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一種戈氏梭菌特異性PCR檢測引物及方法與流程

文檔序號:12697241閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.戈氏梭菌硫氧還蛋白編碼基因Trx,核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.一種戈氏梭菌特異性PCR檢測引物,該引物為一對,正向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,反向引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.利用權(quán)利要求2所述戈氏梭菌特異性PCR檢測引物進行PCR檢測的方法,其特征在于,步驟如下:

(1)提取組織樣品中的RNA;

(2)將步驟(1)提取獲得的RNA進行反轉(zhuǎn)錄,制得cDNA;

(3)以步驟(2)制得的cDNA為模板,上述戈氏梭菌特異性PCR檢測引物為特異引物,進行PCR擴增,獲得擴增產(chǎn)物;

(4)取步驟(3)制得的擴增產(chǎn)物,經(jīng)電泳檢測,如果檢測結(jié)果在315bp處出現(xiàn)條帶,則組織樣品中含有戈氏梭菌,如果檢測結(jié)果中未在315bp處出現(xiàn)條帶,則組織樣品中不含戈氏梭菌。

4.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,PCR擴增體系如下,總體積20μL:

最后用滅菌雙蒸水補至20μL。

5.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述步驟(3)中,PCR擴增程序如下:

94℃預(yù)變性3min;94℃變性30s,60℃退火30s,72℃延伸20s,32個循環(huán);72℃延伸5min,4℃保存。

6.如權(quán)利要求3所述的方法,其特征在于,所述步驟(4)中,所述電泳檢測為采用質(zhì)量百分比為1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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