本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及bmx剪切體及其在肺癌耐藥性中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
肺癌發(fā)生于支氣管黏膜上皮。近年來，肺癌的發(fā)病率在全球均呈顯著上升趨勢，在歐美工業(yè)發(fā)達(dá)國家和我國的一些工業(yè)大城市中，肺癌發(fā)病率在男性惡性腫瘤中已居首位，在女性發(fā)病率也迅速增高，占女性常見惡性腫瘤的第2位或第3位。肺癌成為危害生命健康的一種主要疾病。臨床上，第三代基于鉑的聯(lián)合療法治療非小細(xì)胞肺癌雖具有一些優(yōu)勢，但是結(jié)合幾種細(xì)胞毒類藥物的治療方式并沒有取得比鉑雙試劑治療更好的效果，表明這種治療方法已經(jīng)達(dá)到了瓶頸。隨著對肺癌生物學(xué)的深入研究以及對肺癌發(fā)病分子機制的進(jìn)一步了解，根據(jù)不同患者個體腫瘤中存在的關(guān)鍵致病基因進(jìn)行針對性的分子靶向治療。比較成功的例子即針對表皮生長因子受體(egfr)激活型突變(比如l858r點突變、19號外顯子缺失突變)所設(shè)計的靶向egfr激酶域的小分子抑制劑，包括吉非替尼(gefitinib,iressa)和厄洛替尼(erlotinib,tarceva)。臨床上這些小分子抑制劑對具有上述egfr激酶域突變的肺癌患者療效顯著，然而一些耐藥突變(比如egfr激酶域t790m點突變等)的出現(xiàn)卻極大削弱了靶向藥物的治療效果，且目前并沒有很好的解決策略。
因此，深入研究肺癌的耐藥機制，制定肺癌耐藥性防治的有效策略迫在眉睫?；谏鲜鲫愂?，本發(fā)明提出了bmx剪切體及其在肺癌耐藥性中的應(yīng)用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺點，而提出的bmx剪切體及其在肺癌耐藥性中的應(yīng)用。
bmx剪切體位于染色體xp25.5的dxs203與dxs212兩位點之間，是由前380個氨基酸組成，具有seqidno1-15、39-54、72-83、102-137所示的氨基酸序列；所述bmx剪切體不包含蛋白缺失野生型bmx的n端。
優(yōu)選的，所述bmx剪切體由包含seqno.1所包含的核苷酸序列或其互補序列的多核苷酸編碼。
優(yōu)選的，所述bmx剪切體的cdna引物包括5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段。
一種bmx剪切體的制備方法，包括以下步驟：準(zhǔn)備防爆玻璃反應(yīng)器，從反應(yīng)器的下方通入氮氣，通入反應(yīng)器的氮氣從反應(yīng)器的上方排出，按權(quán)利要求1中所述的氨基酸序列將氨基酸加入反應(yīng)器中，加入權(quán)利要求2中的多核苷酸，利用氮氣鼓泡的方式對反應(yīng)物進(jìn)行攪拌，從而制得bmx剪切體。
優(yōu)選的，所述bmx剪切體可用于制備檢測肺癌耐藥性機制的試劑。
優(yōu)選的，所述檢測肺癌耐藥性機制試劑的篩選方法，包括以下步驟：
步驟s1、在酪氨酸激酶的催化作用下，將bmx剪切體進(jìn)行分解，將所得的分解產(chǎn)物分別注射于小鼠腹腔內(nèi)，并向小鼠腹腔內(nèi)注射肺癌感染病毒；
步驟s2、觀察注射bmx剪切體分解產(chǎn)物后的小鼠，并對小鼠體內(nèi)的氨基酸n端片段、中間片段及c端片段的表達(dá)抑制結(jié)果進(jìn)行檢測，從而獲得bmx剪切體具有肺癌耐藥性機制檢測活性的關(guān)鍵位點；
步驟s3、將獲得的具有肺癌耐藥性機制檢測活性的關(guān)鍵位點利用現(xiàn)有的醫(yī)學(xué)技術(shù)，制備檢測肺癌耐藥性機制試劑。
本發(fā)明提出的bmx剪切體可作為肺癌細(xì)胞對抗癌藥物耐藥性形成和程度的相關(guān)因子，能夠有效的檢測肺癌耐藥性機制，本發(fā)明提出的bmx剪切體，其制備方法簡單，制備條件溫和，制備所需成本低，制備的bmx剪切體用于制備檢測肺癌耐藥性機制的試劑，其篩選方法簡單，值得推廣。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步解說。
實施例
本發(fā)明提出的bmx剪切體，位于染色體xp25.5的dxs203與dxs212兩位點之間，是由前380個氨基酸組成，具有seqidno1-15、39-54、72-83、102-137所示的氨基酸序列；所述bmx剪切體不包含蛋白缺失野生型bmx的n端；其中bmx剪切體由包含seqno.1所包含的核苷酸序列或其互補序列的多核苷酸編碼。
bmx剪切體的cdna引物包括5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段，其擴增條件為：以bmx剪切體的cdna為模板，以蛋白缺失野生型bmx的n端為參照，以引物5'-agagttcgcggtgatatgcc-3'片段和5'-gtgcgagatcacgagagagga-3'片段，在反應(yīng)體系為15ul，反應(yīng)條件為：88℃5min；88℃30sec，59℃30sec，65℃30sec，32個循環(huán)；65℃5min，進(jìn)行擴增。
一種bmx剪切體的制備方法，包括以下步驟：準(zhǔn)備防爆玻璃反應(yīng)器，從反應(yīng)器的下方通入氮氣，通入反應(yīng)器的氮氣從反應(yīng)器的上方排出，按權(quán)利要求1中所述的氨基酸序列將氨基酸加入反應(yīng)器中，加入權(quán)利要求2中的多核苷酸，利用氮氣鼓泡的方式對反應(yīng)物進(jìn)行攪拌，從而制得bmx剪切體。
bmx剪切體可用于制備檢測肺癌耐藥性機制的試劑，其中檢測肺癌耐藥性機制試劑的篩選方法，包括以下步驟：
步驟s1、在酪氨酸激酶的催化作用下，將bmx剪切體進(jìn)行分解，將所得的分解產(chǎn)物分別注射于小鼠腹腔內(nèi)，并向小鼠腹腔內(nèi)注射肺癌感染病毒；
步驟s2、觀察注射bmx剪切體分解產(chǎn)物后的小鼠，并對小鼠體內(nèi)的氨基酸n端片段、中間片段及c端片段的表達(dá)抑制結(jié)果進(jìn)行檢測，從而獲得bmx剪切體具有肺癌耐藥性機制檢測活性的關(guān)鍵位點；
步驟s3、將獲得的具有肺癌耐藥性機制檢測活性的關(guān)鍵位點利用現(xiàn)有的醫(yī)學(xué)技術(shù)，制備檢測肺癌耐藥性機制試劑。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。