專利名稱：從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然產(chǎn)物提取、分離方法，特別涉及一種從甘肅棘豆中分 離提取苦馬豆素的工藝方法。
背景技術(shù)：
甘肅棘豆(Oxy "op fam^e"^)為豆科棘豆屬多年生草本植物，主要分布于 我國青海、甘肅、寧夏、四川、云南等地，其根系發(fā)達,枝多葉茂,抗逆性強,生物 產(chǎn)量巨大,每年在其密集生長的牧區(qū)都有大批的家畜中毒死亡，對當?shù)啬撩裨斐傻?損失相當嚴重,是我國西北和西南牧區(qū)危害最嚴重的毒草之-。對甘肅棘豆有毒 成分的研究認為苦馬豆素(swainsonine)是其主要有毒成分?？囫R豆素是一種大 極性的吲哚単-西啶類生物堿，對a-甘露糖苷酶具有特殊的抑制作用。近年來苦馬 豆素作為一種嶄新的抗癌藥物得到了國內(nèi)外研究人員的關(guān)注，其特點在于既具有 直接殺傷腫瘤細胞的作用，又具有免疫調(diào)節(jié)的雙向作用。
當前分離提取苦馬豆素的主要來源有兩種， 一是從植物中提??；另一種是從 豆類絲核菌(朋/zocmw/a /egww!'m'co/a)中提純。人工合成其成本很高。國外分 離提純苦馬豆素的主要技術(shù)工藝是先將植物樣品或者菌絲體在有機溶劑中浸提， 將浸提物濃縮后進過陽離子交換樹脂柱和瓊脂糖凝膠柱分離，最后重結(jié)品得到苦 馬豆素，其不足是提取工藝復雜，成本高，不能工業(yè)化大量生產(chǎn)。國內(nèi)苦馬豆素 主要來源于從植物中提取，同樣存在上述問題。本發(fā)明的優(yōu)點在于提取路線工藝 簡單，成本低廉，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種從甘 肅棘豆中分離提純苦馬豆素的工藝方法。
本發(fā)明以我國西北草原上豐富的植物資源一甘肅棘豆為原料，根據(jù)苦馬豆素 的基本理化性質(zhì)，采用逆流萃取的方法在酸性條件下用氯仿脫脂除雜，然后在堿 性條件下用正丁醇逆流萃取得到總生物堿粗品。將所得總生物堿粗品經(jīng)硅膠柱層 析分離得到苦馬豆素粗品，然后重結(jié)晶獲得苦馬豆素純品。
本發(fā)明采用有機溶劑浸提，逆流萃取、硅膠柱色譜分離、重結(jié)晶等技術(shù)'最 后得到苦馬豆素。
本發(fā)明的提純工藝分四步完成，提取成本低，工藝簡單，產(chǎn)品純度高，整個 提取工藝適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法，其特征在于該方法依次 包括如下步驟
A、 將甘肅棘豆粉碎，用工業(yè)乙醇熱提2-5次，過濾后棄去料渣，將提取液 減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏；
B、 將得到的總浸膏，加入1 3倍量的水溶解，用酸溶液調(diào)pH值至3-5， 在酸性條件下用氯仿逆流萃取除去其中的脂溶性雜質(zhì)，然后用氫氧化鈉溶液調(diào) pH值至8-10，用正丁醇逆流萃取，收集正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇得總生 物堿粗品
C、 將總生物堿粗品用硅膠柱色譜分離，干法上樣，氯仿一甲醇一氨水梯度 洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆 素；
D、 將得到的白色粉末狀苦馬豆素，采用甲醇溶解，再向其中加入氯仿重結(jié)晶 獲得白色針狀結(jié)晶的苦馬豆素純品。
在A步驟中，工業(yè)乙醇與甘肅棘豆的質(zhì)量比為1-3: 1。
本發(fā)明苦馬豆素的提取率為20 30pg/g，與已有技術(shù)相比減少了苦馬豆素提 取的中間環(huán)節(jié)，降低了生產(chǎn)成本，適合工業(yè)生產(chǎn)應(yīng)用，進一步促進苦馬豆素作為 抗腫瘤藥物及免疫增強劑等產(chǎn)品開發(fā)的產(chǎn)業(yè)化。
具體實施例方式
實施例1:
取甘肅棘豆千草lkg，用10升75%工業(yè)乙醇熱提三次，每次兩小時，過濾 后棄去料渣，將提取液減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏180g,出膏率18%。在浸膏 中加入200mL水反復攪拌溶解，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至4，用氯仿逆流萃取除去浸 膏中的葉綠素等脂溶性雜質(zhì)。棄去氯仿，水相用NaOH溶液調(diào)整pH至9，用正 丁醇逆流萃取提取其中的總生物堿。減壓回收正丁醇得到11.5g總生物堿粗品， 出堿率1.15%。將生物堿粗品用甲醇溶解，100 200目的硅膠拌樣，用200 300
目的硅膠千法上柱，氯仿一甲醇一氨水梯度洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素 部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆素0.15g。將其溶于lmL甲醇中，待 甲醇揮發(fā)至0.5ml后向其中加入5mL氯仿重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶23.1mg， 即為苦馬豆素，提取率0.0023%。
權(quán)利要求
1、一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法，其特征在于該方法依次包括如下步驟A、將甘肅棘豆粉碎，用工業(yè)乙醇熱提2-5次，過濾后棄去料渣，將提取液減壓濃縮得甘肅棘豆總浸膏；B、將得到的總浸膏，加入1～3倍量的水溶解，用酸溶液調(diào)pH值至3-5，在酸性條件下用氯仿逆流萃取除去其中的脂溶性雜質(zhì)，然后用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8-10，用正丁醇逆流萃取，收集正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇得總生物堿粗品；C、將總生物堿粗品用硅膠柱色譜分離，干法上樣，氯仿-甲醇-氨水梯度洗脫，薄層色譜檢測，合并苦馬豆素部分，自然揮發(fā)溶劑得到白色粉末狀苦馬豆素；D、將得到的白色粉末狀苦馬豆素，采用甲醇溶解，再向其中加入氯仿重結(jié)晶獲得白色針狀結(jié)晶的苦馬豆素純品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在A步驟中，工業(yè)乙醇與甘肅 棘豆的質(zhì)量比為l-3: 1。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從甘肅棘豆中分離提取苦馬豆素的工藝方法。本發(fā)明采用逆流萃取的方法在酸性條件下用氯仿脫脂除雜，然后在堿性條件下用正丁醇逆流萃取得到總生物堿粗品。將所得總生物堿粗品經(jīng)硅膠柱層析分離得到苦馬豆素粗品，然后重結(jié)晶獲得苦馬豆素純品。本發(fā)明的提純工藝分四步完成，提取成本低，工藝簡單，產(chǎn)品純度高，整個提取工藝適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D463/00GK101177426SQ200610104918
公開日2008年5月14日 申請日期2006年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月11日
發(fā)明者邸多隆, 黃新異 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所