專利名稱：抑制異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶表達的寡核苷酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶表達的寡核苷酸及其衍生物、含該類化合物的治療組合物以及利用該類寡核苷酸組合物治療因異常和/或無控制細胞增殖而引起的人或動物體內(nèi)疾病。
任何生物(不管是單細胞還是多細胞的)都表現(xiàn)出其繁殖的能力，這一現(xiàn)象需要遺傳物質(zhì)(如DNA等)的復(fù)制以及所復(fù)制DNA在兩個“子”細胞間的平均分配。存在著大量具促有絲分裂活性的形形色色的分子，它們以“細胞特異性”方式發(fā)揮作用?！靶盘枴狈肿踊蛏L因子是多肽類型的，它們的量很低，在與靶細胞相互作用之后可以引發(fā)一連串終止DNA復(fù)制及有絲分裂的活動。
生長因子并不直接作用于細胞循環(huán)，而是通過位于靶細胞質(zhì)膜上的一系列橫跨膜受體的相互作用和活化作用。這種機制觸發(fā)了細胞內(nèi)導(dǎo)致有絲分裂的鏈式反應(yīng)。所激活的胞內(nèi)活動可能因同一受體的不同細胞類型而有所變化。
使生長因子與其受體相連接的第一階段之一是激酶蛋白質(zhì)的激活和蛋白質(zhì)的磷酸化。構(gòu)成這種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)連接的蛋白質(zhì)之一是蛋白質(zhì)ras，即由異戊烯化作用機制修飾的一種21K—道爾頓的蛋白質(zhì)。異戊烯化作用是一種轉(zhuǎn)譯后修飾，其包括異戊烯基組群與多種蛋白質(zhì)的半胱氨酸的共價連接。這樣異戊烯化作用就可以是法呢基組群或牻牛兒基一牻牛兒基組群向靶蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移。這種修飾使某些蛋白質(zhì)自身附著到膜作用位點上。抑制這種異戊烯化作用的后果之一是阻止了胞外信號向細胞核內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)作用以及細胞增殖。
迄今為止，已表征了催化這種修飾的三類酶法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶、I型和II型牻牛兒基—牻牛兒基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶。所有這些酶都能識別位于蛋白質(zhì)羧基末端的同感序列。
阻斷這些酶合成的后果之一是阻斷引起細胞增殖的主要信號傳遞途徑。
大多數(shù)典型性有效成份與蛋白質(zhì)，即遺傳信息的轉(zhuǎn)譯產(chǎn)物相互作用并抑制其功能。本發(fā)明涉及一種新近的治療方法反義對策。該方法旨在通過核苷酸鏈(寡核苷酸)與其在信使或前信使RNA或DNA上的互補序列的選擇性配對而進行基因表達的選擇性調(diào)節(jié)，并因此抑制相應(yīng)蛋白質(zhì)的合成。所使用的分子直接相互作用于遺傳信息級聯(lián)。
與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物互補的寡核苷酸被稱為“反義”寡核苷酸。與轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物具有相同序列的寡核苷酸稱為“有意義”寡核苷酸。最初，這些化合物被合理設(shè)計以通過相應(yīng)信使RNA經(jīng)RNA酶H介導(dǎo)的水解機制的脫落抑制基因產(chǎn)物的形成。不久，發(fā)現(xiàn)這些反義寡核苷酸的作用機制并不如此簡單。這些寡核苷酸可與不同數(shù)目的非核酸細胞靶相互作用。這些寡核苷酸可與基因相互作用而形成三股螺旋結(jié)構(gòu)并抑制轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的形成。寡核苷酸可與前信使RNA內(nèi)含子—外顯子接點相互作用，因而干擾轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的正確拼接。寡核苷酸可通過形成RNA—DNA雙螺旋而與胞質(zhì)中的mRNA雜交，其因RNA酶H或因阻止核糖體復(fù)合物滑過mRNA而迅速降解，因而阻斷轉(zhuǎn)譯。寡核苷酸(特別是修飾的寡核苷酸)可與許多細胞組分(如蛋白質(zhì))相互作用。這些相互作用可以是序列特異性的(如轉(zhuǎn)錄因子)，也可以是非序列特異性的(如生長因子)。這樣，寡核苷酸(SEQ ID NOs.1—36)可通過上述機制之一或組合而引起增殖停滯。
本發(fā)明尤其旨在利用反義寡核苷酸來阻斷上述酶的合成。這意味著其可作為抗增殖劑而用于心血管疾病、腫瘤學(xué)、皮膚學(xué)、某些病毒感染和任何其它與細胞增殖有關(guān)的病理狀況。
在反義方法學(xué)中，可使用反義寡核苷酸或反義RNA。反義寡核苷酸方法學(xué)不同于反義RNA。在后者中，基因的DNA片段在正常意義相對方向上被插入載體DNA內(nèi)，這樣，在所述載體轉(zhuǎn)錄期間，其DNA的螺鏈之一在RNA中得到復(fù)制?；蚍聪蚱蔚牟迦胍鹆薘NA的原位合成，該RNA與由細胞本身合成的正常mRNA互補。這種RNA(稱為反義RNA)可雜交以正常表達mRNA，因而抑制靶蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)譯。Prendergast等人已使用了這種方法(細胞生長與分化4，707—713,1993年9月)以評估法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶的作用對該法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶β—亞基之cDNA進行克隆并提純；對靶細胞進行遺傳工程處理以原位表達反義RNA分子。
反義RNA方法尤其適用作機制工具以搞清蛋白質(zhì)在細胞中的作用和最終用作治療劑(應(yīng)用復(fù)雜性基因治療方案)，而反義寡核苷酸作為藥物更具吸引力，并被制定規(guī)章的部門視為典型性化學(xué)品。而且，可通過經(jīng)典化學(xué)很容易地大量合成寡核苷酸，而反義RNA分子可在生物體系中產(chǎn)生，但以工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)則障礙頗多。
在EP456180中已研究過法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶的劑量方法尤其是可用上述方法對法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶潛在抑制劑活性進行測度。但是，這種方法并沒有給出法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶新型潛在抑制劑的結(jié)構(gòu)，該專利也沒有描述與本發(fā)明相關(guān)的任何分子。
本發(fā)明提供了可選擇性與異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶亞基之基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，優(yōu)選的是異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶亞基α和/或β之基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物雜交的寡核苷酸(反義或有意義)。寡核苷酸可由2—50個單位，優(yōu)選8—35個單位組成。更優(yōu)選的是由10—25個單位組成。
可通過任何已知寡核苷酸化學(xué)合成法來合成本發(fā)明的寡核苷酸。最有利的是使用任意商業(yè)上可得到的，自動化核酸合成儀制備寡核苷酸。寡核苷酸合成法之一是β—氰乙基氨基磷酸酯法，如S.L.Beaucage等人所述[Tet.Let.22(1981)，1859—1862]。
本發(fā)明還提供了這類寡核苷酸的衍生物，即，已在寡核苷酸整體長度上或5’和3’位兩處或其中一處修飾了主鏈的寡核苷酸。事實上寡核苷酸對酶，即將其水解成核苷酸的核酸酶具有敏感性；通過對糖本身化學(xué)性質(zhì)或磷酸酯—糖核苷酸間的鍵進行修飾，寡核苷酸變得對核酸酶具有耐受性；這樣磷酸二酯鏈就可被取代，如被硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、膦酸甲酯、氨基磷酸酯、磷酸乙基三酯、丁基酰胺化物、哌嗪化物或嗎啉化物鏈所取代?？稍诠押塑账嵴麄€長度上或在5’和/或3’端處進行其它類型的修飾，以使寡核苷酸在生物環(huán)境中更具耐受性。另外，核苷酸之間的磷酸酯鍵可被酰胺鍵替代(肽核酸)。再者，寡核苷酸的橫跨膜通道因使寡核苷酸更具疏水性而得到促進；例如，通過連接疏水取代物(如膽固醇、芳香族組群或聚合物)可達到這一目的?？刹糠值鼗蛟诠押塑账岬恼麄€長度上摻入修飾的堿基。也可部分地或在寡核苷酸的整個長度上摻入可耐受核酸酶或提高雜交或胞內(nèi)攝取特性的構(gòu)象改變的核苷酸(如具有α—異頭物構(gòu)象的寡核苷酸)。這樣，術(shù)語“衍生物”包括以上述方法之一或?qū)I(yè)人員所熟知的其它方法進行修飾的核苷酸。
本發(fā)明優(yōu)選的寡核苷酸分別為序列SEQ ID NO.1—SEQ IDNO.36的寡核苷酸。依據(jù)本發(fā)明，也可以使用其互補序列或有意義寡核苷酸。
本發(fā)明進而提供了包括選自SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.36中序列之一至少一部分的寡核苷酸。
本發(fā)明還提供了含有作為有效成分的至少一種本發(fā)明的反義寡核苷酸的治療組合物，該有效成分與適合于所選定的給藥方法的藥用性稀釋劑和/或載體相混合。該組合物可局部或全身性施用；其形式有注射液、脂質(zhì)體、緩釋制劑，凝膠、局部使用的軟膏或適于所選定的給藥方法的其它可用形式。
最后，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物在對細胞增殖異常和/或無控制的人或動物體進行治療的方法中的應(yīng)用。
下列實施例可說明本發(fā)明。
實施例1反義寡核苷酸對大鼠平滑肌增殖的作用通過酶消化(膠原酶和彈性蛋白酶)分離出雄性Wistar大鼠主動脈中的平滑肌細胞，在DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含有10％的胎牛血清(FCS)、2mM谷氨酰胺、50U/ml的青霉素和50μg/ml的鏈霉素。將平滑肌細胞用于24孔平板的第3—第7通道間。
培養(yǎng)3天后，在血清中使細胞離析72小時。然后用1％的血清或5ng/ml bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)刺激(或不刺激)細胞，同時用(或不用)本發(fā)明的產(chǎn)物(濃度為10-5M)處理24小時。在培養(yǎng)結(jié)束之前4小時，用氚標記的胸苷(1μg Ci/ml)標記細胞。加入TCA 5％使摻入中止10分鐘；然后用500μl的0.5N NaOH對細胞進行平滑處理。取400μl的等分試樣，將其分布于含400μl的0.5NHC1和10ml Instagel的閃爍瓶中。
通過測度細胞增殖(以百分比表示)來確定寡核苷酸的活性。所得結(jié)果如下表所示。
<p>實施例2劑量與反應(yīng)研究—反義寡核苷酸對大鼠平滑肌增殖的作用試驗方案同實施例1所述。用本發(fā)明的化合物(濃度分別為10-9M、10-8M、10-7M、10-6M和10-5M)處理細胞
<p>實施例4對血管形成模型(大鼠或兔)的反義寡核苷酸的體內(nèi)抗增殖研究將正常血壓的雄性Wistar大鼠或新西蘭兔麻醉并解剖使髂動脈暴露出來。除去動脈四周的結(jié)締組織，并用法國Fogarty導(dǎo)管進行插管。將氣球充氣以擴張動脈，反復(fù)3次以造成脫內(nèi)皮細胞化損傷。
將溶于25％Pluronic凝膠的寡核苷酸迅速施用于動脈四周暴露區(qū)域?？p合傷口，21天后將動物處死。對脫內(nèi)皮動脈部分進行組織形態(tài)學(xué)分析，對內(nèi)膜和中域進行測試。
增殖百分比確定為內(nèi)膜/內(nèi)膜＋中域比率。
表1<
>表2<
<p>依據(jù)慣例，在所有敘述中的“SEQ ID(有意義)”表述是寡核苷酸序列SEQ ID的互補寡核苷酸序列。
實施例5(a)法呢基轉(zhuǎn)移酶之有意義和反義寡核苷酸對C6大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞的體外作用接種細胞，密度為5000細胞/平皿，并用以5％馬血清和2.5％胎牛血清補充的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。24小時后，改用無血清并加Lipo-fectin和5μM濃度的不同寡核苷酸的培養(yǎng)基進行轉(zhuǎn)染。培養(yǎng)5小時后，用含15％馬血清及2.5％胎牛血清的正常培養(yǎng)基替代原培養(yǎng)基。然后在37℃下繼續(xù)培養(yǎng)72小時。在單層胰酶消化后，利用ZM型Coulter計數(shù)器進行細胞計數(shù)來評估細胞增殖。<
b)法呢基轉(zhuǎn)移酶α—亞基之反義寡核苷酸的時間過程作用如上處理細胞，在第3、第7和第14天對對照和寡核苷酸處理平皿中的平行樣品進行細胞計數(shù)。在所有3天實驗中p值均小于0.05％。
實施例6對大鼠惡性膠質(zhì)瘤的抗增殖研究(a)反義寡核苷酸對C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞腫瘤發(fā)生的體外作用同上所述處理細胞。用法呢基轉(zhuǎn)移酶寡核苷酸α—亞基(5μM)轉(zhuǎn)染24小時后，將未處理和處理過的細胞腦內(nèi)接種于雄性Sprague—Dawley大鼠(7—8周齡，重約180—200g)。按1.5mg/kg(體重)腹膜內(nèi)注射賽拉嗪使動物麻醉，10分鐘后按5mg/公斤(體重)腹膜內(nèi)注射克他命。利用10μl Hamiton Microsiringe將經(jīng)胰酶消化而預(yù)先收獲的在3μl磷酸鹽緩沖鹽水中的1.5×105個細胞立體定向性注射到左側(cè)脈管神經(jīng)節(jié)中(距中線3mm，深度為5mm)以前我們觀察到在移植腫瘤數(shù)日后處死的大鼠中其平均存活率為24天。對得自所有動物的腦的組織學(xué)分析證明了腫瘤移植成功率為100％。在處死所有大鼠前2小時給其注射40mg BrdU。砍頭處死大鼠。收取所有鼠腦，浸入70％的乙醇中在4℃下固定2天。通過對腦兩半球的雙參數(shù)DNA(Brd U)細胞熒光測定分析來確定腫瘤的增殖。
(b)寡核苷酸對C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞體內(nèi)腫瘤發(fā)生的體內(nèi)作用從培養(yǎng)48小時的細胞培養(yǎng)平皿中收獲未處理的C6神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞，如上所述立體定向性注射到鼠腦的左半球中。之后，迅速在背囊上放置Alzet泵，該泵含有載體或反義和有意義寡核苷酸，其量足夠每天釋放5μM濃度的寡核苷酸。通過直徑為0.5mm的管線，在細胞注射部位釋放不同的藥劑。利用post—hoc Duncan試驗進行所有統(tǒng)計分析。
序列目錄(2)SEQ ID NO.1信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.1AGAAGCCATGAT(2)SEQ ID NO.2信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.2GGACGTGACT GT(2)SEQ ID NO.3信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸
(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.3AAGGAGTAGC AG(2)SEQ ID NO.4信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.4CAGGCAGTAG CA(2)SEQ ID NO.5信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.5CCCGTCGTCCAT(2)SEQ ID NO.6信息
(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.6CTGTCCCTGTAC(2)SEQ ID NO.7信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.7ACTTCTCTCTCC(2)SEQ ID NO.8信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是
(xi)序列描述SEQ ID NO.8ACTTGGTCCT AA(2)SEQ ID NO.9信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.9GCCATCATTC TG(2)SEQ ID NO.10信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.1GATCTGGACC AC(2)SEQ ID NO.11信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸
(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.11CTCAATAGCA TC(2)SEQ ID NO.12信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.12GTTTTTGGGC TG(2)SEQ ID NO.13信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.13TCTCACATCC TC(2)SEQ ID NO.14信息
(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.14TTGTAAGAAC TG(2)SEQ ID NO.15信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.15GAAGTGCTTC TC(2)SEQ ID NO.16信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是
(xi)序列描述SEQ ID NO.16GCCTCTTTTC AG(2)SEQ ID NO.17信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.1 7GGCATCTGTG AG(2)SEQ ID NO.18信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.18CGGCTGGCAT CC(2)SEQ ID NO.19信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸
(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.19GAACTGACAC AC(2)SEQ ID NO.20信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.20ACGATC ACATCA(2)SEQ ID NO.21信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.21ATCAACATGC AG(2)SEQ ID NO.22信息
(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.22CTGCATATCG AC(2)SEQ ID NO.23信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.23CAGTGCACCAGC(2)SEQ ID NO.24信序(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是
(xi)序列描述SEQ ID NO.24CTGCAGCCTC GG(2)SEQ ID NO.25信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.25ACTCTCTGGA CC(2)SEQ ID NO.26信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.26CAAGAATCCTCG(2)SEQ ID NO.27信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸
(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.27ACATCTGCTCTG(2)SEQ ID NO.28信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.28TCTGTACTCGTC(2)SEQ ID NO.29信息(i)序列屬性(A)長度12堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.29CTACAGTACA GC(2)SEQ ID NO.30信息
(i)序列屬性(A)長度15堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.30CCCGTCGTCC ATAGG(2)SEQ ID NO.31信息(i)序列屬性(A)長度18堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.31CCCGTCGTCC ATAGGGGA(2)SEQ ID NO.32信息(i)序列屬性(A)長度21堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是
(xi)序列描述SEQ ID NO.32CCCGTCGTCC ATAGGGGACGC(2)SEQ ID NO.33信息(i)序列屬性(A)長度15堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.33GGACGTGACT GTTTC(2)SEQ ID NO.34信息(i)序列屬性(A)長度18堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.34GGACGTGACT GTTTCCAC(2)SEQ ID NO.35信息(i)序列屬性(A)長度21堿基對(B)類型核苷酸
(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.35GGA CGTGACT GTTTCCACTGA(2)SEQ ID NO.36信息(i)序列屬性(A)長度24堿基對(B)類型核苷酸(C)鏈況單鏈(D)拓撲學(xué)線性(iv)反義是(xi)序列描述SEQ ID NO.36GGACGTGACT GTTTCCACTG AGTC
權(quán)利要求
1.一種可選擇性與異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶亞基之基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物雜交的寡核苷酸。
2.一種寡核苷酸，其含有SEQ ID NO.1—SEQ ID NO.36中序列之一的至少一部分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的寡核苷酸，其可與異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶α和/或β亞基之基因或轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物雜交。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3的寡核苷酸，其中異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶選自法呢基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶及I型和II型牻牛兒基—牻牛兒基—蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶。
5.根據(jù)上述權(quán)利要求任一項的寡核苷酸，其由2—50單位組成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的寡核苷酸，其由8—35單位組成。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的寡核苷酸，其由10—25單位組成。
8.根據(jù)上述權(quán)利要求任一項的寡核苷酸，其具有修飾的主鏈。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的寡核苷酸，其中至少一個核苷酸堿基得到修飾。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的寡核苷酸，其中修飾的核苷酸堿基具有α—異頭物構(gòu)象。
11.根據(jù)權(quán)利要求8的寡核苷酸，其中連接鍵組群中至少之一被修飾。
12.根據(jù)權(quán)利要求8的寡核苷酸，其中5’和3’位兩處或其中一處被修飾。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的寡核苷酸，其中5’和3’位兩處或其中一處通過疏水性或保護性基團的取代得到修飾。
14.含有根據(jù)權(quán)利要求任一項中至少一種寡核苷酸作為有效成分的治療組合物，該有效成分與適合于所選定的給藥方法的藥用性稀釋劑和/或載體相混合。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物在對細胞增殖異常和/或無控制的人體或動物體進行治療的方法中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制異戊二烯基蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移酶表達的寡核苷酸及其衍生物、含有該化合物的治療組合物以及利用該寡核苷酸組合物治療人體或動物體內(nèi)因異常和/或無控制的細胞增殖而引起的疾病。
文檔編號C07H21/04GK1124142SQ95108109
公開日1996年6月12日 申請日期1995年6月28日 優(yōu)先權(quán)日1994年6月29日
發(fā)明者S·考勞特, E·瑟羅茲基 申請人:科學(xué)研究與運用咨詢公司