專利名稱：一種超臨界流體萃取路路通酸的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種超臨界流體萃取路路通酸的方法，具體而言，是一種采用超臨界 CO2流體和柱層析方法結合從路路通中萃取路路通酸的方法。
背景技術：
路路通為金縷梅科植物楓香樹Liquidamtar formosana Hance的干燥成熟果序， 始載于《本草綱目拾遺》。傳統(tǒng)醫(yī)學認為它有祛風除濕、疏肝活絡、利水通經(jīng)之功效，用于治療關節(jié)痹痛、麻木拘攣、水腫脹滿、乳少經(jīng)閉等癥。現(xiàn)代藥理研究表明，它有保肝、抑制關節(jié)炎腫脹、消炎、消毒等作用。臨床上，路路通主要用于止痛、利尿、通乳、抗痙攣及治療蕁麻疹、風疹等皮膚病。路路通酸(Liquidambaric acid)，又名白樺脂酮酸，分子式為C3tlH46O3, 分子量454. 68，在路路通中含量為0. 057-0. 319%。劉婷等研究表明路路通酸10、20mg/kg 能明顯對抗角叉菜膠引起的小鼠足腫脹，10mg/kg能明顯對抗醋酸(H+)所致小鼠腹腔毛細血管通透性亢進并降低小鼠的扭體次數(shù)。目前尚未搜索到利用超臨界流體萃取路路通酸的工藝報道。超臨界流體萃取分離過程的原理是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關系， 即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點高低和分子量大小的成分依次萃取出來。目前使用最廣泛的流體是CO2，因為它無毒、無嗅、無害，再超臨界狀態(tài)(7.3MPa，31°C)中具有強溶解力，該溶解力又隨壓力和溫度的改變而變化，因而具有高選擇性，可對被提取物中的活性有效成分進行選擇性提取，因此和常規(guī)的化學溶劑提取法比，它具有高提取率、操作簡便自動化程度高、無化學殘留和重金屬殘留等優(yōu)點，被稱為“綠色”環(huán)保提取工藝，現(xiàn)已在藥物、食品、生化等領域廣泛應用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用超臨界組合技術從路路通中提取路路通酸的方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案如下一種超臨界流體萃取路路通酸的方法，其特征在于主要包括以下步驟a)將路路通粉碎成粗粉，然后將原料放入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，向萃取罐內(nèi)泵入 CO2和夾帶劑乙酸乙酯，萃取壓力為33-56MPa，萃取溫度為35_78°C，提取時間2_4小時，解析壓力為4-9MPa，解析溫度為30-50°C，得路路通酸萃取物；b)將路路通萃取物用少量90%乙醇分散，與少量柱層析填料拌樣，揮干，上柱層析，乙酸乙酯-乙醇G 1-1 1)洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮為浸膏；c)將浸膏用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再采用兩相溶劑法重結晶， 所用重結晶溶劑為二氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯中的任意一種。所述步驟(b)中柱層析填料可采用大孔樹脂或硅膠，選用樹脂為DlOl或AB-8，選用硅膠目數(shù)為100-300目。
所述步驟(c)中重結晶溶劑二氯甲烷-甲醇的體積比為15-8 1。所述步驟(c)中重結晶溶劑石油醚-丙酮的體積比為8-2 1。所述步驟(c)中重結晶溶劑二氯甲烷-乙酸乙酯的體積比為15-8 1。本發(fā)明的優(yōu)點在于1、步驟少，耗時短，得率高，易于小規(guī)?；a(chǎn)；2、工序簡單，易于控制，分離效率高；3、本發(fā)明制備得到的高純度路路通酸可為路路通酸的進一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實踐支持。
具體實施例方式實施例1 稱取路路通200g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度 78 0C，分離塔溫度調(diào)至45 °C，萃取壓力45MPa，分離器解析壓力為8MPa，進入儲罐用高壓計量泵將CO2和20ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/ min，連續(xù)動態(tài)提取2小時。停機后放出萃取物1. 7g，將萃取物分散于10ml90 %乙醇中，與少量DlOl大孔樹脂拌樣，揮干，上柱體積IL的DlOl大孔樹脂柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇3 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-甲醇(9 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品:346mg(路路通酸含量為98. 4% )。實施例2 稱取路路通200g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度 55°C，分離塔溫度調(diào)至36°C，萃取壓力38MPa，分離器解析壓力為5MPa，進入儲罐用高壓計量泵將CO2和20ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/ min，連續(xù)動態(tài)提取4小時。停機后放出萃取物1.9g，將萃取物分散于10ml90 %乙醇中，與少量200目硅膠拌樣，揮干，上柱體積IL的中壓硅膠柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(10 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品338mg(路路通酸含量為98. 2% )。實施例3 稱取路路通300g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度 43°C，分離塔溫度調(diào)至32°C，萃取壓力56MPa，分離器解析壓力為7MPa，進入儲罐用高壓計量泵將CO2和45ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/ min，連續(xù)動態(tài)提取2小時。停機后放出萃取物2. 5g，將萃取物分散于17ml90 %乙醇中，與少量AB-8大孔樹脂拌樣，揮干，上柱體積IL的AB-8大孔樹脂柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用石油醚-丙酮(6 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品509mg(路路通酸含量為98. 7% )。實施例4 稱取路路通500g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度64°C，分離塔溫度調(diào)至50°C，萃取壓力43MPa，分離器解析壓力為5MPa，進入儲罐用高壓計量泵將(X)2和60ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/ min，連續(xù)動態(tài)提取3小時。停機后放出萃取物4. 2g，將萃取物分散于23ml90 %乙醇中，與少量DlOl大孔樹脂拌樣，揮干，上柱體積2L的DlOl大孔樹脂柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-甲醇(14 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品865mg(路路通酸含量為98. 5% )。實施例5 稱取路路通600g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度 52°C，分離塔溫度調(diào)至33°C，萃取壓力33MPa，分離器解析壓力為6MPa，進入儲罐用高壓計量泵將(X)2和65ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/ min，連續(xù)動態(tài)提取2小時。停機后放出萃取物5. lg，將萃取物分散于35ml90 %乙醇中，與少量150目硅膠拌樣，揮干，上柱體積2L的中壓硅膠柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(8 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品1. 03g (路路通酸含量為98. 8% )。實施例6 稱取路路通800g加入超臨界CO2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度 47°C，分離塔溫度調(diào)至30°C，萃取壓力47MPa，分離器解析壓力為4MPa，進入儲罐用高壓計量泵將⑶2和IlOml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為 500ml/min，連續(xù)動態(tài)提取4小時。停機后放出萃取物7. 0g，將萃取物分散于42ml90%乙醇中，與少量AB-8大孔樹脂拌樣，揮干，上柱體積2L的AB-8大孔樹脂柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇1 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-甲醇(12 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品1. 33g (路路通酸含量為98. 6% )。實施例7 稱取路路通Ikg加入超臨界(X)2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度41 °C， 分離塔溫度調(diào)至34°C，萃取壓力56MPa，分離器解析壓力為9MPa，進入儲罐用高壓計量泵將 CO2和IlOml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，CO2流速為500ml/min， 連續(xù)動態(tài)提取3小時。停機后放出萃取物8. 5g，將萃取物分散于51ml90%乙醇中，與少量 DlOl大孔樹脂拌樣，揮干，上柱體積3L的DlOl大孔樹脂柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇3 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏， 用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-乙酸乙酯(13 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品1.70g(路路通酸含量為99. )。實施例8 稱取路路通Ikg加入超臨界0)2萃取罐內(nèi)，先用500ml乙醇潤濕，在萃取溫度38°C， 分離塔溫度調(diào)至31°C，萃取壓力47MPa，分離器解析壓力為8MPa，進入儲罐用高壓計量泵將 CO2和130ml乙酸乙酯送入預熱器，通過預熱器到指定溫度和壓力，(X)2流速為500ml/min，連續(xù)動態(tài)提取4小時。停機后放出萃取物8. 4g，將萃取物分散于67ml90%乙醇中，與少量100目硅膠拌樣，揮干，上柱體積3L的中壓硅膠柱，先用2L去離子水洗脫，再用乙酸乙酯-乙醇 4 1、乙酸乙酯-乙醇2 1洗脫，收集路路通酸洗脫液，減壓濃縮為浸膏，用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再用二氯甲烷-甲醇(10 1)重結晶，濾出晶體，干燥得成品 1.72g(路路通酸含量為98.3% )0
權利要求
1.一種超臨界流體萃取路路通酸的方法，其特征在于主要包括以下步驟a)將路路通粉碎成粗粉，然后將原料放入超臨界(X)2萃取罐內(nèi)，向萃取罐內(nèi)泵入(X)2和夾帶劑乙酸乙酯，萃取壓力為33-56MPa，萃取溫度為35-78°C，提取時間2-4小時，解析壓力為4-9MPa，解析溫度為30-50°C，得路路通酸萃取物；b)將路路通萃取物用少量90%乙醇分散，與少量柱層析填料拌樣，揮干，上柱層析，乙酸乙酯-乙醇G 1-1 1)洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮為浸膏；c)將浸膏用乙醇加熱回流溶解，冷卻結晶，濾出晶體，再采用兩相溶劑法重結晶，所用重結晶溶劑為二氯甲烷-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯中的任意一種。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(b)中柱層析填料可采用大孔樹脂或硅膠，選用樹脂為DlOl或AB-8，選用硅膠目數(shù)為100-300目。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(c)中重結晶溶劑二氯甲烷-甲醇的體積比為15-8 1。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(c)中重結晶溶劑石油醚-丙酮的體積比為8-2 1。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟(c)中重結晶溶劑二氯甲烷-乙酸乙酯的體積比為15-8 1。
全文摘要
一種超臨界流體萃取路路通酸的方法，涉及一種從路路通中利用超臨界CO2萃取路路通酸的方法。其具體工藝流程為將路路通粉碎，然后將原料放入萃取罐中，然后通過超臨界CO2高壓泵注入CO2，乙酸乙酯作夾帶劑，高壓泵萃取壓力為33-56MPa，萃取溫度為35-78℃，提取時間2-4小時，解析壓力為4-9MPa，解析溫度為30-50℃，得路路通酸萃取物，將萃取物加入層析柱中純化，乙酸乙酯-乙醇洗脫，得到路路通酸粗提物，濃縮，無水乙醇回流溶解結晶，濾出晶體，干燥得路路通酸。本發(fā)明適合小規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C07J53/00GK102477062SQ20101055779
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月25日 優(yōu)先權日2010年11月25日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司