專利名稱：一種提取純化銀椴苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提純制備領(lǐng)域，具體涉及一種提取純化銀椴苷的方法。
背景技術(shù)：
銀椴苷(Tiliroside)，又名山奈酚-3-0-i3-D_(6’，-0-反式-對羥基桂皮?；? 吡喃葡萄糖苷，是一種黃酮苷類化合物，為黃色針晶，mp. 246 248°C，分子式C3tlH26O13，分子量594.52。研究顯示銀椴苷在植物中分布較為普遍，在結(jié)香花、地桃花、巴西甘薯葉、 蜀葵花、白頭翁地上部分等植物中均有分離得到，其中結(jié)香花中含量最高，高達1. 56%。據(jù)報道，銀椴苷具有較強的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，對補體系統(tǒng)的傳統(tǒng)途徑顯示出非常有潛力的抗補體活性(IC5Q=5.4X1(^M)，其活性甚至比公認的補體系統(tǒng)抑制劑迷迭香酸活性還強。另有文獻報道銀椴苷及全乙?；苌锞哂幸欢ǖ膶Π籽“┘毎亩拘宰饔谩ｃy椴苷還具有強的護肝作用。筱雅研究了從意大利蠟菊Widrj^/ i tali cum {Roth) Q. Don Fil中分得的銀椴苷和鼠尾草黃素對由銅誘導(dǎo)的人LDL氧化改變的抑制作用，發(fā)現(xiàn)兩種成分能夠抑制人低密度脂蛋白氧化。銀椴苷的提取分離方法一般都采用95%乙醇回流提取、濃縮后用水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等非極性溶劑萃取，萃取部分反復(fù)進行硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱色譜等多步驟，分離得到銀椴苷，這些分離純化工藝都需經(jīng)過反復(fù)柱層析步驟，存在分離時間長、重現(xiàn)性差、使用大量有毒溶劑、不易工業(yè)化等缺點。中國專利(公開號 CN1733788A) “一種從結(jié)香花中提取分離銀椴苷的方法”，采用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗后用脂溶性溶劑回流萃取，得到的濾餅重結(jié)晶得到產(chǎn)品，用到毒害性有機溶劑，造成溶劑殘留，產(chǎn)品質(zhì)量差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種成本低、工藝簡單、易于工業(yè)化生產(chǎn)的銀椴苷的提取純化方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種提取純化銀椴苷的方法，該方法包括以下步驟
(1)銀椴苷的提取
取結(jié)香花粉碎后加沸水微波提取10-60分鐘，其中料液比為1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，過濾，得銀椴苷提取液；
(2)銀椴苷提取液的脫色
將銀椴苷提取液加入總液量2%-6%的硅藻土，攪拌，過濾，得銀椴苷脫色液；
(3)銀椴苷的分離
將銀椴苷脫色液用大孔吸附樹脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然后先用水洗脫，再用體積百分比為20%-50%的乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集銀椴苷洗脫液；
將洗脫液濃縮至無醇味，采用聚酰胺柱層析以甲醇水混合溶液進行梯度洗脫，用TLC快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液； (4)結(jié)晶
將銀椴苷溶液濃縮至小體積，放置結(jié)晶，加乙醇水溶液溶解，過濾，重結(jié)晶3-5次，得到純度95%以上的銀椴苷晶體。步驟(2)中大孔吸附樹脂可選自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附樹脂中的一種或幾種。步驟(2 )中甲醇水混合溶液梯度洗脫順序依次為2-3BV30%-40%甲醇 —3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脫有效成分。步驟(4)中乙醇水溶液為60%_80%乙醇溶液。本發(fā)明的有益技術(shù)效果是本發(fā)明采用微波提取銀椴苷粗提取物，采用大孔樹脂和聚酰胺樹脂分離純化，方法簡單，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式實施例1
取結(jié)香花1kg，加10倍量沸水微波提取30分鐘，濾出液體，再加10倍量沸水微波提取 30分鐘，合并提取液加入4%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有250gS-8 大孔吸附樹脂)以1. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用30%乙醇溶液洗脫，采用 TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有600g聚酰胺樹脂，)，依次用2BV30%甲醇、3BV60%甲醇和85%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用60%乙醇回流溶解，過濾，重結(jié)晶4次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體11.84g，經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件:C18 ；流動相甲醇水=7:3 ； 檢測波長2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 4%。實施例2:
取結(jié)香花1kg，加12倍量沸水微波提取50分鐘，濾出液體，再加12倍量沸水微波提取50分鐘，合并提取液加入m的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有 250gAB-8大孔吸附樹脂)以2. OBV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用20%乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有600g聚酰胺樹脂)，依次用2BV30%甲醇、3BV50%甲醇和90%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用70%乙醇回流溶解，過濾，重結(jié)晶3次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體11. 39g，經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水 =7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 2%。實施例3:
取結(jié)香花1. 5kg,加8倍量沸水微波提取20分鐘，濾出液體，再加8倍量沸水微波提取 20分鐘，如此反復(fù)提取3次，合并提取液加入3%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有370gZTC-l大孔吸附樹脂)以0. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 30%乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有 900g聚酰胺樹脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV60%甲醇和80%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測， 收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用75%乙醇回流溶解，過濾， 重結(jié)晶5次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體17. 22g，經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為95. 8%。實施例4:
取結(jié)香花^g，加15倍量沸水微波提取10分鐘，濾出液體，再加15倍量沸水微波提取 10分鐘，，如此反復(fù)提取4次，合并提取液加入5%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有500gS-8大孔吸附樹脂)以1.0BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 40%乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有 600g聚酰胺樹脂)，依次用:3BV30%甲醇、3BV50%甲醇和80%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測， 收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用80%乙醇回流溶解，過濾， 重結(jié)晶4次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體22. 97g，經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長2Mnm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 1%。實施例5:
取結(jié)香花2. 5kg,加9倍量沸水微波提取60分鐘，濾出液體，再加9倍量沸水微波提取 60分鐘，如此反復(fù)提取3次，合并提取液加入6%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有625gAB-8大孔吸附樹脂)以1. 5BV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用50%乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有1. 5kg 聚酰胺樹脂)，依次用2BV40%甲醇、4BV60%甲醇和90%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用65%乙醇回流溶解，過濾，重結(jié)晶5 次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體29. 54g,經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 7%。實施例6:
取結(jié)香花^g，加10倍量沸水微波提取40分鐘，濾出液體，再加10倍量沸水微波提取 40分鐘，如此反復(fù)提取4次，合并提取液加入3%的硅藻土，攪拌，過濾，濾液加入大孔吸附樹脂柱(裝有1. 2kggZTC-l大孔吸附樹脂)以1. OBV/h流速進行吸附，先以水洗至無色，再用 40%乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集洗脫液濃縮至無醇味，加入聚酰胺樹脂柱(裝有 3kg聚酰胺樹脂)，依次用:3BV40%甲醇、4BV55%甲醇和85%甲醇洗脫，TLC快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液，濃縮至小體積，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用80%乙醇回流溶解，過濾，重結(jié)晶3次，濾出真空低溫干燥即得銀椴苷晶體59. ^g，經(jīng)HPLC法檢測(色譜條件C18 ；流動相甲醇水=7:3 ；檢測波長:254nm ；流速0. 6ml/min)其含量為96. 3%。
權(quán)利要求
1.一種提取純化銀椴苷的方法，其特征在于(1)銀椴苷的提取取結(jié)香花粉碎后加沸水微波提取10-60分鐘，其中料液比為1:8-15 (kg/L)，提取2-4 次，過濾，得銀椴苷提取液；(2)銀椴苷提取液的脫色將銀椴苷提取液加入總液量2%-6%的硅藻土，攪拌，過濾，得銀椴苷脫色液；(3)銀椴苷的分離將銀椴苷脫色液用大孔吸附樹脂柱以0. 5-2. OBV/h的流速吸附，然后先用水洗脫，再用體積百分比為20%-50%的乙醇溶液洗脫，采用TLC跟蹤檢測，收集銀椴苷洗脫液；將洗脫液濃縮至無醇味，采用聚酰胺柱層析以甲醇水混合溶液進行梯度洗脫，用TLC 快速定性檢測，收集相應(yīng)的銀椴苷溶液；(4)結(jié)晶將銀椴苷溶液濃縮至小體積，放置結(jié)晶，加乙醇水溶液溶解，過濾，重結(jié)晶3-5次，得到純度95%以上的銀椴苷晶體。
2.如權(quán)利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特征在于所述步驟(2)中大孔吸附樹脂可選自AB-8、S-8或ZTC-I型大孔吸附樹脂中的一種或幾種。
3.如權(quán)利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特征在于所述步驟(2)中甲醇水混合溶液梯度洗脫順序依次為2-;3BV30%-40%甲醇一3-4BV50%-60%甲醇一80%-90%甲醇洗脫有效成分。
4.如權(quán)利要求1所述的提取純化銀椴苷的方法，其特征在于所述步驟(4)中乙醇水溶液為60%-80%乙醇溶液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取純化銀椴苷的方法，將結(jié)香花粉碎，微波提取銀椴苷，將銀椴苷提取液加硅藻土脫色，脫色液用大孔吸附樹脂柱以20-50%乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮至無醇味，再用聚酰胺柱層析分離，可得純度95%以上的銀椴苷產(chǎn)品。本發(fā)明包括結(jié)香中銀椴苷的提取、大孔樹脂和聚酰胺柱分離、結(jié)晶等工藝，該方法具有成本低、操作簡單、易于產(chǎn)業(yè)化等優(yōu)點。
文檔編號C07H17/07GK102304161SQ20111018774
公開日2012年1月4日 申請日期2011年7月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月6日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司