專利名稱：：一種狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白及其制備方法以及其在制藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及一種生物免疫制品，特別是涉及一種狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白及其制備方法，以及其在制藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：狂犬病是一種病原體為核糖核酸型的彈性病毒。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球三分之二以上的國(guó)家和地區(qū)有狂犬病流行，我國(guó)及東南亞地區(qū)處于世界狂犬病高發(fā)區(qū)，其病例約占全球的70%以上。狂犬病一旦發(fā)病，目前尚無(wú)法醫(yī)治，死亡率幾乎達(dá)100%。根據(jù)冊(cè)0推薦的狂犬免疫接種方案，對(duì)暴露者注射人狂犬病免疫球蛋白(RIg)，然后肌肉注射狂犬病疫苗，以確保暴露者免疫效果。該方法被世界衛(wèi)生組織公認(rèn)為是目前唯一有效的預(yù)防方法。破傷風(fēng)是一種嚴(yán)重威脅人類生命健康的急性特異性感染疾病，由破傷風(fēng)桿菌侵入人體傷口、生長(zhǎng)繁殖、產(chǎn)生毒素引起。破傷風(fēng)桿菌及其毒素不能侵入正常的皮膚和粘膜，故破傷風(fēng)都發(fā)生在傷后。一切開(kāi)放性損傷均有發(fā)生破傷風(fēng)的可能。人體破傷風(fēng)免疫球蛋白(TIg)是經(jīng)破傷風(fēng)疫苗接種后再經(jīng)破傷風(fēng)類毒素(TD)免疫的具有高效價(jià)破傷風(fēng)抗體的血漿，經(jīng)低溫乙醇法分級(jí)沉淀、加壓過(guò)濾分離提純，并經(jīng)病毒滅活處理，用于防治破傷風(fēng)。世界衛(wèi)生組織要求，在對(duì)病犬咬傷積極預(yù)防狂犬病的同時(shí)，也應(yīng)預(yù)防破傷風(fēng)。目前我國(guó)臨床使用的狂犬病人免疫球蛋白和破傷風(fēng)人免疫球蛋白均為單一效價(jià)，使用時(shí)需要多次注射，臨床使用不便，而且費(fèi)用高。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)及產(chǎn)品效能的不足，提供一種即能預(yù)防狂犬病同時(shí)又能預(yù)防破傷風(fēng)發(fā)生的雙效價(jià)免疫球蛋白及制備方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案本發(fā)明一種狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其中，免疫球蛋白純度大于等于總蛋白的90%，狂犬病中和抗體的效價(jià)大于等于100IU/mL，同時(shí)破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于40IU/mL，蛋白質(zhì)含量小于等于180g/L。3本發(fā)明所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其中，所述免疫球蛋白與正常人血清比較，主要沉淀線為IgG。本發(fā)明所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其中，所述免疫球蛋白的IgG單體及二聚體含量之和大于等于90%。本發(fā)明所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其中，所述免疫球蛋白的劑型為液體型或凍干劑型；以狂犬病中和抗體效價(jià)為準(zhǔn)規(guī)格有100IU/1.0ml/瓶、200IU/2.0m1/瓶、500IU/5.0ml/瓶。本發(fā)明所述獲取、制備高效價(jià)狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋的制備方法，其中a.給符合國(guó)家采血標(biāo)準(zhǔn)的供血者，在0、3、7、14、28天分別接種狂犬病疫苗，劑量為1.0-0.5ml/每次，完成疫苗接種后15天，再給上述供血者應(yīng)用吸附破傷風(fēng)疫苗，按照O、14、28天劑量為1.0-0.5mL每次進(jìn)行免疫接種；b.免疫接種完成后的15天-180天，選擇符合下列要求的獻(xiàn)血人員的血漿為原料血漿，以固相酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)獻(xiàn)血漿者的血清或血漿狂犬病中和抗體及破傷風(fēng)中和抗體，符合單一血漿狂犬病中和抗體效價(jià)大于等于5IU/ml，破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于4IU/ml，以雙縮脲法測(cè)蛋白質(zhì)含量大于等于55g/L，以賴氏法測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶不高于25單位，乙型肝炎表面抗原陰性，梅毒陰性，HIV-l/HIV-2抗體陰性，HCV抗體陰性；c.每批次狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白的混合原料血漿由不少于IOO名供血漿者的原料血漿混合而成。d.以固相酶聯(lián)免疫法測(cè)定混合原料血漿中的狂犬病中和抗體效價(jià)和破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)，留中狂犬病中和抗體效價(jià)大于等于10IU/ml，破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于8IU/ml的混合原料血漿用以制備狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，如混合后血漿的狂犬病中和抗體效價(jià)小于10IU/mL或破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)小于8IU/mL，則該批次血漿不能使用，只能另作它用。e.將d步驟所得混合原料血漿按低溫乙醇或?qū)游龇ǖ鞍追蛛x工藝，分離提取免疫球蛋白組分，經(jīng)超濾、層析、病毒滅活、配制、除菌、分裝等工序制成。本發(fā)明所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白在制備狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷暴露患者狂犬病及破傷風(fēng)的預(yù)防藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明采集得到的原料血漿應(yīng)低溫冰凍儲(chǔ)存，其保存期不超過(guò)2年。作為制備狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白原料的混合原料血漿，每批次需由不少于ioo名供血漿者的原料血漿混合而成，采用低溫乙醇蛋白分離法或?qū)游龇ㄖ苽?。本發(fā)明的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白用于被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷暴露患者預(yù)防患狂犬病、破傷風(fēng)。其使用量以狂犬病中和抗體效價(jià)計(jì)，按20IU/kg體重計(jì)算，一次注射。如個(gè)體所需免疫球蛋白注射總劑量大于lOmL時(shí)，可在12日內(nèi)分次注射。隨后即可進(jìn)行狂犬病疫苗的注射。本發(fā)明由于伺時(shí)含有狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，故此對(duì)于被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷暴露患者，一次注射即可預(yù)防狂犬病和破傷風(fēng)，使用簡(jiǎn)單方便，具有較大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。具體實(shí)施例方式實(shí)施例11、供血漿者的免疫-選擇符合國(guó)家獻(xiàn)血標(biāo)準(zhǔn)的263供血漿者，在0、3、7±1、14±2、28士5天分別接種狂犬病疫苗(遼寧成大生物股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20081001，劑量為0.5ml/支)lml、0.5ml、0.5ml、0.5ml、lml。完成狂犬疫苗接種后15天，再應(yīng)用吸附破傷風(fēng)疫苗(武漢生物制品研究所生產(chǎn)，批號(hào)為20081002，劑量為O.5mL/支)，按照0、14±2、28±5天劑量為0.5mL進(jìn)行免疫接種，并建立詳細(xì)的免疫記錄。所述符合國(guó)家采rfn.標(biāo)準(zhǔn)包括以下項(xiàng)目以雙縮脲法檢測(cè)蛋白質(zhì)含量大于等于55g/L，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(賴氏法)不高于25單位，乙型肝炎表面抗原陰性，梅毒陰性，HIV-l/HIV-2抗體陰性，HCV抗體陰性者。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>805.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.152115905.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.1524101005.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.1518121105.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.151071205.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.15651305.0205.0505.1205.1605.3106,1506.2907.1513121405.0205,0505.1205.1605.3106.1506.2907.1517121505.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.1518151605.0205.0505.1205.1605.3106.1506.2907.151181705.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.16751805.0305.0605,1305.1706.0106.1606.3007.1612101905.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1615102005.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1617122105.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1618132205.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1614102305.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1615112405.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.16892505.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1614112605.0305.0605.1305.1706.0106.1606,3007.1611132705.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1610152805.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1621152905.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1614103005.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1615113105.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1623153205.0305.0605.1305,1706.0106.1606.3007.1612103305.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1614113405.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1615123505.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1616143605.0305.0605.1305.1706.0106.1606.3007.1615126<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>15305.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2114615405.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2181215505.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21151115605.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2191315705.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21161015805.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21181615905.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21151416005.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21161316105.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21181416205.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21211616305.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21281416405.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21161016505.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21151316605.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21171216705.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21151016805.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.217616905.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2191017005.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2171017105.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21151117205.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2116817305.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.2113917405.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21111317505.0805.1105.1805.2206.0606.2107.0507.21121517605.0805.1105.1805.2206,0606.2107.0507.2110817705.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.227517805.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.229617905.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.228718005.0905.1205.1905.2306.0706.2207,0607.22151318105.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2214101118205.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22211818305.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22181318405.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22171518505.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2216918605.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2291318705.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2281018805.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151318905.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22181019005.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22191219105.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.228619205.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22101219305.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22191319405.0905.1205.19。5.2306.0706.2207.0607.22111119505,0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151219605.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22171219705.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22191519805.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22211819905.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22131520005.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151420105.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22181520205.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22141220305.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22181020405.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2281020505.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151120605.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607,22121220705.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.2291420805.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151020905.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22181621005.0905.1205.1905.2306.0706.2207.0607.22151212<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>24005.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.2310724105.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23181424205.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23171124305.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23131324405.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23121524505.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23171024605.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23101224705.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23181524805.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23151124905.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23101025005.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23191325105.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23121125205.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23151325305.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23141225405.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23171325505.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23181325605.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23151325705.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23141125805.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23181525905.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23111026005.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23151326105.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.23181226205.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.238626305.1005.1305.2005.2406.0806.2307.0707.2318132、供血漿者的血漿篩選采集選擇狂犬病及破傷風(fēng)抗體IgG固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(泰安英才科技有限公司生產(chǎn)，狂犬病固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒批號(hào)分別為K20080102、破傷風(fēng)抗體固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒P20080201)分別定量檢測(cè)263名已免疫的供血漿者血清或血漿中的狂犬病中和抗體及破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)，其中符合下列要求131份,狂犬病中和抗體效價(jià)大于等于5IU/mL,同時(shí)14破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于4IU/mL，蛋白質(zhì)含量(雙縮脲法)大于等于55g/L，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(賴氏法)不高于25單位，乙型肝炎表面抗原陰性，梅毒陰性，HIV-l/HIV-2抗體陰性，HCV抗體陰性，采集符合要求的131名獻(xiàn)血者的血漿為狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)免疫球蛋白原料血漿，低溫冰凍儲(chǔ)存。3、狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白的制備(1)將131份狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)免疫球蛋白原料血漿融化混合，體積為75000ml，混合后血漿用固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(泰安英才科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為K20080102、P20080201)測(cè)得，狂犬病中和抗體效價(jià)為13.0IU/mL、破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)為10.2IU/mL;(2)步驟(1)所得的無(wú)菌血漿，在2。C下離心去除冷沉淀7Kg;(3)步驟(2)所得的去除冷沉淀后的血漿為69L，用6.9L生理鹽水將其稀釋，用PH4.0醋酸緩沖液210ml調(diào)節(jié)稀釋液pH值至6.5，加16L95%乙醇至反應(yīng)液中，反應(yīng)液最終乙醇濃度為20%，終體積為92L，使用冷媒控制反應(yīng)液溫度至-4.5i:并保持，板框壓濾分離得沉淀12kg;(4)將步驟(3)所得的沉淀用0°CO.01mol/LNaCl溶液108L攪拌溶解，終體積為120L;(5)在步驟(4)所得上清液中加40.8L50%乙醇，使液體中乙醇濃度為17%,以PH4.0醋酸緩沖液352ml調(diào)節(jié)液體pH值至5.1，終體積為160L，使用冷媒控制液體溫度至-4.5'C并保持，板框壓濾分離去除沉淀，收集上清液152L;(6)將步驟(5)所得上清液進(jìn)行超濾透析四遍后上DEAE-S印harose-FastFlow弱陰離子交換層析，反應(yīng)液溫度為IO'C，收集流出液120L;(7)將步驟(6)的流出液進(jìn)行再超濾、濃縮，用2mol/L的冰醋酸712ml調(diào)節(jié)pH值為4.0，溫度至1(TC。透析8遍后濃縮，體積為8L，測(cè)蛋白含量:8.7y。、pH:4.05;(8)將步驟(7)的濃縮液用2mol/L的冰醋酸15ml調(diào)pH至3.85，加入30%麥芽糖4L使麥芽糖最終濃度在10%，蛋白含量為5.8%;(9)將上述步驟(8)所得原液經(jīng)過(guò)2425'C孵放21天之后再用納米膜過(guò)濾的雙病毒滅活處理；21天后將病毒處理液再返回經(jīng)超濾、脫醇、脫鹽、濃縮，得到原液3200ml，以狂犬病及破傷風(fēng)抗體IgG固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(泰安英才科技有限公司生產(chǎn)，狂犬病固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒批號(hào)分別為K20080102、破傷風(fēng)抗體固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒P20080201)測(cè)狂犬病中和抗體效價(jià)為150IU/ml、破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)為80IU/ml;(10)加入lmol/L的碳酸氫鈉溶液550ml調(diào)節(jié)步驟(9)所得原液，原液pH值被調(diào)為6.8，并加入30%葡萄糖溶液570ml至原液中，葡萄糖終濃度為4%，補(bǔ)加入生理鹽水50ml至原液，以狂犬病及破傷風(fēng)抗體IgG固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(泰安英才科技有限公司生產(chǎn)，狂犬病固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒批號(hào)分別為K20080102、破傷風(fēng)抗體固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒P20080201)測(cè)狂犬病中和抗體效價(jià)為112IU/ml、破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)為55IU/ml，配置液經(jīng)0.45um濾膜過(guò)濾得半成品約4300ml;(ll)除菌分裝為2.0ml/瓶成品(共計(jì)1916瓶)，取樣25瓶交質(zhì)量檢定部檢定。4、檢定(1)活性選擇狂犬病及破傷風(fēng)抗體IgG固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(泰安英才科技有限公司生產(chǎn)，狂犬病固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒批號(hào)分別為K20080102、破傷風(fēng)抗體固相酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒P20080201),測(cè)得狂犬病中和抗體效價(jià)為112.8IU/mL，破傷風(fēng)效價(jià)為58.4IU/mL。(2)鑒別免疫雙擴(kuò)散法僅與抗人的血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、抗牛、抗豬、抗羊的血清不產(chǎn)生沉淀線。免疫電泳法DYY-2C型電泳儀，瓊脂糖凝膠，100V恒壓電泳2小時(shí)，與正常人血清比較，主要沉淀線為IgG。(3)蛋白質(zhì)含量定氮法檢測(cè)113.2g/L。(4)純度檢測(cè)方法全自動(dòng)電泳掃描法免疫球蛋白純度為97.5%。(5)分子大小分布檢測(cè)方法高壓液相色譜檢測(cè)IgG單體與二聚體含量之和98.4%。(6)外觀為無(wú)色澄清液體，無(wú)渾濁。(7)熱穩(wěn)定性57'C水浴中保溫4小時(shí)后，無(wú)凝膠化及絮狀物。(8)pH值用生理氯化鈉溶液將供試品蛋白質(zhì)含量稀釋成10g/L，pH值為7.0。(9)無(wú)菌檢査無(wú)雜菌生長(zhǎng)；符合要求。卿異常毒性觀察7天，用10只小白鼠和4只豚鼠(sps級(jí)，從安徽醫(yī)科大學(xué)購(gòu)得)，取0.5ml腹腔注射，動(dòng)物健存，體重增加；符合要求。(ll)熱源檢查使用成年兔子3只(普通級(jí)，從安徽醫(yī)科大學(xué)購(gòu)得)，按0.45ml/Kg靜脈注射實(shí)施例1所得的免疫球蛋白，升溫總和為0.78。C;個(gè)別升溫分別為0.26°C、0.29°C、0.23°C;符合要求。(1加CV抗體檢查為陰性；符合要求。(l加IVw抗體檢査酶聯(lián)試劑盒，北京華大吉比愛(ài)生物公司生產(chǎn)，批號(hào)為20071001，為陰性；符合要求。實(shí)施例2臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)(l)實(shí)驗(yàn)組120例被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷暴露患者，年齡2-61歲，平均23.7歲；使用實(shí)施例l制備得到的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，用于預(yù)防狂犬病及破傷風(fēng)的發(fā)生，使用劑量按狂犬病中和抗體效價(jià)20IU/kg體重計(jì)算，一次應(yīng)用。結(jié)果均未發(fā)生任何不良反應(yīng)；連續(xù)觀察1年，均未發(fā)生狂犬病及破傷風(fēng)。(2)對(duì)照組47例被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷暴露患者，年齡3-65歲，平均21.4歲；使用華蘭生物生產(chǎn)的狂犬病人免疫球蛋白(批號(hào)200803001，規(guī)格200IU/2.0ml/瓶)用于預(yù)防狂犬病的發(fā)生，使用劑量按狂犬病中和抗體效價(jià)20IU/kg體重計(jì)算，一次應(yīng)用；同時(shí)使用四川遠(yuǎn)大蜀陽(yáng)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的破傷風(fēng)人免疫球蛋白(批號(hào)200704103，規(guī)格250IU/瓶)用于預(yù)防破傷風(fēng)的發(fā)生，使用劑量為250IU，一次應(yīng)用。結(jié)果均未發(fā)生任何不良反應(yīng)；連續(xù)觀察1年，均未發(fā)生狂犬病及破傷風(fēng)。結(jié)論應(yīng)用狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白預(yù)防狂犬病及破傷風(fēng)的發(fā)生與同時(shí)使用狂犬病人免疫球蛋白和破傷風(fēng)人免疫球蛋白兩種免疫球蛋白具有同樣的效果。上面所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)精神前提下，本領(lǐng)域普通工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案作出的各種變形和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求書(shū)確定的保護(hù)范圍內(nèi)。權(quán)利要求1、一種狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其特征在于，免疫球蛋白純度大于等于總蛋白的90％，狂犬病中和抗體的效價(jià)大于等于100IU/mL，同時(shí)破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于40IU/mL，蛋白質(zhì)含量小于等于180g/L。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白僅與抗人血清產(chǎn)生沉淀線，與抗馬、牛、豬、羊血清不產(chǎn)生沉淀線。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白與正常人血清比較，主要沉淀線為IgG。4、根據(jù)權(quán)利要求l所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白的IgG單體及二聚體含量之和大于等于90%。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白的劑型為液體型或凍干劑型；以狂犬病中和抗體效價(jià)為準(zhǔn)規(guī)格有100IU/1.0ml/瓶、200IU/2.0ml/瓶、500IU/5.0ml/瓶。6、根據(jù)權(quán)利要求1所述狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋的制備方法，其特征在于a.給符合國(guó)家采血標(biāo)準(zhǔn)的供血者，在0、3、7、14、28天分別接種狂犬病疫苗，劑量為L(zhǎng)0-0.5ml/每次，完成狂犬疫苗接種后15天，再給上述供血漿者應(yīng)用吸附破傷風(fēng)疫苗，按照劑量為1.0-0.5ml/每次，分別在第0、14、28天進(jìn)行免疫接種；b.免疫接種完成后的15天-180天,選擇符合下列要求的獻(xiàn)血人員的血槳為原料血漿，以固相酶聯(lián)免疫法定量檢測(cè)獻(xiàn)血漿者的血清或血漿狂犬病中和抗體及破傷風(fēng)中和抗體，符合單一血漿狂犬病中和抗體效價(jià)大于等于5IU/ml，破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于4IU/ml，以雙縮脲法測(cè)蛋白質(zhì)含量大于等于55g/L，以賴氏法測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶不高于25單位，乙型肝炎表面抗原陰性，梅毒陰性，HIV-l/HIV-2抗體陰性，HCV抗體陰性；c.每批次狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白的混合原料血漿由不少于IOO名供血漿者的原料血漿混合而成；d.以固相酶聯(lián)免疫法測(cè)定混合原料血漿中的狂犬病中和抗體效價(jià)和破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)，留中狂犬病中和抗體效價(jià)大于等于10IU/ml，破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于8IU/ml的混合原料血漿用以制備狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白；e.將d步驟所得混合原料血漿按低溫乙醇或?qū)游龇ǖ鞍追蛛x工藝，分離提取免疫球蛋白組分，經(jīng)超濾、層析、病毒滅活、配制、除菌、分裝等工序制成。7、權(quán)利要求1所述的狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白在制備被狂犬或其他瘋動(dòng)物咬傷或抓傷的暴露患者狂犬病及破傷風(fēng)的預(yù)防藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白，其中免疫球蛋白純度大于等于總蛋白的90％，狂犬病中和抗體的效價(jià)大于等于100IU/mL，破傷風(fēng)中和抗體效價(jià)大于等于40IU/mL，蛋白質(zhì)含量小于等于180g/L。同時(shí)狂犬病、破傷風(fēng)雙效價(jià)人免疫球蛋白的制備方法，及其在制備預(yù)防狂犬病和破傷風(fēng)病藥物中的應(yīng)用。文檔編號(hào)C07K16/12GK101591393SQ200910088039公開(kāi)日2009年12月2日申請(qǐng)日期2009年6月30日優(yōu)先權(quán)日2009年6月30日發(fā)明者孫思才,張振湖,胡輝恒申請(qǐng)人:同路生物制藥有限公司