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具有抗鞘翅目昆蟲活性的殺蟲毒素蛋白的制作方法

文檔序號:11888000閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種重組核酸分子,其任選地包含:

a)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至具有選自由以下組成的組的核苷酸序列的多核苷酸區(qū)段:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939以及SEQ ID NO:60從位置100-939;

b)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼殺蟲多肽的多核苷酸區(qū)段,所述殺蟲多肽包含選自由以下組成的組的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61;

c)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼殺蟲多肽的多核苷酸區(qū)段,所述殺蟲多肽包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列;以及

d)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼具有殺蟲活性的多肽的多核苷酸區(qū)段;其中所述多核苷酸區(qū)段在嚴格雜交條件下與具有如在a)中的任何序列中列出的核苷酸序列的DNA雜交;并且其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37℃下雜交4至12小時,以及在60℃至約65℃下在0.1x SSC中的洗滌;

一種展示殺蟲活性的重組多肽,所述重組多肽選自由以下組成的組:

a)多肽,其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列;

b)多肽,其包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

c)多肽,其由如在以下中的任一個中列出的核苷酸序列編碼:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939或SEQ ID NO:60從位置100-939;以及

d)多肽,其由在嚴格雜交條件下與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一個的核苷酸序列的補體雜交的核苷酸序列編碼;其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37C下雜交4至12小時,以及在60C-65C下在0.1x SSC中的洗滌;

一種組合物,其包含展示殺蟲活性且具有異源氨基酸序列的重組多肽,其中所述重組多肽選自由以下組成的組:

a)多肽,其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列;

b)多肽,其包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

c)多肽,其由如在以下中的任一個中列出的核苷酸序列編碼:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939或SEQ ID NO:60從位置100-939;以及

d)多肽,其由在嚴格雜交條件下與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一個的核苷酸序列的補體雜交的核苷酸序列編碼;其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37C下雜交4至12小時,以及在60C-65C下在0.1x SSC中的洗滌;

一種用于控制鞘翅目害蟲侵擾的殺蟲多肽,其中所述殺蟲多肽任選地:

a)具有選自由以下組成的組的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61;或

b)展示與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

一種植物,其具有穩(wěn)定地并入其基因組的DNA構(gòu)建體,所述DNA構(gòu)建體包含編碼具有殺蟲活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列,其中所述蛋白質(zhì)任選地:

a)具有選自由以下組成的組的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61;或

b)展示與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

一種種子,其具有穩(wěn)定地并入其基因組的DNA構(gòu)建體,所述DNA構(gòu)建體包含編碼具有殺蟲活性的蛋白質(zhì)的核苷酸序列,其中所述蛋白質(zhì)任選地:

a)具有選自由以下組成的組的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61;或

b)展示與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的重組核酸分子,

其中所述核苷酸序列任選地:

a)為已被設(shè)計用于在植物中表達的合成序列;

b)選自由以下組成的組:SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58和60;

c)在植物細胞中表達;或

d)還包含編碼異源多肽的核苷酸序列;

其中所述重組核酸分子存在于宿主細胞內(nèi),并且其中所述宿主細胞選自由細菌宿主細胞和植物宿主細胞組成的組;

其中所述重組核酸分子存在于植物宿主細胞內(nèi),并且其中所述植物宿主細胞存在于植物、植物組織或種子內(nèi);

其中所述重組核酸分子存在于植物、植物組織或種子中的植物宿主細胞內(nèi),并且其中其中所述植物、植物組織或種子選自由以下組成的組:玉米、高粱、小麥、卷心菜、向日葵、番茄、十字花科植物、辣椒、馬鈴薯、棉花、水稻、大豆、甜菜、甘蔗、煙草、大麥和油菜。

3.如權(quán)利要求1所述的組合物,其中,任選地:

a)所述組合物選自由以下組成的組:粉末、粉塵、球粒、顆粒、噴霧、乳液、膠體和溶液,各自呈農(nóng)業(yè)上可接受的制劑形式;

b)所述組合物通過蘇云金芽孢桿菌細胞的培養(yǎng)物的干燥、凍干、均質(zhì)化、萃取、過濾、離心、沉降或濃縮來制備;或

c)所述組合物包含約1重量%至約99重量%的所述多肽。

4.一種控制鞘翅目害蟲群體的方法,所述方法包括使所述群體與殺蟲有效量的展示殺蟲活性的重組多肽相接觸,所述重組多肽選自由以下組成的組:

a)多肽,其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列;

b)多肽,其包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

c)多肽,其由如在以下中的任一個中列出的核苷酸序列編碼:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939或SEQ ID NO:60從位置100-939;以及

d)多肽,其由在嚴格雜交條件下與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一個的核苷酸序列的補體雜交的核苷酸序列編碼;其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37C下雜交4至12小時,以及在60C-65C下在0.1x SSC中的洗滌;

一種殺死鞘翅目害蟲的方法,所述方法包括使所述害蟲與殺蟲有效量的展示殺蟲活性的重組多肽相接觸,所述重組多肽選自由以下組成的組:

a)多肽,其包含SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列;

b)多肽,其包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59或61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%-100%(包括44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%)氨基酸序列同一性的氨基酸序列;

c)多肽,其由如在以下中的任一個中列出的核苷酸序列編碼:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939或SEQ ID NO:60從位置100-939;以及

d)多肽,其由在嚴格雜交條件下與SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、44、45、46、47、48、50、52、54、56、58或60中的任一個的核苷酸序列的補體雜交的核苷酸序列編碼;其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37C下雜交4至12小時,以及在60C-65C下在0.1x SSC中的洗滌;

一種產(chǎn)生殺蟲多肽的方法,所述方法包括在提供所述宿主細胞中所述多核苷酸區(qū)段的表達的條件下培養(yǎng)包含重組核苷酸分子的宿主細胞,其中所述殺蟲多肽由所述宿主細胞以殺蟲有效量產(chǎn)生,并且其中所述重組核苷酸分子任選地包含:

a)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至具有選自由以下組成的組的核苷酸序列的多核苷酸區(qū)段:SEQ ID NO:1從位置100-945、SEQ ID NO:3從位置100-939、SEQ ID NO:5從位置85-1011、SEQ ID NO:7從位置94-948、SEQ ID NO:9從位置79-978、SEQ ID NO:11從位置100-942、SEQ ID NO:13從位置100-939、SEQ ID NO:15從位置100-939、SEQ ID NO:17從位置85-1011、SEQ ID NO:19從位置85-1011、SEQ ID NO:21從位置79-978、SEQ ID NO:23從位置79-978、SEQ ID NO:25從位置100-963、SEQ ID NO:27從位置100-963、SEQ ID NO:29從位置100-963、SEQ ID NO:31從位置1-846、SEQ ID NO:33從位置1-843、SEQ ID NO:35從位置226-1065、SEQ ID NO:37從位置187-1023、SEQ ID NO:39從位置1-846、SEQ ID NO:41從位置100-939且具有占據(jù)位置781-783的除TAA、TAG或TGA以外的任何密碼子、SEQ ID NO:43從位置100-945、SEQ ID NO:44從位置100-939、SEQ ID NO:45從位置85-1011、SEQ ID NO:46從位置94-948、SEQ ID NO:47從位置79-978、SEQ ID NO:48從位置1-852、SEQ ID NO:50從位置1-852、SEQ ID NO:52從位置1-852、SEQ ID NO:54從位置1-933、SEQ ID NO:56從位置100-939、SEQ ID NO:58從位置100-939以及SEQ ID NO:60從位置100-939;

b)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼殺蟲多肽的多核苷酸區(qū)段,所述殺蟲多肽包含選自由以下組成的組的氨基酸序列:SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61;

c)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼殺蟲多肽的多核苷酸區(qū)段,所述殺蟲多肽包含與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、49、51、53、55、57、59和61中的任一個的氨基酸序列具有至少44%、或50%、或55%、或60%、或65%、或70%、或75%、或80%、或85%、或90%、或95%、或約100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列;以及

d)異源啟動子,所述異源啟動子可操作地連接至編碼具有殺蟲活性的多肽的多核苷酸區(qū)段;其中所述多核苷酸區(qū)段在嚴格雜交條件下與具有如在a)中的任何序列中列出的核苷酸序列的DNA雜交;并且其中所述雜交條件包括在50%甲酰胺、1M NaCl和1%SDS中在37℃下雜交4至12小時,以及在60℃至約65℃下在0.1x SSC中的洗滌;

一種保護植物免于鞘翅目昆蟲害蟲侵擾的方法,所述方法包括在植物或植物細胞中表達編碼殺蟲多肽的核苷酸序列,其中所述殺蟲多肽包含具有殺蟲活性且與選自由以下組成的組的氨基酸序列具有至少44%-100%同一性的氨基酸序列:

a)如在以下各項中列出的氨基酸序列:SEQ ID NO:2從氨基酸位置34-315、SEQ ID NO:4從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:6從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:8從氨基酸位置34-316、SEQ ID NO:10從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:12從氨基酸位置34-314、SEQ ID NO:14從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:16從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:18從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:20從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:22從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:24從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:26從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:28從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:30從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:32從氨基酸位置1-282、SEQ ID NO:34從氨基酸位置1-281、SEQ ID NO:36從氨基酸位置76-355、SEQ ID NO:38從氨基酸位置62-341、SEQ ID NO:49從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:51從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:53從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:55從氨基酸位置1-310、SEQ ID NO:57從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:59從氨基酸位置34-313以及SEQ ID NO:61從氨基酸位置34-313;或

b)如在a)中列出的任何序列,所述序列可操作地連接至選自由以下組成的組的亞細胞細胞器靶向肽:葉綠體或質(zhì)體靶向肽以及造粉體靶向肽;

一種增加由植物產(chǎn)生的種子、水果、漿果、堅果、蔬菜、油或棉絨作物的產(chǎn)率的方法,所述方法包括在田地中生長所述植物;其中所述田地受害蟲侵擾,所述多肽具有針對所述害蟲的殺蟲活性;其中DNA構(gòu)建體被穩(wěn)定地并入所述植物的所述細胞的所述基因組中并且編碼殺蟲蛋白;其中所述殺蟲蛋白包含選自由以下組成的組的氨基酸序列:

a)如在以下各項中列出的氨基酸序列:SEQ ID NO:2從氨基酸位置34-315、SEQ ID NO:4從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:6從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:8從氨基酸位置34-316、SEQ ID NO:10從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:12從氨基酸位置34-314、SEQ ID NO:14從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:16從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:18從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:20從氨基酸位置29-337、SEQ ID NO:22從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:24從氨基酸位置27-326、SEQ ID NO:26從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:28從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:30從氨基酸位置34-321、SEQ ID NO:32從氨基酸位置1-282、SEQ ID NO:34從氨基酸位置1-281、SEQ ID NO:36從氨基酸位置76-355、SEQ ID NO:38從氨基酸位置62-341、SEQ ID NO:49從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:51從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:53從氨基酸位置1-283、SEQ ID NO:55從氨基酸位置1-310、SEQ ID NO:57從氨基酸位置34-313、SEQ ID NO:59從氨基酸位置34-313以及SEQ ID NO:61從氨基酸位置34-313;

b)展示與a)中的任一個至少44%-100%氨基酸序列同一性且展示殺蟲活性的氨基酸序列;以及

c)如在a)或b)中列出的任何序列,所述序列可操作地連接至選自由以下組成的組的分泌靶向肽:葉綠體或質(zhì)體靶向肽以及造粉體靶向肽。

5.如權(quán)利要求4所述的方法,其用于保護植物免于鞘翅目昆蟲害蟲侵擾,其中,任選地:

所述植物或植物細胞還包含對鱗翅目、半翅目、同翅目、纓翅目、植物病原性線蟲、真菌植物病原體或鞘翅目植物害蟲具有毒性的試劑;

所述試劑選自由化學(xué)劑和蛋白質(zhì)劑組成的組;

所述化學(xué)劑選自由以下組成的組:有機氯化物、有機磷酸酯、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯、新煙堿、萊恩堿以及靶向用于在所述植物害蟲中抑制的特異性基因的dsRNA分子;或

所述蛋白質(zhì)劑選自由以下組成的組:馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP以及ω-Hexatoxin-Hv1a毒素蛋白和用于控制鱗翅目、半翅目、同翅目、纓翅目、植物病原性線蟲、真菌植物病原體或鞘翅目植物害蟲的Cry蛋白毒素。

6.一種重組殺蟲多肽,其包含與SEQ ID NO:4的至少75%同一性以及在飼料生物測定中與以下相比高至少約1.5、2、3、4、5、6、10、15、25或50倍的殺蟲活性:TIC2463、馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP或ω-Hexatoxin-Hv1a;

一種重組殺蟲多肽,其包含與SEQ ID NO:4的至少75%同一性,以及等于或高于以下的植物中殺蟲活性的植物中殺蟲活性:TIC2463、馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP或ω-Hexatoxin-Hv1a;

一種包含重組殺蟲多肽的殺蟲組合物,所述重組殺蟲多肽包含與SEQ ID NO:4的至少75%同一性以及在飼料生物測定中與以下相比高至少約1.5、2、3、4、5、6、10、15、25或50倍的殺蟲活性:TIC2463、馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP或ω-Hexatoxin-Hv1a;

一種重組核酸分子,其包含可操作地連接至編碼第一殺蟲多肽的多核苷酸的異源啟動子,所述第一殺蟲多肽包含與SEQ ID NO:4的至少75%同一性以及在飼料生物測定中與以下相比高至少約1.5、2、3、4、5、6、10、15、25或50倍的殺蟲活性:TIC2463、馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP或ω-Hexatoxin-Hv1a;

一種植物或其部分,其包含重組核酸分子,所述重組核酸分子包含可操作地連接至編碼第一殺蟲多肽的多核苷酸的異源啟動子,所述第一殺蟲多肽包含與SEQ ID NO:4的至少75%同一性以及在飼料生物測定中與以下相比高至少約1.5、2、3、4、5、6、10、15、25或50倍的殺蟲活性:TIC2463、馬鈴薯糖蛋白、TIC100/101二元毒素、ET33/34二元毒素、TIC863、ET80/76二元毒素、ET70、Cry3Bb、Cry1C變體、Cry3A變體、Cry3、Cry3B、Cry34/35、5307、Axmi184、Axmi205、AxmiR1、TIC901、TIC1201、TIC407、TIC417、TIC431、TIC807、TIC853、TIC3131、DIG-10、eHIP或ω-Hexatoxin-Hv1a。

7.如權(quán)利要求6所述的重組殺蟲多肽,其中,任選地:

a)所述殺蟲活性是針對鞘翅目物種;

b)在飼料生物測定中所述殺蟲活性通過被稱為引起目標昆蟲的50%死亡率的殺蟲多肽致死濃度的LC50進行測量;或

c)在飼料生物測定中所述殺蟲活性通過被稱為引起目標昆蟲蛻皮的50%抑制的殺蟲多肽濃度的MIC50進行測量。

8.如權(quán)利要求6所述的重組核酸分子,其中所述多核苷酸針對植物中表達進行密碼子優(yōu)化。

9.如權(quán)利要求6所述的植物或其部分,其中,任選地:

a)所述殺蟲多肽被靶向葉綠體;或

b)所述植物還包含具有不同作用模式的第二殺蟲多肽或能夠抑制鞘翅目物種中的必需基因的dsRNA。

10.如權(quán)利要求9所述的植物或其部分,其中,任選地:

a)所述第二殺蟲多肽、所述dsRNA和所述第一殺蟲多肽對相同鞘翅目物種具有毒性;或

b)所述第二殺蟲多肽、所述dsRNA和所述第一殺蟲多肽對不同鞘翅目物種具有毒性。

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