本發(fā)明涉及一種高效誘導(dǎo)沉香結(jié)香的復(fù)合微生物菌劑，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
沉香又叫沉水香，是沉香屬植物在生長(zhǎng)過(guò)程中遭遇外力入侵或被某種病毒或細(xì)菌所侵染，令沉香屬植物本身產(chǎn)生一種抗體，以抵抗外來(lái)的侵略，該抗體凝結(jié)于沉香屬植物木質(zhì)部?jī)?nèi)形成的一種特異產(chǎn)品，即沉香樹(shù)脂。沉香屬植物在健康的情況下是無(wú)法產(chǎn)生沉香的。沉香屬植物即使受傷或被入侵后通常也要積累數(shù)年才能形成沉香，而且產(chǎn)出率非常低，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能夠滿足當(dāng)前的市場(chǎng)需求。為此人們采取了各種人為地結(jié)香方法，以提高結(jié)香的成功率及沉香的產(chǎn)量。
但是目前所有結(jié)香方法的效果都不是很理想，結(jié)香效率低，時(shí)間長(zhǎng)；沉香的品質(zhì)不高，產(chǎn)率低，而且大量的沉香樹(shù)被破壞。因此，如何充分提高結(jié)香效率，緩解沉香供需矛盾成為當(dāng)前生產(chǎn)上的關(guān)鍵問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是為解決當(dāng)前沉香結(jié)香產(chǎn)量低、品質(zhì)差、不能滿足市場(chǎng)需求等問(wèn)題，提供一種高效誘導(dǎo)沉香結(jié)香的復(fù)合微生物菌劑。具體制備步驟如下：
(1)菌種采集：采集自不同地區(qū)、不同地貌自然環(huán)境下生長(zhǎng)的白木香結(jié)香部位的復(fù)合微生物菌群；
(2)富集培養(yǎng)：將采集的不同的微生物復(fù)合菌群接種在液體富集培養(yǎng)基上150rpm，33℃，培養(yǎng)10d；
(3)擴(kuò)大培養(yǎng)：按照5%的接種量，將富集培養(yǎng)基中的菌液接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中150rpm，33℃，進(jìn)行擴(kuò)繁；
(4)復(fù)合微生物菌劑制備：將上述菌液離心10000rpm，10min收集菌體去掉上清液，添加保護(hù)劑，-20℃冷凍24h，真空干燥；
(5)沉香結(jié)香：將真空冷凍干燥好的復(fù)合微生物菌劑通過(guò)鑿洞法接種到5年齡健康白木香樹(shù)上；
(6)侵染能力綜合分析：結(jié)香后觀察記錄各個(gè)實(shí)驗(yàn)組復(fù)合微生物菌群的浸出物含量、浸染面積、定殖率來(lái)檢驗(yàn)沉香的品質(zhì)及其產(chǎn)量，選擇最佳的復(fù)合微生物菌群作為最佳目標(biāo)。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：復(fù)合微生物菌群取自白木香，接種到白木香，容易在白木香樹(shù)干上定植、侵染，因此誘導(dǎo)結(jié)香的成功率高。能夠成功解決目前單一真菌誘導(dǎo)產(chǎn)生的沉香產(chǎn)量低、品質(zhì)差、不能滿足市場(chǎng)需求量等問(wèn)題。
具體實(shí)施方式
復(fù)合微生物菌劑的制備：
(1)菌種采集：采集自不同地區(qū)、不同地貌自然環(huán)境下生長(zhǎng)的白木香結(jié)香部位的復(fù)合微生物菌群；
(2)富集培養(yǎng)：將采集的不同的微生物復(fù)合菌群接種在液體富集培養(yǎng)基上150rpm，33℃，培養(yǎng)10d；
(3)擴(kuò)大培養(yǎng)：按照5%的接種量，將富集培養(yǎng)基中的菌液接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中150rpm，33℃，進(jìn)行擴(kuò)繁；
(4)復(fù)合微生物菌劑制備：將上述菌液離心10000rpm，10min收集菌體去掉上清液，添加保護(hù)劑，-20℃冷凍24h，真空干燥。
復(fù)合微生物菌劑在白木香樹(shù)上的結(jié)香檢驗(yàn)：
(1)沉香結(jié)香：將真空冷凍干燥好的復(fù)合微生物菌劑通過(guò)鑿洞法接種到5年齡健康白木香樹(shù)上；具體實(shí)施步驟如下：選定生長(zhǎng)健康，苗齡5年以上，胸徑≥15cm的白木香樹(shù)；在白木香樹(shù)的逆風(fēng)方向，自上而下，每隔30~50cm處，用鋸、鑿等工具，按照垂直或者45°角對(duì)樹(shù)干的方向開(kāi)一香門(mén)，深度約為樹(shù)干胸徑的1/3，口寬2~3公分；然后將復(fù)合微生物菌劑涂滿洞口，用塑料薄膜密封；
(2)侵染能力綜合分析：結(jié)香后觀察記錄各個(gè)實(shí)驗(yàn)組復(fù)合微生物菌群的浸出物含量、浸染面積、定殖率來(lái)檢驗(yàn)沉香的品質(zhì)及其產(chǎn)量，選擇最佳的復(fù)合微生物菌群作為最佳目標(biāo)。白木香樹(shù)結(jié)菌后一個(gè)月洞口就會(huì)觀察到顏色變深，若未發(fā)生變化表示接種失敗，可刮去洞口表面重新接種。分別觀察測(cè)定結(jié)菌后0、1、3、6、9、12個(gè)月各項(xiàng)指標(biāo)。所述的浸染物含量的測(cè)定用gc-ms分析法分析化合物的差異性，通過(guò)各類(lèi)化合物含量的分析來(lái)進(jìn)一步判斷沉香的品質(zhì)；所述的浸染面積的測(cè)定用圓周面積法計(jì)算；定殖率按照浸染組織/接種組織的占比來(lái)計(jì)算。通過(guò)綜合浸染能力分析可以更好地挑選出優(yōu)勢(shì)菌種，促進(jìn)高效誘導(dǎo)沉香結(jié)香的品質(zhì)。
上述實(shí)施案例和說(shuō)明書(shū)中的描述只是對(duì)本發(fā)明的原理和最佳實(shí)施例，在不脫離本發(fā)明精神和范圍下，本發(fā)明還會(huì)有各種改進(jìn)和變化，這些改進(jìn)和變化都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。