去除肝素鈉精品中ds雜質(zhì)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種肝素鈉精品去除DS雜質(zhì)的方法，為了滿足美國(guó)客戶對(duì)我公司提出：DS含量必須≤2％的要求，技術(shù)方案是根據(jù)肝素鈉與硫酸皮膚素(DS)在不同溶劑、不同溫度下溶解不同的原理，達(dá)到有效分離產(chǎn)品中的硫酸軟骨素(DS)雜質(zhì)的目的。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典及西歐藥典所規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)。
【專利說明】去除肝素鈉精品中DS雜質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說涉及從肝素鈉精品中去除DS雜質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是從豬小腸粘膜中提取的一種生化藥品，是手術(shù)中不可替代的、挽救生命的、市場(chǎng)不能斷檔的首選藥物。自二十世紀(jì)四十年代用于臨床以來，其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，尤其是二十世紀(jì)九十年代以來，該產(chǎn)品臨床主要用于防止血栓形成，治療心血管病、血液病、尿毒癥等。西方國(guó)家已開始研究肝素鈉對(duì)癌癥的防治作用，其新用途不斷增加。
[0003]進(jìn)入二十世紀(jì)七十年代以來，我國(guó)肝素鈉生產(chǎn)工藝不斷改進(jìn)，成為世界肝素鈉產(chǎn)量最大的國(guó)家。國(guó)際市場(chǎng)的肝素鈉產(chǎn)品有70%以上來自中國(guó)。肝素鈉精品生產(chǎn)已由高錳酸鉀氧化法發(fā)展到雙氧水氧化法，結(jié)合醇洗分離法，將大量的雜質(zhì)用乙醇帶走，到后來發(fā)展到酶解法雜質(zhì)進(jìn)一步被去除。隨著用藥安全標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高，客戶對(duì)肝素鈉成品DS雜質(zhì)含量要求也進(jìn)一步提高，特別是國(guó)外客戶對(duì)肝素鈉成品中DS雜質(zhì)含量要求也更高，為滿足市場(chǎng)客戶要求，促進(jìn)出口，國(guó)內(nèi)肝素企業(yè)對(duì)此工藝技術(shù)不斷改進(jìn)最大量的去除DS雜質(zhì)，從而滿足市場(chǎng)需求。
[0004]中國(guó)藥典及美國(guó)藥典對(duì)肝素鈉成品DS雜質(zhì)含量均無(wú)要求，美國(guó)客戶對(duì)我公司提出:DS含量必須<2%，為滿足客戶要求，促進(jìn)出口，故對(duì)此立項(xiàng)進(jìn)行研發(fā)。根據(jù)肝素鈉與硫酸皮膚素(DS)在不同溶劑、不同溫度下溶解不同的原理，達(dá)到有效分離產(chǎn)品中的硫酸軟骨素(DS)雜質(zhì)的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種溶解度分離法分離肝素鈉與硫酸皮膚素(DS)的方法，是為了最大限度地去除DS雜質(zhì)，根據(jù)肝素鈉與硫酸皮膚素(DS)在不同溶劑、不同溫度下溶解不同的原理，在肝素鈉精制工序第四次沉淀時(shí)，控制有機(jī)溶劑的沉淀溫度、沉淀度數(shù)和沉淀時(shí)間，有效去除肝素鈉中的DS雜質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)用溶解度分離法將肝素鈉與DS雜質(zhì)分離。
[0006]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
[0007]一種溶解度分離法分離肝素鈉中的硫酸皮膚素(DS)的方法，其特征在于:采用溶解度分離法將肝素鈉中的硫酸皮膚素(DS)去除。
[0008]在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征:所述鹽解-酶解法包括如下步驟:
[0009]一、提取
[0010]1、粗品溶解:
[0011]開啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，按原料與飲用水1: (6-7)比例溶解，攪拌5-10小時(shí)后，用攪拌棒試底部是否全部溶解；
[0012]2、酶解:
[0013]將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.0-8.0，升溫至50_55°C之間時(shí)加入胃蛋白酶5-10g /億單位，再加入10-20g /億單位胰酶，50-55°C保溫2_4小時(shí)；[0014]3、急升溫:
[0015]將上一步酶解液在30~40分鐘內(nèi)升溫至85_90°C，靜止10_30分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50-55°C時(shí)，用2-6mol / L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時(shí)；
[0016]4、底部沉淀的雜質(zhì)離心:
[0017]虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液；
[0018]二、精制
[0019]1、第一次沉淀:
[0020]待上述上清液和離心液溫度降至20_30°C，加入20_30g / L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97 %的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~50%，沉淀10-12小時(shí)；
[0021]2、第一次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時(shí)；
[0022]3、第二次沉淀:溶液加入20_30g / L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~50%，沉淀10-12小時(shí)；
[0023]4、第二次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時(shí)；
[0024]5、第三次沉淀:溶液加入20_30g / L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~50%，沉淀10-12小時(shí)；
[0025]6、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時(shí)；
[0026]7、第四次沉淀:上一步溶液若有沉淀物析出，則用離心機(jī)離心，沒有析出則直接加入20-30g / L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH6.0-7.0，將溶液放冷庫(kù)中冷凍至-10 V —5 °C，邊攪邊加-10 °C —5 °C的丙酮，使得丙酮占溶液的質(zhì)量百分含量為40-45%,-50C -0°C保溫24-30小時(shí)，然后將廢丙酮棄去，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，留底部沉淀物用純化水溶解，溶液再加入20-30g / L氯化鈉，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加乙醇，使乙醇濃度在20°C時(shí)為45-50%，沉淀10-12小時(shí)；
[0027]8、將沉淀物用純化水按2-5L /億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80%，再加入23-26%的氯化鈉溶液，每I升溶液加
6-10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時(shí)；
[0028]9、將上層乙醇棄去，加入無(wú)水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99%，靜止24-30小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；
[0029]10、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度35-60°C，烘干70-80小時(shí)；
[0030]11、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。[0031]在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征:第四次沉淀后的溶液進(jìn)行QA取樣化驗(yàn)，測(cè)吸光度:260nm〈0.1 ；400nm<0.02 ;若不合格，繼續(xù)重復(fù)上面過程，若合格移交下一工序。
[0032]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:
[0033]本發(fā)明的肝素鈉精品生產(chǎn)采用鹽解-酶解法，結(jié)合醇洗分離法，將大量的雜質(zhì)用乙醇帶走，其成品DS含量< 2%，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典及西歐藥典所規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)，也滿足了市場(chǎng)客戶的要求。
[0034]肝素鈉中DS雜質(zhì)最大限度地去除，為世界生物醫(yī)藥的發(fā)展作出貢獻(xiàn)；為患者用藥提供了安全保障；本產(chǎn)品每年出口在10個(gè)億以上，為國(guó)家出口創(chuàng)匯作出貢獻(xiàn)。又是一個(gè)支持三農(nóng)、變廢為寶，環(huán)境保護(hù)的好項(xiàng)目。
【具體實(shí)施方式】
[0035]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0036]實(shí)施例1
[0037]一、提取
[0038]1、粗品溶解:
[0039]開啟水閥，加入900L飲用水，再將150億單位肝素鈉粗品加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，攪拌6小時(shí)后，用攪拌棒試底部是否全部溶解；
[0040]2、酶解:`[0041]將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.5，升溫至53°C時(shí)加入胃蛋白酶1500g，再加入300g胰酶，53°C保溫3小時(shí);
[0042]3、急升溫:
[0043]將上一步酶解液在35分鐘內(nèi)升溫至88°C，靜止15分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50°C時(shí)，用6mol / L氫氧化鈉溶液調(diào)PH11.0，靜止分層24小時(shí)；
[0044]4、底部沉淀的雜質(zhì)離心:
[0045]虹吸上清，用80目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液；
[0046]二、精制
[0047]1、第一次沉淀:
[0048]待上述上清液和離心液溫度降至25°C，加入22.5kg氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.5，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液920L，沉淀10小時(shí)；
[0049]2、第一次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物即產(chǎn)品用640L純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PHl1.0，然后加入20L雙氧水，氧化10小時(shí)；
[0050]3、第二次沉淀:溶液加入12.8kg氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液640L，沉淀10小時(shí)；
[0051]4、第二次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用640L純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PHl1.0，然后加入20L雙氧水，氧化10小時(shí)；
[0052]5、第三次沉淀:溶液加入12.8kg氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH6.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液640L，沉淀10小時(shí)；[0053]6、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用640L純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PHl1.0，然后加入21L雙氧水，氧化10小時(shí)；
[0054]7、第四次沉淀:上一步溶液若有沉淀物析出，則用離心機(jī)離心，沒有析出則直接加入12.8kg氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH6.0,將溶液放冷庫(kù)中冷凍至_6°C，邊攪邊加-10°C的丙酮600L，_3°C保溫24小時(shí)，然后將廢丙酮棄去，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，留底部沉淀物用純化水溶解，溶液再加入12.8kg氯化鈉，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0，邊攪邊加乙醇640L，沉淀10小時(shí);
[0055]8、將沉淀物用300L純化水溶解后，用孔徑0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用840L乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80%，再加入26%的氯化鈉溶液11L，靜止沉淀10小時(shí)；
[0056]9、將上層乙醇棄去，加入500L無(wú)水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97_99%，靜止24小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；[0057]10、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度50°C，烘干72小時(shí)；
[0058]11、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5Kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。
【權(quán)利要求】
1.一種肝素鈉精品去除DS雜質(zhì)的方法，其特征在于:采用鹽解-酶解法在肝素鈉精制工序第四次沉淀時(shí)，控制有機(jī)溶劑的沉淀溫度、沉淀度數(shù)和沉淀時(shí)間，有效去除肝素鈉中的DS雜質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的除DS法去除肝素鈉中的DS雜質(zhì)的方法，其特征在于所述去除方法包括如下步驟: 一、粗制 . 1、粗品溶解: 開啟水閥，加入一定量飲用水，再將肝素鈉粗品加入到反應(yīng)罐中，邊攪邊加，按原料與飲用水1: (6-7)比例溶解，攪拌5-10小時(shí)后，用攪拌棒試底部是否全部溶解； . 2、鹽解-酶解: 將上一步溶解液，先用鹽酸溶液調(diào)PH7.0-8.0，升溫至50-551:之間時(shí)加入胃蛋白酶.5-10g /億單位，再加入10-20g /億單位胰酶，50-55°C保溫2_4小時(shí)，再加入氯化鈉，反復(fù)調(diào)節(jié)酶和氯化鈉的量。 .3、急升溫: 將上一步鹽解-酶解液在30~40分鐘內(nèi)升溫至85-90°C，靜止10-30分鐘，開攪拌，通入循環(huán)水降溫，待溫度降至50-55°C時(shí)，用2-6mol / L氫氧化鈉溶液調(diào)PH10.0-12.0，靜止分層20-30小時(shí)； . 4、底部沉淀的雜質(zhì)離心: 虹吸上清，用40-100目濾袋過濾，過濾后的溶液分為上清液和下層沉淀，留上清液待沉淀，下層沉淀放離心機(jī)離心，離心后留上層離心液； 二、精制 .1、第一次沉淀: 待上述上清液和離心液溫度降至20-30°C，加入20-30g / L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸將濾液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~50%，沉淀10-12小時(shí)； . 2、第一次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0,然后加入體積3-5%雙氧水,氧化10-12小時(shí)； .3、第二次沉淀:溶液加入20-30g/ L氯化鈉，攪拌溶解后，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~.50%，沉淀10-12小時(shí)； . 4、第二次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，然后加入體積3-5%雙氧水，氧化10-12小時(shí)； . 5、第三次沉淀:溶液加入20-30g/ L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0，邊攪邊加濃度為95~97%的乙醇溶液，使得乙醇的濃度在20°C時(shí)達(dá)到45~50%，沉淀10-12小時(shí)； .6、第三次氧化:棄去上層廢乙醇，下層沉淀物用純化水溶解，用氫氧化鈉溶液將溶液調(diào)PH10.0-12.0,然后加入體積3-5%雙氧水,氧化10-12小時(shí)； .7、第四次沉淀:上一步溶液若有沉淀物析出，則用離心機(jī)離心，沒有析出則直接加入.20-30g / L氯化鈉，用鹽酸溶液將溶液調(diào)PH6.0-7.0，將溶液放冷庫(kù)中冷凍至_10°C —5°C，邊攪邊加-10°C —5°C的丙酮，使得丙酮占溶液的質(zhì)量百分含量為40-45%，-50C -(TC保溫24-30小時(shí)，然后將廢丙酮棄去，多硫酸軟骨素被丙酮帶走，留底部沉淀物用純化水溶解，溶液再加入20-30g / L氯化鈉，用鹽酸溶液調(diào)將溶液PH6.0-7.0，邊攪邊加乙醇，使乙醇濃度在20°C時(shí)為45-50%，沉淀10-12小時(shí)； (8)、將沉淀物用純化水按2-5L/億單位溶解后，用孔徑0.22-0.3微米濾膜板框機(jī)微濾，用乙醇沉淀，使乙醇濃度達(dá)75-80%，再加入23-26%的氯化鈉溶液，每I升溶液加6_10ml氯化鈉溶液，靜止沉淀10-12小時(shí)； (9)、將上層乙醇棄去，加入無(wú)水乙醇脫水，邊攪邊加，使乙醇濃度為97-99%，靜止24-30小時(shí)，棄去上層乙醇，將不銹鋼砂芯棒放在產(chǎn)品中，用真空泵通過管道和過濾瓶把剩余乙醇抽干，待干燥； (10)、將抽干的產(chǎn)品均勻放置在不銹鋼盤中，放在真空干燥箱中抽真空，用循環(huán)水加溫，溫度35-60。。，烘干70-80小時(shí)； ( 11)、包裝:將產(chǎn)品取出，稱重，使每包裝袋5kg，用封口機(jī)封口，放在鋁桶中待驗(yàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽解-酶解相結(jié)合的方法，其特征在于:肝素鈉提取工序，采用鹽解-酶解相結(jié)合的技術(shù)，可以去除90%以上的DS雜質(zhì)；肝素鈉精制工序，第四次沉淀時(shí)，控制有機(jī)溶劑的沉淀溫度、沉淀度數(shù)和沉淀時(shí)間，從而有效去除肝素鈉中的DS雜質(zhì)，使肝素鈉中DS含2%。
【文檔編號(hào)】C08B37/10GK103694373SQ201310615994
【公開日】2014年4月2日 申請(qǐng)日期:2013年11月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月23日
【發(fā)明者】劉乃山, 王小鳳, 遲培升, 夏襯來 申請(qǐng)人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司