(jīng)濟動物，生命周期短，繁殖力強，富含高蛋白和多種必需氨基酸，是一種低脂肪的水產(chǎn)品。魷魚加工過程中會隨即產(chǎn)生大約15%左右的廢棄物，被稱之為魷魚加工副產(chǎn)物，雖然是被丟棄的一部分，但其中所含有的營養(yǎng)價值卻極其豐富，富含脂肪和蛋白質(zhì)，如能加以利用則能產(chǎn)生不錯的經(jīng)濟效益；魷魚內(nèi)臟有機物含量豐富，是微生物的優(yōu)良培養(yǎng)基。以魷魚內(nèi)臟為培養(yǎng)基，發(fā)酵制備具有抗植物真菌病害活性的生物農(nóng)藥，一方面可實現(xiàn)魷魚內(nèi)臟的高值化利用，另一方面開發(fā)的產(chǎn)品具有抗真菌病害活性，具有替代化學(xué)農(nóng)藥的潛力。

3、發(fā)明人從多種發(fā)酵水產(chǎn)品中分離可以發(fā)酵利用魷魚內(nèi)臟的菌株，通過菌絲生長抑制法篩選出發(fā)酵液具有高抗灰葡萄孢菌活性的菌株，采用形態(tài)學(xué)結(jié)合分子生物學(xué)方法對菌株進行分類鑒定，發(fā)現(xiàn)一株對灰葡萄孢具有明顯抑制作用的貝萊斯芽孢桿菌，以此為灰霉病的生物防治提供菌種資源，為研制綠色生物農(nóng)藥提供理論依據(jù)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供貝萊斯芽孢桿菌ls77及其應(yīng)用的技術(shù)方案。

2、本發(fā)明具體采用以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

3、本發(fā)明第一方面提供了一種貝萊斯芽孢桿菌( bacillus?velezensis)?ls77，其保藏編號為：cgmcc?no.32058。

4、該菌株分離自山東省日照市嵐山區(qū)自然發(fā)酵蝦醬中，通過形態(tài)分析及測序分析發(fā)現(xiàn)，該菌株與貝萊斯芽孢桿菌有最高同源相似性，最高相似性為99.99％，可以確定該菌株為貝萊斯芽孢桿菌( bacillus?velezensis)。

5、所述的貝萊斯芽孢桿菌ls77在固體平板上菌落觀察。菌落隆起呈圓形或近圓形邊緣規(guī)則，表面濕潤，中心突起淡黃色，質(zhì)地粘稠，易挑起，革蘭氏染色為陽性，桿狀。該貝萊斯芽孢桿菌ls77在37℃恒溫的條件下，在lb固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)8?h達到對數(shù)末期。

6、本發(fā)明第二方面提供了一種貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液，所述發(fā)酵液由上述貝萊斯芽孢桿菌ls77發(fā)酵獲得。

7、本發(fā)明第三方面提供了一種貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法，其包括以下步驟：

8、將貝萊斯芽孢桿菌ls77菌種液以體積比1～3?%的接種量接種于lb液體培養(yǎng)基中，在30～40?℃，160～200?r/min條件下培養(yǎng)12～24?h后，以體積比3～6?%的接種量將菌種轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在27～38?℃，180～200?r/min條件下培養(yǎng)96～144?h，發(fā)酵完成即獲得貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液；

9、所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為：每升含有魷魚加工下腳料5～50?g，葡萄糖10～30?g，ph7.0-10.0，余量為水。

10、作為發(fā)酵液制備方法的優(yōu)選，將貝萊斯芽孢桿菌ls77菌種液以體積比2?%的接種量接種于lb液體培養(yǎng)基中，在37?℃，180?r/min條件下培養(yǎng)24?h后，以體積比4%的接種量將菌種轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在37?℃，180?r/min條件下培養(yǎng)120?h，發(fā)酵完成即獲得貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液。

11、作為發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)選，每升含有魷魚加工下腳料10?g，葡萄糖20?g，ph9.0，余量為水。

12、作為發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)選，將魷魚內(nèi)臟與水以1:100比例混合，使用組織勻漿機勻漿，隨后加入2%葡萄糖，使用1?m?naoh調(diào)節(jié)ph值為9.0，121℃滅菌15?min制成發(fā)酵培養(yǎng)基。

13、本發(fā)明第四方面提供了上述的貝萊斯芽孢桿菌或上述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液在制備生物農(nóng)藥或抗真菌病藥物中的應(yīng)用。

14、進一步，該應(yīng)用中所述生物農(nóng)藥或抗真菌病藥物具體用于抑制灰葡萄孢菌。

15、本發(fā)明第五方面提供了一種生物農(nóng)藥，該生物農(nóng)藥含有上述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液。

16、本發(fā)明第六方面提供了一種抗真菌病藥物，該藥物含有上述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液。

17、本發(fā)明第七方面提供了上述的一種生物農(nóng)藥或上述的一種抗真菌病藥物在抑制灰葡萄孢菌中的應(yīng)用。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

19、本發(fā)明分離得到的貝萊斯芽孢桿菌ls77能夠利用魷魚加工下腳料進行發(fā)酵，發(fā)酵得到的發(fā)酵液有顯著抑制灰葡萄孢菌，以此為灰霉病的生物防治提供菌種資源，為研制綠色生物農(nóng)藥提供理論依據(jù)。

技術(shù)特征：

1.一種貝萊斯芽孢桿菌(bacillus?velezensis)?ls77，其保藏編號為：cgmccno.32058。

2.一種貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液，其特征在于，所述發(fā)酵液由權(quán)利要求1所述貝萊斯芽孢桿菌ls77發(fā)酵獲得。

3.如權(quán)利要求2所述的一種貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

4.如權(quán)利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌或如權(quán)利要求2所述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液在制備生物農(nóng)藥或抗真菌病藥物中的應(yīng)用。

5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物農(nóng)藥或抗真菌病藥物具體用于抑制灰葡萄孢菌。

6.一種生物農(nóng)藥，其特征在于，該生物農(nóng)藥含有權(quán)利要求2所述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液。

7.一種抗真菌病藥物，其特征在于，該藥物含有權(quán)利要求2所述的貝萊斯芽孢桿菌發(fā)酵液。

8.如權(quán)利要求6所述的一種生物農(nóng)藥或權(quán)利要求7所述的一種抗真菌病藥物在抑制灰葡萄孢菌中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明貝萊斯芽孢桿菌LS77及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明一方面提供了一種貝萊斯芽孢桿菌LS77，另一方面提供了該貝萊斯芽孢桿菌LS77在抑制灰葡萄孢菌中的應(yīng)用。本發(fā)明分離得到的貝萊斯芽孢桿菌LS77能夠利用魷魚加工下腳料進行發(fā)酵，發(fā)酵得到的發(fā)酵液有顯著抑制灰葡萄孢菌，以此為灰霉病的生物防治提供菌種資源，為研制綠色生物農(nóng)藥提供理論依據(jù)。

技術(shù)研發(fā)人員：劉宇,胡逸鵬,姜維,孫迪,余中節(jié),馬慶保
受保護的技術(shù)使用者：浙江海洋大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19