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一種VDR?His融合蛋白及其DNA序列、表達(dá)和應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12104066閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1. 一種VDR-His融合蛋白,其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2. 權(quán)利要求1所述VDR-His融合蛋白的DNA序列,其DNA序列如SEQ ID No.1所示。

3.一種含有權(quán)利要求2所述VDR-His融合蛋白的DNA序列的表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的表達(dá)載體,其特征在于:所述表達(dá)載體為真核表達(dá)載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體,其特征在于:所述的真核表達(dá)載體為pcDNA3.1/His質(zhì)粒。

6.一種含有權(quán)利要求2所述VDR-His融合蛋白的DNA序列或權(quán)利要求3所述表達(dá)載體的宿主菌。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的宿主菌,其特征在于:所述宿主菌為大腸桿菌。

8.一種權(quán)利要求1所述的VDR-His融合蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:包括以下步驟:

(1)設(shè)計(jì)擴(kuò)增人VDR的cDNA序列的上、下游引物,通過(guò)PCR擴(kuò)增程序獲得人VDR的cDNA片段;

(2)利用重組技術(shù)將人VDR的cDNA片段與6×His tag的cDNA實(shí)現(xiàn)連接,其間插入12個(gè)甘氨酸cDNA序列,構(gòu)建真核表達(dá)載體;

(3)將步驟(2)得到的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)、純化。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的VDR-His融合蛋白的表達(dá)方法,其特征在于:步驟(2)所述的表達(dá)載體為pcDNA3.1/His質(zhì)粒。

10.一種權(quán)利要求1所述的VDR-His融合蛋白在維生素D藥物的篩選、鑒定以及活性評(píng)估的應(yīng)用。

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