專利名稱：一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的處理方法，特別涉及一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法。
背景技術(shù)：
玻璃酸(Hyaluronic acid，簡稱HA)，是由(1 — 3) _2_乙酰氨基_2_脫氧-β _D_葡萄糖-(1 — 4) -0- β -D-葡糖醛酸雙糖重復(fù)單位所組成的直鏈多聚糖，分子式為(C14H21NO11) ,依據(jù)組織來源不同，分子量變化范圍為2 X IO5 7Χ 106，雙糖單位數(shù)為300 11000對。
不同來源的玻璃酸結(jié)構(gòu)一致，無種屬差異，只存在相對分子量的區(qū)別。商品玻璃酸一般為鈉鹽形式，為白纖維狀或粉末狀固體，有較強(qiáng)的吸濕性，溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。玻璃酸鈉的大分子網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)通過與H2O形成氫鍵結(jié)合大量的水，在體內(nèi)具有構(gòu)成多種基質(zhì)、調(diào)節(jié)滲透壓、調(diào)控大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)、在細(xì)胞周圍形成物理屏障以及調(diào)節(jié)細(xì)胞功能等作用。玻璃酸鈉可作為眼科手術(shù)輔助用藥及變形性膝關(guān)節(jié)病和肩關(guān)節(jié)周圍炎的輔助治療，還在組織生成、創(chuàng)傷愈合、腫瘤入侵和調(diào)節(jié)細(xì)胞功能諸方面具有重要的生理功能。目前國內(nèi)的醫(yī)用級玻璃酸鈉生產(chǎn)大多是動物組織提取的生產(chǎn)工藝，原料成本較高，來源受限，且存在動物源性風(fēng)險。而發(fā)酵法生產(chǎn)玻璃酸鈉，通過基因技術(shù)，能夠篩選出不含內(nèi)毒素和外毒素且高產(chǎn)HA的變異菌株，較組織提取更加安全；發(fā)酵液與動物組織比較， 組成成分簡單，更有利于提取與純化，制備高純度HA ；能夠保證生產(chǎn)原料來源不受限制，且原料成本更加低廉。在以往的公開的文獻(xiàn)中，玻璃酸鈉發(fā)酵液的處理方式通常是直接用有機(jī)溶劑沉淀，然后再將沉淀溶解，進(jìn)行絡(luò)合等進(jìn)一步的純化。使用有機(jī)溶劑沉淀的方法，有機(jī)溶劑使用量大，成本高，而且有機(jī)溶劑的使用、儲存都存在安全風(fēng)險，有機(jī)溶劑的排放及處理存在污染的風(fēng)險。因此這種方法在工業(yè)化生產(chǎn)中存在不足。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，以克服上述玻璃酸鈉發(fā)酵液處理方法的不足。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將玻璃酸鈉發(fā)酵液加純化水稀釋，過濾除菌；(2)將步驟⑴所得的料液濃縮；(3)保持步驟( 所得的料液體積不變，流加純化水對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加氯化鈉溶液對料液進(jìn)行洗濾。在本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，步驟(1)中發(fā)酵液稀釋至其體積的2-4倍。在本發(fā)明的一更優(yōu)選實(shí)施例中，步驟(1)中發(fā)酵液稀釋至其體積的3倍。在本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，步驟O)中發(fā)酵液濃縮1 3倍。在本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，所述步驟(3)中純化水的用量為料液體積的1 6倍。在本發(fā)明的一優(yōu)選實(shí)施例中，所述步驟⑶中氯化鈉溶液的濃度為 0. 005-0. lmol/L，用量為料液體積的1 6倍。本發(fā)明的玻璃酸鈉發(fā)酵液用超濾方法處理，該方法制備所得的玻璃酸鈉發(fā)酵液安全、有效、低成本、低風(fēng)險，可基本去除發(fā)酵液中的培養(yǎng)基成份，大幅減少核酸和蛋白等的含量，特別適合醫(yī)用級玻璃酸鈉的工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式通過下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是對本發(fā)明的限定。實(shí)施例1 取玻璃酸鈉發(fā)酵液4L，加8L純化水稀釋，過濾除菌后進(jìn)行超濾，超濾過程分為二個步驟首先將料液濃縮1倍，至6L ；然后保持料液體積不變，流加12L純化水，即2倍料液體積，對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加12L濃度為0. 05mol/L氯化鈉溶液，即2倍料液體積，繼續(xù)對料液進(jìn)行洗濾。最終獲得能夠直接進(jìn)行絡(luò)合沉淀的玻璃酸鈉溶液。超濾完畢測得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下平均通量27. 8L/m2h ；蛋白去除率93. 2% ；玻璃酸鈉收率87. 1%。實(shí)施例2 取玻璃酸鈉發(fā)酵液5L，加IOL純化水稀釋，過濾除菌后進(jìn)行超濾，超濾過程分為二個步驟首先將料液濃縮2倍，至5L ；然后保持料液體積不變，流加IOL純化水，即2倍料液體積，對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加20L濃度為0. 07mol/L氯化鈉溶液，即4倍料液體積，繼續(xù)對料液進(jìn)行洗濾。最終獲得能夠直接進(jìn)行絡(luò)合沉淀的玻璃酸鈉溶液。超濾完畢測得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下平均通量31.3L/m2h ；蛋白去除率94.0% ；玻璃酸鈉收率83. 1%。實(shí)施例3 取玻璃酸鈉發(fā)酵液5L，加IOL純化水稀釋，過濾除菌后進(jìn)行超濾，超濾過程分為二個步驟首先將料液濃縮2倍，至5L ；然后保持料液體積不變，流加20L純化水，即4倍料液體積，對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加IOL濃度為0. lmol/L氯化鈉溶液，即2倍料液體積，繼續(xù)對料液進(jìn)行洗濾。最終獲得能夠直接進(jìn)行絡(luò)合沉淀的玻璃酸鈉溶液。超濾完畢測得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下平均通量20. lL/m2h ；蛋白去除率96. 8% ；玻璃酸鈉收率87. 9%。實(shí)施例4
4
取玻璃酸鈉發(fā)酵液4L，加8L純化水稀釋，過濾除菌后進(jìn)行超濾，超濾過程分為二個步驟首先將料液濃縮1倍，至6L ；然后保持料液體積不變，流加12L純化水，即2倍料液體積，對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加24L濃度為0. 06mol/L氯化鈉溶液，即4倍料液體積，繼續(xù)對料液進(jìn)行洗濾。最終獲得能夠直接進(jìn)行絡(luò)合沉淀的玻璃酸鈉溶液。超濾完畢測得的各項(xiàng)數(shù)據(jù)如下平均通量30. 4L/m2h ；蛋白去除率94. 0% ；玻璃酸鈉收率79. 8%。盡管對本發(fā)明已經(jīng)作了詳細(xì)的說明并引證了一些具體實(shí)施例，但對本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員來說，只要不離開本發(fā)明的精神和范圍可作各種變化和修正是顯然的。
權(quán)利要求
1.一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，包括以下步驟(1)將玻璃酸鈉發(fā)酵液加純化水稀釋，過濾除菌；(2)將步驟(1)所得的料液濃縮；(3)保持步驟( 所得的料液體積不變，流加純化水對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再流加氯化鈉溶液對料液進(jìn)行洗濾。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，步驟(1)中發(fā)酵液稀釋至其體積的2-4倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，步驟(1)中發(fā)酵液稀釋至其體積的3倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，步驟( 中發(fā)酵液濃縮1 3倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，所述步驟C3)中純化水的用量為料液體積的1 6倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，其特征在于，所述步驟C3)中氯化鈉溶液的濃度為0. 005-0. lmol/L，用量為料液體積的1 6倍。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種玻璃酸鈉發(fā)酵液的超濾方法，該方法包括以下步驟首先，將玻璃酸鈉發(fā)酵液加純化水稀釋，過濾除菌；然后將所得的料液濃縮；最后，保持料液體積不變，加入純化水對料液進(jìn)行洗濾，純化水洗濾完畢再加入氯化鈉溶液對料液進(jìn)行洗濾。該方法制備所得的玻璃酸鈉發(fā)酵液安全、有效、低成本、低風(fēng)險，可基本去除發(fā)酵液中的培養(yǎng)基成份，大幅減少核酸和蛋白等的含量，特別適合醫(yī)用級玻璃酸鈉的工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C08B37/08GK102504047SQ201110389619
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月30日
發(fā)明者付愛玲, 張延良, 曾輝, 馬賢鵬 申請人:上海景峰制藥有限公司