背景技術(shù)：

1、甲狀旁腺激素(pth)是由甲狀旁腺產(chǎn)生的84個(gè)氨基酸的激素。pth通過其對(duì)骨、腎和腸的作用來調(diào)節(jié)血清鈣濃度。甲狀旁腺功能減退(hp)是一種罕見的甲狀旁腺無法分泌pth的病狀。hp引起低鈣血癥，低鈣血癥導(dǎo)致另外的癥狀，包含虛弱、肌肉抽筋、頭痛和/或無法控制的抽搐和肌肉痙攣。重組人pth(rhpth(1-84))已被fda批準(zhǔn)用于治療成人慢性hp。rhpth(1-84)需要每天皮下注射，因?yàn)閜th的血清半衰期較短。雖然rhpth(1-84)在臨床研究中顯示出良好的安全性概況，但外源性pth會(huì)增加大鼠骨肉瘤的風(fēng)險(xiǎn)，這表明長(zhǎng)期連續(xù)使用rhpth(1-84)存在安全性問題。

2、需要用于甲狀旁腺功能減退的改進(jìn)的療法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本文提供了編碼甲狀旁腺激素(pth)融合蛋白構(gòu)建體的病毒載體。在一些實(shí)施例中，與不具有融合配偶體的pth融合物的載體介導(dǎo)的遞送相比，這些病毒載體可以實(shí)現(xiàn)pth融合物在受試者中的持續(xù)表達(dá)和/或增加的循環(huán)半衰期。進(jìn)一步提供了制備和使用此類病毒載體的方法。

2、一方面，提供了一種病毒載體，所述病毒載體包含核酸，所述核酸包括編碼融合蛋白的多核苷酸序列。所述融合蛋白包含(a)前導(dǎo)序列，所述前導(dǎo)序列包括分泌信號(hào)肽和前肽，(b)甲狀旁腺激素(pth)融合物，以及(c)融合結(jié)構(gòu)域，所述融合結(jié)構(gòu)域包括(i)igg?fc或其功能變體或(ii)白蛋白或其功能變體。在一個(gè)實(shí)施例中，所述載體是腺相關(guān)病毒載體。

3、在一個(gè)實(shí)施例中，(i)所述前導(dǎo)序列的所述分泌信號(hào)肽包括凝血酶信號(hào)肽；(ii)所述前導(dǎo)序列包括凝血酶前肽；和/或(iii)所述前導(dǎo)序列包括凝血酶前導(dǎo)序列。在另一個(gè)實(shí)施例中，前導(dǎo)序列包括與pth前肽或凝血酶前肽組合的il-2前導(dǎo)序列。在一個(gè)實(shí)施例中，pth融合物選自seq?id?no:11、seq?id?no:13、seq?id?no:15、seq?id?no:17、seq?id?no:19、seq?id?no:21、seq?id?no:23、seq?id?no:25、seq?id?no:27、seq?id?no:29、seq?id?no:39、seq?id?no:42、seq?id?no:44、seq?id?no:46、seq?id?no:48及其功能變體。

4、在一個(gè)實(shí)施例中，所述融合結(jié)構(gòu)域是人igg4?fc，所述人igg4?fc具有seq?id?no:6的序列或與其共享至少90％同一性的序列或其功能變體。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述融合結(jié)構(gòu)域是人白蛋白，所述人白蛋白具有seq?id?no:9的序列或與其共享至少90％同一性的序列或其功能變體。在一個(gè)實(shí)施例中，所述融合結(jié)構(gòu)域是恒河猴igg4?fc，所述恒河猴igg4?fc具有seq?id?no:8的序列或與其共享至少90％同一性的序列或其功能變體。在一個(gè)實(shí)施例中，所述融合結(jié)構(gòu)域是人igg1?fc，所述人igg1?fc具有seq?id?no:7的序列或與其共享至少90％同一性的序列或其功能變體。

5、另一方面，所述病毒載體包含aav衣殼和包裝在所述aav衣殼中的載體基因組，所述載體基因組包括aav反向末端重復(fù)序列(itr)、編碼所述融合蛋白的所述多核苷酸序列以及引導(dǎo)所述融合蛋白的表達(dá)的調(diào)控序列。

6、另一方面，提供了一種適用于治療受試者的甲狀旁腺功能減退的藥物組合物。所述組合物包含水性液體和如本文所述的病毒載體。在一個(gè)實(shí)施例中，所述受試者是人。

7、在又另一方面中，提供了如本文所述的病毒載體用于制造用于治療患有甲狀旁腺功能減退，任選地糖尿病的受試者的藥物的用途。

8、另一方面，提供了一種治療患有甲狀旁腺功能減退的受試者的方法。所述方法包含向所述受試者施用有效量的如本文所述的病毒載體或組合物。

9、根據(jù)本發(fā)明的以下詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它方面和優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。

技術(shù)特征：

1.一種組合物，其包括核酸，所述核酸包括編碼融合蛋白的序列，所述融合蛋白包括甲狀旁腺激素(pth)蛋白和igg4?fc，其中所述融合蛋白具有seq?id?no:1、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、39、42、44、46或48的序列或與其至少99％相同的序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中編碼所述融合蛋白的所述序列是seq?id?no:12、14、16、18、20、22、24、26、28或30或共享與其至少75％相同的序列。

3.所述的組合物，其包括病毒載體，所述病毒載體包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述病毒載體是具有aavrh91或aavhu68的所述aav衣殼的重組aav(raav)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中的一項(xiàng)所述的組合物，其中所述融合蛋白處于誘導(dǎo)型基因表達(dá)系統(tǒng)的控制下。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述誘導(dǎo)型基因表達(dá)系統(tǒng)包括可調(diào)控啟動(dòng)子、激活結(jié)構(gòu)域和dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

7.根據(jù)權(quán)利要求3至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述aav反向末端重復(fù)序列(itr)是位于所述融合蛋白編碼序列和所述調(diào)控序列的側(cè)翼的aav2?5'itr和aav2?3'itr。

8.根據(jù)權(quán)利要求3至7中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述載體基因組包括cb7啟動(dòng)子和兔珠蛋白poly?a。

9.根據(jù)權(quán)利要求5至8中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述誘導(dǎo)型基因表達(dá)系統(tǒng)包括

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述誘導(dǎo)型基因表達(dá)系統(tǒng)包括在一個(gè)載體中。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述誘導(dǎo)型基因表達(dá)系統(tǒng)包括在兩個(gè)載體中。

12.根據(jù)權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述反式激活結(jié)構(gòu)域包括nf-κbp65的一部分。

13.根據(jù)權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述可調(diào)控啟動(dòng)子是組成型啟動(dòng)子。

14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中所述可調(diào)控啟動(dòng)子是cmv啟動(dòng)子。

15.根據(jù)權(quán)利要求9至14中任一項(xiàng)所述的組合物，其進(jìn)一步包括ires或2a。

16.根據(jù)權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)所述的組合物，其包括所述zfhd結(jié)合位點(diǎn)的至少8個(gè)拷貝。

17.根據(jù)權(quán)利要求5至16中任一項(xiàng)所述的組合物，其包括可調(diào)控啟動(dòng)子；激活結(jié)構(gòu)域，所述激活結(jié)構(gòu)域包括p65反式激活結(jié)構(gòu)域和fkbp12-雷帕霉素相關(guān)蛋白(frap)的fkbp12-雷帕霉素結(jié)合(frb)結(jié)構(gòu)域；dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括鋅指同源結(jié)構(gòu)域(zfhd)和三個(gè)fk506結(jié)合蛋白結(jié)合域(fkbp)亞基基因；所述zfhd結(jié)合位點(diǎn)的12個(gè)拷貝；以及編碼包括seq?id?no:1、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、39、42、44、46或48中的任一者的pth蛋白的融合蛋白的序列，以及引導(dǎo)所述融合蛋白的表達(dá)的調(diào)控序列。

18.一種適用于治療受試者的甲狀旁腺功能減退的藥物組合物，所述藥物組合物包括水性液體和根據(jù)權(quán)利要求1至17中任一項(xiàng)所述的組合物。

19.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物，其在用于治療患有甲狀旁腺功能減退的受試者的方法中使用。

20.一種根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物的用途，其用于制備用于治療患有甲狀旁腺功能減退的受試者的藥物。

21.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述組合物被調(diào)配用于以1x109gc/kg至5x?1013gc/kg的所述raav的劑量施用。

22.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物，其中患者是人并且向所述患者施用1x1010gc至1.5x?1015gc的所述raav的劑量。

23.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述raav是肌內(nèi)或靜脈內(nèi)遞送的。

24.一種治療患有甲狀旁腺功能減退的受試者的方法，所述方法包括向所述受試者遞送raav，所述raav具有來自aavrh91或aavhu68的aav衣殼和包裝在所述aav衣殼中的載體基因組，所述載體基因組包括aav反向末端重復(fù)序列(itr)、編碼包括seq?id?no:1、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、39、42、44、46或48中的任一者的pth蛋白的融合蛋白的序列，以及引導(dǎo)所述融合蛋白的表達(dá)的調(diào)控序列。

25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中向患者施用根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物。

26.根據(jù)權(quán)利要求24或25所述的方法，其中向所述患者施用1x?109gc/kg至5x?1013gc/kg體重的所述raav的劑量。

27.根據(jù)權(quán)利要求24至26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述raav是肌內(nèi)或靜脈內(nèi)遞送的。

28.根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于治療人的甲狀旁腺功能減退。

技術(shù)總結(jié)
提供了用于治療受試者的甲狀旁腺功能減退的組合物和方法。提供了一種病毒載體，所述病毒載體包含核酸分子，所述核酸分子包括編碼PTH融合蛋白的序列和引導(dǎo)其表達(dá)的調(diào)控序列。

技術(shù)研發(fā)人員：J·M·威爾遜,C·欣德爾,堀內(nèi)真
受保護(hù)的技術(shù)使用者：賓夕法尼亞州大學(xué)信托人
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17