專利名稱：具有抗流感活性之含奧司他偉膦酸酯同系物的合成的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明敘述新穎的膦酸酯化合物。該等化合物具有作為神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑之活 性，可對抗Hmi及H5W病毒的野生型及H274Y突變株。本發(fā)明亦提供已知神經(jīng)胺酸苷酶 抑制劑奧司他偉(Oseltamivir)及抗流感藥物克流感(Tamiflu )以及新穎膦酸酯化合物 之經(jīng)由D-木糖或溴苯的兩種對映體選擇性合成途徑。
背景技術(shù)：
流感依舊是人類及動物的重大健康問題(Kaye and Pringle, Clin. Infect. Dis. 2005，40，108 ；以及 Beigel et al.，N. Engl. J. Med. 2005，353，1374)。目前共有四種 藥物核準用于流感之預(yù)防及治療金剛烷胺(amantadine)及金剛乙胺(rimantadine)是 作為M2離子通道阻斷劑，而克流感(奧司他偉乙醚之磷酸鹽，Roche Laboratories, Inc.) 及瑞樂沙(Relenza )(扎那米偉(zanamivir)，Glaxo Wellcome, Inc.)則是抑制神經(jīng)胺 酸苷酶(NA) (Moscona, A. N. Engl. J. Med. 2005，353，1363 ；Ward et al.，J. Antimicrob. Chemother. 2005, 55, Suppl. Si, 15 ；以及 De Clercq, Ε. Nature Rev. Drug Discov. 2006, 5, 1015)。近來對于藥物抗性禽流感的感染以及接受克流感治療兒童的副作用的研究報告建 議，在對抗大流行性流感威脅的戰(zhàn)役中，仍需要能作為神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑的新穎化學物。 在可取得安全及有效的疫苗來保護以對抗可能發(fā)生的大流行性禽流感之前，神經(jīng)胺酸苷酶 抑制劑是少數(shù)可用的治療方法之一。NA抑制劑(NAIs)經(jīng)設(shè)計具有(氧雜)環(huán)己烯骨架，以模擬唾液酸的酶切割的 氧鐺過渡狀態(tài)(von Itzstein, Μ. et al. Nature 1993,363,418 ；Lew et al. , Curr. Med. Chem. 2000,7,663 ；and Russell et al. , Nature 2006，443，45)?？肆鞲?1,示于流程 1) 是一種口 服投與的抗流感藥物(Kim et al.，J. Am. Chem. Soc. 1997，119，681 ；Rohloffet al.，J. Org. Chem. 1998,63,4545 ；Karpf andTrussardi，J. Org. Chem. 2001,66,2044 ； Harrington et al. , Org. Process Res. De υ . 2004, 8, 86 ；Yeung et al. , J. Am. Chem. Soc.2006,128,6310 ；Fukuta etal. , J. Am. Chem. Soc.2006,128,6312 ；Farina and Brown, Angew. Chem. Int. Ed. 2006,45,7330 ；Mita et al. , Org. Lett. 2007,9,259 ；Yamatsugu et al.，Tetrahedron Lett. 2007，48，1403)。在由肝酯酶水解時，活化的羧酸鹽奧司他偉(2， 亦稱為GS4071)會與NA活性位點中的三個精胺酸殘基(Argll8、Arg292及Arg371)產(chǎn)生作 用(von Itzstein, et al. , 1993 ；Lew et al. , 2000,及 Russell et al.,2006)o膦酸基一般是在藥物設(shè)計中作為羧基的生物電子等排體(White et al.，J. MoI. Biol. 1995, 245,623 ；Streicher et al. ,Tetrahedron 2001,57,8851 ；Streicher,Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004，14，361 ；Schug and Lindner, W. Chem. Rev. 2005，105，67 ；Streicherand Busseb，Bioorg. Med. Chem. 2006，14，1047)。使用已知的 Nl 晶體結(jié)構(gòu)(PDB 編碼:2HU4) (Russell et al.，2006)所進行的初步分子對接實驗(圖1)顯示，除了類似NA-奧司他偉 復合物之在結(jié)合袋中由該C3-戊氧基、C4-乙酰胺基、及C5-胺基所產(chǎn)生的其它作用外，該推 定之膦酸酯抑制劑3a尚可強力結(jié)合NA之三-精胺酸殘基。相較于羧酸-胍離子對，膦酸 離子與胍離子間具有更強之靜電作用。針對奧司他偉/克流感的合成，先前所報告之方法 (包括，如，Bischofberger et al.，美國專利第5，763，483號，其并入本文作為參考)并無 法接受將C-I羧基交換成為膦酸基；因此，其需要新穎的方法來合成已知及新穎的神經(jīng)胺 酸苷酶抑制劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明敘述新穎的膦酸酯化合物。該等化合物具有作為神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑的活 性，以對抗Hmi及H5m病毒的野生型及H274Y突變株。本發(fā)明亦提供已知神經(jīng)胺酸苷酶抑 制劑奧司他偉(Oseltamivir)及抗流感藥物克流感(Tamiflu )以及新穎膦酸酯化合物之 經(jīng)由D-木糖的對映體選擇性合成途徑。本發(fā)明亦提供另一種有效且彈性的合成，以11步驟 及> 20%的整體產(chǎn)率，由可輕易取得的發(fā)酵產(chǎn)物(1S-順)-3-溴-3，5-環(huán)己二烯-1，2- 二 醇合成克流感以及高度強效神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑零流感(Tamiphosphor)。大部分的反應(yīng)中 間物皆在無冗長純化流程的情形下以晶體形式取得。關(guān)鍵的轉(zhuǎn)化作用包括溴苯順_ 二氫二 醇的起始位向及立體選擇性溴酰胺化作用，以及最終的鈀催化性羰基化及膦酰化作用。根據(jù)本發(fā)明的特征之一，其揭示一種組合物，包含治療有效量之式I化合物 以及醫(yī)藥載體，其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1_C6烷基、芳 基、及X，其中X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇 銨、二環(huán)己基銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂 陽離子、及鈣陽離子、鋅陽離子所組成之群；且其中R1系順2、順3+駛04_、或NH(C = NH)NH20
根據(jù)本發(fā)明的特征之一，其揭示一種組合物，包含治療有效量之至少一種下列化 合物
以及醫(yī)藥載體。根據(jù)本發(fā)明的特征之一，其揭示一種方法，包含根據(jù)至少一種圖3-5之流程制造 式I化合物之組合物 其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中
X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基 銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣 陽離子、鋅陽離子所組成之群；且其中R1系nh2、NH3+H2PO4_、或NH(C = NH)NH2。由此種方法所產(chǎn)生之產(chǎn)物亦以類似方式為本發(fā)明預(yù)期。根據(jù)本發(fā)明的特征之一，其揭示一種方法，包含提供治療有效量之式I化合物組 合物 其中該組合物系設(shè)計用以投與至生物以抑制神經(jīng)胺酸苷酶之活性，其中A系 PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系一陽離子反離子， 選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、胍、乙二銨陽離子、 鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽離子、鋅陽離子所組 成之群；且其中 R1 系 NH2、ΝΗ3+Η2Ρ0ρ 或 NH(C = NH) NH2。根據(jù)本發(fā)明的特征之一，其揭示一種方法，包含提供具有治療有效量之至少一種 下列化合物的組合物 其中該組合物系設(shè)計用以投與至生物以抑制神經(jīng)胺酸苷酶之活性。在一實施例中，本發(fā)明提供式⑴之化合物 其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中 X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基 銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及 丐 陽離子、鋅陽離子所組成之群；且R1系NH2、NH3+H2P04-、或NH(C = NH)NH2。在一特定態(tài)樣中，該化合物是 在另一特定態(tài)樣中，該化合物是 在又另一特定態(tài)樣中，該化合物是 在另一特定態(tài)樣中，該化合物是
在另一特定態(tài)樣中，該化合物是
本發(fā)明之另一實施例提供下式之化合物
本發(fā)明之另一實施例提供下式之化合物 在一實施例中，本發(fā)明提供一種組合物，包含下列化合物中之任何一者式(I)化 合物，其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系 一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、 胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽 離子、鋅陽離子所組成之群；且札系朋2、朋3+!^04-、或朋化=朋)朋2 ；3、3a、3b、13a、及13b， 以及醫(yī)藥可接受之載體。在另一實施例中，本發(fā)明提供制備式(I)化合物之方法 其中A系CO2R,或PO (OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1_C6烷基、芳基、及X， 其中X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán) 己基銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、 及鈣陽離子、鋅陽離子所組成之群；且R1系NH2、NH3+H2P04_、或NH(C = NH) NH2 ；該方法包含(a)使用D-木糖作為掌性前體，制備中間化合物(7) 其中E系CO2R或PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自C1-C6烷基及芳基；(b)處理中間化合物(7)而進行分子內(nèi)之Horner-Wadsworth-Emmons反應(yīng)，以形成
中間化合物(8) 其中E系CO2R或PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自C1-C6烷基及芳基；(c)以疊氮磷酸二苯酯處理中間化合物(8)而以迭氮基取代羥基并進行構(gòu)型轉(zhuǎn) 化，以形成中間化合物(9) 其中E系CO2R或PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自C1-C6烷基及芳基；(d)以Tf20、堿、及冠狀醚處理中間化合物(9)而轉(zhuǎn)化羥基，以形成中間化合物 (10) 其中 E 系 CO2R 或 PO (OR) (OR
獨立選自C1-C6烷基及芳基;
以及(e)處理中間化合物(10)以形成式(I)化合物。本發(fā)明之另一實施例提供一種用以抑制神經(jīng)胺酸苷酶活性之方法，其包含使該神 經(jīng)胺酸苷酶接觸下列化合物中之任何一者式(I)化合物，其中A系PO (OR) (OR')，其中R 及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二 甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、 鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽離子、鋅陽離子所組成之群；且R1系NH2、 ΝΗ3+Η2Ρ0ρ 或 NH(C = NH) NH2 ； 3、3a、3b、13a、及 13b。在一態(tài)樣中，該神經(jīng)胺酸苷酶是活體內(nèi)(in vivo)之流感神經(jīng)胺酸苷酶。在另一 態(tài)樣中，該神經(jīng)胺酸苷酶是試管內(nèi)(in vitro)之流感神經(jīng)胺酸苷酶。在另一實施例中，本發(fā)明提供一種用以在需要的病患體內(nèi)治療流感之方法，該方 法包含對該病患投與包含治療有效量之下列化合物中任何一者的組合物式(I)化合物， 其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1_C6烷基、芳基、及X，其中X系一陽離 子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、胍、乙二 銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽離子、鋅 陽離子所組成之群；且 R1 系冊2、ΝΗ3+Η2Ρ0ρ或 NH(C = NH) NH2 ；3、3a、3b、13a、及 13b。在一 態(tài)樣中，該組合物尚包含醫(yī)藥可接受之載體。


上述本發(fā)明之特征以及標的將可在參照下文結(jié)合附呈圖式之敘述時變得更為顯 著，在該等圖式中，類似之參照數(shù)字系代表類似之組件，且其中圖1顯示奧司他偉2(A)及膦酸酯化合物3a(B)在流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶(W亞 型)活性位點中之分子模型；圖2顯示化合物1、3、3b、3c、13b、及13c之分子模型；圖3顯示克流感1、奧司他偉2、其胍類似物13a、及膦酸酯同系物3、3b、及13b之 新穎合成途徑；圖4顯示克流感1以及膦酸酯同系物零流感3之新穎合成途徑；圖5顯示克流感1以及膦酸酯同系物零流感3之新穎合成途徑；圖6顯示克流感1以及膦酸酯同系物零流感3及13b之新穎合成途徑；圖7顯示膦酸酯同系物3c之新穎合成途徑；圖8顯示膦酸酯同系物13c之新穎合成途徑；圖9顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以10mg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖10顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以lmg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖11顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以0. lmg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖12顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以0. 0lmg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；
圖13顯示經(jīng)IOMLD5tl之NIBRG-14 (H5N1)流感病毒接種并以10mg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖14顯示經(jīng)IOMLD5tl之NIBRG-14 (H5N1)流感病毒接種并以lmg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖15顯示經(jīng)IOMLD5tl之NIBRG-14 (H5m)流感病毒接種并以0. lmg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖16顯示經(jīng)IOMLD5tl之NIBRG-14(H5m)流感病毒接種并以0. 01mg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖17顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以10mg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖18顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以lmg/kg/天之藥物劑 量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖19顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以0. lmg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖20顯示經(jīng)IOMLD5tl之A/WSN/33 (HlNl)流感病毒接種并以0. 01mg/kg/天之藥物 劑量治療之小鼠的存活率(a組)及平均體重變化(b組)；圖21顯示化合物5 之1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖22顯示化合物5 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；
圖23顯示化合物6 之1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖24顯示化合物6 之 13C 匪R 光譜(150MHz，CDCl3)；
圖25顯示化合物7a 之 1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖26顯示化合物7b 之 1H NMR 光譜(600MHz, CDCl3)；
圖27顯示化合物8a 之 1HNMR 光譜(600MHz, CDCl3)；
圖28顯示化合物8a 之 13C 匪R 光譜(150M H z, CDCl3)；
圖29顯示化合物9a 之 1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖30顯示化合物9a 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；
圖31顯示化合物IOa 之 1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖32顯示化合物IOa 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；
圖33顯示化合物IOb 之 1H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)；
圖34顯示化合物IOb 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；
圖35顯示化合物IOb 之 31P NMR 光譜(162MHz，CDCl3)；
圖36顯示化合物Ila 之1H NMR 光譜(600MHz, CDCl3)；
圖37顯示化合物Ila 之 13C 匪R 光譜(150MHz，CDCl3)；
圖38顯示化合物lib 之1H NMR 光譜(600MHz, CDCl3)；
圖39顯示化合物lib 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；
圖40顯示化合物lib 之 31P NMR 光譜(162MHz，CDCl3)；
圖41顯示化合物1克流感之1H NMR光譜(600MHz, D2O)
圖42顯示化合物1 克流感之 13C NMR 光譜(150MHz, D2O)
圖43顯示化合物1 克流感之 31P NMR 光譜(162MHz, D2O)圖44顯示化合物2奧司他偉之1H NMR光譜(600MHz，D2O) 圖45顯示化合物2奧司他偉之13C NMR光譜(150MHz，D2O) 圖46顯示化合物3之1H NMR光譜(600MHz, D2O)； 圖47顯示化合物3之13C NMR光譜(150MHz, D2O)； 圖48顯示化合物3之31P NMR光譜(162匪ζ，D2O)； 圖49顯示化合物12a之1H NMR光譜(600MHz, CDCl3)； 圖50顯示化合物12a之13C NMR光譜(150MHz，CDCl3)； 圖51顯示化合物12b之1H NMR光譜(600MHz, CDCl3)； 圖52顯示化合物12b之13C NMR光譜(150MHz, CDCl3)； 圖53顯示化合物12b之31P NMR光譜(162MHz, CDCl3)； 圖54顯示化合物13a之1H NMR光譜(600MHz，D2O)； 圖55顯示化合物13a之13C匪R光譜(150MHz，D2O)； 圖56顯示化合物13b之1H NMR光譜(600MHz, D2O)； 圖57顯示化合物13b之13C NMR光譜(150MHz, D2O)； 圖58顯示化合物13b之31P NMR光譜(162MHz, D2O)； 圖59顯示化合物14a之1H NMR光譜(600MHz，D2O)； 圖60顯示化合物14a之13C NMR光譜(150MHz, D2O)； 圖61顯示化合物14b之1H NMR光譜(600MHz，D2O)； 圖62顯示化合物14b之13C匪R光譜(150MHz，D2O)； 圖63顯示化合物14b之31P NMR光譜(162MHz, D2O)；
圖64顯示化合物20之 圖65顯示化合物20之 圖66顯示化合物22之 圖67顯示化合物22之 圖68顯示化合物23之 圖69顯示化合物23之 圖70顯示化合物24之 圖71顯示化合物24之 圖72顯示化合物25之 圖73顯示化合物25之 圖74顯示化合物26之 圖75顯示化合物26之 圖76顯示化合物27之 圖77顯示化合物27之 圖78顯示化合物29之 圖79顯示化合物29之
H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz, CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)； 3C NMR 光譜(150MHz，CDCl3) H NMR 光譜(600MHz，CDCl3)
C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)； 圖80顯示化合物31a之1H NMR光譜(600MHz, CDCl3)； 圖81顯示化合物31a之13C NMR光譜(150MHz, CDCl3)； 圖82顯示化合物31b之1H NMR光譜(600MHz，CDCl3)；
圖 83 顯示化合物 31b 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；圖 84 顯示化合物 31b 之 31P NMR 光譜(202MHz, CDCl3)；圖 85 顯示化合物 3c 之 1H NMR 光譜(600MHz, D2O)；圖 86 顯示化合物 3c 之 13C NMR 光譜(150MHz, D2O)；圖87顯示化合物31b之31P匪R光譜(242MHz，D2O)；圖 88 顯示化合物 13c 之1H NMR 光譜(600MHz, D2O)；圖89顯示化合物13c之13C匪R光譜(150MHz，D2O)；圖 90 顯示化合物 3b 之 1H NMR 光譜(600MHz, CDCl3)；圖 91 顯示化合物 3b 之 13C NMR 光譜(150MHz, CDCl3)；圖 92 顯示化合物 3b 之 31P NMR 光譜(162MHz, CDCl3)。
具體實施例方式在下文本發(fā)明實施例之詳述中，其參照附呈之圖式，其中類似之參照數(shù)字代表類 似之組件，且其中系以說明方式顯示可實施本發(fā)明之具體實施例。此等具體實施例系以足 夠之細節(jié)進行敘述，以使一般技藝人士可據(jù)以實施本發(fā)明，且需明了者，可使用其它具體實 施例，且可在不偏離本發(fā)明范圍的情形下進行邏輯、機械、電學、功能、組成、及其它之改變。 下文之詳述因此不應(yīng)被視為任何限制，而本發(fā)明之范圍僅由附呈之申請專利范圍定義。在 本文中，「或」乙辭應(yīng)被視為一種論理上之選言，且不應(yīng)被視為一種排他性選言，除非其明示 為如此或是被標示為「或不(xor)」乙辭。本發(fā)明提供已知神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑奧司他偉及抗流感藥物克流感以及新穎膦 酸酯同系物的新穎合成途徑。其使用D-木糖作為掌性前體以進行已知及新穎活性神經(jīng)胺 酸苷酶抑制劑的合成。新穎的膦酸酯同系物藉由抑制Hmi及H5m病毒的野生型及H274Y 突變株的神經(jīng)胺酸苷酶而具有優(yōu)于抗流感之較佳抗流感活性。目前的克流感工業(yè)合成是依賴天然存在的莽草酸(shikimic acid)來作為起始物 質(zhì)。然而，具有一致純度之莽草酸的取得可能造成問題。此種合成亦具有操作爆炸性迭氮 化物反應(yīng)試劑及中間化合物的缺點。數(shù)種新穎的克流感合成方法系著手于非莽草酸依賴性 的方法。為建立克流感的環(huán)己烯羧酸酯核結(jié)構(gòu)，已使用了各種類型的Diels-Alder反應(yīng)。 舉例而言，可進行呋喃及丙烯酸酯間的Diels-Alder反應(yīng)，接著進行酶法拆分，以取得克流 感合成的掌性中間化合物。類似者，可使用1-三甲基系烷氧基-1，3-丁二烯與需要以掌性 HPLC分離關(guān)鍵中間化合物的外消旋混合物?；蛘?，可以催化對映選擇性Diels-Alder反應(yīng) 提供所需的掌性環(huán)己烯羧酸酯以進行克流感的合成。在一實施例中，本發(fā)明提供新穎的合成方法，以進行具有合理高產(chǎn)率 (5. 2-13. 5% )的克流感、奧司他偉、各種膦酸酯同系物、以及其胍類似物的對映選擇性合 成。該合成途徑示于圖3 (流程1)。本發(fā)明進行分子內(nèi)之Horner-Wadsworth-Emmons反應(yīng)以 產(chǎn)生環(huán)己烯羧酸酯8a及膦酸酯Sb。在根據(jù)Mitsimobu法以疊氮磷酸二苯酯處理時，8a/8b 中之羥基可成功以迭氮基取代并具有轉(zhuǎn)化之構(gòu)型。在一態(tài)樣中，此流程中免除了使用危險 反應(yīng)試劑迭氮化鈉。在一較佳態(tài)樣中，該合成流程可容許進行后期官能化作用，這使其就醫(yī) 藥化學之觀點而言相當具有吸引力。該新穎的合成流程示于圖3。述于圖3的反應(yīng)試劑及步驟如下(a)Me3CCOCl,吡啶，0°C，8h ；89%。(b)PDC,Ac2O,回流，1. 5h ；HONH2-HCl,吡啶，60°C，24h ；82%。(C)LiAlH4, THF，0°C，接著回流 1. 5h ；88%。(d) Ac2O，吡啶，25°C，3h ；HC1/1，4_ 二惡烷(4M)，BnOH，甲苯， 0-25°C,24h ；85% ο (e)2，2' -二 甲氧基丙烷，甲苯，催化量 p-TsOH，80°C，4h ;90 %。(f) Tf2O,吡啶，CH2Cl2, -15°C，2h ；EtO2CCH2PO (OEt) 2 或 H2C [P0 (OEt) 2] 2，NaH，催化量 15-冠醚-5， DMF，250C，24h ；7a 產(chǎn)率 80% 而 7b 產(chǎn)率 73%。(g) H2, Pd/C，EtOH, 25°C，24h ；NaH, THF，25°C， lh，8a 產(chǎn)率 83% ；or NaOEt，EtOH，25°C，5h，8b 產(chǎn)率 80%。(h) (PhO)2PON3, (i-Pr)N = C = N(i-Pr)，PPh3, THF，25°C，48h。(i)HCl, EtOH,回流，Ih ；9a 產(chǎn)率 83%而 9b 產(chǎn)率 74%。(j) Tf2O，吡啶，CH2Cl2,-15 至-10°C，2h ；KNO2,18-冠醚-6，DMF，40°C，24h ； IOa 產(chǎn)率 70% 而 IOb 產(chǎn)率 71%。(k) Cl3CC( = NH) OCHEt2, CF3SO3H, CH2Cl2, 25°C，24h ；Ila 產(chǎn)率 78%而 lib 產(chǎn)率 82%o (I)H2,Lindlar 催化劑，Et0H，25°C，1他；3b 產(chǎn)率 85%。(m)H3PO4,EtOH,40°C, Ih ；1 之 產(chǎn)率 91%。(n)K0H，THF/H20，0-25°C，Ih ；2 之產(chǎn)率 88%而 14a 產(chǎn)率 81%。(o) TMSBr, CHCl3, 25°C，24h ；NH4HCO3水溶液，凍干；3之產(chǎn)率85% (銨鹽)，13b產(chǎn)率72 %而14b產(chǎn)率75%。 (P)N，N'-雙(第三丁氧羰基)硫脲，HgCl2, Et3N, DMF，0-25°C，10-16h ;12a 產(chǎn)率 78%而 12b產(chǎn)率58%。(q)TFA，CH2Cl2，0°C，lh ;13a產(chǎn)率88%。各步驟的反應(yīng)試劑、反應(yīng)條件及產(chǎn) 率進一步詳述于下文之實驗章節(jié)。在另一方法中，其制備1，4_環(huán)己二烯的內(nèi)消旋-氮丙啶衍生物，并以疊氮三甲基 硅烷對其進行催化性的不對稱性開環(huán)反應(yīng)，以其作為克流感合成的平臺方法。Ru-Al2O3催 化經(jīng)取代異酞酸二酯之氫化反應(yīng)，提供所有取代基及二酯順式-排列之環(huán)己烷核結(jié)構(gòu)。接 著對該內(nèi)消旋_ 二酯進行酶性水解而成為光學活性之單酸，其是作為克流感合成之關(guān)鍵中 間化合物。克流感的合成以環(huán)己二烯羧酸酯之掌性陽離子復合物的胺化作用起始示范，該 復合物系由經(jīng)(lR，2S)-2-苯基環(huán)己醇衍化之非鏡相異構(gòu)物的HPLC分離而取得。最后，以 5-氧雜-雙環(huán)[3. 2. 1]己烯-4-酮之鈀催化性不對稱烯丙基胺化反應(yīng)示范為克流感合成之 關(guān)鍵步驟。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)使用D-木糖作為平價起始物質(zhì)的克流感及零流感的合成。該等目標 化合物的環(huán)己烯核是由分子內(nèi)之Horner-Wadsworth-Emmons反應(yīng)建構(gòu)。盡管此種彈性合成 方法可以合理的整體產(chǎn)率(5-13% )提供克流感及零流感兩者，但其冗長之途徑(18-19反 應(yīng)步驟)對于大規(guī)模的合成而言并不理想。一種更為精確及實用的克流感及零流感的合成 途徑如圖4所示敘述。在此流程中，起始物質(zhì)鏡像純性溴苯順-1，2-二氫二醇(17)可由市售取得，且 可在大規(guī)模下可以溴苯之微生物氧化作用輕易制備。由于其獨特之官能基組合，該溴苯 順_ 二氫二醇已成功應(yīng)用于各種天然產(chǎn)物及其相關(guān)分子的合成。此外，該溴原子可在該合 成途徑之后期階段轉(zhuǎn)化成為各種官能基，包括羧酸酯及膦酸酯。因此，此種合成流程在使用 共同之中間化合物(如，26及29)作為關(guān)鍵點的情形下具有廣泛用途而可合成克流感、零流 感、及其它衍生物。此種后期之官能化作用就醫(yī)藥化學之觀點而言相當具有吸引力。根據(jù)此種合成計劃，其在0°C下，于CH3CN中，以N-溴乙酰胺(NBA)對(1S， 2S)-順-二醇17進行SnBr4-催化性溴乙酰胺化反應(yīng)，以位向及立體選擇性之方式產(chǎn)生溴 酰胺19，如圖4所示。以X光散射分析確認19之結(jié)構(gòu)(參見實例31及下列等等)。此種 反應(yīng)可能會接著在受阻較少之面形成溴離子，接著再在烯丙基C-5位置產(chǎn)生乙酰胺之選擇 性背后攻擊。在LHMDS (1. 1當量)之存在下，溴酰胺19會轉(zhuǎn)化成為氮丙啶20，其以3-戊醇
23進行BF3-中介性開環(huán)反應(yīng)，以73%之產(chǎn)率產(chǎn)生化合物22。去保護后，以α-乙酰氧基異丁 酰溴處理順_ 二醇23而產(chǎn)生對應(yīng)之乙酸_反-2-溴環(huán)己酯24。類似前述實例，此種反應(yīng) 可能涉及乙酰氧鐺離子(acetoxonium ion)之形成，以及溴離子在烯丙基C2位置之背后攻 擊。24與3當量LiBHEt3 (Super-Hydride )之反應(yīng)可借著Cl及C2位置之乙酰基及溴原 子之同時還原而以82%產(chǎn)率(由23)產(chǎn)生干凈產(chǎn)物25。在根據(jù)Mitsunobu法以疊氮磷酸 二苯酯(DPPA)處理時，25中之羥基可成功以迭氮基取代并具有轉(zhuǎn)化之構(gòu)型，以84%產(chǎn)率產(chǎn) 生26。亦發(fā)現(xiàn)少量(2%)之二烯27，其系藉由除去水分子而產(chǎn)生之副產(chǎn)物。對關(guān)鍵化合 物26進行有機金屬偶合反應(yīng)，以納入所欲之羧基及膦?；?。因此，在EtOH之存在下，26與 Ni (CO)2(PPh3)2之反應(yīng)可以81%產(chǎn)率產(chǎn)生乙酯28a。另一方面，以催化劑Pd(PPh3)4達成亞 磷酸二乙酯對26之膦?；饔茫?3%產(chǎn)率產(chǎn)生膦酸酯28b。在將28a及28b中之迭氮基 還原成為胺后，根據(jù)我們先前報告之流程合成克流感及零流感。上述的合成方法進一步由無迭氮化物之流程改良。我們發(fā)現(xiàn)，氰酸四丁銨是良好 的胺官能基來源，如圖5所示。醇25與Bu4N0CN/PPh3/DDQ反應(yīng)產(chǎn)生異氰酸中間化合物，其 接著以t-BuOH處理而以78%產(chǎn)率產(chǎn)生氨基甲酸酯29，如圖5所示。進行與亞磷酸二乙酯 之Pd-催化性偶合反應(yīng)，形成膦酸酯31b，再在溫和條件下以TMSBr進行Boc及乙基之同時 去除而合成零流感。為避免使用化學計量量之毒性Ni (CO) 2 (PPh3) 2，29之Pd-催化性羰基 化作用嘗試失敗。改將溴化物29轉(zhuǎn)化成為更具活性之碘化物類似物30，該Pd-催化性羰基 化作用即以高產(chǎn)率實現(xiàn)，產(chǎn)生羧酸酯31a。最后，以H3PO4處理31a，以一鍋操作切除Boc基 并形成磷酸鹽而產(chǎn)生克流感?？偨Y(jié)言之，其使用可輕易取得的材料溴苯順_ 二醇19 (其可由溴苯之微生物氧化 作用提供)，經(jīng)由11步驟之反應(yīng)序列，以21-26%的整體產(chǎn)率合成克流感及零流感。所有的 反應(yīng)皆在未使用潛在危險之中間化合物或毒性反應(yīng)試劑的情形下進行。由于大部分之反 應(yīng)皆系以位向及立體選擇性之方式產(chǎn)生結(jié)晶產(chǎn)物，其分離流程相對而言即簡單且具成本效 益。盡管在此實驗中僅示范克級合成，克流感及零流感之大規(guī)模合成對抗流感藥物之研發(fā) 而言大有指望。技藝中已知，可藉由使用膦酸二酯之堿性水解而取得膦酸單酯。膦酸單酯因此為 本發(fā)明的態(tài)樣之一預(yù)期。該單酯的合成在圖7中針對化合物3c顯示并在圖8中針對化合 物13c顯示。此等化合物皆可以本文所揭示之其它合成流程而由起始化合物31b或12b輕 易合成，以分別合成化合物3c及13c。本發(fā)明之組合物視情況包含本文化合物之鹽，特別是醫(yī)藥可接受之無毒性鹽，其 包含，例如，Na+、Li+、K+、Ca++及Mg++。此等鹽可包括藉由組合適當之陽離子(諸如，堿金屬 及堿土金屬離子或是銨及四級胺離子)與適當之酸陰離子分子部分而衍生者。金屬鹽可借著使金屬氫氧化物與本發(fā)明之化合物反應(yīng)而制備。可以此方式制備之 金屬鹽實例為含有Na+、Li+、K+之鹽。此外，可對堿性中心(一般為胺)或酸性基團進行部分有機或無機酸(如，HC1、 HBr^H2SO4)或是有機磺酸之酸加成而形成鹽。最后，咸應(yīng)明了，本文之組合物包含未離子化 以及兩性離子形式，以及在水合物之形式中結(jié)合化學計量量之水的本發(fā)明化合物。本發(fā)明 之另一態(tài)樣系關(guān)于用以抑制神經(jīng)胺酸苷酶活性之方法，其包含以本發(fā)明之化合物處理疑似 含有神經(jīng)胺酸苷酶之樣本的步驟。
本發(fā)明之化合物是與習知之載體及賦形劑進行調(diào)配，該等載體及賦形劑將根據(jù)一 般之實務(wù)而選擇。錠劑將會含有賦形劑、助流劑、充填劑、黏合劑、及其類似者。水性調(diào)配物 系以無菌形式制備，且在欲以非口服投與形式傳遞時，其一般而言將為等滲性。所有的調(diào)配 物皆將視情況含有賦形劑，諸如述于〃 Handbook of Pharmaceutical Excipients [醫(yī)藥賦 形劑手冊]〃 (1986)中者，其以其全文明確納入作為參考。賦形劑包括抗壞血酸及其它抗 氧化劑、螯合劑(諸如EDTA)、糖類(諸如葡聚糖)、羥烷基纖維素、羥烷基甲基纖維素、硬脂 酸、及其類似者。該等調(diào)配物之PH范圍為自pH 3至pH 11，但一般系約pH 7至pH 10。一或多種本發(fā)明之化合物(其在本文中稱為活性成分)可以適用于待治療病況之 任何途徑投與。適當之途徑包括口服、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括經(jīng)頰及舌下)、陰道、及腸外 (包括皮下、肌內(nèi)、靜脈、皮內(nèi)、腦脊髓膜內(nèi)、及硬腦膜外)、及其類似者。咸將可明了，較佳的 途徑可隨例如接受者之狀況而各異。盡管可能單獨投與該等活性成分，較佳者可能為將其以醫(yī)藥調(diào)配物之形式提供。 該等本發(fā)明之調(diào)配物(包括獸醫(yī)及人類用途兩者)包含至少一種活性成分(如上所定義)， 結(jié)合一或多種其可接受之載體及視情況之其它治療成分。該(等)載體必須為「可接受」 者，意謂其可與該調(diào)配物之其它成分兼容，并對其接受者為生理無害者。該等調(diào)配物包括適于前述投與途徑者。該等調(diào)配物可以單位劑形便利提供， 且可以任何藥學技藝中所熟知之方法制備。技術(shù)及調(diào)配物一般可見于Remington' s Pharmaceutical Sciences [Remington 醫(yī)藥禾斗學](MackPublishing Co.，Easton，Pa.)。此 等方法包括結(jié)合活性成分與構(gòu)成一或多種附屬成分之載體。一般而言，該等調(diào)配物系借著 均勻及密切結(jié)合該活性成分與液態(tài)載體或是細切之固態(tài)載體或是兩者，并接著，如需要，塑 形該產(chǎn)物而進行制備。適用于口服投與之本發(fā)明調(diào)配物系制備為不連續(xù)之單元，諸如，膠囊、藥片、或錠 劑，其各含有預(yù)定量之該活性成分；粉末或顆粒；水性液體或非水性液體中之溶液或懸浮 液；或是水包油液態(tài)乳劑或油包水液態(tài)乳劑。該活性成分亦可以大丸藥、干藥糖劑、或糊劑 之形式提供。錠劑可借著壓制或模制而制備，選擇性結(jié)合一或多種附屬成分。壓制錠劑可借著 在適用之機器中壓制視情況混合黏合劑、潤滑劑、鈍性稀釋劑、防腐劑、界面活性劑或分散 劑之自由流動形式(諸如，粉末或顆粒)的活性成分而制備。模制錠劑可借著在適用之機 器中模塑以鈍性液體稀釋劑濕潤之粉末化活性成分的混合物而制備。錠劑可視情況進行包 衣或截痕并視情況進行調(diào)配，以提供活性成分之緩釋或控釋。就眼或其它外部組織(如，口及皮膚)的感染而言，該等調(diào)配物較佳系以含有該 (等)活性成分之局部軟膏或乳霜之形式施用，該(等)活性成分之量為，例如，0.075至 20% w/w(包括范圍介于0. 及20%間以0. w/w增量之活性成分，諸如，0.6% w/w, 0. 7% w/w等)，較佳為0. 2至15% w/w，且最佳為0. 5至10% w/w。當調(diào)配于軟膏中時，該 等活性化合物可與石蠟性或水可分散性之軟膏基質(zhì)共同使用?；蛘撸摰然钚曰衔锟膳c 水包油乳霜基質(zhì)共同調(diào)配于乳霜中。如需要，該乳霜基質(zhì)之水相可包括，例如，至少30% w/w之多元醇，亦即，具有二或 多個羥基之醇，諸如，丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油、及聚乙二醇(包括 PEG 400)、以及其混合物。局部調(diào)配物可能需要包括能夠增進該活性成分穿過皮膚或其它受感染區(qū)域之吸收或穿透的化合物。此等皮膚穿透增進劑包括二甲基亞砜及相關(guān)類似物。本發(fā)明乳劑之油相可以已知方法而由已知的成分構(gòu)成。盡管該相可僅包含乳化劑 (emulsifier)(亦稱為乳化劑(emulgent))，其較佳系欲包含至少一種乳化劑與脂肪或是 油或是脂肪及油兩者的混合物。較佳者，其包括親水性之乳化劑結(jié)合作為安定劑之親脂性 乳化劑。其亦較佳包括油及脂肪兩者。含或不含安定劑之該(等)乳化劑共同構(gòu)成所謂之 乳化蠟，而該蠟與該油及脂肪則共同構(gòu)成所謂之乳化軟膏基質(zhì)，其形成該等乳霜調(diào)配物之 油分散相。適用于本發(fā)明調(diào)配物之乳化劑及乳劑安定劑包括Tween 60、SpanTM80、鯨蠟硬脂 醇、芐醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯、及十二烷基硫酸鈉。調(diào)配物之適當油及脂肪的選擇系根據(jù)達成所欲的化妝品特性。乳霜應(yīng)較佳為不油 膩、不染色、且可水洗之產(chǎn)品，具有適當之稠度而不會由管或其它容器滲漏?？墒褂弥辨溁?支鏈、單-或二堿性烷基酯(諸如，二 -異己二酸酯、硬脂酸異十六烷酯、椰子脂肪酸之丙二 醇二酯、肉苴蔻酸異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸丁酯、棕櫚酸-2-乙基己酯、或 是稱為Crodamol CAP之支鏈酯混合物，最后三者為較佳的酯。此等酯可根據(jù)所需之特性而 單獨或結(jié)合使用?；蛘?，可使用高熔點之脂質(zhì)，諸如，白凡士林及/或液體石蠟或是其它礦 物油。適于進行眼之局部投藥的調(diào)配物亦包括眼滴劑，其中該活性成分系溶解或懸浮于 適當之載體中，特別是該活性成分之水性溶劑。該活性成分較佳系在此等調(diào)配物中以0. 5 至20%之濃度存在，較佳為0.5至10%，特別是約1.5%w/w。適于進行口之局部投藥的調(diào)配物包括糖錠，其在經(jīng)調(diào)味之基質(zhì)中包含該活性成 分，該基質(zhì)通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠；片劑，其在鈍性基質(zhì)中包含該活性成分，該基 質(zhì)諸如明膠及甘油，或是蔗糖及阿拉伯膠；以及漱口液，其在適當之液態(tài)載體中包含該活性 成分。用于進行直腸投與之調(diào)配物可以栓劑形式存在，結(jié)合適當之基質(zhì)，包含，例如，可 可脂或水楊酸。適于進行肺內(nèi)或經(jīng)鼻投與之調(diào)配物具有，例如，0. 1至500微米范圍之顆粒大小 (包括介于0. 1及500微米間范圍以微米增量之顆粒大小，諸如，0. 5、1、30微米、35微米 等)，其系借著經(jīng)由鼻通道迅速吸入或是經(jīng)口吸入以到達肺泡囊而投與。適當之調(diào)配物包括 該活性成分之水性或油性溶液。適于進行氣溶膠或干粉投與之調(diào)配物可根據(jù)習知之方法制 備，且可與其它療劑共同傳遞，諸如至今用于治療或預(yù)防A或B型流感感染之化合物。適于進行陰道投與之調(diào)配物可以子宮托、棉條、乳霜、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧調(diào)配 物的形式存在，其在該活性成分外尚含有如技藝中已知為適用之諸等載體。適于進行腸外投與之調(diào)配物包括水性及非水性之無菌注射溶液，其可含有抗氧化 劑、緩沖劑、抑菌劑、以及使該調(diào)配物與目標接受者之血液等滲的溶質(zhì)；以及水性及非水性 之無菌懸浮液，。其可包括懸浮劑及增稠劑。該等調(diào)配物系提供于單位劑量或多劑量之容器中，例如，密封安瓿及小瓶，且其可 貯存在冷凍干燥(凍干)狀態(tài)下，僅需在使用前實時加入無菌之液態(tài)載體，例如，注射用水。 即席之注射溶液及懸浮液系由先前所述類型之無菌粉末、顆粒、及錠劑制備。較佳的單位劑 量調(diào)配物系含有每日劑量或單位每日分次劑量，如上文所述，或是其適當部分之活性成分者。應(yīng)可明了，除了上文特別述及之成分外，本發(fā)明之調(diào)配物尚可包括其它技藝中習 知與所述調(diào)配物類型相關(guān)之試劑，例如，適于進行口服投與者可包括調(diào)味劑。本發(fā)明進一步提供獸醫(yī)組合物，其包含至少一種如上文所定義之活性成分，結(jié)合 其獸醫(yī)用之載體。獸醫(yī)用之載體系可用于投與組合物之目的的材料，且可為固體、液體、或 氣體材料，其在其它方面為鈍性或是在獸醫(yī)技藝中為可接受者，且其與該活性成分相容。此 等獸醫(yī)組合物可經(jīng)口服、腸外、或任何其它所欲途徑而投與。本發(fā)明之化合物可用于提供含 有一或多種本發(fā)明化合物作為活性成分之醫(yī)藥調(diào)配物的受控釋出(「控釋調(diào)配物」)，其中 該活性成分之釋出系經(jīng)控制或調(diào)控，以容許進行頻率較低的投劑或是改良特定活性成分之 醫(yī)藥動力學或毒性特征?；钚猿煞种行┝恐辽偃Q于待治療病況之性質(zhì)、毒性、該化合 物是以預(yù)防方式(較低劑量)使用或是用于對抗活動性流感感染、傳遞方法、以及醫(yī)藥調(diào)配 物，且將可由臨床醫(yī)師使用習知之劑量累增試驗而決定。其可預(yù)期為每天自約0. 0001至約 100mg/kg公斤體重。一般而言為每天自約0.01至約10mg/kg公斤體重。更一般而言為每 天自約0. 01至約5mg/kg公斤體重。更一般而言為每天自約0. 05至約0. 5mg/kg公斤體重。 舉例而言，就吸入而言，約70公斤體重之成人的每日候選劑量將會介于自Img至lOOOmg，較 佳為介于5mg及500mg間，且可以單或多劑之形式進行。在一實施例中，本發(fā)明之活性 成分亦用于結(jié)合其它活性成分。此等結(jié)合之選擇系 根據(jù)待治療之病況、組成份之交叉反應(yīng)性、以及該結(jié)合之藥學特性。舉例而言，在治療呼吸 系統(tǒng)之病毒感染時，特別系流感的感染，本發(fā)明之組合物可結(jié)合抗病毒劑(諸如，金剛胺 (amantidine)、金剛乙胺(rimantadine)、及利巴韋林(ribavirin))、化痰劑、祛痰劑、支氣 管擴張劑、抗生素、解熱劑、及止痛劑。一般而言，抗生素、解熱劑、及止痛劑系與本發(fā)明之化 合物共同投與。本發(fā)明之另一實施例包括本文所述化合物之體內(nèi)代謝產(chǎn)物，其條件為此等產(chǎn)物系 新穎且對先前技藝而言系非顯而易見者。此等產(chǎn)物可由，例如，經(jīng)投與化合物之氧化、還原、 水解、酰胺化、酯化、及其類似者而產(chǎn)生，主要是因為酵素作用。因此，本發(fā)明包括借著其中 包含使本發(fā)明之化合物接觸哺乳動物一段足以產(chǎn)生其代謝產(chǎn)物之時間的方法所產(chǎn)生之新 穎及非顯而易見的化合物。此等產(chǎn)物一般而言可藉由制備經(jīng)放射標記(如，14C或3H)之本發(fā) 明化合物，將其以可偵測之劑量對哺乳動物(諸如，大鼠、小鼠、豚鼠、猴)或人類進行腸外 投與，給予足夠之時間進行代謝(一般而言約30秒至30小時)，再由尿液、血液、或其它生 物樣本中分離其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物而辨識。此等產(chǎn)物因受到標記而可輕易分離(其它產(chǎn)物則可借著 使用能夠結(jié)合留存于該代謝物中之抗原表位的抗體而分離)。該等代謝物枝結(jié)構(gòu)系以習知 方式判定，如，藉由MS或NMR分析。一般而言，代謝物之分析系以熟習技藝者所熟知之習知 藥物代謝試驗的相同方式進行。只要其在其它情形下并不存在于體內(nèi)，該等轉(zhuǎn)化產(chǎn)物可用 于進行本發(fā)明化合物治療投劑之診斷分析，即使其本身并不具有神經(jīng)胺酸苷酶抑制活性。其亦預(yù)期該等新穎膦酸酯同系物之前藥。極性之膦酸基及胍基兩者皆可視情況 以技藝中所知之技術(shù)進一步官能化，以增進其藥物動力學及/或藥效學特性。舉例而言， 可調(diào)配及使用前藥，如，酰氧甲基-及芳基膦酸酯，以用于增進其生物可利用率(Krise and Stella, Adv. Drug Deliv. Rev. 1996，19，287)。在本發(fā)明之一態(tài)樣中，疑似含有神經(jīng)胺酸苷酶之樣本包括天然或人工材料，諸如活生物體；組織或細胞培養(yǎng)物；生物樣本，諸如，生物材料樣本(血液、血清、尿液、腦脊髓 液、淚液、痰、唾液、組織樣本、及其類似者)；實驗室樣本；食物、水、或空氣樣本；生物制品 樣本，諸如，細胞萃取物，特別是可合成所欲糖蛋白之重組細胞；及其類似者。一般而言，該 樣本將系疑似含有可制備神經(jīng)胺酸苷酶的生物體，通常系病原性生物體，諸如病毒。樣本可 包含在任何基質(zhì)中，包括水以及有機溶劑/水混合物。樣本包括活生物體，諸如人類，以及 人造材料，諸如細胞培養(yǎng)物。本發(fā)明之處理步驟包含將本發(fā)明之組合物添加至該樣本中，或者，其包含將該組 合物之前體添加至該樣本中。該添加步驟包含任何如上所述之投與方法。如需要，施用該 組合物后之神經(jīng)胺酸苷酶活性可以任何方法觀察，包括偵測神經(jīng)胺酸苷酶活性之直接及間 接方法。判定神經(jīng)胺酸苷酶活性之量性、質(zhì)性、以及半量性皆為可預(yù)期者。一般而言其系應(yīng) 用上述之篩選方法之一，但是任何其它方法亦為可應(yīng)用者，諸如觀察活生物體之生理特性。含有神經(jīng)胺酸苷酶的生物體包括細菌(霍亂弧菌(Vibrio cholerae)、產(chǎn)氣 英膜梭菌(Clostridium perfringens)、月市炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)、及 Arthrobacter sialophilus)以及病毒(特別是正黏液病毒或副黏液病毒，諸如，流感病毒 A(如，HlNU H5N1)及B、副流感病毒、腮腺炎病毒、新城病病毒、雞瘟病毒、及仙臺病毒)。 對于來自或是發(fā)現(xiàn)于任何此等生物體之神經(jīng)胺酸苷酶活性的抑制屬于本發(fā)明之標的范圍 中。流感病毒之病毒學述于"Fundamental Virology[基礎(chǔ)病毒學]"(Raven Press,New York，1986)第24章。本發(fā)明之化合物可用于在動物(諸如，鴨及其它鳥類、鼠類、豬)或人 類體內(nèi)預(yù)防流感感染或是治療既有之流感感染。本發(fā)明之組合物可以任何用于評估酶活性之習知技術(shù)篩選其對抗神經(jīng)胺酸苷酶 之抑制活性。在本發(fā)明之內(nèi)容中，一般而言，組合物首先在試管內(nèi)進行對于神經(jīng)胺酸苷酶之 抑制的篩選，接著再對顯示出抑制活性之組合物進行體內(nèi)活性的篩選。具有小于約5x10_6M 之試管內(nèi)Ki (抑制常數(shù))的組合物，一般而言系小于約5x10_7M，且較佳系小于約5xlO_8M者， 系用于體內(nèi)之較佳者?？捎弥嚬軆?nèi)篩選已經(jīng)獲得詳述而將不在此處詳盡說明(Itzstein，M.VOn et al. ； “ Nature “，363(6428) :418_423(1993) ；Potier, M. ；et al. ； “ Analyt. Biochem. “ ,94 287-296(1979) ；Chong, A. K. J. ；et al. ； “ Biochem.Biophys. Acta “， 1077:65-71(1991)；及 Colman，P. M. ；et al.；國際專利公開案號 W092/06691 (國際專利申 請案號PCT/AU90/00501，
公開日1992年4月30日)。體內(nèi)之篩選亦已經(jīng)獲得詳述，參見，例如，Itzsteimet al.，1993，特別是第421頁 第2欄第一完整段落至第423頁第2欄第一部分段落，以及Colman，p. 36。本發(fā)明之NAIs 已接受其對抗各種流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶之抑制活性的試驗。表1顯示對抗野生型及突變 型流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶之抑制活性。 表1 :a取自流感病毒A/WSN/1933 (HlNl)之神經(jīng)胺酸苷酶(NA)。b取自流感病毒 A/WSN/1933 (HlNl)之 NA(H274Y)。。取自流感病毒 A/Hanoi/30408/2005 (H5N1)之 ΝΑ。<1取 自流感病毒A/Hanoi/30408/2005(H5N1)之NA(H274Y)。e呈圖3所述之銨鹽。{未測定。在Hmi及H5m流感病毒的野生型神經(jīng)胺酸苷酶中，觀察到膦酸酯同系物3 (零流 感)相對于奧司他偉2以及胍13b相對于13a之較大強度(表1)。對于NAI抗性突變體 H274Y7，化合物3及2兩者之強度皆顯著低于對于野生型酶者。然而，膦酸酯化合物13b系 可以低nM濃度抑制兩種突變酶的有效抑制劑。化合物14a及14b (其在C-3羥基位置缺乏 戊氧基)相較于2及3顯示較低的NAI活性。表2顯示奧司他偉2、膦酸酯同系物3、以及 相關(guān)類似物之神經(jīng)胺酸苷酶抑制、抗流感、以及細胞毒性活性。
表2 3對抗流感病毒A/WSN/1933 (HlNl)之神經(jīng)胺酸苷酶抑制作用。Ki值系使用Cheng-Prusoff方程式測定。b對于因為流感(A/WSN/1933)感染所造 成之CPE效應(yīng)具有50%保護力之NA抑制劑濃度。e在于MDCK細胞上所進行的細胞毒性分 析中所用之最高濃度為100 μ Μ。d選擇性指數(shù)，CC50對EC5tl之比值。e呈圖3所述之銨鹽。在本發(fā)明之一實施例中，膦酸酯3系一種強效之NA抑制劑以及對抗流感Hmi病 毒之抗流感劑，其具有0. 15及4. 67nM之Ks及EC5tl值(表2)。相較而言，膦酸酯3在NA抑 制及抗流感分析中之活性分別為奧司他偉之19及7倍。以多種濃度進一步評估膦酸酯3， 以測定其對于宿主MDCK細胞之生長抑制。膦酸酯3之推論CC5tl值為74 μ M。顯示具有大 于15800之選擇性指數(shù)的膦酸酯3因此唯一種對抗Hmi病毒之強效抗病毒劑，并對于宿主 MDCK細胞不具有毒性。借著將3中之胺基置換成為胍基，膦酸酯13b具有增強之NA抑制 作用(Ki = 0. 06nM)及抗流感活性(EC50 = 0. 09nM)。類似先前之報告，胍基可與Glull9、 Aspl51及Glu227產(chǎn)生強靜電作用。
在一態(tài)樣中，相較于其羧酸酯同系物，本實驗中所述之膦酸酯同系物皆可顯著更 強效的對抗Hmi及H5m的野生型神經(jīng)胺酸苷酶。此外，化合物13b在19nM下是一種可對 抗H5W神經(jīng)胺酸苷酶之H274Y突變物的有效抑制劑。在本發(fā)明之另一實施例中，本發(fā)明之化合物是用于在體內(nèi)治療流感感染。在小 鼠體內(nèi)試驗本發(fā)明之NAIs。每日兩次經(jīng)口強飼，以指定劑量之藥物處理小鼠共5天。在 第一次藥物投劑4小時后，以25 μ L中之IOMLD5tl的感染性流感病毒[A/WSN/33 (HlNl)或 NIBRG-14(H5N1)]于鼻內(nèi)對小鼠進行接種。每日觀察小鼠之存活及體重共14天。表3顯示 化合物3及3b以及克流感之處理對于小鼠體內(nèi)A/WSN/33 (HlNl)流感病毒感染之作用。 表33化合物是每日兩次經(jīng)口投與共5天，從以所指流感病毒感染前4小時開始。b存活者數(shù)目/總處理數(shù)目。第一個數(shù)字代表第14天之存活百分比，而括號內(nèi)之 數(shù)字代表第7天之存活百分比。^在第14天前死亡之小鼠的平均至死天數(shù)?；衔?及3b以及克流感之對于小鼠體內(nèi)NIBRG_14(H5m)流感A病毒感染之處 理作用示于表4。
表43化合物是每日兩次經(jīng)口投與共5天，從以所指流感病毒感染前4小時開始。b存活者數(shù)目/總處理數(shù)目。第一個數(shù)字代表第14天之存活百分比，而括號內(nèi)之 數(shù)字代表第7天之存活百分比。c在第14天前死亡之小鼠的平均至死天數(shù)。借著將化合物3對接至流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶(附亞型，PDB編碼2HU4)之晶體 結(jié)構(gòu)中，建構(gòu)復合NA之化合物3的分子模擬。以SYBYL 7. 3修飾奧司他偉2之3-D結(jié)構(gòu) (亦來自于2HU4)，建立化合物3之3-D結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明之一態(tài)樣中，神經(jīng)胺酸苷酶_膦酸 酯復合物之分子模擬指出該膦酸酯與活性位點中之三個精胺酸殘基的適當結(jié)合模式。使用 已知W晶體結(jié)構(gòu)(PDB編碼2HU4)之初步分子對接實驗(圖1)揭露，除了類似NA-奧司他 偉復合物之在結(jié)合袋中由該C3-戊氧基、C4-乙酰胺基、及C5-胺基所產(chǎn)生的其它作用外，該 推定之膦酸酯抑制劑3a尚的確可強力結(jié)合NA之三-精胺酸殘基。圖1顯示奧司他偉2 (A) 以及膦酸酯化合物3a(B)在流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶(m亞型)之活性位點的分子模型。膦 酸酯化合物3a之復合物與NA活性位點中之重要殘基具有較奧司他偉-NA復合物(6對配位體-NA之H-鍵)更為大量之氫鍵作用(8對配位體-NA之H-鍵)。本文亦揭示用以進行克流感以及高度強效神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑零流感的合成的 新穎及改良方法。如前文所述，克流感(磷酸奧司他偉，15-H3P04)，一種用于流感治療之熱 門藥物，是一種口服投與之前藥，其可由肝酯酶輕易水解，以產(chǎn)生對應(yīng)之羧酸(16，圖6)作 為流感病毒上神經(jīng)胺酸苷酶之活性抑制劑。由于克流感的副作用會造成青少年病患產(chǎn)生精 神病癥，并產(chǎn)生禽流感之藥物抗性菌株，在對抗大流行性流感威脅的戰(zhàn)役中，急需研發(fā)能夠 對抗流感病毒的新穎化學物。摘述于下文的合成于圖4中完整呈現(xiàn) 零流感(3)是一種可用于對抗禽流感及人流感兩者之有望藥物。借著以膦?；?換奧司他偉中之羧基，零流感可與神經(jīng)胺酸苷酶之三-精胺酸殘基強力作用，且其可更為 強效對抗Hmi及H5m病毒的野生型神經(jīng)胺酸苷酶。此外，其胍類似物3b是H5m病毒神 經(jīng)胺酸苷酶之H274Y突變體之有效抑制劑(Ki = 19nM)。同時，初步試驗指出，零流感亦具 口服生物可利用性而保護小鼠對抗流感病毒之致命挑戰(zhàn)。接由比較小鼠之存活率及平均存 活時間(數(shù)據(jù)未顯示)，就對抗Hmi人類流感病毒而言，零流感較克流感更為有效，且就對 抗重組H5m (NIBRG14)病毒而言，其至少為同樣有效?；衔?及13之單酯衍生物亦已被證明對于流感特別有效。如表5所示，小鼠試 驗顯示，單酯化合物3c及13c可有效治療具有流感之小鼠。表5顯示以克流感(1)、零流感 (3)、零流感單酯(3c)、零流感胍(13b)、及零流感胍單酯(13c)所進行的鼻內(nèi)治療對于小鼠 體內(nèi)流感A[A/WSN/33(H1N1)]病毒感染的作用。單酯3c及13經(jīng)顯示為特別有效者，具有
改善之存活率以及較低濃度下之功效。 表 53化合物是每日兩次經(jīng)口投與共5天，從以所指流感病毒感染前4小時開始。b存活者數(shù)目/總處理數(shù)目(10只小鼠)。第一個數(shù)字代表第14天之存活百分比， 而括號內(nèi)之數(shù)字代表第7天之存活百分比。c在第14天前死亡之小鼠的平均至死天數(shù)。圖17-20以圖式說明單酯化合物3c及13c相較于化合物3及13b之功效。該等 化合物顯示較佳的存活率以及較佳的體重維持。此種傾向可見于自10mg/kg/天至0. Img/ kg/天之濃度范圍內(nèi)。在較低的濃度下(圖20)，該等單酯與化合物3及13b同樣無效，且 其密切近似控制組之結(jié)果，其因此建議，在此等低濃度下，該等膦酸酯同系物之有益作用可 能喪失。實例所有的反應(yīng)試劑皆為可由市售取得，且其不經(jīng)進一步之純化即予使用，除非另有 明示。所有的溶劑皆為無水級，除非另有明示。偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)系在減壓條 件下于Na2SO4I蒸餾而純化。所有的非水性反應(yīng)皆系在于弱正壓氬氣下于烘箱中干燥之玻璃器皿內(nèi)進行，除非另外注明。反應(yīng)經(jīng)磁攪拌，并在硅膠上以薄層層析監(jiān)測。閃蒸層 析系在60-200 μ m顆粒大小之硅膠上進行。產(chǎn)率系針對光譜純性化合物報告。熔點系在 Electrothermal MEL- TEMP⑧IlOlD熔點裝置上記錄且不經(jīng)校正。匪R光譜系在Bruker AVANCE 600及400光譜儀上記錄?；瘜W位移系以相對于四甲基硅烷(TMS)之δ值提供；偶 合常數(shù)J系以Hz單位提供。1H-NMR光譜之內(nèi)部標準物為⑶C13(SH = 7.24)或隊0(511 = 4. 79)，13C-WR 光譜為 CDCl3 ( δ Η = 77. 0)，而 31P-WR 光譜則為 D2O 中之 H3PO4 ( δ ρ = 0. 00)。 分裂模式報告為s (單峰)，d(雙重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br (寬峰)， 及dd(雙重之雙重峰)。IR光譜系在Thermo Nicolet 380FT-IR光譜儀上記錄。旋光度 系在Perkin-Elmer Model 341旋光儀上紀律，[α ]及c之單位分別為deg cm3 g"1 dnT1及 gcm_3。高分辨率ESI質(zhì)譜系在BrukerDaltonics光譜儀上記錄。合成流程及產(chǎn)物定性實例1. 1，2-0-異亞丙基-3-胺基-3-脫氧-α -D-核呋喃糖苷(5) (Nair， andEmanuel, J.Am.Chem. Soc. 1977,99,1571-1576) 根據(jù)先前報告之流程(Suharaet al.，J. Org. Chem. 2001，66，8760-8771)，將D-木 糖(50g)、無水CuSO4 (70g)及濃H2SO4 (5mL)于丙酮(IL)中之懸浮液，在室溫下攪拌24h， 接著再在40°C下，于HCl水溶液(110mL，0. 1M)中部分水解2h，以產(chǎn)生呈無色糖漿狀之1， 2-0-異亞丙基-a-D-呋喃木糖(4，61g)。在0°C下，于吡啶(50mL)中，以新戊酰氯(6. 6g， 54. 8mmol)對化合物4 (10g，52. 6mmol)進行處理8小時，以產(chǎn)生呈無色油體之1，2_0_異亞 丙基-5-0-新戊?；? a -D-呋喃木糖苷(13g，自D-木糖之產(chǎn)率85% )。將重鉻酸批啶鐵(PDC,8.92g,23. 7mmol)及 AC2O (12. 2mL，130mmol)加 Λ CH2Cl2(IeOmL)中之該新戊?；?10. 8g，39. 4mmol)中。在回流溫度下加熱該混合物 1.5h，接著再在減壓條件下進行濃縮。將該殘余物溶于EtOAc (30mL)中，再使其通過硅膠 墊過濾，以EtOAc溶析。濃縮該濾液，并與甲苯進行共蒸發(fā)(2x)以除去AC20。在60°C下， 于無水吡啶(75mL)中，使該粗制酮產(chǎn)物(10. 2g)與鹽酸羥胺(18. 15g, 260mmol)共同攪 拌24h。在減壓條件下濃縮該混合物，再將該殘余物溶于EtOAc中。以水清洗該有機層， 再以EtOAc萃取該水層(3x)。以MgSO4對結(jié)合之有機層進行去水，過濾，再進行濃縮。在 硅膠上以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，1 3)純化該殘余油體，以產(chǎn)生呈順式/反式異構(gòu) 物混合物(70 30)之對應(yīng)肟(9. 27g，兩步驟之產(chǎn)率82% )。無色油體；TLC(EtC)Ac/己 烷，1 4) Rf = 0.4 ；[a ]D20 = +162. 5 (c = 1，CHCl3) ；IR(凈)3501，2988，1769，1292CHT1 ； 1H NMR (600MHz，CDCl3)(順式 / 反式異構(gòu)物=7 3) δ 8. 05(0. 3Η, br s), 7. 97(0. 7H, br s)，5. 98 (0. 7H, d, J = 4. 3Hz)，5. 96 (0. 3H, d, J = 4. 3Hz)，5. 27-5. 25 (1H, m)，4. 99 (1H, dd, J = 4. 2，1. 3Hz) ,4. 97-4. 96(0. 3H, m)，4· 55(0. 7Η, dd, J = 11. 1,2. 6Ηζ)，4· 33(0. 3Η, dd, J = 11. 1,2. 6Ηζ)，4· 23-4. 20 (1Η, m)，1. 47 (3Η, s)，1. 42 (3Η, s)，1. 16 (9Η, s) ；13CNMR(150MHz, CDCl3) δ 178. 1/177. 9，158. 4/157. 3，114. 2/113. 7，105. 0/104. 8,78. 4/73. 5， 75. 8/75. 6,38. 7/38. 6,27. 7,27. 4,27. 3,27. 2,27. 19,27. 15 ；C13H22NO6(Μ++Η)之 HRMS 計算 值288. 1444，實驗值:m/z 288. 1452。在冰(0°C)THF(60mL)中攪拌該肟(2. 88g，IOmmol)，再加入 LiAlH4 (1. OM 溶液于 THF中，25mL，25mmol)。使該混合物回流3h，在室溫下攪拌12h，接著再以EtOAc淬滅。使該混 合物通過硅藻土過濾。濃縮該濾液，再在硅膠上以閃蒸管柱層析(Me0H/CH2C12，l 9)純化 該殘余油體，以產(chǎn)生呈黃色糖漿狀之胺5(1.678，88%)。11(^60!1/012(12，1 9)Rf = 0. 1 ；D20= +54.6 (c= LCHCl3) [lit. sl [ a ]D25 =+41 (c = 1. 15, CH3OH)] ；IR(凈)3359，2911， 1756,1298cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 5-77 (1H，d, J = 3. 7Hz)，4-45 (1H，dd, J = 4. 2， 2. 1Hz)，3· 87 (1H, dd, J = 11. 8,3. 7Hz)，3. 77-3. 70 (2H, m)，3. 17 (1H, dd, J = 9. 5,4. 6Hz)， 1. 52 (3H, s)，1. 35 (3H, s) ； 13C NMR(150MHz, CDC13) δ 112. 1，104. 3,80. 7,80. 6,61. 5,55-2, 26. 6,26. 4 ；C8H16NO4 (M++H)之 HRMS 計算值190· 1079，實驗值m/z 190. 1080。實例2. 0-芐基-2，3-0，N-異亞丙基_3_乙酰胺基_3_脫氧-a -D-核呋喃糖苷
(б)
在室溫下，在吡啶(IOmL)中，將胺5(1. 67g，8. 8mmol)與Ac20(5mL)攪拌3h。加入 MeOH(5mL)以淬滅反應(yīng)。濃縮該混合物，并與甲苯進行共蒸發(fā)(3x)，以除去AC2O及吡啶。由 EtOAc使該殘余固體樣本再結(jié)晶，以產(chǎn)生乙?；a(chǎn)物(2. 35g)。以HCl (4. 0M)于1，4_ 二惡 烷(7. 5mL，30mmol)中之溶液，處理該乙?；a(chǎn)物及苯甲醇(5. 84g，54mmol)于甲苯(16mL) 中之冰溶液(0°C )，并在室溫下攪拌24h。將該反應(yīng)混合物倒入Et2O(IOOmL)，并以0°C之飽 和NaHCO3溶液(SOmL)中和。分離有機層，并以水(3x)及鹽水清洗。以Et20(6x)萃取結(jié)合 之水洗液。結(jié)合有機萃取液，以MgSO4去水，過濾，并在減壓條件下濃縮。在硅膠上以閃蒸管 柱層析(MeOH/CH2Cl2，1 19)純化該殘余油體，以產(chǎn)生2. IOg(兩步驟之產(chǎn)率85% )呈異 位異構(gòu)物混合物(α / β = 7 3)(如以1H NMR分析所示)之二醇產(chǎn)物O-芐基_3_乙酰胺 基-3-脫氧-a-D-核呋喃糖苷。在硅膠上再次層析(MeOH/CH2Cl2，1 99)以取得α-異 位異構(gòu)物之分析樣本，Rf = 0. 2。無色固體，mp 95-97°C;[a ]D20 = -72. 8 (c = 0. 5，CHCl3)； IR( ？f ) 3487, 2955,1712,1265cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 7. 35-7. 27 (5Η, m) ,6. 38 (1H, d, J = 8. 0Hz)，4. 74 (1H, d, J = 11. 9Hz)，4. 52 (1H, d, J = 11. 9Hz)，4. 24 (1H, dd, J = 7. 9， 3. 1Hz)，3. 99 (1H, d, J= 12. 4Hz)，3. 92 (1H, s)，3. 74-3. 71 (2H，m)，3. 41 (1H, br s)，3. 00 (1H, br s)，2.01(3H，s) ；13C NMR (150MHz, CDC13) δ 170. 1，136. 9，128. 5 (3x)，128. 0 (2x)，98. 9， 69. 8,69. 1,68. 4,63. 6,46. 3,23. 4 ；C14H20NO5(M++H)之 HRMS 計算值282. 1341，實驗值:m/z 282.1343。在80°C下，將該二醇(2. 10g，7. 5mmol，為α/β異位異構(gòu)物之混合物)、2，2_ 二 甲氧基丙烷(IOmL)、及對-甲苯磺酸單水合物( 0.2g)于甲苯(20mL)中之溶液攪拌4 小時。在減壓條件下濃縮該混合物，再自Et2O使該殘余物再結(jié)晶，以產(chǎn)生呈異位異構(gòu)物混合物(α/β =7 3)(如以1H NMR分析所示)之醇6(2. 17g，90% )。在硅膠上再次 層析(EtOAc/己烷，1 9)以取得α-異位異構(gòu)物之分析樣本。無色晶體，mp 82-85 °C ； TLC(EtOAc/己燒，1 l)Rf = 0. 35 ；[a ]D20 = -125. 6 (c = LCHCl3) ；IR(凈)3501，2988， 1732,1288cm-1 ；1H NMR(600MHz，CDCl3，兩滯留物(1 1)) δ 7. 36-7. 27 (5H，m)，5. 20 (0. 5H， s)，5. 15 (0. 5H, s)，4. 74 (0. 5H, d, J = 11. 6Hz)，4. 68 (0. 5H, d, J = 11. 6Hz)，4. 64 (0. 5H, d, J = 5. 9Hz)，4. 61 (0. 5H, dd, J = 5. 9，2. 5Hz)，4. 59-4. 57 (1. 5H, m)，4. 45 (0. 5H, d, J =11. 6Hz)，4. 34-4. 33 (0. 5H, m)，4. 22 (0. 5H, dd, J = 8.1，4. OHz)，4. 02 (0. 5H, d, J = 9. IHz) ,3. 81-3. 74(lH，m)，3. 69-3. 66(lH，m)，2. 72(0. 5H, dd, J = 9. 1,2. 6Hz)，2· 14(1. 5Η, s)，2. 06(1. 5Η, m)，1. 67(1. 5Η, s)，1. 63(1. 5H, s)，1. 53(1. 5H, s)，1. 52(1. 5H, s) ； 13C NMR (150MHz, CDCl3) δ 167. 6/167. 3，136. 5/136. 1, 128. 7/128. 6 (2χ)，128. 4/128. 29， 128. 27/128. 1 (2χ) , 106. 2/105. 0,98. 2/95. 7, 89. 2/89. 1, 84. 2/82. 4, 70. 4/69. 4, 65. 1/61. 7,64. 4,28. 2/26. 3,26. 0/24. 4,24. 2/21. 9 ；C17H23NNaO5(M++Na)之 HRMS 計算值 344. 1474，實驗值:m/z 344. 1477。實例3. (0-芐基-2，3-0，N-異亞丙基-3-乙酰胺基-3，5，6-三脫氧-6-二乙氧基
磷?；?D-核-庚呋喃糖苷)糖醛酸乙酯(7a) 在-15"C 下，攪拌醇 6(2. 17g，6. 76mmol)及批啶(1. 2mL，14. 73mmol)于 CH2Cl2 (20mL)中之溶液，同時以30min之時間，逐滴加入三氟甲磺酸酐(Tf20，1. 49mL， 8. 86mmol)。在_15°C下再攪拌該混合物2h，以MeOH(ImL)淬滅，在順序以冰水及冰KH2PO4 水溶液(IM)清洗。以EtOAc (3x)萃取該水層。以MgSO4對結(jié)合之有機層進行去水，過濾， 濃縮，再與甲苯進行共蒸發(fā)以除去吡啶。該粗產(chǎn)物不經(jīng)進一步純化即用于下一步驟。在氮氣大氣下，以無水己烷(3x)清洗NaH(0.41g，10. 2mmol ；60%分散液于油中)， 加入DMF(30mL)，再在冰浴中于0°C下攪拌。以30min之時間，逐滴加入膦?；宜崛阴?(1.95g,10. 9mmol)于DMF (IOmL)中之溶液。除去冰浴，再攪拌該混合物2h，以產(chǎn)生澄清之 黃色溶液。接著加入DMF(IOmL)中之上文所制備的三氟甲磺酸酯(3. 06g， 6. 76mmol)， 接著加入2滴之15-冠醚-5。在室溫下攪拌該所得之溶液24h，冷卻至0°C，再以KH2POyK 溶液(1M溶液)淬滅。以CH2Cl2 (5x)萃取該混合物。以水清洗該結(jié)合之有機層，以MgSO4 去水，過濾，再在減壓條件下濃縮。在硅膠上以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷梯度，1 4至 1 1)純化該殘余棕色油體，以產(chǎn)生呈α/β異位異構(gòu)物混合物之產(chǎn)物7a(2.85g，自6之 產(chǎn)率80% )。在硅膠上再次層析(EtOAc/己烷，1 4)以取得α -異位異構(gòu)物之分析樣本。 TLC(Me0H/CH2C12,1 19)Rf = 0. 2 ；1H NMR(600MHz，CDCl3,呈非鏡像異構(gòu)物之旋轉(zhuǎn)異構(gòu) 物)δ 7. 33-7. 26 (5Η, m)，5. 15 (1H, s)，4. 74 (1H，d，J = 11. 9Hz)，4. 68 (1H, d, J = 5. 8Hz)， 4. 46 (1H, d, J = 11. 9Hz)，4. 29-4. 19 (4H, m)，4. 12-4. 05 (3H, m)，4. 00 (1H, d, J = 12. 4Hz)， 3. 41 (1H, dd, J = 12. 4，10. 3Hz)，2. 45-2. 35 (1H，m)，2. 22-2. 18 (1H, m)，2. 12 (3H, s)，1. 60(3H，m)，1. 48 (3H, s)，1. 31-1. 24(9H，m) ；C25H39NO9P (M++H)之 HRMS 計算值528. 2362，實 驗值m/z 528.2366。實例4. 0-芐基-2，3-0，N-異亞丙基_3_乙酰胺基_3，5，6_三脫氧_6，6_雙(二 乙氧基磷?；?-D-核-己呋喃糖(7b) 藉由類似7a之流程，在DMF(35mL)中，以NaH(0. 31g，7. 75mmol ;60%分散液于油 中)對亞甲基二膦酸四乙酯(3. 14g，10. 9mmol)進行處理2h，接著在15-冠醚-5 (2滴)之存 在下，與醇6之三氟甲磺酸酯反應(yīng)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物24h，逐步進行，再在硅膠上 以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷梯度，1 4至1 1)純化，以產(chǎn)生呈α/β異位異構(gòu)物混合 物之產(chǎn)物7b (2. 16g，自6之產(chǎn)率73% )。在硅膠上再次層析(MeOH/CH2Cl2，1 99)以取得 α _ 異位異構(gòu)物之分析樣本。TLC(MeOH/CH2Cl2，1 19) Rf = 0. 14 ；1H NMR(600MHz, CDCl3, 為兩旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)δ 7. 37-7. 27 (5Η, m)，5. 15 (1H, s)，4. 79-4. 74 (1H, m)，4. 69-4. 67 (1H, m)， 4. 59-4. 57 (1H, m)，4. 49-4. 44 (2H, m)，4. 22-4. 04 (8H, m)，2. 86-2. 76 (1H, m)，2. 47-2. 35 (1H, m) ,2. 30-2. 21 (1H, m)，2. 11 (3H, s)，1. 61 (3H, s)，1. 50 (3H, s)，1. 33-1. 29 (12H, m)； C26H43NNaO10P2 (M++Na)之 HRMS 計算值614· 2260,實驗值m/z614. 2268。實例5. (3S，4R，5R)-3，4_0，N-異亞丙基-4-乙酰胺基-3，5-二羥基-1-環(huán)己 烯-1-羧酸乙酯(8a) 在氫氣大氣下，于室溫，在乙醇(30mL)中，與Pd/C(0. 5g)共同攪拌24h，以對膦酸 酯7a (2. 85g，5. 4mmol)進行氫解。使該混合物通過硅藻土過濾，再濃縮該濾液，以產(chǎn)生呈淺 黃色糖漿狀之目標乳醇(2. 36g)。在氮氣大氣下，將乳醇(2. 36g)于THF(IOmL)中之溶液逐 滴加入NaH(7. Ommol ；0. 28g之60%油分散液，經(jīng)己烷預(yù)洗三次)于THF(20mL)中之懸浮液 中。在室溫下攪拌該混合物Ih以完成該分子內(nèi)之Wittig-Horner-Emmons反應(yīng)。將該混合物 冷卻至0°C，以KH2PO4水溶液(1M溶液)淬滅，再以CH2Cl2 (5x)萃取。以MgSO4對結(jié)合之有機 層進行去水，過濾，再在減壓條件下濃縮。以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，1 1)純化該殘余 物，以產(chǎn)生呈無色油體的環(huán)己烯羧酸酯8a(1. 27g，自7a之產(chǎn)率83%)。TLC(EtOAc)Rf = O. 3 ； [α ]D20 = -15. 6 (c = 2· 6，CHCl3) ；IR(凈)3492，1769，1655，1221cm-1 ；1H NMR (600MHz, CDCl3, 為兩旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物)δ 7. 07 (0. 8Η, d, J = 3. 4Hz)，6. 99 (0. 2H, d, J = 3. 4Hz)，4. 61 (0. 8H, d, J = 5. 9Hz)，4. 56 (0. 8H, d, J = 5. 9Hz)，4. 47 (0. 2H, dd，J = 6. 0，3. 4Hz)，4. 28-4. 19 (3H, m)，4. 47 (0. 8H, dd，J = 6. 0，3. 4Hz)，3. 03 (0. 8H, dd, J = 18. 0,2. 8Hz)，2. 84 (0. 2H, dd, J = 18. 0，2. 8Hz)，2. 38-2. 27 (1H, m)，2. 19 (0. 6H, s)，2. 14 (2. 4H, s)，2. 09 (0. 8H, d, J = 9. 2Hz)， 1. 98(0. 2H, d, J = 9. 2Hz)，1. 70 (3H, s)，1. 62 (3H, s)，1. 31-1. 27 (3H, m) ； 13CWR(150MHz，CDCl3) δ 168. 0/167. 4，166. 1/165. 9，132. 2/131. 8,131. 4/130. 7，95-8/93-7，68. 7/68. 4， 64. 2/62. 6,61. 3/61. 1,59. 6/59. 3,31. 1/30. 6,27. 4/25. 1,26. 3/23. 8,23. 2/22. 6，14. 1 ； C14H22NO5 (Μ++Η)之 HRMS 計算值284. 1498，實驗值:m/z 284. 1500。實例6. (3S，4R，5R)-3，4_0，N-異亞丙基-4-乙酰胺基-3，5-二羥基-1-環(huán)己 烯-1-膦酸二乙酯(8a) 在氫氣大氣下，于室溫，在乙醇(35mL)中，將雙膦酸酯7b (3. 55g，6mmol)與Pd/ C(Ig)共同攪拌24h。使該混合物通過硅藻土過濾，再將乙醇鈉(25mL，21%于乙醇中)加 入該濾液中。攪拌該反應(yīng)混合物5h，以飽和NH4Cl水溶液淬滅，再在減壓條件下濃縮。以 CH2Cl2 (3x)萃取該水層。以MgSO4對結(jié)合之有機相進行去水，過濾，再進行濃縮。以閃蒸管 柱層析(MeOH/CH2Cl2，l 99)純化該殘余物，以產(chǎn)生呈無色油體的環(huán)己烯膦酸酯8b (1. 67g， 80% )。實例7. (3S，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-迭氮基-3-羥基-1-環(huán)己烯-1-羧酸乙酯 (9a) 在室溫下，將8a(l. 27g，4. 5mmol)、三苯膦(2. 36g，9. Ommol)、偶氮二甲酸二異 丙酯(DIAD，1.82g，9. Ommol，新鮮蒸餾)、及疊氮磷酸二苯酯(DPPA，2. 48g，9. Ommol)于 THF(40mL)中之溶液攪拌48h。在減壓條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)以除去溶劑，再以閃蒸管柱層析 (EtOAc/己烷，1 3)純化該殘余物，以產(chǎn)生具有5S構(gòu)形之對應(yīng)疊氮化物(1.21g，產(chǎn)率 87%)。無色固體，mp91-93°C ;TLC(Et0Ac/己燒，1 l)Rf = 0. 4 ；[α ]D20 = +61. 07 (c = 3.2，CHCl3) ；IR(凈)2101，1749，1655，1261CHT1/H NMR(600MHz, CDCl3，為兩旋轉(zhuǎn)異構(gòu)物) δ 6. 92-6. 91 (1Η, m)，4. 57-4. 56 (1H, m)，4. 24-4. 19 (2H, m)，3. 71-3. 66 (2H, m)，3. 02 (1H, dd, J = 15. 4，3. 8Hz)，2. 26 (3H, s)，2. 23-2. 19 (1H, m)，1. 66 (3H, s)，1. 62 (3H, s)，1. 28 (3H, t, J = 7. IHz) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 168. 8，165. 1，133. 3，132. 0,95. 9,70. 8,61. 4,60. 7， 60. 1,29. 9,27. 8,24. 2,23. 7,14. 1 ；C14H21N4O4 (Μ++Η)之 HRMS 計算值309. 1563，實驗值m/z 309. 1562。將乙醇(20mL)中之該疊氮化物(1. 21g，3. 93mmol)與HCl水溶液(5mL, 1M)在 回流溫度下共同加熱lh。在減壓條件下濃縮該混合物，再以閃蒸管柱層析(EtOAc)純化該 殘余物，以產(chǎn)生產(chǎn)物9&(1.018，產(chǎn)率95%)。無色固體，mp 51-53°C ；TLC(EtOAc)Rf = 0. 3 ； [a ]D20 = +83.0 (c = 1，CHCl3) ；IR(凈)3491，2105，1722，1655，1251CHT1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 86 (1Η, s) ,6. 21 (1H, d, J = 8. 1Hz)，4. 42 (1H, d, J = 3. 5Hz)，4. 19 (2H, q, J = 7. 1Ηζ)，4· 11-4. 07(lH，m)，3. 79-3. 74(lH，m)，2. 86(lH，dd，J= 18. 1,5. 1Hz)，2. 33(lH，dd， J = 18. 1,8. 7Hz) ,2. 04 (3H, s)，1. 27 (3H, t, J = 7. 1Hz) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 171. 1，
38165. 8，136. 1，130. 4,64. 8,61. 3,56. 3,52. 1,29. 6,23. 3，14. 1 ；C1 ^17N4O4 (M++H)之 HRMS 計算 值269. 1250，實驗值:m/z 269. 1253。實例8. (35，4札55)-4-乙酰胺基-5-迭氮基-3-羥基-1-環(huán)己烯-1-膦酸二乙酯 (9b) 藉由類似9a之流程，在室溫下，以THF (45mL)中之Ph3P (2. 42g，9. 2mmol)、新鮮蒸 餾之 DIAD (1. 86g，9. 2mmol)、及 DPPA (2. 54g，9. 2mmol)處理化合物 8b (1. 67g，4. 8mmol)，在 以閃蒸管柱層析(60%Et0Ac/己烷，3 2)純化后，產(chǎn)生對應(yīng)之疊氮化物產(chǎn)物(1.39g，產(chǎn) 率78%)。接著在回流之EtOH/HCl(lM水溶液)中進行水解，產(chǎn)生目標產(chǎn)物9b (1. 18g，產(chǎn)率 95%)，其直接用于制備IOb0實例9. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-迭氮基-3-羥基-1-環(huán)己烯-1-羧酸乙酯 (IOa) 在9a(53. 7mg,2mmol)及吡啶(1. 3mL, 16mmol)于 CH2Cl2(IOmL)中之冰(-15 °C ) 溶液中，逐滴加入CH2Cl2 (5mL)中之Tf2O (0. 67mL，4mmol)，再在-15 -10°C下攪拌2h。以 KH2PO4水溶液(1M溶液，2x)、飽和NaHCO3水溶液、水、及鹽水清洗該混合物。以MgSO4對有 機層進行去水，再在真空下濃縮，以產(chǎn)生對應(yīng)之三氟甲磺酸酯(0.82g)。在40°C下，于無水 DMF(40mL)中，將該三氟甲磺酸酯與KNO2 (85. 6mg, IOmmol)及18-冠醚-6(3滴)共同攪拌 24h。在反應(yīng)結(jié)束時，以CH2Cl2稀釋該混合物，再以鹽水清洗。以MgSO4對有機層進行去水， 再在減壓條件下濃縮。以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，4 1)純化該殘余物，以產(chǎn)生具有 3R 構(gòu)形之產(chǎn)物 10a(0. 3752g，產(chǎn)率 70% )。無色固體，mp 40-42°C ；TLC(EtOAc) Rf = 0. 35 ； [a ]D20 = +45. 5 (c = 0. 6, CHCl3) ；IR(凈)3501，2101，1699，1538，1214cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 80 (1Η, d, J = 2. 4Hz)，5. 97 (1H, br s)，5. 20 (1H, d, J = 3. 2Hz)，4. 38 (1H, d, J = 3. 2Hz) ,4. 21 (2H, q, J = 7. 2Hz)，3. 65-3. 57 (2H, m)，2. 95 (1H, dd, J = 16. 3,4. 3Hz)， 2. 45-2. 40 (1H, m)，2· 09 (3Η, s)，1. 28 (3H, t, J = 7. 2Hz) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 173. 7， 165. 6，138. 3，127. 8,71. 2,61. 3,57. 9,57. 5,29. 5,23. 2,14. 1 ；C11H17N4O4 (Μ++Η)之 HRMS 計算 值269. 1250，實驗值:m/z269. 1257。實例10. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基_5_迭氮基_3_羥基環(huán)己烯膦酸二乙 酯(IOb) 藉由類似IOa之流程，在-15 -10°C下，將上文所制備之化合物9b (1. 18g，
3.55mmol)，與 CH2Cl2(IOmL)中之 Tf2O (1. 2mL，7. Immo 1)及吡啶(2. 3mL, 28. 5mmol)共同 攪拌2h，以產(chǎn)生對應(yīng)之三氟甲磺酸酯(1.65g)，其接著在40°C下，于無水DMF(50mL)中，以 KNO2 (1. 52g，17. 3mmol)及18-冠醚-6 (3滴)處理，以產(chǎn)生具有3R構(gòu)形之產(chǎn)物IOb (83. 8mg， 產(chǎn)率 71 % )。無色油體；TLC(MeOH/CH2Cl2，l:9)Rf = 0.2 ；[α ]D20 = -11. 3(c = 2.0， CDCl3) ；IR(凈)3499, 2108,1755,1634,1240cm-1 ;iH NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 56 (1H, d, JP-2 = 19. 4Hz)，6. 13 (1H, d, J = 5. 2Hz)，4. 95 (1H, br s)，4. 35 (1H, dd，J = 5· 5，3. 4Hz)，
4.12-4. 05 (4H, m)，3. 74-3. 70 (1H, m)，3. 64-3. 60 (1H, m)，2. 79-2. 74 (1H, m)，2. 36-2. 30 (1H, m) ,2. 07 (3H, s)，1. 32 (6H, t, J = 7. IHz) ；13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 172. 7，142. 3， 125. 5(C-1, d, Jh = 184Ηζ)，71· 5,62. 5,62. 3,57. 9,57. 5,29. 9,23. 4，16. 39，16. 35 ；31P NMR(162MHz, CDCl3) δ 16. 54 ；C12H21N4NaO5P(M++Na)之 HRMS 計算值355· 1147，實驗值m/z 355.1152。實例11. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基_5_迭氮基_3_ (1_乙基丙氧基)_1_環(huán)己 烯-1-羧酸乙酯(Ila) (Rohloff et al. , J. Org. Chem. 1998，63，4545-4550.) 如下制備三氯乙酰亞胺酸-3-戊酯。在氮氣大氣下，將3-戊醇(8.815g，100mmol) 于無水Et2O(HmL)中之溶液，逐滴加入懸浮于Et2O(IOmL)中之NaH(0. 4g，IOmmol ；60%油 分散液，經(jīng)己烷預(yù)洗)中。在室溫下攪拌該混合物lOmin，再在氮氣大氣下，以20min之時 間，逐滴加至三氯乙腈(15mL，150mmol)于Et20(20mL)中之冰(_5°C )溶液中。使該混合物 回溫至室溫，并攪拌2h。在除去溶劑后，以MeOH/己烷(1 19，IOmL)研制該殘余物，并劇 烈攪拌lmin，以產(chǎn)生沈淀物，將其濾出，并以冰己烷清洗。在減壓條件下將該濾液蒸發(fā)至干， 產(chǎn)生呈淺棕色油體之三氯乙酰亞胺酸-3-戊酯(16g，產(chǎn)率70%)。TLC(EtC)Ac/己烷，1 4) Rf = 0. 3 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 8. 17 (1Η, br s, NH), 4. 89 (1Η, m, J = 6. OHz)，1. 69 (4H, qd, J = 7-4，6. 0Hz)，0. 94(6H，t，J = 7A Hz) ；13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 162. 7，92. 2，81. 9， 25. 7(2x)，9. 4(2x) ；C7H13Cl3NO (M++H)之 HRMS 計算值232. 0063，實驗值m/z 232.0067。在 氮氣大氣下，將該新鮮制備之三氯乙酰亞胺酸-3_戊酯(350mg，1. 5mmol)及CF3S03H(13 μ L， 0. 15mmol)加至醇10a(321mg，1. 2mmol)于CH2Cl2 (15mL)中之溶液中。在室溫下攪拌該反應(yīng) 混合物24h，其中每4小時加入更多之亞胺酸酯及CF3SO3H(350mg及13 μ L mmol)共五5次。 以NaHCO3水溶液(5% )淬滅反應(yīng)，以CH2Cl2 (2x)萃取水層。以鹽水清洗結(jié)合之有機相，以 MgSO4去水，再在真空下濃縮。以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，3 7)純化該殘余物，以產(chǎn) 生烷基化產(chǎn)物 lla(317mg，產(chǎn)率 78% )。無色固體，mp 115-117°C;TLC(EtOAc/己烷，1 1) Rf = 0. 4 ；[a ]D20 = -48. 9 (c = 1. 1，CHCl3) ；IR(凈)2101，1712，1655cm-1 ；1H NMR(600MHz,CDCl3) δ 6. 75 (1Η, s)，5. 98 (1H, d, J = 7. 4Hz)，4. 53 (1H, d, J = 5. OHz)，4. 51-4. 16 (3H, m)，3. 33-3. 28 (2H, m)，2. 82 (1H, dd, J = 17. 6,5. 6Hz)，2. 22-2. 16 (1H, m)，2. 00 (3H, s)， 1. 49-1. 45 (4H, m), 1. 25 (3H, t, J = 7. IHz) ,0. 95-0. 80 (6H, m) ；13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 171. 1,165. 8，137. 9，128. 1,82. 0,73. 4,61. 0,58. 0,57. 2,30. 5,26. 2,25. 6,23. 5，14. 1， 9. 5,9. 3 ；C16H27N4O4 (Μ++Η)之 HRMS 計算值339. 2032，實驗值m/z 339. 2035。實例12. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_迭氮基_3_ (1_乙基丙氧基)環(huán)己 烯-1-膦酸二乙酯(lib) 藉由類似Ila之流程，在CF3SO3H(15. 6 μ L，0. 18mmol)之存在下，進行醇 IOb (498mg,l. 5mmol)與三氯乙酰亞胺酸-3-戊酯(420mg，1. 8mmol)之反應(yīng)，再與另一 批次之亞胺酸酯與CF3SO3Hg應(yīng)，產(chǎn)生烷基化產(chǎn)物llb(495mg，產(chǎn)率82% )。無色油體； TLC (EtOAc/ 己烷，1 l)Rf = 0.2 ；[a ]D20 = -61. 3 (c = 0. 65, CDCl3) ；IR(凈)2100， 1756,1634,1246cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 56 (1Η, d, JP_2 = 21. 6Hz)，5. 71 (1H，d, J =6. 9Hz)，4. 52 (1H, d, J = 7. 8Hz)，4. 34-4. 30 (1H, m)，4. 11-4. 01 (4H，m)，3. 31-3. 23 (2H, m)，2. 69-2. 64 (1H, m)，2. 12-2. 08 (1H, m) ,2. 01 (3H, s)，1. 51-1. 43 (4H, m)，1. 39-1. 31 (6H, m)，0· 90-0. 81 (6Η, m) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 171. 0，141. 7，126. 3(C_1，d, Jp^1 = 182Ηζ)，81· 9,73. 7,62. 14,62. 10,54. 3,57. 1,31. 0,26. 2,25. 4,23. 6，16. 4，16. 3,9. 6,9. 2 ； 31P NMR(162MHz, CDCl3) δ 16. 99 ；C17H32N4O5P (Μ++Η)之 HRMS 計算值403· 2110，實驗值m/z 403.2111。實例13. (3札4札55)-4-乙酰胺基-5-胺基-3-(1-乙基丙氧基)-1-環(huán)己烯-1-羧 酸乙酯磷酸化物(1，克流感) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(Lindlar' s catalyst) (IOOmg)，對迭氮 化物lla(170mg，0. 5mmol)于乙醇(20mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土 過濾，再以乙醇沖洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(155mg)，將其溶于乙醇 (3mL)中，并逐份緩慢添加至乙醇(5mL)中之熱(55°C )磷酸溶液(85%, 115mg,0. 6mmol) 0 結(jié)晶作用在幾分鐘內(nèi)開始。在冷卻至0°C后，過濾收集沈淀物，并以冰丙酮(2x)清洗，以 產(chǎn)生 l(187mg，產(chǎn)率 91% )。白色晶體，mp 189-191°C [lit. (Fukuta et al. , J. Am. Chem. Soc. 2006，128，6312-6313)mp 184—186 "C ] ；[α ]D20 = -35. 8 (c = 1，H2O) [lit. (Rohloff et al.，· J. Org. Chem. 1998，63，4545-4550.) [a ]D = -39. 9 (c = 1，H2O)；或 lit. (Fukuta et al. ,2006) [a ]D22 = -30. 5 (c = 0. 480，H2O) ] ;IR(凈)3501，1734，1612，ΙΙδΟαιΓ1/H
NMR (600MHz, D20) δ 6. 91 (1Η, s) ,4. 39 (1H, d, J = 8. OHz) ,4. 32-4. 30 (2H, m)，4. 11 (1H, dd, J= 10. 5,5. 7Hz)，3. 67-3. 59 (2H, m)，3. Ol (1H, dd, J = 17. 4，5. 4Hz)，2. 60-2. 56 (1H, m)，2. 14 (3H, s)，1. 61-1. 50 (4H, m)，1. 34 (3H, t, J = 7. IHz)，0. 94 (3H, t, J = 7. 3Hz)， 0. 89 (3H, t, J = 7. 3Hz) ；13C NMR(150MHz, D2O) δ 178. 1，170. 3，140. 7，130. 4,87. 2,77. 9， 65. 2,55. 4,52. 0,30. 9,28. 3,27. 9,25. 2，16. 1，11. 36，11. 30 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 0. 43 ； C16H29N2O4 (Μ+-Η3Ρ04+Η)之 HRMS 計算值313· 2127，實驗值m/z 313. 2123。C16H31N2O8P 之分析 計算值:C, 46. 83 ；H, 7. 61 ；N, 6. 83，實驗值C，46. 70 ；H, 7. 69 ；N, 6. 74。實例14. (3札4札55)-4-乙酰胺基-5-胺基-3-(1-乙基丙氧基)-1-環(huán)己烯-1-羧
酸(2，奧司他偉) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(70mg)，對迭氮化物1 la (110mg， 0. 3mmol)于乙醇(15mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇沖 洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(95mg)，將其溶于THF(IOmL)中，再在0°C 下，以KOH水溶液(1M，0. 5mL,0. 5mmol)處理。使該反應(yīng)混合物回溫至室溫，并攪拌lh。接 著，以AmberliteIR-120將該混合物酸化至pH 5，過濾，并以乙醇水溶液(95% )沖洗。在 減壓條件下濃縮該濾液。在C18管柱上(CH3CN/H20，1 19)純化該殘余物，以產(chǎn)生2 (75mg， 產(chǎn)率 88%)。白色固體，mp 185-187°C ;[a]D2CI =-143.2(c = 0.4，H2O) ;IR(凈)3525， 2991，1751，1611，1050cm-1 ；1H NMR(600MHz, D20) δ 6. 50 (1Η, s)，4. 28 (1Η, d, J = 8. 4Ηζ)， 4. 05 (1Η, dd, J = 9. 6,4. 8Ηζ)，3. 57-3. 52 (2Η, m)，2. 89 (1Η, dd, J = 17. 4，5. 4Ηζ)，2. 48 (1Η, dd, J = 17. 4，10. 8Ηζ)，2. 09 (3Η, s)，1. 61-1. 52 (3Η, m)，1. 50-1. 43 (1H, m)，0. 90 (3H, t, J = 7-5Hz) ,0. 87 (3H, t, J = 7. 5Hz) ；13C 匪R(150MHz，D2O) δ 175. 1,173. 8,133. 0,132. 4,84. 2, 75. 6,52. 9,49. 7,29. 5,25. 4,25. 1,22. 3,8. 54,8. 45 ；C14H24N2NaO4 (M++Na)之 HRMS 計算值 307. 1634，實驗值:m/z307. 1633。C14H24N2O4 之分析計算值=C, 59. 13 ；H, 8. 51 ；N，9. 85，實驗 值:C,59. 04 ；H, 8. 58 ；N, 9. 79。實例15. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_胺基_3_ (1_乙基丙氧基)環(huán)己烯膦
酸銨(3，零流感) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(80mg)，對迭氮化物llb(203mg， 0. 5mmol)于乙醇(18mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇 沖洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(185mg)，將其溶于CHCl3(15mL)中， 再在0°C下，以溴化三甲基硅烷(2mL，15mmol)處理。使該反應(yīng)混合物回溫至室溫，并攪拌24h。接著，在減壓條件下濃縮該混合物。將該殘余物溶于水(IOmL)中，在室溫下攪拌2h， 再進行凍干。在C18管柱上純化該殘余之淺黃色固體，以NH4HCO3水溶液(0. IM溶液)溶 析，以產(chǎn)生磷酸銨 3(150mg，產(chǎn)率 85% )。白色固體，mp240°C (dec) ；[a]D20 = -56. 0 (c = 0· 8，H2O) ；IR(凈)3532，3001，1701，1656，1120CHT1 ；屮匪R(600MHz，D20) δ 6. 15 (1Η, d, Jp-2 = 18. 8Ηζ)，4· 12 (1H, d, J = 8. 1Hz)，3· 94 (1Η, dd, J = 11. 6,9. 2Hz)，3· 45-3. 40 (2Η, m)，2. 73-2. 68 (1Η, m)，2. 39-2. 34 (1Η, m)，1. 97 (3H, s)，1. 46-1. 40 (3H, m)，1. 38-1. 29 (1H, m) ,0. 77 (3H, t, J = 7. 3Hz) ,0. 73 (3H, t, J = 7. 3Hz) ； 13CNMR(150MHz, D2O) δ 175. 0，133. 1， 132. 9(C-1，d, Jh = 170Hz)，84. 3，76. 0,52. 9，49. 7，29. 3，25. 3，25. 0,22. 2,8. 5,8. 3 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 10. 35 ；C13H24N2O5P[M+H-2NH4]+ 之 HRMS 計算值319· 1434，實驗值m/ ζ319· 1709。C13H31N4O5PH2O 之分析計算值:C，41.93 ；H, 8. 93 ；N，15. 04，實驗值=C, 41. 87 ；H, 8. 99 ；N, 15. 01。實例16. (3札4札5幻-4-乙酰胺基-5-[隊，隊-雙(第三丁氧羰基)胍基]_3-(1_乙 基丙氧基)-1_環(huán)己烯-1-羧酸乙酯(12a) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(80mg)，對迭氮化物1 la (150mg， 0. 41mmol)于乙醇(20mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇沖 洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(IlOmg)，將其溶于無水DMF(20mL)中，再 以 N，N-雙(第三丁氧羰基)硫脲(148mg，0. 51mmol)及 Et3N(148 μ L，1. 03mmol)處理。將 該反應(yīng)混合物冷卻至0°C，再緩慢加入HgCl2 (138mg，0. 51mmol)。使該懸浮液回溫至室溫，并 攪拌10h。接著，以EtOAc稀釋該反應(yīng)物，再通過硅藻土過濾。濃縮該濾液，再以閃蒸管柱層 析(EtOAc/己烷，3 7)純化，以產(chǎn)生胍12a(177mg，產(chǎn)率78% )。無色泡沫體；TLC(EtOAc/ 己烷，1 l)Rf = 0. 4 ；[a ]D20 = -81. 6o (c = 1. 0，CHCl3) ；IR(凈)3302，1724，1635，1612， 1120cm-1 ；1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 11. 36(1Η, s) ,8. 60 (1Η, d, J = 8. IHz)，6. 78 (1Η，s)， 6. 21 (1Η, d, J = 9. OHz)，4. 37-4. 34 (1Η, m)，4. 17 (2Η, q, J = 7. IHz)，4. 14-4. 08 (1H, m)， 3. 98 (1H, dd，J = 4. 3，1. 3Hz)，3. 32-3. 30 (1H, m)，2. 74 (1H, dd, J= 17. 8,5. 3Hz)，2. 35 (1H, dd, J = 17. 8,9. 4Hz)，1. 87 (3H, s)，1. 50-1. 44(22H，m)，1. 24(3H，t，J = 7. 1Hz)，0· 86(3H，t， J = 7. 4Ηζ)，0· 83 (3Η, t, J = 7. 4Ηζ) ； 13CWR(150MHz，CDCl3) δ 170. 2，165. 9，163. 1，156. 8， 152. 5，137. 9，128. 6，83. 4，82. 6,79. 5, 76. 1,60. 9,54. 3,48. 0, 30. 4，28. 3 (3 χ )，28. 0 (3χ)， 26. 0,25. 7，23. 2，14. 1,9. 5,9. 3 ；C27HJN4O8(Μ++Η)之 HRMS 計算值:555· 3394，實驗值:m/z 555.3398。實例17. (3札4札5幻-4-乙酰胺基-5-[隊，隊-雙(第三丁氧羰基)胍基]_3-(1_乙 基丙氧基)-1_環(huán)己烯-1-膦酸二乙酯(12b) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(85mg)，對迭氮化物1 lb (320mg, 0. 8mmol)于乙醇(25mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇沖 洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(225mg)，將其溶于無水DMF(30mL)中，再 以 N，N-雙(第三丁氧羰基)硫脲(278mg，0. 96mmol)及 Et3N(267 μ L，1. 92mmol)處理。將 該混合物冷卻至0°C，再緩慢加入HgCl2 (260mg, 0. 96mmol)。使該懸浮液回溫至室溫，并攪 拌16h。接著，以EtOAc稀釋該反應(yīng)物，再通過硅藻土過濾。濃縮該濾液，再以閃蒸管柱層 析(Me0H/CH2Cl2，3 97)純化，以產(chǎn)生胍 12b (287mg，產(chǎn)率 58% )。無色泡沫體；TLC(MeOH/ CH2Cl2,1 19)Rf = 0. 3 ;[a ]D20 =-76. 8 (c = 1. 6，CDC13) ；IR(凈)3310，1801，1734，1642， 1253cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 11. 36 (1H, s)，8. 61 (1H, d, J = 8. 2Hz)，6. 62 (1H, d, JP_2 =21. 7Hz)，6. 38 (1H, d, J = 8. 9Hz)，4. 44-4. 38 (1H, m)，4. 19-3. 92 (6H, m)，3. 32-3. 28 (1H, m)，2. 68-2. 61 (1H, m)，2. 29-2. 24 (1H, m)，1. 91 (3H, s)，1. 49-1. 46 (22H, m)，1. 29 (6H, t, J = 7. IHz) ,0. 86 (3H, t, J = 7. 3Hz) ,0. 82 (3H, t, J = 7. 3Hz) ;"C NMR(150MHz, CDCl3) δ 170. 8，162. 8，156. 9，152. 6，142. 1，126. 4(C_1，d, Jim = 181Hz)，83· 8,82. 6,80. 1,76. 3， 62. 2,62. 1,54. 4,48. 2,30. 9,28. 2 (3x)，28. 0 (3x)，26. 0,25. 6,23. 4，16. 4，16. 3,9. 7,9. 2 ； 31P NMR(162MHz, CDCl3) δ 17. 20 ；C28H52N4O9P(M++H)之 HRMS 計算值619· 3472，實驗值m/ ζ619· 3476。實例18. (3札4札55)-4-乙酰胺基-5-胍基-3-(1-乙基丙氧基)-1-環(huán)己烯-1-羧 酸(13a) (Kim et al. , . J. Med. Chem. 1998，41，2451-2460.) 在0 °C 下，將 KOH 水溶液(0. 5mL 之 IM 溶液)力Π 入 12a(177mg，0. 32mmol)于 THF(IOmL)中之溶液中。使該混合物回溫至室溫并攪拌lh，再以Amberlite IR_120(酸性 樹脂)處理。過濾該混合物，再以乙醇水溶液(95%)沖洗。濃縮該濾液，將該殘余物溶于 CH2Cl2(IOmL)中，并冷卻至0°C。逐滴加入三氟乙酸(5mL)，再在0°C下攪拌該混合物lh。接 著，在減壓條件下濃縮該混合物，并以C18管柱(CH3CN/H20，1 19)純化該殘余物，以產(chǎn)生 酸 13a(92mg，產(chǎn)率 88% )。偏白色固體，mp 90-920°C ； [ α ]D20 = -190. 5 (c = 0. 36, H2O)； IR (凈)3502，2989，1733，1625，1213cm-1 ；1H NMR(600MHz, D2O) δ 6. 86 (1Η, s)，4. 36 (1H, d, J =8. 2Hz)，3. 94 (1H, dd, J = 10. 1,5. 2Hz)，3. 87-3. 82 (1H, m)，3. 56-3. 54 (1H, m)，2. 87 (1H, dd, J = 17. 5,5. 0Hz)，2. 42 (1H, dd, J= 17. 5，10. 1Hz)，2. 05 (3H, s)，1. 60-1. 54 (3H, m)，1. 50-1. 44 (1H, m) ,0. 91 (3H, t, J = 7. 2Hz) ,0. 86 (3H, t, J = 7. 2Hz) ； 13C NMR(150MHz, D2O) δ 174. 7，169-3，156. 8，138. 2，128. 7,84. 3,75. 3,54. 8,50. 5,29. 8,25. 6,25. 2,21. 9,8. 55， 8. 50 ；C15H27N4O4 (Μ++Η)之 HRMS 計算值327. 2032，實驗值:m/z 327. 2035。C15H26N4O4 之分析 計算值C，55. 20 ；H, 8. 03 ；N, 17. 17，實驗值C，55. 10 ；H, 8. 11 ；N, 17. 14。
實例19. (3R，4R，5S) _4_乙酰胺基_5_胍基_3_ (1_乙基丙氧基)環(huán)己烯膦 酸銨(13b) 將溴化三甲基娃燒(5mL,38mmol)加至12b(287mg，0. 46mmol)于 CHCl3(20mL)中之 冰(0°C)溶液中。在室溫下攪拌該混合物24h，接著在減壓條件下濃縮。將該殘余物溶于 水(15mL)中，在室溫下攪拌2h，再進行凍干。以C18管柱(0. IM NH4HCO3水溶液)純化該殘 余物，以產(chǎn)生磷酸銨 13b(132mg，產(chǎn)率 72% )。白色固體，mp 220-223°C ； [ α ]D20 = -55. 3 (c =1.5，H2O) ；IR(凈)3512，2901，1716，llOlcnT1 ；1H NMR(600MHz, D20) δ 6. 12 (1Η, d, JP_2 =19. 0Hz)，4. 12 (1H, d, J = 6. 9Hz)，3. 80 (1H, dd, J= 10. 0,5. OHz)，3. 71-3. 62 (1H, m)， 3. 41 (1H, br s)，2. 62-2. 59 (1H, m)，2. 28-2. 23 (1H, m)，1. 91 (3H, s)，1. 46-1. 44 (3H, m)， 1. 34-1. 28 (1H, m) ,0. 77 (3H, t, J = 7. 3Hz) ,0. 72 (3H, t, J = 7. 3Hz) ； 13C NMR(150MHz, D2O) δ 174. 5，156. 6，134. 3(C_1，d, Jim = 168Hz)，132. 7,84. 2,76. 3,55. 2,51. 0,30. 8,25. 5， 25. 2,21. 8,8. 6,8. 2 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 10. 92 ；C14H26N4O5P [M+H_2NH4]+之 HRMS 計算值 361. 1652，實驗值:m/z 361. 1637。C14H33N6O5P. (2H20)之分析計算值=C, 38. 88 ；H, 8. 62 ；N, 19. 43，實驗值:C, 38. 74 ；H, 8. 71 ；N, 19. 39。實例20. (3R，4R，5S) _4_乙酰胺基_5_胺基_3_羥基環(huán)己烯羧酸(14a) (Kim et al. , . J. Med. Chem. 1998，41，2451-2460) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(75mg)，對迭氮化物10a(81mg，0. 3mmol) 于乙醇(15mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇沖洗。在減 壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(95mg)，將其溶于THF (IOmL)中，再在0°C下，以 KOH水溶液(0. 5mL之IM溶液)處理。使該混合物回溫至室溫，攪拌lh，再以Amberlite IR-120酸化至pH 5。過濾該混合物，再以乙醇水溶液(95%)沖洗。濃縮該濾液，再以C18 管柱(CH3CN/H20，1 19)純化該殘余物，以產(chǎn)生酸14a(52mg，產(chǎn)率81% )。白色固體，mp 220 0C (dec) ；[α ]D20 = -96. 9 (c = 0. 7, H2O) ；IR(凈)3511，1711，ΙΘΙΟαιΓ1 ；1H NMR(600MHz, D2O) δ 6. 85(lH，s)，4· 48(lH，d，J = 8. 7Ηζ)，4· 06(lH，dd，J = 11. 5,5. 6Hz)，3· 64-3. 59 (1Η,m) ,2. 96 (1H, dd, J= 17.3,5. 6Ηζ), 2. 57-2. 51 (1H, m)，2. 10 (3H, s) ； 13C NMR(150MHz, D2O) δ 175. 6，169. 0，139. 4，127. 5,68. 7,53. 6,49. 0,28. 2,22. 2 ；C9H15N2O4(Μ++Η)之 HRMS 計算 值215. 1032，實驗值:m/z 215. 1035。實例21. (3札41 ，55)-4-乙酰胺基-5-胺基-3-羥基-1-環(huán)己烯-1-膦酸銨(14b) 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(50mg)，對迭氮化物IOb (IOlmg, 0. 3mmol)于乙醇(15mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以乙醇沖 洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(90mg)，將其溶于CHCl3 (IOmL)中，再在 0°C下，以溴化三甲基硅烷(lmL，7.6mm0l)處理。使該反應(yīng)混合物回溫至室溫，攪拌24h，再 在減壓條件下濃縮。將該殘余物溶于水(IOmL)中，在室溫下攪拌2h，再進行凍干。以C18 管柱(0. IM NH4HCO3水溶液)純化該殘余物，以產(chǎn)生磷酸銨14b(64mg，產(chǎn)率85% )。無色 固體，mp 190-192°C ； [a]D2。= -56. 3 (c = 1.0，H2O) ；IR(凈)3500，2891，1728，1159CHT1 ； 1H NMR (600MHz, D20) δ 6. 29 (1Η, d,廣2 = 19. 1Hz) ,4. 40 (1H, d, J = 7. OHz) ,4. 06 (1H, dd, J = 10. 6,5. 3Hz) ,3. 90 (1H, dd, J = 6. 8，3. 4Hz)，3. 60 (1H，br)，2. 88-2. 80 (1H，m)， 2. 57-2. 53 (1H, m)，2. 13 (3H, s) ；13C 匪R(150MHz，D2O) δ 175. 6，135. 0，132. 3(C_1，d, Jim = 172Hz) ,69. 4,54. 1,49. 6,29. 3,22. 3 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 13. 52 ;C8H14N2O5P[M+H-2NHJ. 之 HRMS 計算值249. 0651，實驗值:m/z249. 0869。實例22.病毒流感A/WSN/1933(HlNl)(得自 Dr. Shin-Ru Shih, Chang GungUniversity, Taiwan) 系在10-日齡之雞胚胎蛋的尿囊腔中培養(yǎng)72h，并以蔗糖梯度離心純化。實例23.細胞(American Type Culture Collection, Manassas, Va)取得Madin-Darby犬腎(MDCK)及293T細胞，并使其在含有10%胎牛血清(GibcoBRL) 及青霉素-鏈霉素(GibcoBRL)之DMEM(Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基，GibcoBRL)中，在5% C02、37°C下進行生長。實例24.測定流感病毒之TCID5tl在96孔微試驗盤上，在IxlO5細胞/mL濃度之100 μ L MDCK細胞上，以流感病毒 貯存物之系列稀釋測定TCID5tl(50%組織培養(yǎng)物感染劑量)。在5% C02、37°C下，培育經(jīng)感 染之細胞48h，再在各孔中加入每孔100 μ L之CellTiter 96 水性非放射性細胞增殖分析 反應(yīng)試劑(Promega)，在盤視讀器上判讀490nm之吸收值。使用Reed-Muench法測定流感病 毒之 TCID5ci (Reed and Muench, H. Am. J. Hyg. 1938，27，493-497)。實例25.制備重組神經(jīng)胺酸苷酶以進行NAI評估制備兩種m基團神經(jīng)胺酸苷酶以及其H274Y突變形式。分別衍生自A/ WSN/1933 (HlNl)及 A/Hanoi/30408/2005 (H5m)之 NA 基因的 cDNANA (WNS)及 NA(Hanoi) 分另1J 系取自 Dr. King-Song Jeng (Institute ofMolecular Biology, Academia Sinica) 及 Dr. Po-Huang Liang(Institute ofBiological Chemistry, Academia Sinica)。 以GeneTailor定位誘變系統(tǒng)(Invitrogen，CaI，USA)，根據(jù)制造商之指示，對該等NA基因進行 進一步之誘變，以引入該H274Y突變。將NA (WSN)及其突變基因選殖進入pClneo (Promega， Wis, USA)，并將NA(Hanoi)及其突變基因選殖進入pCDNA6 (Invitrogen)。使用該等NA基 因之質(zhì)體DNA轉(zhuǎn)染進入293T細胞中，以在細胞表面表現(xiàn)重組神經(jīng)胺酸苷酶。在48h時收集 該等經(jīng)轉(zhuǎn)染之細胞，以PBS (pH 7.4)清洗兩次，并用于評估神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑。實例26.測定NA之活性使用經(jīng)流感A/WSN/1933 (HlNl)感染之胚胎蛋的稀釋尿囊液，測量神經(jīng)胺酸苷 酶之活性。以熒光發(fā)光受質(zhì)2' -(4-甲基傘形酮)_α -D-N-乙?；窠?jīng)胺酸(MUNANA ； Sigma)，使用熒光分析測定NA活性。分別使用365及460nm之激發(fā)及發(fā)光波長，以Envision 盤視讀器(Perkin-Elmer，ffellesley, ΜΑ)，測量釋出4-甲基傘形酮之熒光。以200 μ M之 MUNANA測定神經(jīng)胺酸苷酶神經(jīng)胺酸苷酶之活性。酶活性以在室溫下共置15min內(nèi)之熒光增 加表示。實例27.測定NA抑制劑之IC50及Ki在室溫下，將抑制劑與神經(jīng)胺酸苷酶混合lOmin，接著再加入200μΜ之受質(zhì)，以測 定NA抑制作用。使用Graph Pad Prism 4，針對NA活性之抑制百分比對抑制劑之濃度作 圖，以測定抑制劑之IC50值。藉由式K = IC50/(1+[S]/Km])測定抑制劑之Ki值(Cheng, Y. -C ；Prusoff, W. H. Biochem. Pharmacol. 1973，22，3099-3108)，其中[S]系用于 IC5。測定 試驗中之受質(zhì)(MUNANA ;Sigma)濃度，而Km系可產(chǎn)生一半最大速度之受質(zhì)濃度。Km系使用 Michaelis-Menten方程式繪圖而測定。實例28.測定NA抑制劑之EC5tl及CC5tl以EC5tl值測量神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑之抗流感活性，其系對于HmiCPE活性具有 50%保護力之NA抑制劑濃度。將IOOTCID5ci濃度之50 μ L稀釋Hmi與等體積之不同濃度 NA抑制劑混合。在96孔試驗盤中，使用該混合物感染IxlO5細胞/mL濃度之100 μ L MDCK 細胞。在5% C02、37°C下培育48h后，如上所述以CellTiter 96 水性非放射性細胞增殖 分析反應(yīng)試劑測定細胞病變作用。使用Graph Pad Prism 4，針對CPE百分比對NA抑制劑 濃度之曲線進行擬合，以測定抑制劑之EC5tl值。CC5tl值系測量NA抑制劑對MDCK細胞之毒 性，并系以類似EC5tl之測定但未進行病毒感染而測定。實例29.體內(nèi)分析以舒泰(zoletil)麻醉BALB/c母鼠(4_5周齡)并由鼻內(nèi)接種25 μ L的感染性流 感病毒。藉由每日兩次經(jīng)口強飼，以每天每kg體重0.01、0. 1、1.0、及IOmg之劑量，對10 只小鼠之試驗組投予膦酸酯化合物3及3b共5天?？刂平M(安慰劑)之小鼠則以相同時 程接受無菌水。在投與第一劑藥物4小時后，以IOMLD5tl之流感病毒[A/WSN/33 (HlNl)或 NIBRG-14(H5N1)]接種小鼠。每日觀察小鼠之存活及體重共14天。平均存活率之結(jié)果示于 表3及4。個別存活率及平均體重示于圖9至20。實例30. Nl神經(jīng)胺酸苷酶抑制作用之計算機仿真借著將化合物3對接至流感病毒神經(jīng)胺酸苷酶(附亞型，PDB編碼2HU4) (Russell et al. ,Nature 2006，443，45-49)之晶體結(jié)構(gòu)中，建構(gòu)復合NA之化合物3的分子模擬。以 SYBYL 7. 3程序修飾奧司他偉2之3-D結(jié)構(gòu)(亦來自于2HU4)，建立化合物3之3-D結(jié)構(gòu) (SYBYL 7. 3 ；The Tripos Associates :St. Louis, M0。該 SYBYL 計算機計算系在 National
47Center for HighPerformance Computing, Taiwan.進行)。使用 GOLD 3. 1. 1 (Jones et al.，J. MoI. Biol. 1995，245，43-53 Jones et al.，J. MoI. Biol. 1997，267，727-748)，并 開啟彈性對接選項，以將化合物3對接至該蛋白上。使用SYBYL 7. 3程序(Joneset al., J. MoI. Biol. 1997，267，727-748)，對該蛋白之原子指定 Kollmann 全原子電荷(Cornell et al.，J.Am. Chem. Soc. 1995，117，5179-5197)，并對配位體之原子指定 Gasteiger-Huckel 電 荷(Gasteiger and Marsili,Tetrahedronl980,36,3219-3228. ；Marsili and Gasteiger, Croat.Chem. Acta 1980,53,601-614 ；Purcell and Singer, J. Chem. Eng. Data 1967,12, 235-246)。最初的1000個獨立基因演算計算循環(huán)系以介于-180及180度間不等之配位體 扭轉(zhuǎn)角度進行。搜尋效率設(shè)定為200%以確保對于對接構(gòu)形空間之最徹底搜尋。所有其它 參數(shù)接保持與系統(tǒng)預(yù)設(shè)相同。對接過程系分配至具有Intel (R) Xeon (TM) CPU 3. OOGHz CPUs 之包含40個處理器的Linux叢集。以G0LDSC0RE評分函數(shù)對所得之配位體-蛋白復合物 結(jié)構(gòu)進行排名，以決定前1000名之結(jié)果。對于該等前位排名構(gòu)形的人工檢視確認，如圖Ib 所示之共有結(jié)構(gòu)明顯可見。該結(jié)果預(yù)期系由NA之關(guān)鍵精胺酸與化合物3中之磷酸基間的 強互補靜電作用造成。在 PyMOL 軟件(DeLano WL(2002) The PyMOL molecular graphics system San Carlos(California) =DeLanoScientific)中顯示該等分子模型。在圖 1 中， 其明確顯示以配位體為中心之7人半徑內(nèi)之NA殘基側(cè)鏈中的碳原子。試行性之氫鍵供給 者_接受者配對以虛線連接。膦酸酯化合物3a之復合物與NA活性位點中之重要殘基具有 較奧司他偉-NA復合物(6對配位體-NA之H-鍵)更為大量之氫鍵作用(8對配位體-NA 之H-鍵)。實例31.用于下列實施例的合成流程以及產(chǎn)物定性的材料在下列之實施例中，所有的反應(yīng)試劑皆為可由市售取得，且其不經(jīng)進一步之純化 即予使用，除非另有明示。所有的溶劑皆為無水級，除非另有明示。偶氮二甲酸二異丙酯 (DIAD)系在減壓條件下于Na2SO4I蒸餾而純化。所有的非水性反應(yīng)皆系在于弱正壓氬氣下 于烘箱中干燥之玻璃器皿內(nèi)進行，除非另外注明。反應(yīng)經(jīng)磁攪拌，并在硅膠上以薄層層析監(jiān) 測。閃蒸層析系在60-200 μ m顆粒大小之硅膠上進行。產(chǎn)率系針對光譜純性化合物報告。 熔點系在Electrothermal MEL- TEMP IlOlD熔點裝置上記錄且不經(jīng)校正。匪R光譜系 在Bruker AVANCE 600及400光譜儀上記錄?；瘜W位移系以相對于四甲基硅烷(TMS)之δ 值提供；偶合常數(shù)J系以Hz單位提供。1H-NMR光譜之內(nèi)部標準物為⑶Cl3( δ H= 7. 24)、 CD3OD ( δ H = 3· 31)、或 D2O ( δ H = 4· 79)，13C-NMR光譜為 CDCl3 ( δ H = 77. 0)或 CD3OD ( δ c = 49. 15)，而31P-NMR光譜則為D2O中之H3PO4 ( δ P = 0. 00)。分裂模式報告為s (單峰)，d (雙 重峰)，t (三重峰)，q (四重峰)，m(多重峰)，br (寬峰)，及dd (雙重之雙重峰)。IR光譜 系在Thermo Nicolet 380 FT-IR光譜儀上記錄。旋光度系在Perkin-Elmer Model 341旋 光儀上紀律，[a ]D值系以10-ldeg cm2 g_l之單位提供。高分辨率ESI質(zhì)譜系在Bruker Daltonics光譜儀上記錄。與下列實施例相關(guān)之附件A系如其完全揭示于本文中般納入作為參考。實例31.N-[(1S，4S，5R，6R)_3，6- 二 溴 _4，5_(異亞丙基-二 氧)環(huán) 己-2-烯-1-基]乙酰胺(19) 以對-甲苯磺酸單水合物(lOOmg，0. 52mmol)，處理順-二氫二醇17 (8. Og, 42. Immol)于丙酮(20mL)及2，2_ 二甲氧基丙烷(40mL)混合物中之冰(0°C )溶液。在室 溫下攪拌該反應(yīng)混合物30ain，接著加入飽和之NaHCO3水溶液(60mL)而淬滅。在減壓條件 下除去有機溶劑，再以Et20(3xl00mL)萃取該殘余之水相。以鹽水(IOOmL)清洗結(jié)合之有 機萃取液，以MgSO4去水，過濾，并在真空下濃縮(不可加熱)，以產(chǎn)生呈淺黃色油體之粗制 丙酮化物(8. 92g)。在黑暗中，于0°C，在N-溴代乙酰胺(NBA，6.49g，47mmol)于無水乙腈(250mL)中 之溶液中，加入SnBr4 (4. 7mL之IM溶液于CH2Cl2中，4. 7mmol)及水(0. 72mL, 40mmol)。在該 相同溫度下，以Ih之時間，將乙腈(150mL)中之上文制備之乙酰胺(8. 92g，38. Smmol)，逐滴 加入該NBA-SnBr4混合物中。在0°C下劇烈攪拌該反應(yīng)物8h，接著以飽和之NaHCO3(IOOmL) 及Na2SO3 (IOOmL)水溶液進行淬滅。使該反應(yīng)混合物回溫至室溫30min。在分離有機相后， 以CH2Cl2 (3x300mL)萃取水相。以水(3x200mL)及鹽水(300mL)清洗結(jié)合之有機層，以MgSO4 去水，過濾，并在真空下濃縮。使該粗產(chǎn)物自Et2CVCH2Cl2再結(jié)晶，以產(chǎn)生呈無色結(jié)晶固體之 溴代乙酰胺 19(11. 66g，自順-二氫二醇 17 產(chǎn)率 75%) ；m. p. 150-152°C (dec) ； TLC(EtOAc/ 己烷，1 l)Rf = 0. 40 ；[α ]D20 = +176. 6 (c = 1. 63，CHCl3) ；IR(膠片)3209，2988，1655， 1225cm-1 ；1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 6. 19 (1Η，d, J = 9. 1Ηζ)，6· 15 (1Η，d, J = 5· OHz)， 4. 93-4. 90 (1Η, m)，4. 66 (1Η, d, J = 5. OHz)，4. 58 (1Η, dd，J = 5. 2，2. 6Hz)，4. 19 (1H, dd, J =3.9 ；2. 0Hz)，1. 95 (3H, s)，1. 49 (3H, s)，1. 40 (3H, s) ； 13C NMR (150MHz, CDCl3) δ 168. 9， 127. 9，124. 7，112. 0,77. 9,75. 8,50. 2,44. 3,27. 8,26. 5,23. 3 ；C1 ^16Br2NO3 (Μ++Η)之 HRMS 計 算值367. 9497，實驗值:m/z 367. 9499。實例32. (13，45，55，65)-7-乙酰基-3-溴-4，5-異亞丙基-二氧-7_氮雜雙環(huán) [4. 1.0]庚-2-烯(20)
在氮氣大氣下，于-10°C，將雙(三甲硅烷基)酰胺鋰(35mL之1.0M溶液于THF中， 35mmol)逐滴加入溴代乙酰胺19 (11. 66g，31. 8mmol)于THF(150mL)中之攪拌溶液中。使 所得之溶液回溫至0°C，并攪拌30min，以產(chǎn)生棕色懸浮液。在加入緩沖溶液(100mL，pH 7) 后，以Et20(4xl50mL)萃取該混合物。以鹽水清洗結(jié)合之有機萃取液，以MgSO4去水，過濾， 再進行濃縮。該粗制氮丙啶20(8. 32g)不經(jīng)進一步之純化即用于下一步驟。在硅膠上對該粗產(chǎn)物進行閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，2:3)，制備分析用之純性 樣本 20。無色固體；m. ρ· 110-112 °C； TLC (EtOAc/ 己烷，1 l)Rf = 0. 42 ；[α ]D2° = -77. 6 (c =0. 47, CHCl3) ；IR(膠片)2967,1980,1706,1233,1072cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 69 (1Η, d, J = 4_7Hz)，4. 72 (1H, dd，J = 7. 0，1. 1Hz)，4. 45 (1H, dd, J = 7. 0,4. 2Hz)，3. 19 (1H, dd，J = 5. 9，5. OHz)，3. 10 (1H, dd，J = 5. 6，2. 8Hz)，2. 16 (3H, s)，1. 55 (3H, s)， 1. 41 (3H, s) ； 13CNMR (150MHz, CDCl3) δ 181. 7，129. 9，122. 7，108. 5，76. 5，71. 9，39. 5，36. 7， 27. 0,24. 8，23. 2 ；C11H14BrNNaO3 (M++Na)之 HRMS 計算值310. 0055，實驗值:m/z 310. 0058。
實例 33. N- [ (1S，2R，5S，6S) _4_ 溴 _2_ (1_ 乙基丙氧基)_5，6_ (異亞丙基二氧)環(huán) 己-3-烯-1-基]乙酰胺(22) 在-10°C下，在粗制氮丙啶20(8. 32g，28. 8mmol)于3_戊醇(50mL)中之溶液中，逐 滴加入三氟化硼_乙醚絡(luò)合物(4. 68mL, 36mmol)。使該反應(yīng)混合物回溫至0°C，并攪拌6h， 再在減壓條件下濃縮。將該殘余物溶于EtOAc (200mL)中，再以飽和之NaHCOjK溶液(50mL) 清洗該有機層。以Et0Ac(3xl00mL)萃取該水層，再以水(200mL)及鹽水(300mL)清洗結(jié) 合之有機層。以MgSO4對該有機萃取液進行去水，過濾，并進行濃縮。在硅膠上以閃蒸管柱 層析(EtOAc/己烷，3 7)純化該殘余油體，以產(chǎn)生呈無色泡沫體之醚產(chǎn)物22(8. 82g，自 20 之產(chǎn)率 73%)。TLC(EtOAc/己燒，1 1) Rf = 0. 35 ； [ α ]D20 =-123 (c = 1. 42，CHCl3)； IR(膠片)3221，2988，1921，1711，1199，1075cm—1 ；屯 NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 15 (1Η, d, J = 2. 1Hz)，5. 70 (1H, d, J = 9. OHz)，4. 59 (1H, dd，J = 5. 2，1. 7Hz)，4. 42 (1H, dd, J = 5. 2,2. 6Hz)，4. 31 (1H, ddd, J = 11. 5,8. 8,2. 6Hz)，3. 90-3. 88 (1H, m)，3. 27-3. 23(1H, m) ,2. 01 (3H, s)，1. 50-1. 45 (4H, m)，1. 40 (3H, s)，1· 36 (3Η, s)，0. 89-0. 85 (6Η, m) ；13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 169. 9，132. 6，122. 7，110. 0,82. 3,76. 9,76. 1,73. 5,51. 3,27. 3， 26. 3,26. 0,25. 6,23. 2,9. 5,9. 2 ；C16H27BrNO4(Μ++Η)之 HRMS 計算值:367· 1123，實驗值:m/z 367.1129。實例34.N-[(1R，2R，5S，6S)_4-溴 _2-(1_ 乙基丙氧基)_5，6_ 二 羥基環(huán) 己-3-烯-1-基]乙酰胺(23)
在丙酮化物22(8. 82g，23. 4mmol)于甲醇(IOOmL)中之溶液中，加入濃HCl溶液 (2mL)。在50°C下攪拌該反應(yīng)混合物約6h，直到TLC分析顯示去保護作用完成。將該混合 物冷卻至室溫，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑，再使該殘余固體自Et20/THF再結(jié)晶，以產(chǎn)生呈無色 結(jié)晶固體之二羥基乙酰胺 23(7. 42g,94% ) ；m. p. 131_133°C (dec) ；TLC(EtOAc)Rf = 0. 35 ； [α ]D20 = -101. 2 (c = 0. 67，Me0H) ；IR(膠片)3678，3206，2972，1971，1698，1208，1072cm-1 ； 1HNMR(600MHz, CD3OD) δ 6. 04 (1Η, d, J = 3. IHz)，4· 13 (1Η, dd, J=L 7,0. 9Hz)，3· 95 (1Η, dd，J = 4. 3，2. 2Ηζ)，3. 92-3. 89 (2Η, m)，3. 32-3. 29 (1Η, m)，1. 86 (3H, s)，1. 44-1. 33 (4H, m)， 0. 85-0. 79 (6H, m) ； 13CNMR (150MHz, CD3OD) δ 173. 3，132. 0，128. 1,83. 4,75. 9,72. 7,70. 8，55. 1,27. 5,27. 3,23. 0，10. 1,9. 9 ；C13H23BrNO4 (M++H)之 HRMS 計算值336. 0810，實驗值:m/z 336.0818。實例35. (lS，2R，5R，6S)-6-乙酰胺基-2，3-二溴-5-(l-乙基-丙氧基)_ 環(huán) 己-3-烯-1-基乙酸酯(24) 在氮氣大氣下，于0°C，在二醇23(7. 42g，22. Immo 1)于THF(150mL)中之攪拌溶液 中，以IOmin之時間，逐滴加入α -乙酰氧基異丁酰溴(4. ImL, 27. 8mmol)。在該相同溫度下 攪拌該反應(yīng)混合物30min，再回溫至室溫同時予以攪拌3. 5h。蒸發(fā)溶劑，再在EtOAc (200mL) 及5% NaHCO3水溶液(50mL)間分配該殘余油體。以水(IOOmL)清洗該有機層，以MgSO4去 水，過濾，再進行濃縮，以產(chǎn)生粗制溴代乙酸酯24 (9. 05g)。該粗制產(chǎn)物不經(jīng)進一步之純化即 用于下一步驟。在硅膠上對該粗產(chǎn)物進行閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，2:1)，制備分析用之純性 樣本 24。淺黃色泡沫體；TLC (EtOAc/己烷，2 1) Rf = 0. 33 ； [ α ]D2° =-43. 2 (c = 1. 28， CHCl3) ；IR(膠片)3279, 2981,1927,1702,1687,1221,1093cm-1 ；1H NMR(600MHz，CDCl3) δ 6. 17 (1Η, d, J = 2. 3Hz)，5. 85 (1H, br s)，5. 29 (1H, s)，4. 78-4. 75 (1H, m)，4. 54 (1H, d, J =2. 8Hz) ,4. 03 (1H, d, J = 8. 6Hz)，3. 26 (1H, dd, J = 11. 3，5_6Hz)，2. 09 (3H, s)，1. 96 (3H, s), 1. 49-1. 43 (4Η, m)，0· 89-0. 81 (6Η，m) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 170. 0,169. 9,133-9, 121. 1,82. 4,75. 4,74. 5,48. 8,47. 3,26. 2,25. 8,23. 4,20. 9,9. 4,9. 3 ；C15H24Br2NO4(Μ++Η)之 HRMS 計算值440. 0072,實驗值:m/z440. 0076。實例36. N- [ (1R，2R，6R) _4_溴_2_ (1_乙基丙氧基)_6_羥基環(huán)己_3_烯基] 乙酰胺(25) 在氮氣大氣下，于 0°C，將 Super-Hydride (LiBHEt3,61. 5mL 之 IM 溶液于 THF 中，61.5mmol)逐滴加入溴化乙酸酯24(9. 05g，20. 5mmol)于THF(IOOmL)中之攪拌溶液 中。使所得之溶液回溫至室溫，攪拌2h，再以飽和之NH4Cl水溶液(50mL)處理。分離水 層，再以Et0Ac(6xl00mL)萃取。以水(2x200mL)及鹽水(200mL)清洗結(jié)合之有機層。以 MgSO4對該有機相進行去水，過濾，并進行濃縮，以產(chǎn)生淺黃色泡沫體殘余物。自Et2O再 結(jié)晶而純化該粗產(chǎn)物，以產(chǎn)生呈白色結(jié)晶固體之羥基乙酰胺25(5. 78g，自二醇23產(chǎn)率 82% ) ；m. p. 102-104°C ；TLC (EtOAc)Rf = 0. 35 ；[α ]D20 = -107. 7 (c = 1· 1，CHCl3) ； IR (膠 片)3595，3217，2923，1984，1707，1286，1021CHT1/H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 03 (1Η, d, J = 3. 1Hz), 5. 89 (1Η, d, J = 6. 7Hz), 4. 23 (1Η, br s) ,4. 07 (1Η, br s), 3. 98 (1Η, br s)，3. 93 (1H, dd，J = 7. 5，2. 1Hz)，3. 29-3. 26 (1H, m)，2. 82 (1H, dd, J = 18. 2,4. 7Hz)，2. 50 (1H, dd, J = 18. 2,5. 8Hz) ,2. 01 (3H, s)，1. 51-1. 42 (4H，m)，0. 89-0. 85 (6H，m) ； 13C 匪R(150MHz， CDCl3) δ 172. 0，127. 9，122. 5,81. 7,74. 0,67. 7,54. 2,41. 7,26. 3,26. 0,23. 4,9. 7,9. 5 ； C13H22BrNNaO3 (M++Na)之 HRMS 計算值342. 0681，實驗值:m/z 342. 0688。實例37.N-[(1R，2R，6S)_4-溴_2-(1_乙基丙氧基)_6_迭氮基-環(huán) 己-3-烯-1-基]乙酰胺(26)及N-[(1R，6R)_4-溴-6-(l-乙基丙氧基)-環(huán)己_2，4-二 烯-1-基]乙酰胺(27) 在40°C下，將 25(5. 78g，18. lmmol)、三苯膦(9. 96g，38. Ommol)、新鮮蒸餾之迭氮 二羧酸二異丙酯(7. 68g，38. Ommol)、及疊氮磷酸二苯酯(10. 51g，38. Ommol)于 THF(120mL) 中之溶液攪拌24h。在減壓條件下，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，再以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷， 1 2)純化該殘余物，以產(chǎn)生具有6S構(gòu)形之對應(yīng)迭氮化物產(chǎn)物26(5. 23g,84% yield)，同 時并有2%之副產(chǎn)物二烯27(108mg，0. 36mmol)。迭氮化物26 白色固體，m. p. 138-140 °C ;TLC(EtOAc/己烷，1 l)Rf = 0. 45; [α ]D20 = -33. 4 (c = 0.7，CHCl3) ；IR(膠片)3119，2927，2178，1902，1698，1277，1054CHT1 ； 1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 6. 33 (1Η, d, J = 7. 8Hz)，5. 98 (1H，d, J = 2. 2Hz)，4. 27 (1H，d, J = 8. 2Hz)，4. 22-4. 17 (1H, m)，3. 44-3. 40 (1H, m)，3. 23-3. 20 (1H, m)，2. 77 (1H, dd, J = 17. 4，5. 8Hz)，2. 52-2. 46 (1H, m)，1. 99 (3H, s)，1. 47-1. 42 (4H, m)，0. 86-0. 82 (6H, m) ； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 171. 2，130. 3，119. 0,82. 0,74. 7,57. 5,56. 9,40. 4,26. 2,25. 6,23. 5， 9. 6,9. 2 ；C13H22BrN4O2 (Μ++Η)之 HRMS 計算值洶5· Ο926，實驗值:m/z345. O93L二烯 27 無色固體，m. ρ· 68-70 °C ;TLC(Et0Ac/ 己烷，2 1) Rf = 0. 60 ； [ α ]D20 =-215. 6 (c = 0· 98，CHCl3) ；IR(膠片)3331，1721，1607，1088CHT1 ^HNMR^OOMHz，CDCl3) δ 6. 16 (1Η, d, J = 5. 2Hz)，6. 09 (1H, dd，J = 9. 8，1. 3Hz)，5. 81 (1H, dd，J = 9. 8，5. 2Hz)， 5. 52 (1H, d, J = 7. 7Hz)，4. 60 (1H, ddd, J = 8. 9,4. 8,2. 4Hz)，3. 91 (1H, dd，J = 4. 8，2. 4Hz)， 3. 43-3. 39 (1H, m), 1. 94 (3H, s)，1. 49-1. 41 (4H，m)，0. 88-0. 82 (6H，m) ；13C NMR (150MHz, CDCl3) δ 169. 9，129. 9，128. 0，126. 7，120. 0,80. 8,74. 8,47. 0,26. 6,26. 5,23. 3,9. 9,9. 5 ； C13H21BrNO2 (M++H)之 HRMS 計算值302. 0756，實驗值:m/z 302. 0761。實例38. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基_5_迭氮基_3-(1_乙基-丙氧基)_1_環(huán)己 烯-1-羧酸乙酯(28a) 在氮氣大氣下，于 80°C，將 26 (349mg, lmmol)、N，N- 二異丙基乙胺(2. 5mL，15. 2mmol)、及雙(三苯膦)二羰基鎳(0) (960mg, 1. 5mmol)于乙醇(3mL)及 THF(15mL)中 之溶液攪拌24h。將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，再蒸發(fā)溶劑。以Et0Ac(20mL)稀釋該殘余 油體，再使該混合物通過硅藻土墊過濾。蒸發(fā)該濾液，以產(chǎn)生淺黃色之油體，其經(jīng)閃蒸管柱 層析(EtOAc/己烷，3 7)純化，產(chǎn)生呈無色固體之酯28a(274mg,81% ) ；m. p. 115_117°C ； TLC (EtOAc/ 己燒，1 l)Rf = 0.4 ；[a ]D20 = -48. 9 (c = 1. 1，CHCl3) ；IR(膠片)3401， 2101，1712，1655，1273cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 75 (1Η, s)，5· 98 (1Η, d, J = 7A Hz)，
4.53 (1H, d, J = 5. 0Hz)，4. 51-4. 16 (3H, m)，3. 33-3. 28 (2H, m)，2. 82 (1H, dd, J= 17. 6，
5.6Hz)，2. 22-2. 16 (1H，m)，2. 00 (3H, s)，1. 49+45 (4H, m)，1. 25 (3H, t, J = 7. IHz)， 0. 95-0. 80 (6H, m) ； 13CNMR(150MHz, CDCl3) δ 171. 1, 165. 8，137. 9，128. 1,82. 0,73. 4， 61. 0,58. 0,57. 2,30. 5,26. 2,25. 6,23. 5，14. 1,9. 5,9. 3 ；C15H27N4O4 (Μ++Η)之 HRMS 計算值 339. 2032，實驗值:m/z 339. 2039。 實例39. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-迭氮基-3-(l-乙基-丙氧基)-1_環(huán)己烯 膦酸二乙酯(28a) 對26(1. 72g，10mmol)、，亞磷酸二乙酯(2. 07g，15匪ol)、及 1，4_ 二氮雜雙環(huán) [2.2.2]辛烷(3. 37g，30mmol)于無水甲苯(50mL)中之混合物，以氮氣吹泡IOmin而 進行脫氧，接著將其加至置于氮氣大氣下之圓底燒瓶中之四(三苯膦)鈀(0) (867mg, 0. 75mmol)中。將所得之溶液逐漸加熱至90°C，并維持在此溫度12h。使該反應(yīng)混合物通 過硅藻土過濾，再在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，以產(chǎn)生無色之泡沫體(3.91g)，其經(jīng)閃蒸管柱 層析(EtOAc/己烷，1 1至2 1)純化，產(chǎn)生呈無色油體之膦酸酯28b(3. 33g，83% )。 TLC (EtOAc/己燒，1 l)Rf = 0. 2 ；[a ]D20 = -62. 4 (c = 1. 2, CHCl3) ；IR(膠片)3357，2108， 1754,1651,1247cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 56 (1Η, d, JP_2 = 21. 6Hz)，5. 71 (1H，d, J =6. 9Hz)，4. 52 (1H, d, J = 7. 8Hz)，4. 34-4. 30 (1H, m)，4. 11-4. 01 (4H，m)，3-31-3-23 (2H， m)，2. 69-2. 64 (1H, m)，2. 12-2. 08 (1H, m)，2. 01 (3H, s)，1. 51-1. 43 (4H, m)，1. 39-1. 31 (6H, m)，0· 90-0. 81 (6Η, m) ； 13C NMR (150MHz, CDCl3) δ 171. 0，141. 7，126. 3(C_1，d, Jp^1 = 182Hz)，81· 9,73. 7,62. 14,62. 10,54. 3,57. 1,31. 0,26. 2,25. 4,23. 6，16. 4，16. 3,9. 6,9. 2 ； 31P NMR(162MHz, CDCl3) δ 16. 99 ；C17H32N4O5(M++H)之 HRMS 計算值403. 2110，實驗值:m/z 403. 2117。實例40. (lS，5R，6R)-6_乙酰胺基-3-溴-5-(l-乙基-丙氧基)環(huán)己-3-烯-1-基 胺基甲酸第三丁酯(29) 在室溫下之2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(1. 37g，6_ol)及三苯膦(1. 57g， 6mmol)于無水乙腈(30mL)中之混合物中，加入氰酸四丁基銨(1. 71g，6mmol)，再加入醇 25(1.58g，5mm0l)。在室溫下攪拌該混合物18h直到反應(yīng)完成。蒸發(fā)溶劑，并將該黑色殘余 物溶于第三丁醇(20mL)中。在回流溫度下加熱該所得之溶液24h。在減壓條件下蒸發(fā)溶 劑，再以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，3 7)純化該殘余物，以產(chǎn)生呈白色固體之胺基甲酸 酯 29(1. 63g，78% ) ；m. p. 153-155°C;TLC(Et0Ac/己烷，1 1) Rf = 0. 5 ； [ α ]D20 =-49. 7 (c =1. 35, CHCl3) ；IR(膠片)3327，2919，1708，1682，1523，1244CHT1 ；屮 NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 24 (1Η, d, J = 9. 1Hz)，6. 00 (1H, s)，548 (1H, d, J = 9. 1Hz)，4. 01 (1H, dd, J = 17. 0， 9. 3Hz)，3. 85-3. 81 (2H, m)，3. 28-3. 24 (1H, m)，2. 71 (1H, dd, J = 17. 6,4. 8Hz)，2. 57 (1H, dd, J = 17. 6,8. 6Hz)，1. 93 (3H, s)，1. 46-1. 39 (4H, m)，1. 36 (9H, s)，0. 85-0. 80 (6H, m)； 13C NMR(150MHz, CDCl3) δ 170. 8，156. 0，129. 5，121. 2,81. 9,79. 6,76. 4,53. 1,49. 8,40. 6， 28. 3(3χ) ,26. 0,25. 7,23. 2,9. 5,9. 2 ；C18H31BrN2NaO4 (M++Na)之HRMS 計算值441. 1365，實驗 值:m/z 441.1368。實例41. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-第三丁氧基-羰胺基-3-(l-乙基丙氧 基)-1_環(huán)己烯羧酸乙酯(31a) 對溴乙烯29 (2. llg, 5mmol)、碘化鉀(1. 66g，IOmmol)、及碘化銅(I) (477mg， 2. 5mmol)于正丁醇(35mL)中之混合物，以氮氣吹泡IOmin而進行脫氧，接著將其加至置于 氮氣大氣下之圓底燒瓶中之N，N' - 二甲基乙二胺(54yL，0. 5mmol)中。在120°C下攪拌 該反應(yīng)混合物24h。在冷卻至室溫后，在減壓條件下蒸發(fā)溶劑。在Et0Ac(50mL)及稀氨水溶 液(50mL)間分配該殘余物。以水(3x30mL)清洗該有機相，以MgSO4去水，再進行濃縮。使 該殘余物通過短硅膠管柱過濾(EtOAc/己烷，1:1)，以產(chǎn)生粗制碘乙烯30 (2. 29g)之無色 固體樣本，其不經(jīng)進一步之純化即用于下一步驟。將醋酸鈀(II) (90mg，0. 4mmol)加入上文所制備之碘乙烯30 (2. 29g，4. 9mmol) 及醋酸鈉(1.64g，20mmOl)于無水乙醇(50mL)中之溶液中。在一氧化碳大氣下，于室 溫攪拌該反應(yīng)混合物24h。蒸發(fā)溶劑，再以閃蒸管柱層析(EtOAc/己烷，3 7)純化 該殘余物，以產(chǎn)生呈白色固體之 31a(1.69g，82% from 29) ；m. p. 142-144 °C [lit.s3m. p. 138-139 "C ] ；TLC (EtOAc/ 己烷，1 l)Rf = 0. 35 ；[α ]D20 = -76. 3 (c = 1. 67, CHCl3) [lit. s3[a ]D25 = -68. 9 (c= 1. 0，CDCl3)] ；IR(膠片)3312，2951，1713，1688，1651，1244cm-1 ； 1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 70 (1H, s)，6· 24 (1H, , J = 9. 2Hz)，5. 26 (1Η, d, J = 9. 3Ηζ)， 4. 18-4. 12 (2Η, m)，4. 03-3. 98 (1Η, m)，3. 95-3. 94 (1H, m)，3. 75-3. 72 (1H, m)，3. 30 (1H, t, J =5. 6Hz)，2. 67 (1H, dd, J= 17. 8,5. IHz)，2. 27-2. 23 (1H, m)，1. 93 (3H, s)，1. 48-1. 42 (4H, m), 1. 37 (9H, s)，1. 24 (3H，t，J = 7. 2Hz)，0. 86—0. 81 (6H，m) ；13C NMR(150MHz，CDCl3) δ 170. 9，165. 9，156. 3，137. 7，129. 2,82. 2,79. 5,75. 8,60. 9,54. 4,49. 2,30. 8,28. 3 (3χ)， 26. 1,25. 6,23. 3，14. 1,9. 5,9. 2 ；C21H36N2NaO5 (M++Na)之 HRMS 計算值435. 2471，實驗值:m/ ζ435· 2477。
實例42. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_第三丁氧基-羰胺基_3_ (1_乙基-丙氧 基)-1_環(huán)己烯膦酸二乙酯(31b) 藉由類似28b之流程，在90°C下，將無水甲苯(50mL)中之溴乙烯29 (4. 21g， lOmmol)、亞磷酸二乙酯(2. 12g，15mmol)、1，4-二氮雜雙環(huán)[2. 2. 2]辛烷(3. 43g,30mmol) 與四(三苯膦)鈀(0) (872mg，0. 75mmol)之混合物加熱12h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土 墊過濾，再在EtOAc (50mL)及水(30mL)間分配該濾液。再次以水(30mL)及鹽水(30mL) 清洗該有機相，以MgSO4去水，再進行濃縮，以產(chǎn)生粗產(chǎn)物，使其自Et2CVCH2Cl2再結(jié)晶，以 產(chǎn)生呈白色結(jié)晶固體之膦酸酯 31b(4. 05g，85% ) ；m.p. 167-169°C ；TLC(EtOAc)Rf = 0. 31 ； [a ]D20 = -88. 8 (c = 1. 14, CHCl3) ；IR(膠片)3378，2901，1733，1626，1262，1159CHT1 ； 1H NMR (600MHz, CDCl3) δ 6. 57 (1Η, d, JP_2 = 21. 6Hz)，5· 81 (1H，d, J = 9· OHz)，5· 06 (1Η， d, J = 8. 9Ηζ)，4. 06-4. 01 (5Η, m)，3. 88 (1Η, br s)，3. 79-3. 75 (1H, m)，3. 30 (1H, t, J = 5. 3Hz)，2. 60-2. 57 (1H, m)，2. 20-2. 16 (1H，m)，1. 95 (3H, s)，1. 48-1. 44 (4H, m)，1. 39 (9H, s)，1. 30-1. 27 (6H, m) ,0. 87-0. 82 (6H, m) ； 13C NMR (150MHz, CDCl3) δ 170. 9，156. 2，141. 5， 126. 8(C-1, d, Jh = 181Ηζ)，82· 1,79. 6,76. 0,62. 0,61. 9,54. 2,49. 1,31. 0,28. 3 (3x)， 26. 0，25. 5，23. 3，16. 37，16. 33,9-5,9-1 ；31P NMR(202MHz，CDCl3) δ 17. 25 ;C22H42N2O7P (Μ++Η) 之 HRMS 計算值477. 2730，實驗值:m/z 477. 2732。實例43. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-胺基-3-(l-乙基丙氧基)-l-環(huán)己烯羧酸 乙酯磷酸化物(15-H3P04，克流感) 將化合物31a(1. 24g,3mmol)溶于乙醇(20mL)中，再緩慢逐份加入熱(50°C )磷 酸溶液(IOmL之IM溶液于乙醇中，lOmmol)。在50°C下攪拌該溶液6h。在冷卻至0°C后， 過濾收集沈淀物，并以冰丙酮(3x 5mL)清洗，以產(chǎn)生呈白色晶體的克流感(998mg，81%)； m. p. 187-190°C [lit. m. p. 184_186°C ] ；[α ]D20 = -36. 7 (c = 1,Η20) [lit. [α ]D = -39. 9 (c =LH2O)；或 lit. [α ]D22 =-30. 5 (c = 0· 480，H2O)] ；IR(膠片)3501，1734，1612，ΙΙδΟαιΓ1 ； 1HNMR (600MHz, D2O) δ 6. 91 (1Η, s)，4_39(lH，d, J = 8. OHz) ,4. 32-4. 30 (2Η, m),4. 11 (1Η, dd, J = 10. 5,5. 7Ηζ)，3. 67-3. 59 (2Η, m)，3. 01 (1H, dd, J = 17. 4，5. 4Hz)，2. 60-2. 56 (1H, m)，2. 14 (3H, s)，1. 61-1. 50 (4H, m)，1. 34 (3H, t, J = 7. IHz)，0. 94 (3H, t, J = 7. 3Hz)， 0. 89 (3H, t, J = 7. 3Hz) ；13C NMR(150MHz, D2O) δ 178. 1，170. 3，140. 7，130. 4,87. 2,77. 9， 65. 2,55. 4,52. 0,30. 9,28. 3,27. 9,25. 2，16. 1，11. 36，11. 30 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 0. 43 ； C16H29N2O4 (Μ+-Η3Ρ04+Η)之 HRMS 計算值313. 2127，實驗值:m/z313. 2132。C16H31N2O8P 之分析計算值:C, 46. 83 ；H, 7. 61 ；N, 6. 83，實驗值C，46. 72 ；H, 7. 68 ；N, 6. 75。實例44. (3R，4R，5S)-4-乙酰胺基-5-胺基-3-(l-乙基-丙氧基)-1_環(huán)己烯膦
酸銨(3，零流感) 將膦酸二乙酯31b(2. 38g，5mmol)溶于CH2Cl2(50mL)中，并在0°C下，以溴代三甲 基硅烷(6.67mL，50mmol)處理。使該反應(yīng)混合物回溫至室溫，攪拌18h，再在減壓條件下濃 縮。將該殘余物溶于水(IOmL)中，在室溫下攪拌2h，再進行凍干。以Et20(3x20mL)清洗 該殘余之淺黃色固體殘余物以產(chǎn)生白色固體，將其溶于NH4HCO3水溶液(0. IM溶液，20mL) 中，在室溫下攪拌lh，接著進行凍干，以產(chǎn)生呈白色固體之零流感3 (1. 56g，產(chǎn)率88 % )； m. p. 238-240 °C (dec) ；[α ]D20 = -56. 7 (c = 1. 2, H2O) ；IR(膠片)3521，3212，2987，1712， 1686，1121cm-1 ；1H 匪R (600MHz，D2O) δ 6. 15(lH，d，Jp-2 = 18. 8Hz)，4. 12(lH，d，J = 8. 1Hz)， 3. 94 (1H, dd, J= 11. 6,9. 2Hz)，3. 45-3. 40 (2H, m)，2. 73-2. 68 (1H, m)，2. 39-2. 34 (1H, m)， 1. 97 (3H, s)，1. 46-1. 40 (3H, m)，1. 38-1. 29 (1H, m)，0. 77 (3H, t, J = 7. 3Hz)，0. 73 (3H, t, J = 7. 3Hz) ；13C NMR(150MHz，D2O) δ 175. 0，133. 1，132. 9(C-1，d，Jp^1 = 170Hz)， 843,76. 0,52. 9,49. 7,29. 3,25. 3,25. 0,22. 2,8. 5,8. 3 ；31P NMR(162MHz, D2O) δ 10. 35 ； C13H24N2O5P [Μ+Η-2ΝΗ4] +之 HRMS 計算值319. 1423，實驗值:m/z 319. 1429。C13H31N4O5P. H2O 之 分析計算值C，41. 93 ；H, 8. 93 ；N, 15. 04，實驗值C，41. 89 ；H, 8. 99 ；N, 15. 07。實例45. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_胺基_3_ (1_乙基-丙氧基)環(huán)己 烯-1-膦酸乙酯銨鹽(3c) 在氮氣大氣下，以乙醇中之乙酸鈉(4. 5mmol，4. 5mL之IM溶液)，處理二乙酯 31b(1.43g,3mmol)于乙醇(50mL)中之溶液。在室溫下攪拌該混合物16h，接著以Amberlite IR-120(H+-形式)進行酸化。在40°C下攪拌該異相溶液2h，過濾，再在真空下濃縮。將該 殘余油體溶于水(15mL)中并進行凍干。以冰丙酮(20mL x3)清洗該殘余無色固體，將其溶 于NH4HCO3水溶液(15mL之0. IM溶液)中，在室溫下攪拌lh，接著進行凍干，以產(chǎn)生呈白色 固體之零流感單酯的銨鹽3c(898mg，82% )。C15H32N3O5P, mp 65-67°C ； [ α ]D20 = -36. 2 (c = 0. 7, H2O) ； IR (凈)3503，3211，2921， 1714,1658,1121cm-1 ；1H 匪R(600MHz，D2O) δ 6. 33 (1Η, d, JP_2 = 19. 2Hz)，4-23 (1H，d, J = 9. 4Hz)，3. 99 (1H, dd, J= 10. 2,5. 1Hz)，3. 86-3. 84 (2H, m)，3. 53 (1H, br s)，3. 48-3. 45 (1H, m)，2. 76-2. 73 (1H, m)，2. 41-2. 37 (1H, m)，2. 07 (3H, s)，1. 61-1. 40 (4H, m)，1. 24 (3H, t, J = 在氫氣大氣下，于室溫，以林德拉催化劑(80mg)，對迭氮化物1 lb (204mg, 0. 5mmol)于乙醇(18mL)中之溶液處理16h。使該反應(yīng)混合物通過硅藻土過濾，再以 乙醇沖洗。在減壓條件下蒸發(fā)該濾液，產(chǎn)生無色之泡沫體(183mg)，其以閃蒸管柱層析 (MeOH/CH2Cl2,1 4)純化，產(chǎn)生膦酸二乙酯3b (141mg，產(chǎn)率75 % )，淺黃色油體；[α ]D2° =-50. 6 (c = 2，CHCl3) ；IR( ？f ) 3321, 2911,1702,1663,1510cm-1 ；1H NMR(600MHz, CDCl3) δ 6. 51 (1Η, d, Jp_2 = 21. 7Hz)，6. 29 (1H, d, J = 7. 4Hz)，4. 06-4. 00 (5H, m)，3. 55 (1H, dd, J
CN 101883569 Ai兌明書48/49 頁
6. 8Ηζ)，0· 89 (3Η, t, J = 7. 1Hz)，0· 84 (3H, t, J = 7. 1Hz) ； 13C NMR(150MHz, D2O) δ 175. 1， 136. 4，130. 3(C-1, d, Jim = 168Hz)，84· 2,76. 2,76. 1,61. 3,53. 6,49. 6,29. 9,25. 5,25. 2， 22. 3,15. 8,8. 5 ；31P NMR(242MHz, D2O) δ 12. 89 ；C15H28N2NaO5P[M+Na-NH4]+ 之 HRMS 計算值 370. 1639，實驗值:m/z370. 1543。實例46. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_胍基_3_ (1_乙基-丙氧基)環(huán)己 烯-1-膦酸乙酯銨鹽(13c) 在氮氣大氣下，以乙醇中之乙酸鈉(6mmol，6mL之IM溶液)，處理二乙酯 12b (2. 73g,4mmol)于乙醇(60mL)中之溶液。在室溫下攪拌該混合物18h，接著以Amberlite IR-120(H+-形式)進行酸化。在40°C下攪拌該異相溶液3h，過濾，再在真空下濃縮。將該 殘余油體溶于水(15mL)中并進行凍干。以冰丙酮(20mL x3)清洗該殘余無色固體，將其溶 于NH4HCO3水溶液(15mL之0. IM溶液)中，在室溫下攪拌lh，接著進行凍干，以產(chǎn)生呈白色 固體之零流感胍單酯的銨鹽13c (1. 22g,75% )。C15H34N5O5P，mp 70-72 "C ；[α ]D20 = -11. 5(c = 0.6，H2O) ；IR(凈)3521，1931， 1756,1623,1210cm-1 ；1H NMR(600MHz, D2O) δ 6. 29 (1Η, d, JP_2 = 19. 1Hz)，4. 25—4. 22 (1Η， m)，3. 91-3. 82 (4H, m)，3. 51 (1H, br s)，2. 57-2. 55 (1H, m)，2. 24-2. 20 (1H, m)，2. 01 (3H, s)，1. 63-1. 49 (3H, m)，1. 44-1. 40 (1H, m)，1. 24 (3H, t, J = 6. 9Hz)，0. 88 (3H, t, J = 7. OHz) ,0. 82 (3H, t, J = 7. OHz) ；13C NMR(150MHz, D2O) δ 174. 5，160. 3，136. 5，131. 8(C_1， d, Jh = 171Ηζ)，84· 2,76. 9,76. 8,61. 2,55. 6,51. 0,31. 6,25. 6,25. 3,22. 0，15. 7,8. 5 ； C16H3tlN4NaO5P [M+Na-NH4]+ 之 HRMS 計算值412· 1857,實驗值m/z412· I859。實例47. (3R，4R，5S) ~4~乙酰胺基_5_胺基_3_ (1_乙基-丙氧基)環(huán)己 烯-1-膦酸二乙酯(3b)=18. 5,9. 4Hz)，3. 28-3. 26 (1H, m)，3. 19-3. 09 (1H, m)，2. 59-2. 56 (1H, m)，2. 28 (3H, br s)， 2. 06-2. 01 (1H, m)，1. 98 (3H, s)，1. 55-1. 40 (3H, m)，1. 38-1. 25 (6H, m)，0. 85-0. 81 (6H, m)； 13C NMR(150MHz，CDCl3) δ 171. 2，141. 7，127. 3(C-1，d，Jim = 180Hz)，81. 8，75. 4，62. 1， 62. 0,58. 4,49. 6,33. 6,26. 1,25. 5,23. 5，16. 35，16. 32,9. 5,9. 2 ；31P NMR(162MHz, CDCl3) δ 17. 69 ；C17H34N2O5P (Μ+Η)之 HRMS 計算值377. 2205，實驗值m/z 377. 2207。
盡管本發(fā)明之組合物及方法已以目前視為最為實際且較佳的實施進行敘述，咸須 明了，該揭示內(nèi)容并不須限于所揭示之實施。其系欲涵括申請專利范圍之精神及范圍內(nèi)所 包括之各種不同修飾及類似安排，該申請專利范圍之范圍應(yīng)符合其最廣釋義，以使其涵括 所有此等修飾及類似結(jié)構(gòu)。本揭示內(nèi)容包括前述申請專利范圍之任何及所有實施。
權(quán)利要求
一種組合物，包含治療有效量之式I化合物以及醫(yī)藥載體，其中A系PO(OR)(OR′)，其中R及R′獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽離子、鋅陽離子所組成之群；且R1系NH2、NH3+H2PO4-、或NH(C＝NH)NH2。FPA00001115726300011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是 HaC^^y^^CHa O
7.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
9. 一種組合物，其包含治療有效量之至少一種下列化合物 以及醫(yī)藥載體。
10. 一種方法，其包含根據(jù)至少一種圖3-8之流程制造式I化合物之組合物 其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系 一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、 胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽 離子、鋅陽離子所組成之群；且R1 系 NH2、NH3+H2P04_、或 NH(C = NH) NH2。
11. 一種由如權(quán)利要求10所述的方法產(chǎn)生之產(chǎn)物。
12. —種方法，包含提供治療有效量之式I化合物組合物 (I)其中該組合物系設(shè)計用以投與至生物以抑制神經(jīng)胺酸苷酶之活性； 其中A系PO(OR) (OR')，其中R及R'獨立選自H、C1-C6烷基、芳基、及X，其中X系 一陽離子反離子，選自由銨、甲基銨、二甲基銨、三甲基銨、四甲基銨、乙醇銨、二環(huán)己基銨、 胍、乙二銨陽離子、鋰陽離子、鈉陽離子、鉀陽離子、銫陽離子、鈹陽離子、鎂陽離子、及鈣陽 離子、鋅陽離子所組成之群；且R1 系 NH2、NH3+H2P04_、或 NH(C = NH) NH2。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中該生物體是動物。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其中該生物體是人類。
15.如權(quán)利要求12所述的方法，其中該生物體具有類流感癥狀。
16.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
17.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
18.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
19.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
20.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
21.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中式I化合物是
22.如權(quán)利要求12所述的方法，其中式I化合物是
23. 一種方法，其包含提供具有治療有效量之至少一種下列化合物的組合物 其中該組合物系設(shè)計用以投與至生物以抑制神經(jīng)胺酸苷酶之活性。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中該生物體是動物。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中該生物體是人類。
26.如權(quán)利要求23所述的方法，其中該生物體具有類流感癥狀。
全文摘要
本發(fā)明敘述新穎的膦酸酯化合物。該等化合物具有作為神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑之活性，可對抗H1N1及H5N1病毒的野生型及H274Y突變株。本發(fā)明亦提供已知神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑奧司他偉(Oseltamivir)及抗流感藥物克流感以及新穎膦酸酯化合物之經(jīng)由D-木糖的對映體選擇性合成途徑。本發(fā)明亦提供另一種有效且彈性的合成，以11步驟及＞20％的整體產(chǎn)率，由可輕易取得的發(fā)酵產(chǎn)物(1S-順)-3-溴-3，5-環(huán)己二烯-1，2-二醇合成克流感以及高度強效神經(jīng)胺酸苷酶抑制劑零流感(Tamiphosphor)。大部分的反應(yīng)中間物皆在無冗長純化流程的情形下以晶體形式取得。關(guān)鍵的轉(zhuǎn)化作用包括溴苯順-二氫二醇的起始位向及立體選擇性溴酰胺化作用，以及最終的鈀催化性羰基化及膦?；饔?。
文檔編號C07C247/14GK101883569SQ200880113461
公開日2010年11月10日 申請日期2008年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月31日
發(fā)明者方俊民, 翁啟惠, 詹家琮, 謝俊結(jié), 鄭義循 申請人:梁啟銘