反柄靈芝酚a和b及其藥物組合物與其在制藥和食品中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】反柄靈芝酚A和B及其藥物組合物與其在制藥和食品中的應(yīng)用。本發(fā)明從反柄靈芝中分離鑒定二個消旋體，后經(jīng)拆分為二對光學(xué)對映體，分別命名為左旋或右旋反柄靈芝酚A和B，研究表明消旋體和對映體均可顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞產(chǎn)生纖粘連蛋白(fibronectin)，I型膠原蛋白和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)，進一步發(fā)現(xiàn)其也可顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細胞Smad3磷酸化，顯示該類化合物在制備抗腎臟纖維化和慢性腎病藥物中的應(yīng)用前景。
【專利說明】反柄靈芝齡A和B及其藥物組合物與其在制藥和食品中的 應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)和食品領(lǐng)域，具體涉及反柄靈芝酷A和B及其藥物組合物，W 及其在制備治療腎臟纖維化或慢性腎病的藥物或保健食品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 慢性腎病的危害、病理機制及藥物研究的方法和原理，本發(fā)明人在已公開的中國 專利（公布號；CN 102153630A)中均有明確的描述。由于藥物、飲食等諸多因素影響，慢性 腎病的發(fā)病率已超過10%，慢性腎病進展至腎衰竭時就只能依賴腎移植和血液透析。但由 于治療藥物的缺乏，慢性腎病目前尚無好的干預(yù)方法。
[0003] 研究表明慢性腎病包括纖維化過程中均伴有細胞外基質(zhì)如collagen I、纖粘連蛋 白（fibronectin)過度分泌，a-SMA表達升高。TGF-目/Smad3磯酸化是導(dǎo)致上述指標升高 的重要原因之一，該通路Smad3的磯酸化也是其它臟器纖維化的主要原因之一。因此，觀察 化合物對腎小管上皮細胞膠原蛋白分泌的影響，或觀察其對TGF-目1誘導(dǎo)的腎小管上皮細 胞Smad3磯酸化的抑制作用，已成為目前研究慢性腎病包括腎纖維化藥物的常用方法。但 目前關(guān)于該方面的小分子藥物還比較缺乏。
[0004] 靈芝被稱為仙草，中藥之王，我國有近百種。靈芝自古為名貴中藥，在我國已有 2000多年應(yīng)用歷史，據(jù)稱靈芝可治療百病，其不僅在我國，且在東亞和美國都有應(yīng)用。我國 關(guān)于靈芝的保健品眾多，表明其功能備受關(guān)注。反柄靈芝（Ganoderma cochlear)市場流通， 具有與《中華人民共和國藥典》I部收載的紫芝類似的功效。本發(fā)明人認為其可能含有抗慢 性腎病活性物質(zhì)，而現(xiàn)有技術(shù)中未見有本發(fā)明涉及的化合物及其抗慢性腎病的相關(guān)報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于提供具有抗慢性腎病或腎臟纖維化價值的化合物反柄靈芝酷 化合物（+)-或（-)-Cochlearol A[(+)-l 或（-)-1]和（+)-或（-)-CochlearolB[(+)-2 或 (-)-2];及其該發(fā)明的化合物在制備抗慢性腎病和/或抗腎臟纖維化的藥物中的應(yīng)用，W 及W該化合物為有效成分的藥物組合物。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是由下述的技術(shù)方案得W實現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的反柄靈芝酷化合物（+)-或（-)-Cochlearol A[(+)-l或 和（+)-或（-)-Cochlearol B[(+)-2 或（-)-2]，（其中 cochlearol A 的晶體結(jié)構(gòu)，其晶體 數(shù)據(jù)存于 Cambridge Crystallographic Data Cen1:re withno.CCDC1012020),
[0008]
【權(quán)利要求】
1. 具有下述結(jié)構(gòu)式的反柄靈芝酚A和B，
2. 制備權(quán)利要求1所述的反柄靈芝酚A和B的方法，取反柄靈芝，粉碎，用70%乙醇 室溫提取，合并提取液并減壓回收溶劑得粗提取物，將粗提取物混懸于適量水中，然后用等 體積乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，減壓濃縮得乙酸乙酯萃取物，經(jīng)硅膠柱層析，100:0， 99:1，98:2,97:3,96:4,95:5,94:6,93:7,92:8,90:10,85:15,80:20, 50:50 的氯仿-甲醇系 統(tǒng)梯度洗脫，每種溶劑梯度為1. 5倍柱體積，按照每份500mL收集得7個合并組份；組份4 經(jīng)S印hadexLH-20 (Me0H/H20, 80:20)柱層析得7個亞組份，其中組份4. 7經(jīng)RP-18柱層析 (Me0H/H20, 10 % -60 % )，TLC檢測合并斑點相同組分，該合并組分經(jīng)半制備RP-HPLC(MeOH/ H20, 78% )純化得化合物2,該化合物為消旋體，經(jīng)手性拆分（CHIRALPAKIC:正己烷/乙 醇，75:25)得化合物（)-2(0. 55mg)和（+)-2(0. 53mg);組分 5 經(jīng)MCIgelCHP20P柱層析 (Me0H/H20, 10% -50% )得 5 個亞組分，組份 5. 1 經(jīng)S印hadexLH-20(Me0H/H20, 80:20)柱 層析，根據(jù)薄層顯色跟蹤合并相同流份得5個組分，其中組分5. 1. 5經(jīng)反相RP-18柱層析， 10-60%的甲醇-水洗脫，薄層指導(dǎo)合并斑點，然后經(jīng)半制備反相RP-18高效液相色譜純化 (Me0H/H20, 43% )，得化合物1，該化合物為消旋體，經(jīng)手性拆分（CHIRALPAKAD-H:正己烷/ 乙醇（含 0.05% 甲酸），72:28)得化合物（)-1(1. 08mg)和（+)-1(0. 98mg)。
3. 治療腎臟纖維化或慢性腎病的藥物組合物，含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化 合物和藥學(xué)上可接受的載體。
4. 權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療腎臟纖維化或慢性腎病的藥物中的應(yīng)用。
5. 權(quán)利要求1所述的化合物在制備治療腎臟纖維化或慢性腎病的保健食品中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求3所述的藥物組合物在制備治療腎臟纖維化或慢性腎病的藥物中的應(yīng)用。
7. 權(quán)利要求3所述的藥物組合物在制備治療腎臟纖維化或慢性腎病的保健食品中的 應(yīng)用。
【文檔編號】C07D493/10GK104447783SQ201410624823
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月7日
【發(fā)明者】程永現(xiàn), 豆曼, 邸磊, 呂青 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所